Resoconto

Giornata Ostreopsis cf.ovata Villefranche-Sur-Mer -26 luglio 2017

Obiettivi

Gli obiettivi di questa giornata di formazione organizzata nell’ambito dell'Accordo RAMOGE e condotta da Rodolphe

Lemée del Laboratorio di oceanografia di Villefranche (LOV), uno dei 2 laboratori dell'osservatorio Océanologique di

Villefranche-su-mare erano molteplici :

Formarsi ai metodi di prelevamento e di conteggio di Ostreopsis cf. ovata sviluppato dal LOV e di discutere

dell'efficacia di questi metodi.

Discutere e scambiare sui suoi protocolli e la sorveglianza di Ostreopsis cf. ovata

Il filo conduttore: La realizzazione di un analisi tipo, dal prelevamento all'interpretazione dei risultati.

I- Prelievo dell'alga: metodi e protocolli

Il protocollo di osservazione comprende 2 prelievi differenti: uno planctonico, nella colonna d’acqua, ed il

secondo bentonico ( sulle macroalghe).

Quelques conseils préliminaires :

Nel corso delle localizzazioni, è importante di evolvere il più

prudentemente possibile e non mettere della materia in sospensione,

particolarmente Ostreopsis cf. ovata, nella colonna di acqua. Ciò verrebbe a

falsare il racolto. Per evitare al massimo questo tipo di situazione, la miglior

cosa è di funzionare in binomio di prelevatore, un occupandosi del prelievo

e l'altro del materiale ;

Preparare a monte i flaconi di prelievo e la loro identificazione;

presentando una grande variabilità nel suo sviluppo spaziale e

ciò a solamente alcuni metri di distanza. È preferibile di fare parecchi

réplicats per essere più obiettivo e prendere dunque in conto la

variabilità della microalga. L'osservatorio Océanologique di Villefranche

sur Mer fa generalmente tre prelievi distanziati di circa 10 metri

ciascuno sui suoi siti di studi.

Il prelievo planctonico

Il prelievo plantonico è un prelievo soltanto in acqua :

Prelievo realizzato nella colonna d’acqua 10 a 20 cm sopra la macroalga selezionata, situataall’incirca a 50 cm

di prfondità, su una roccia orizontale.

Prelievo di 250mL

Metodologia:

Immergere alla rovescia il contenitore vuoto, aperto, nell'acqua (resta così pieno di aria)

Portare il contenitore a circa 20 cm sopra la microalga

Rovesciare il contenitore, si riempie di acqua

Richiudere il contenitore sotto acqua

Transmettre le flacon au binôme

Prelievo bentonico (macroalga)

Per una maggiore rappresentabilità, il campionamento bentonico viene effettuato sulla macroalga di maggioranza

nell'ambiente. È quindi necessario identificare il luogo prima di prelevare questa macroalga. Questo prelievo viene

effettuato sul substrato estraendo la macroalga sopra la quale è stato prelevato il campione planctonico:

Le microalghe crescono prevalentemente tra 30 e 3 m, il prelievo bentonico è fatto circa 50 cm sotto la

superficie, profondità a cui Ostreopsis cfr. ovata è la più presente.

Il peso ideale per prendere la macroalga è di 5 a 10 grammi.

Metodologia:

Immersa la bottiglia vuota, aperta, capovolta nell'acqua (rimane piena d'aria)

Posizionare la bottiglia sull'alga selezionata

Simultaneamente, tagliate le alghe alla base con le dita e inclinate la bottiglia sul lato, che porta

l'acqua e la macroalga.

Chiudere la bottiglia sotto acqua

Trasmettere la bottiglia al binomio

Vidéo del protocollo di prelievo: https://www.youtube.com/watch?v=eIL1S9VZfQ4

Una volta i due prelievi effetuati, sono portati al laboratorio per essere analizzati

II- Preparazione dei prelievi per il contaggio del’alga

Una volta il prelievo realizzato, è portato al laboratorio per essere preparato

Viene aggiunto del acido lugol in tutti i prelievi (planctonico et bentonico) per

fissare Ostreopsis cf. ovata.

Lugol : 1% del volume totale è aggiunto ossia circa 2.5 ml. Sarà possibile

aggiungere del lugol se l’assorbimento di esso dalla macroalga è troppo rapido.

Preparazione del prelievo bentonico È necessario seguire diversi passi per preparare il campionamento bentonico prima di contare:

Agitare il campione contenente la microalga per 10 secondi per

sganciare la microalga.

Filtro su 500 μm.

Ripetere l'operazione numero 1 e 2 recuperando i frammenti

macroalga. (Metterli nuovamente nella bottiglia da 250 ml, quindi

ripetere le fasi di risciacquo e filtraggio).

Misurare il peso fresco di macroalga utilizzando una bilancia.

Aggiungere 100 ml di acqua di mare all'alga, scuotere e filtrare

nuovamente sul setaccio da 500μm.

Misurare il volume totale esatto. (Sarà circa 450ml = 250ml di prelievo

dell'acqua di mare + 2x100ml di acqua di mare aggiunto)

Filtrare la soluzione e trasferirla in una scatola Motoda per essere

omogeneizzata.

Conservare 20 ml di soluzione per il conteggio di Ostreopsis cfr. ovata.

Aggiungere di nuovo 1% di lugol (circa 4 gocce) perché le macroalghe

assorbono enormemente il lugol

I 20ml ottenuti sono analizzati su delle lame Sedgewick Rafter.

Preparazione del prelievo plantonico

Per preparare il campione planctonico per il conteggio, è necessario seguire il seguente protocollo:

Omogenizzare delicatamente il campione

Posizionare 50 ml del campione planctonico in una colonna di sedimentazione

Lasciare in piedi 24 ore prima di contare

Una volta che il periodo di 24 ore è passato, preparare le lame: il principio è quello di sostituire la colonna con

una lamina, come nel seguente video: https://www.youtube.com/watch?v=siO0TczTY8Y&feature=youtu.be

I- Conteggio d’Ostreopsis cf. ovata

Preambulo

Ostreopsis appartiene al grande gruppo di dinoflagellati. Questi sono microrganismi marini che esistono in molte forme.

Come regola, i dinoflagellati possono essere presentati nel seguente formato:

Sono composti da una teca contenente cellulosa e possiedono due flagelle le cui disposizioni variano. Il flagello longitudinale si trova in un solco chiamato sulcus, e il cingolo è il solco che circonda il dinoflagellato come una cintura.

In una visione microscopica, l'Ostreopsis ha una forma di goccia con un'estremità appuntita, può essere più o meno

"confezionata" e appare per lo più scura in presenza di lugol:

Ostreopsis cfr. l'ovata ha una forma molto riconoscibile. Tuttavia, molti microrganismi si trovano sulla lama e alcuni non devono essere confusi con Ostreopsis cfr. ovata:

Prorocentrum lima è l'organismo principale trovato sulla lama e non deve essere confuso con Ostreopsis cfr. ovata. Prorocentrum lima non ha punta ma un leggero rientro.

È possibile confrontare Ostreopsis cfr. ovata e Prorocentrum lima:

Il conteggio planctonico

Dopo la sedimentazione, i campioni vengono preparati per il conteggio. Video della preparazione disponibile tramite il

seguente link: https://www.youtube.com/watch?v=siO0TczTY8Y&feature=youtu.be

Il numero di cellule contate sul campione è quindi di 50ml. È quindi possibile interpolare un numero di cellula per

litro.Esempio : se 5 cellule sono trovate => 5 cellule/50ml = 10 cellule/100ml = 1000 cellules/L

Conteggio bentonico

Per l'indagine bentonica, Ostreopsis cfr. ovata sono contate sulle lame Sedgwewick Rafter con la seguente

metodologia:Placer 1mL de solution sur une lame Sedgwewick Rafter (sans bulle d’air)

Effetuare un conteggio lineare

Prima di ogni spostamento della lama, il contatore selezionato è un punto diriferimento

La metodologia IFREMER :

Il metodo Ifremer consiste nel mettere 1ml di record planctonico in una lama Sedgewick Rafter. Le cellule

vengono contate e il risultato viene moltiplicato per 1000 per ottenere un numero di cellule per litro.

Esempio: se si trovano 10 celle, il risultato sarà 10.000 celle / l

Una volta terminato il conteggio, il numero di Ostreopsis cfr. l'ovata per grammo di peso fresco dell'alga viene ottenuto con il seguente calcolo:

NB: In alcuni casi di fioriture dove l'alga è molto presente sulla lama, è possibile effettuare ulteriori diluizioni che

verranno riportate successivamente nel calcolo finale.

È inoltre possibile contare solo 4 "quadrati" del campione selezionato in modo casuale.

Osservazioni generali :

Durante l'estate il numero di Ostreopsis cfr. l'ovata sulle macroalgee può essere molto alto senza che la

concentrazione nella colonna d'acqua sia significativa (oltre 200 000 cellule / grammo di macroalga e può anche

raggiungere più di 1,5 milioni di cellule / grammo di macroalga)

In questo caso, nel verificarsi di un evento idrodinamico, ecologico o antropico può portare ad un distacco delle

microalghe dal suo substrato macroalgale e una risospensione delle cellule Ostreopsis cfr. ovata. Aree vicino a

questi ascensori Ostreopsis cfr. Ovata diventano quindi vulnerabili e sono esposti alla tossina prodotta da

Ostreopsis