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Cryptococcus

Dr Patricio Godoy MartínezInstituto de Microbiología Clínica

UACH

www.pgodoy.com

Cryptococcus

◼ Levadura Capsulada , identificada por primera

vez en 1894.

◼ Amplia distribución geográfica.

◼ No constituye parte de la microbiota humana.

◼ El genero Cryptococcus comprende 19 especies.

◼ Su ciclo vital involucra 2 formas: sexual y asexual.

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Género Cryptococcus

Tabla 1. Clasificación taxonómica de Cryptococcus.

División Clase Orden Teleomorfo Anamorfo Serología

Basidiomycota Hymenomycetes Tremellales Filobasidiella

neoformans

C. neoformans v. grubii

C. grubii

A

Filobasidiella

neoformans

C. neoformans v. neoformans D

Filobasidiella

bacillispora

C. neoformans v. gattii

C. gatti

C. bacillisporus

B y C

Filobasidiella

uniguttulatum

C. uniguttulatus

C. laurentii

C. albidus

Especies de Cryptococcus1. Cryptococcus aerius

2. Cryptococcus albidosimilis

3. Cryptococcus albidus

4. Cryptococcus albidus var. albidus y difluens

5. Cryptococcus amylolentus

6. Cryptococcus antarcticus

7. Cryptococcus aquaticus

8. Cryptococcus ater

9. Cryptococcus bhutanensis

10. Cryptococcus consortionis

11. Cryptococcus curvatus

12. Cryptococcus feraegula

13. Cryptococcus flavus

14. Cryptococcus friedmannii

15. Cryptococcus fuscescens

16. Cryptococcus gilvescens

17. Cryptococcus heveanensis

19. Cryptococcus huempii

20. Cryptococcus humicolus

21. Cryptococcus hungaricus

22. Cryptococcus kuetzingii

23. Cryptococcus laurentii

24. Cryptococcus luteolus

25. Cryptococcus macerans

26. Cryptococcus magnus

27. Cryptococcus marinus

28. Cryptococcus neoformans var. neoformans y grubii

29. Cryptococcus gattii

30. Cryptococcus podzolicus

31. Cryptococcus skinneri

32. Cryptococcus terreus

33. Cryptococcus uniguttulatus

34. Cryptococcus vishniacii

35. Cryptococcus yarrowii

Kwon-Chung & Bennett, 1992.

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Diferenciación entre C. neoformans y

C. gattii

Anamorfa

Cryptococcus neoformans

Cryptococcus gattii

var. grubiiHíbrido

AD

var.

neoformans

Serotipos A AD D B & C

Fenotípicas

Teleomórfa Filobasidiella neoformans Filobasidiella bacillispora

CGB NEGATIVO POSITIVO

D-Proline NEGATIVO POSITIVO

Biológicas (cruza) No producen por meiosis recombinantes haplóides verdadeiros

Filogenética

(~DNA = 55-63%)

VNI/AFLP1

VNII o

AFLP1A

VNIII

AFLP3

VNIV

AFLP2

VGI/AFLP4

VGII/AFLP5

VGIII/AFLP6

VGIV/AFLP7

Kwon-Chung. FEMS Yeast Res,

6:57,2006.

Variedades, serotipos y genotipos

◼ Cryptococcus neoformans var. grubii

❑ Serotipos A –VNI Y VNII- (y AD –VNIII-)

◼ Cryptococcus neoformans var. neoformans

❑ Serotipos D –VNIV- (y AD –VNIII-)

◼ Cryptococcus bacillisporus o C. gattii

❑ Serotipos B y C –VGI A VGIV-

Meyer W et al. Emerg Infect Dis, 2003.

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▪ Serotipo A : VNI VNII

▪ Serotipo B y C: VGI VGII VGIII VG IV

▪ Serotipo AD: VNIII

▪ Serotipo D: VNIV

▪ La mayoría de los aislamientos en pacientes

VIH corresponden a genotipo, VNI y VNIV

Emerg Infect Dis,;vol. 9:189, 2003.

Serotipos y Genotipos

Cryptococcus gattii

Chen SCA et al. Clin Microbiol Rev. 27 (4) 2014.

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Cryptococcus gattii

Chen SCA et al. Clin Microbiol Rev. 27 (4) 2014.

Nueva Taxonomía

Hagen F, Khayhan K, Theelen B, Kolecka A, Polacheck I, Sionov E, Falk R, Parnmen S, Lumbsch HT,

Boekhout T. Recognition of seven species in the Cryptococcus gattii/Cryptococcus neoformans species

complex. Fungal Genet Biol. 2015 May;78:16-48.

9

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Cryptococcus neoformans

◼ Reservorio más importante de C. neoformans var.

neoformans: heces de paloma (urbana o Columba

livia) o suelos contaminados.

❑ Deyecciones en aleros de edificios, áticos o

balcones de casas abandonadas (duermen las

palomas).

❑ Hábitat urbano, desecado, alcalino y rico en

nitrógeno

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Reservorio: C. gattii

◼ Eucaliptos (Eucalyptus camaldulensis, Eucalyptus tereticornis,Eucalyptus blakelyi, Eucalyptus gomphocephala, Eucalyptusgrandis, Eucalyptus haemostoma, Eucalyptus microcorys,Eucalyptus rudis)

◼ Otros árboles: almendro (Terminalia catappa –C-), higuera (Ficusmicrocarpa), Adenanthera pavonina, Angophora costata, Cassiagrandis, Erythrina velutina, Erythrina jambolanum, Guettardaacreana, Moquilea tomentosa, Syncarpia glomulifera…

◼ Cavidad nasal de koalas (Phascolarctus cinereus)

◼ Guano de murciélago (Rhinolophidae)

◼ Nido de avispas (Polybia occidentalis) (Uruguay)

Hongo

Verdaderamente

Patógeno

Hongo Oportunista

(inmunidade

celular)

Sarcoidosis

Corticoide

Ac monoclonales

DM

Cirróticos

Def. I. Humoral

Colagenosis

I. Renal/Hepat

Chayakulkeeree & Perfect, Infect Dis Clin N Am, 2006.

C. gattii → C. neoformans

¿Quién desarrolla Criptococosis?

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Características C. neoformans C. gattii

Contacto Rural 11-21% 47-69%

Inmunocompetente 20-25% 74-87%

SIDA 50% 2,1%

Inmunossuprimido no-HIV 29% 8,5%

Criptococoma Cerebral 9,3-11% 33,3-40%

Hidrocefalia 2,3% 16,7%

Criptococoma Pulmonar 22% 72-80%

Infilt.Pulm. Alveolar/Intersticial 70,4% 16,7%

Fungemia 20-63% baja

Titulación do antígeno ↑ ↓

Secuelas Neurológicas 3-22% 38-39%

Descripción R-FCZ ↓ ↑

Mortalidad 30% 15%

Chen.CID,31:499, 2000; Mitchell.CID, 20:611, 1995; Speed.CID, 21:28,

1995.

Diferencias Clínicas y Epidemiológicas

entre C. neoformans y C. gattii

Incidencia de Criptococosis, Francia,

1985-2001 (2.125 casos)

Dromer et al., AIDS; 18:555, 2004.

HAART

15

16

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9

Moysés Neto et al, J Bras Nefrol,

1995;17(3):162

39,0%

6,1%

29,3%

3,7%

3,7%

3,7%

14,6% Candida

Aspergillus

Criptococcus

Mucormicosis

Paracoccidioides

Histoplasma

Otros

▪ Moysés Neto et al, 1995, Ribeirão Preto – 82 episodios (66 pts)

de infecciones fúngicas en trasplante renal.

Distribución de las Micosis en Tx. Renal

en Brasil

Perfect & Casadevall, Infect Dis Clin N Am, 2002;16:875; Vilchez, Am J Transplant, 2002;2:575

▪ Sida (>80%)

▪ Transplantes

▪ Evolución tto. de cáncer

▪ Rara en inmunocompetentes

▪ HAART

▪ Fluconazol

▪ Dificultades tratamiento de SIDA en los países en desarrollo

▪ No-VIH

▪ TOS (18-65%)

Década de 70

Década de 90

Incidencia de Criptococosis

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Casos de Meningitis por Cryptococcus en

pacientes VIH a nivel mundial

Adapted from BJ Park et al., AIDS 2009;23:525-530

Causas de muerte en el África

Subsahariana, excluido HIV/AIDS

Adapted from BJ Park et al., AIDS 2009;23:525-530

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11

Perfect & Casadevall, Infect Dis Clin N Am, 2002;16:875; Mitchell & Perfect, Clin Micr Rer, 1995;8(4):515

Infecciónaguda

Infecciónlatente

Resolución

Inmunidad celular

Patogénesis de la Criptococosis

Infección Pulmonar

◼ Nódulo único o múltiple

◼ Infiltrado lobar

◼ Infiltrado Intersticial

◼ Cavitaciones

◼ Masa endobronquial

◼ Diagnóstico diferencial

❑ TBC

❑ Nocardiosis

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Infección SNC

◼ Meningitis o meningoencefalitis subaguda son las

formas de presentación más frecuentes.

❑ Cefalea

❑ Fiebre

❑ Alteración de conciencia

❑ Visión borrosa

❑ Fotofobia

❑ Diplopía

◼ Masa cerebral: criptococomas.

Lesiones en Piel

◼ Puede producir cualquier

tipo de lesiones.

◼ Habitualmente es una

expresión de diseminación.

(Nódulos, pápulas,

vesículas, úlceras,

granulomas, placas etc.)

◼ Biopsia y cultivo de tejido

para diagnóstico.

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Manifestación clínica en paciente

con cirrosis

◼ Peritonitis (19%–45%).

◼ Meningitis (39%–48%).

◼ Enfermedad pulmonar(18%–37%).

◼ Sepsis y enfermedad diseminada ocurre entre

el 50-70% y 19-76% respectivamente.

◼ La mortalidad está entre el 51% al 100%.

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CÁPSULA MELANINA

• Antifagocítica

• Anti-Inflamatoría

• Inmunosupresora

• Protege contra oxidantes

• Interfiere en la muerte celular

• Protege contra los antifúngicos

Por qué C. neoformans es difícil de

erradicar

C. neoformans como un patógeno intracelular in vivo e

in vitro

Día 1

Día 14

Replicación (Brote INDEX)

Intracellular 6.8

Extracellular 1.3

P = 0.0005

Feldmesser et al. 1999

In vitro en J774 células

In vivo – pulmón de ratón

Dr. Arturo Casadevall

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C. neoformans estrategia de parasitismo

intracelular

Dr . Arturo Casadevall

FLUCONAZOL (306)

(ITRACONAZOL)

(VORICONAZOL)

5-FLUORCITOCINA (129)

No AfectaAfecta

CASPOFUNGINA (1093)

ANFOTERICINA B (924)

Melanina Reduce la efectividad de

antifúngicos de mayor masa molecular

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¿Cómo hacemos el diagnóstico?

▪ Sospecha clínica

▪ Hemocultivos

▪ Detección de antígeno capsular(sérico y LCR)

▪ Cultivo de lesiones cutáneas

▪ Punción lumbar si no hay contraindicación (convulsiones, compromiso de conciencia, focalización)

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▪ Examen Directo: Tinta China de cualquier

fluido.

▪ Cultivo do LCR, Biopsia, LBA o esputo.

▪ Antígeno Criptocócico en LCR y Sangre.

▪ Examen Histopatológico.

Casadevall & Perfect. Cryptococcus neoformans, 1998.

¿Cuáles son las herramientas

diagnósticas Disponibles?

Diagnóstico por microscopía

◼ Levaduras encapsuladas (tinción con tinta o connigrosina) en el sedimento del LCR u otros líquidoscorporales.

◼ Las cápsulas pueden ser muy pequeñas e inclusoestar ausentes.

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Lavado Bronquio Alveolar de

paciente VIH – tinción negativa

Diagnóstico por cultivo micológico

◼ Cryptococcus se puede aislar de LCR, también de

muestras de sangre, esputo, orina o líquido

prostático.

◼ Los hemocultivos son positivos en alrededor del

60% de los pacientes con sida y criptococosis.

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◼ Medios más específicos (actividad

fenoloxidasa = colonias mucoides marrones o

negras – melanina):❑ agar alpiste (Guizotia abyssinica)

❑ agar con semillas de girasol (Helianthus annus)

❑ agar ácido caféico

Diagnóstico por cultivo micológico

CGB: positivo = C. gattii

Medio CGB

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Coloração de Prata - Pulmão

Tinción de Mucicarmim de Meyer

▪ LCR, Sangre, LBA y líquido pleural.

❑ Sensibilidad ±90% y especificidad ±100%.

❑ Falso + : FR, error de técnica y Trichosporon spp.

❑ Falso - : títulos bajos, inicio de la infección, IC, efecto

prozona y levaduras pobremente capsuladas.

❑ Relación con pronóstico: (↑ látex = peor pronóstico).

Perfect & Casadevall, Infect Dis Clin N Am, 2002;16:875; Judith et al, J Clin Microbiol, 1991;29(6):1260

Examen de Antígeno Criptocócico

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LF Cryptococcus

▪ Criptococosis

❑Comercialmente

disponible (tiras)

❑Immuno-Mycologics Inc,

USA

❑Costo del test en EUA

(U$2), Brasil (U$8)

Saag et al, Clin Infect Dis, 2000;30(4):710

Tratamiento de la Criptococosis

▪Depende: Sitio de Infección + Inmunidad

▪ Formulaciones de Anfotericina B

▪ Asociaciones de Anfotericina B + 5

Fluorocitosina

▪ Fluconazol, Itraconazol, Voriconazol

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Candida auris

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Taxo

no

mía

Especie auris

Genero Candida

Familia Metschnikowiacea

Orden Saccharomycetales

Clase Saccharomycetes

Reino Fungi

Dominio Eukaryota

45

Satoh, K.(2009). Microbiology and

immunology, 53(1), 41-44.

Jackson, B. R.(2019). Journal of

Fungi, 5(3), 58.

Candida auris

El primer reporte de C.

auris se hizo en el Japón en

2009 a partir de la secreción de

oído.

En junio de 2016 (CDC) yeste año se decretó alertamundial de este patógenoemergente. Se hanreportados casos en Coreadel Sur, India, Reino Unido,Colombia, Venezuela,Estados Unidos, Israelentre otros (11 países).Principalmente en ITS,heridas y otitis.

Puede causarbrotes de origennosocomial, laidentificaciónrápida esfundamentalpara tomar lasprecauciones yprevenir ladiseminación

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Por The New York Times | Fuentes: Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC); las revistas Emerging Infectious Diseases,

Emerging Microbes & Infections, Clinical Infectious Diseases, Journal of Infection, Mycoses y el Instituto Doherty. Imágenes de Kazuo Satoh y otros, en la

revista Microbiology and Immunology

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Características

Identificación errónea

Resistencia múltiple

Mantenimiento fácil de la

colonización

Iguchi, S.(2019). Journal of Infection and Chemotherapy.

Difícil control de

brotes

620 Casos110 infecciones del torrente sanguíneo

40 otras infecciones

466 colonizaciones

4 no se conoce

Rhodes, J., & Fisher, M. C. (2019). Current opinion in microbiology, 52, 84-89.

Candida auris

❖A 25ºC en extracto de levadura

peptona dextrosa:

• Célula ovoide, elipsoidales o

alargadas.

• Tamaño aprox. 2,5 – 5,0 μm.

Individuales, en parejas o grupos.

❖En extracto de Malta a 25ºC por un

mes:

• Cultivo viscoso, blanco a gris, liso

y brillante

• No se producen pseudohifas

después de 59 días a 25ºC.

• C. Haemulonni si las produce

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Patrón de identificación errónea con método convencional

Presentar resistencia a uno o mas antifúngicos

Detección previa en el hospital u otras unidades clínicas

pacientes del área o país de alta prevalencia

Diagnóstico

PCR

Espectrometría de masas

Resonancia magnética T2

Baja

Disponibilidad

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Resistencia

Antifúngica

❖ Se estima que más del 90% de los

aislamientos clínicos de Candida

auris son resistentes a fluconazol

(CIM > 64 mg/L).

❖ 50% resistentes al Voriconazol

❖ Un tercio son resistentes a la

anfotericina B

❖ Se ha observado baja resistencia a

las equinocandinas

Medidas de

Prevención y

Profilaxis

❖ Es recomendable que los pacientes infectados ocolonizados por Candida auris estén enhabitaciones individuales con medidas deaislamiento.

❖ El personal sanitario, si es posible exclusivo paraestos pacientes, debe utilizar bata y guantesdesechables, y en caso de riesgo de salpicadurasde fluidos corporales, mascarilla, protector facial,calzas y gorro.

❖ El aislamiento del paciente colonizado o infectadose mantendrá hasta que los cultivos de vigilanciadiarios, de secreciones respiratorias, muestrasorofaríngeas, orina, sangre, etc., sean negativostres veces seguidas.

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Medidas de Prevención y

Profilaxis ❖ Estos pacientes realizarán medidas de

desinfección cutánea y mucosa con clorhexidina

al 2% utilizando toallas dos veces al día por 5

días, Clorhexidina al 4% para enjuague bucal, en

algunos casos se debe utilizar nistatina oral .

❖ La descontaminación ambiental se realizará

mediante limpieza extrema con agua y jabón y

posterior uso de productos clorados (1000 ppm

hasta 10.000) de suelos y superficies, tres veces

al día y vapor de H2O2. Es importante la limpieza

del material, equipo y aparatos después de la

utilización con el paciente colonizado o

infectado.

Valdivia, 20 al 24 de Enero 2020

V CURSO INTERNACIONAL DE TAXONOMÍA DE HONGOS

FILAMENTOSOS de IMPORTANCIA CLÍNICA

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