Una giornata da biochimico

Test per la ricerca di glucidi Saggio di Lugol e di Fehling

La sfida

Sei un giovane biochimico che ha appena accettato la proposta di occuparsi della ri-apertura di un laboratorio di analisi chiuso ormai da diversi anni.

Non sei solo, ma dovrai lavorare con un gruppo di altri giovani neolaureati, con i quali hai già fatto un sopralluogo per prendere visione dei materiali a disposizione del laboratorio.

Tra i materiali avete individuato uno scatolone contenente reattivi per effettuare la ricerca di glucidi; avete quindi esaminato tre bottiglie e le rispettive etichette.

La sfida

Sulla etichetta della prima bottiglia trovate scritto LUGOL, sulla seconda FEHLING A e sulla terza FEHLING B.

Dopo aver controllato sulla scadenza che i tre reattivi si possono ancora utilizzare, vi mettete alla ricerca delle schede tecniche e vi rendete conto che sono quasi illeggibili.

Sulla scheda tecnica del reattivo LUGOL riuscite a leggere le seguenti indicazioni: “Reattivo adatto alla ricerca dell’amido, da usare a freddo”.

La sfida

Passate poi alla lettura della scheda del reattivo FEHELING, in cui sono leggibili solo le seguenti scritte: “Reattivo adatto alla ricerca di glucidi semplici, monosaccaridi e disaccaridi ad esclusione del … Da usare a caldo. Aggiungere al campione da testare prima il reattivo FEHLING A e poi il reattivo FEHLING B”.

Decidete quindi di mettere a punto delle prove per capire come utilizzare i due reattivi , tenendo presente in base alle vostre conoscenze, che i test più comuni per la rilevazione delle biomolecole, compresi i glucidi, sono generalmente colorimetrici.

La sfida Essi cioè rivelano la presenza delle biomolecole per i quali

sono specifici attraverso un cambiamento di colore caratteristico, che evidenziano quando vengono a contatto con esse. Sapete inoltre che tali reattivi sono comunemente da utilizzare in piccole dosi (1-2 ml o 3-5 gocce).

Fortunatamente tra i materiali del laboratorio avete a disposizione strumenti di vario tipo (vetri da orologio, pipette in plastica monouso, becher e contenitori di diverse misure, spatole e cucchiai, fornelletti e piastra riscaldante, provette con mollette) e anche alcuni glucidi per effettuare i test (glucosio, fruttosio, amido, zucchero da cucina e lattosio) oltre naturalmente ad acqua distillata

Consegne

1. Progettate delle prove sperimentali per scoprire come funzionano i due tipi di reattivi per la ricerca di glucidi, LUGOL e FEHELING, utilizzando il materiale a disposizione.

Dovrete stabilire:

- l’elenco dei materiali da utilizzare

- il procedimento da seguire

- una tabella per la raccolta dei dati ottenuti durante le prove

Consegne

2. Compilate la scheda sul retro del foglio che dovrete presentare prima della fine della lezione 3. Inserite con la biro rossa le eventuali correzioni alle prove che avete progettato, in base alla discussione che seguirà la presentazione delle proposte dei vari gruppi di lavoro. NB: la presente scheda è da conservare e da portare la prossima lezione, sarà infatti indispensabile per svolgere la nuova attività.

Provate a pensare a quali prove si potrebbero effettuare per capire in che modo i due reattivi segnalano la presenza di amido (Lugol) e quale di glucidi semplici (Fehling)

In altre parole, dovete capire quali risultati si ottengono quando il saggio Lugol e Fehling sono positivi (evidenziano la presenza dei glucidi ricercati) o negativi (evidenziano l’assenza dei glucidi ricercati).

1. Come faccio a capire in che modo i due reattivi segnalano la presenza di glucidi?

2. Come faccio a capire quale è il disaccaride che non è rilevato dal Fehling?

1) Quali campioni?

Progettazione prove preliminari

Prove preliminari

• Amido

• Saccarosio

• Glucosio

• Lattosio

• Maltosio

• Acqua

Lugol

Fehling

• Amido

• Saccarosio

• Glucosio

• Lattosio

• Maltosio

• Acqua

Lugol

Fehling

Prove preliminari

• Amido

• Saccarosio

• Glucosio

• Lattosio

• Maltosio

• Acqua

Lugol

Fehling

Prove preliminari

1) Quali campioni?

2) In che quantità?

Progettazione prove preliminari

1) Quali campioni?

2) In che quantità? Una punta di spatola se è solido, 1 ml se è liquido

Progettazione prove preliminari

1) Quali campioni?

2) In che quantità? Una punta di spatola se è solido, 1 ml se è liquido

3) In che condizioni?

Progettazione prove preliminari

1) Quali campioni?

2) In che quantità? Una punta di spatola se è solido, 1 ml se è liquido

3) In che condizioni? Lugol a freddo, Fehling a caldo

Progettazione prove preliminari

1) Quali campioni?

2) In che quantità? Una punta di spatola se è solido, 1 ml se è liquido

3) In che condizioni? Lugol a freddo, Fehling a caldo

4) Che quantità di Reattivi?

Progettazione prove preliminari

1) Quali campioni?

2) In che quantità? Una punta di spatola se è solido, 1 ml se è liquido

3) In che condizioni? Lugol a freddo, Fehling a caldo

4) Che quantità di Reattivi? Lugol 3-4 gocce, Fehling A 1ml + Fehling B 1ml

Progettazione prove preliminari

Saggio Lugol

Descrizione del procedimento per la preparazione di ciascun campione

• Marcare il contenitore: gruppo, reattivo e alimento

• Introdurre l’alimento da testare (una punta di spatola se è solido, 1 ml se è liquido) triturarlo se è solido

• Versare 3-4 gocce di Lugol

• Osservare e annotare le osservazioni

Saggio Fehling Descrizione del procedimento per la preparazione

di ciascun campione

• Introdurre nella provetta 1ml di Feheling A + 1 ml di Fehling B

• Indossare i guanti e chiudere la provetta con il pollice e agitare

• Schiacciare/triturare gli alimenti solidi

• Inserire nella provetta l’alimento da testare (una punta di spatola se è solido, 1 ml se è liquido)

• Chiudere la provetta con il pollice e agitare

• Marcare una molletta con indicando: gruppo, reattivo e alimento

• Introdurre la provetta sostenuta dalla molletta nel bagno bollente

Saggio di Lugol

• Negativo (-)

• Positivo (+)

Saggio di Fehling

• Negativo (-)

• Positivo (+)

Tabella per la raccolta dati

campione LUGOL (+/-) FEHLING (+/-)

1.

2.

3.

4.

5.

6.

La sfida Dopo settimane di duro lavoro il laboratorio è stato

finalmente riattivato, molte persone hanno già usufruito dei servizi offerti.

Questa mattina è arrivata al laboratorio una persona che conosci molto bene, si tratta della tua insegnante di scienze del liceo, la prof.ssa Parisini, che è insieme ad una collega, la prof.ssa Fontechiari, con cui ti ricordi di aver svolto al biennio alcune attività di laboratorio.

Dopo aver ricordato i tempi del liceo e aver spiegato la tua nuova attività, ti consegnano diversi campioni con la richiesta di effettuare la ricerca di glucidi in ciascuno di essi. Nel congedarle fai presente che le risposte saranno pronte nel pomeriggio, visto che i test richiesti non richiedono tempi lunghi, quindi ti metti subito al lavoro.

Consegne

1. Osservate attentamente le prove preliminari e

annotate i risultati nella tabella che avete predisposto nella scheda dell’attività precedente

2. Compilate la presente scheda indicando i materiali e il procedimento da seguire, sulla base di quello che è stato effettuato durante le prove preliminari

3. Compilate la tabella 1 indicando quali risultati vi aspettate di ottenere (PREVISIONI)

4. Predisponete la tabella 2 per la raccolta dei risultati

Campioni Glucidi

Presenti

Saggio

LUGOL

Saggio

FEHELING

Tabella 1: PREVISIONI

Consegne

5. Procuratevi il materiale necessario ed effettuare le prove

6. Svolgete le prove

7. Registrate i risultati nella tabella 2

Tabella previsioni

campione amido

monosaccaridi

1.

2.

3.

4.