Tossicologia Forense

● La tossicologia forense è la branca della tossicologia a servizio delle scienze forensi

● Scienza che ricerca e identifica la presenza di droghe e veleni in fluidi biologici, tessuti e organi.

PARACELSO“sola dosis venenum facit” [trad. è la dose che fa (di una sostanza) il veleno.

L’analisi di screening, di conferma e l’eventuale identificazione di composti incogniti, particolarmente in basse concentrazioni, richiede l’utilizzo di tecniche di spettrometria di massa associate a tecniche cromatografiche

Strumentazione analitica

LC/MS

GC/MS

ICP-MS

TOSSICOLOGIA CLINICA

Diagnosi, trattamento tossicodipendenti afferenti alle strutture pubbliche e private

TOSSICOLOGIA FORENSETOSSICOLOGIA FORENSE

Analisi finalizzate alla

Analisi per scopi amministrativi o medico-legali:

Commissioni medico-legali: disabilità alla guida.

Prefettura: verifica trattamenti alternativi alle sanzioni previste dal DPR 309/1990.

Determinazione requisiti psicofisici per il rilascio del porto d’armi (GU 304/1991).

Forze d’ordine: accertamento stato ebbrezza o assunzione sostanze stupefacenti nella guida (L. 214/2003 ART. 186-187).

Enti pubblici e/o privati: accertamenti sui lavoratori le cui mansioni comportano rischi per la sicurezza, l’incolumità e la salute di terzi (art. 125 DPR 285/1992).

Art. 186Alcolemia g/L Sanzione

AmministrativaSospensione Patente

Altro

0.5 – 0.8 500 - 2000 3 – 6 mesi

0.8 -1.5 800 – 320/L 6 – 12 mesi Arresto 6 mesi

> 1.5 1500 - 6000 12 – 24 mesi Arresto 6 – 12 mesiConfisca del veicolo

Se il conducente in stato di ebrezza ha causato un incidente, le sanzioni sono raddoppiate.Se il valore di etanolo è > 1,5 g/L la patente è revocata

E’ un valore di riferimento espresso in concentrazione, al di sopra del quale il risultato di un test analitico è giudicato positivo e al di sotto del quale il test è giudicato negativo

CUT - OFF

ANTICORPO

ANALITA CONIUGATO CON UN MARCATORE

X

1. L’analita coniugato con un marcatore si lega in modo specifico con l’anticorpo dando luogo ad un prodotto colorato

2. L’analita libero, da determinare, compete con il coniugato nella reazione con l’anticorpo; molecole simili possono interferire e competere anch’esse

3. L’interazione tra l’anticorpo e l’antigene, marcato e non, dà luogo ad un segnale la cui intensità è quantificabile e può essere messa in relazione con la concentrazione dell’analita presente nel campione.

Cut-off screening urine

OPPIACEI 300 ng/ml

COCAINA 300 ng/ml

CANNABINOIDI 50 ng/ml

AMFETAMINE ED ANALOGHI 500 ng/ml

BARBITURICI 300 ng/ml

BENZODIAZEPINE 200 ng/ml

METADONE 300 ng/ml

BUPRENORFINA 5 ng/ml

Cut-off test GCMS conferma urine

Morfina, Codeina 200 ng/ml

6-MonoAcetilMorfina 10 ng/ml

Cocaina, Benzoilecgonina 150 ng/ml

Ac. 11-nor-delta-9-THC 15 ng/ml

Amfetamina, Metamfetamina, 200 ng/ml

Mdma, Mda, Mdea 200 ng/ml

Metadone, EDDP 100 ng/ml

Buprenorfina, Norbuprenorfina 5 ng/ml

Cut-off test GCMS matrice cheratinica

Morfina, 6MAM, Codeina 0,2 ng/ml

Cocaina, 0,2 ng/ml

Benzoilecgonina, CocaEtilene 0,05 ng/ml

Cannabidiolo, Cannabinolo, Delta-9-THC 0,05 ng/ml

Amfetamina, Metamfetamina, 0,2 ng/ml

Mdma, Mda, Mdea 0,2 ng/ml Metadone, EDDP 0,2 ng/ml

Buprenorfina, Norbuprenorfina 0,05 ng/ml

LE PROCEDURELE PROCEDURE

CATENA DI CUSTODIA:CATENA DI CUSTODIA:CON IL TERMINE CATENA DI CUSTODIA SI INTENDE LA DOCUMENTAZIONE CHE ACCOMPAGNA IL CAMPIONE E CHE RIPORTA NOTIZIE SUL PRELIEVO, SUL TRASPORTO E SULLA CONSERVAZIONE

MODULO RICHIESTA ANALISIMODULO RICHIESTA ANALISIOGNI CAMPIONE DEVE ESSERE ACCOMPAGNATO DA UN APPOSITO MODULO DI RICHIESTA ANALISI

NEL MODULO DEVONO ESSERE RIPORTATI:NEL MODULO DEVONO ESSERE RIPORTATI:

DATI DEL PAZIENTE, DATA E ORA DEL PRELIEVO

MOTIVO DELLA RICHIESTA IN MODO DA POTER INDIRIZZARE IL LABORATORIO NELLA SCELTA DELLE ANALISI

STRUTTURA ORGANIZZATIVASTRUTTURA ORGANIZZATIVA

CONTENITORE

IL CAMPIONE VA DIVISO IN DUE ALIQUOTE CHE DEVONO ESSERE SIGILLATE

L’IDENTITÀ DEL SOGGETTO INDICATA NEL DOCUMENTO

DATA

ORA E LUOGO DEL PRELIEVO

FIRMA DEL PAZIENTE

FIRMA DEL TECNICO ADDETTO AL PRELIEVO

CIASCUN CONTENITORE DEVE ESSERE DOTATO CIASCUN CONTENITORE DEVE ESSERE DOTATO DI ETICHETTA IN CUI E’ RIPORTATA:DI ETICHETTA IN CUI E’ RIPORTATA:

Laboratorio SPECIALIZZATO nell’ambito della Biochimica Tossicologica

LABORATORIODI II° LIVELLO CHE ESEGUE SIA LE ANALISI INIZIALI CHE DI CONFERMA

MATRICI BIOLOGICHE TUTTE

METODICHE IMMUNOCHIMICHE E CROMATOGRAFICHE

TIPO DI ANALISI QUANTITATIVA

CUT – OFF GTFI

STRUMENTAZIONI ANALIZZATORI AUTOMATICI DI CHIMICA CLINICA

GC, HPLC, GCMS, LCMS, ICPMS

PROCEDURE QUELLE STABILITE NEI MANUALI DELLA QUALITA’ E

NELLE LINEE GUIDA

CONTROLLO DI QUALITA’ PARTECIPAZIONE AD UN PROGRAMMA VEQ CHE COMPRENDA

TUTTI GLI ANALITI

CATENA DI CUSTODIA SI

IL FENOMENO DELL’ABUSO ALCOLICOIL FENOMENO DELL’ABUSO ALCOLICO

OMS Terzo posto tra i26 fattori di rischio

Secondo solo a TABACCO eIPERTENSIONE

Forte aumento delle problematiche sanitarie legate all’eccessivo consumo di alcol

Necessità di trovare modalità diagnostiche più efficaci per la riduzione del consumo di

alcol

20-30% costi cure sanitarie

63% delle morti Premature

• Ottima correlazione tra le due t di h R2 0 917metodiche: R2= 0,917

• Ottimi i valori delle DS:• DS gas= 90,162

DS enz= 89,7609

• La maggior parte dei valori è compresa all’interno delle due DS

• Metodi sovrapponibili, ripetibili e confrontabili (R di Bland Altman= 0,0002 di l i )e curva di correlazione)

• La discrepanza tra alcuni valori (es 113 mg/dL VS 105 mg/dL) è di scarso interesse clinico e medico-legale

• Da notare una concordanza per valori prossimi alla soglia legalep g g

● E’ un metabolita diretto dell’alcool etilico

● Finestra temporale di 72 ore

● Si forma per coniugazione dell’Etanolo con l’acido glucuronico (nel fegato)

● Applicazione nel monitoraggio dei pazienti alcolisti

● Applicazioni cliniche e medico-legali

ETIL GLUCURONIDE

Diversi Cut – Off Diverse Applicazioni

1000 ng\ml Consumo non Domestico

500 ng\ml Ingestione di Alcol

100 ng\ml Totale astinenza da Alcol

Etilglucuronide Applicazioni

Monitoraggio Alcolisti in Trattamento

500 ng\ml Ingestione di Alcol

Metodica GC in spazio di testa per l'analisi dell'etanolo su sangue

•¬ Nel 1976 Stibler e Kjiellin osservarono che nel LCS degli etilisti era presente una forma di Transferrina con pI > 5.7

•¬ Trasferrina Carboidrato Carente o Desialata •¬ È uno dei test di più recente introduzione per

svelare l’abuso alcolico

•¬ Nel corso di astinenza il valore di CDT si normalizza con una emivita media di 15gg.

•¬ Utile per il monitoraggio

v¬ Il termine CDT è il nome collettivo di un gruppo di isoforme minori della transferrina che presentano un ridotto grado di glicosilazione, la cui concentrazione sierica risulta strettamente correlata all’abuso alcolico

CDT

Alterazione genetica: alti livelli di CDT

EtG

/cre

at

CD

T %

Etha

nol

0Ac

ute

Res

ent

Chr

onic

0 0

M T W T FTWTMSSF

CDT CDT

EtG EtG EtG EtG EtG EtGUrine Testing

Week days

Blood testing

Alc Alc Alc Alc AlcAlc

Test su urine

Giorni settimana

Test su sangue

Test su urine

L M M G VGMMLDSV

EtG

/cre

at

CD

T %

Etha

nol

0Ac

ute

Res

ent

Chr

onic

0 0

M T W T FTWTMSSF

CDT CDT

EtG EtG EtG EtG EtG EtGAlc Alc Alc Alc AlcAlc

Test su urine

Giorni settimana

Test su sangue

Test su urine

L M M G VGMMLDSV

ASTINENZA

EtG

/cre

at

CD

T %

Etha

nol

0Ac

ute

Res

ent

Chr

onic

0 0

M T W T FTWTMSSF

CDT CDT

EtG EtG EtG EtG EtG EtGUrine Testing

Week days

Blood testing

Alc Alc Alc Alc AlcAlcUrine Testing

Test su urine

Giorni settimana

Test su sangue

Test su urine

L M M G VGMMLDSV

ALCOLISTA

EtG

/cre

at

CD

T %

Etha

nol

0Ac

ute

Res

ent

Chr

onic

0 0

M T W T FTWTMSSF

CDT CDT

EtG EtG EtG EtG EtG EtGUrine Testing

Week days

Blood testing

Alc Alc Alc Alc AlcAlc

Test su urine

Giorni settimana

Test su sangue

Test su urine

L M M G VGMMLDSV

DISSUEFAZIONE

EtG

/cre

at

CD

T %

Etha

nol

0Ac

ute

Res

ent

Chr

onic

0 0

M T W T FTWTMSSF

CDT CDT

EtG EtG EtG EtG EtG EtGUrine Testing

Week days

Blood testing

Alc Alc Alc Alc AlcAlc

Test su urine

Giorni settimana

Test su sangue

Test su urine

L M M G VGMMLDSV

Il “Furbone”

“Ciò che si vede è il risultato di come si guarda”

Kierkegaard

Grazie per l’attenzione

Chi beve solo acqua ha qualche cosa da nascondere Baudelaire