protocolo de siembras

8/18/2019 protocolo de siembras

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Tema 5 - Procesamiento de las muestras enmicrobiologia clínica(protocolos de siembra)

Normas básicas generales (antes de proceder al procesamiento de la muestra):1. Volante de petición debe estar bien cumplimentada (filiación y datos administrativos

del paciente, datos clínicos, datos de la

muestra, terapéutica seguida, determinación solicitada)

2. ener constancia de !ue la obtención de la muestra "a sido reali#ada correctamente,

siguiendo las normas y criterios establecidos por el laboratorio, así como su recogida,

transporte y conservación.

$. %a siembra de dic"a muestra se "ar& en los medios idóneos para cada caso, bien en

placa, por agotamiento y'o método cuantitativo, o bien en tubo.

Procesamiento de las muestras 1. Orinas (debe llegar al laboratorio en contenedor estéril y "a de conservarse a *

en menos de 2 "oras)

[a] Agar sangre, chocolate o led!"stine-#actose-$lectrol"te-%e&icient (medios general " especi&ico para orinas) + se siembra en $direcciones' cubrir totalmente la superficie (cuantitativa en *led o - / para contar

colonias0 reali#ar antibiograma)0 crecerán todo tipo de germenes: cocos

Gram+, bacilos Gram-, levaduras0 en led!A' no crecen cocosGram- (Neisseria, Moraxella, Chlamydia)0 en - se

comprueba las características hemolíticas o no de las bacterias e.. Stafilococcus

aureus ( "emolítico) y en *led, las característica lactosa (3) + amarillas o lactosa

(/) sin cambio de color + a#ul verdosas.

[b] Agar ac one" (selecti*o para bacilos +ram-) + se siembra poragotamiento en cuadrantes (puede ponerse un disco de Colistina en el inoculo

para ayudar a la identificacin de !.coli (sensible a colistina / com4n en

orinas)0 crecenbacilos Gram- "# !nterobacterias y tambi$n %seudomonas0

observaremos las características de lactosa (3) + colonias roas y lactosa (/) sincambio de color + rosa.

[c] Agar itrato de 'immons (solo en algunos protocolos)0 se siembra

enla leng&eta del tubo preparado en pico de flauta0 las colonias consumidoras

decitrato (3) + vira a a#ul y las !ue no, permanece verde0 se usa para la diferenciación

de !nterobacterias (para diferenciar entre coliformes y coliformesfecales. #os


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coli&ormes &ecales no fueron capaces de utili#ar el citrato como fuente de carbono nia las sales de amonio como fuente de nitrógeno. 'os coliformes no

fecales como !nterobacter aerogenes o Salmonella enteritidis podían

utili#ar el citrato en este medio dando una reacción alcalina) en base a su capacidad de

utili#ar el citrato (mediante citrato permeasa)

'os g$rmenes mas frecuentes (ue podemos encontrar )en orina se

identifican especies*:

/ !. coli (el mas frecuente) + bacilo 5ram/, móvil, sensible a *olistina, lactosa (3),

indol (3)

/ Streptococcus faecalis + coco 5ram3, catalasa (/), o6idasa (/).

/ %roteus spp (todas) + bacilo móvil 5ram/, resistente a *olistina, lactosa (/),

o6idasa (/), riptófano 7esaminasa'7- (3), ureasa (3) tardío.

/ Stafilococcus aureus + coco 5ram3, catalasa (3), coagulasa (3), "emolítico,

o6idasa(/)./ Candidas spp (todas) + morfología de levaduras (parece como "ematíes)

/ lebsiella spp + bacilo 5ram/, inmóvil, sensible a *olistina, ureasa (3), colonias

mucosas, lactosa (3), tardío.

/ %seudomonas spp + bacilo 5ram/, móvil, sensible a *olistina, lactosa (/), o6idasa

(3)

. Coprocultivos (contenedor especifico para coprocultivo 8*ary y lair8 ' bote de

orina0conservada a *, procurar procesarla en 920 se siembran por agotamiento en

cuadrantes).

[a] ectoen o '' + medios selectivos y diferenciales donde crecer&n elgenero Salmonella y Sigella0 en ectoen las Salmonellas spp + coloniaslactosas (/), verdosas y pueden ser SH2 /sulfihidrogeno/ acido sulfidrico () con fondo

negro, son bacilos móviles, sensible a *olistina0 las Shigellas spp + lactosas (/) , 2

(/), bacilos inmóviles en fresco y sensibles a *olistina0 las colonias lactosas (3) en este

medio ser&n amarillas0

en '' las Salmonellas y Shigella ser&n el del medio (caramelo) y también con el

fondo negro ( Salmonellas 3 y lactosa/ )0 colonias lactosa (3) + roi#as0 las colonias

lactosas3 no son patógenas (coliformes fecales) y no se investigan.

[b] Agar ersinia .N + para buscar colonias de ersinia spp ) rosaclarito- Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica y Yersinia

pseudotuberculosis. * !ue aparece como lactosa (3), sensible a *olistina y bacilos

5ram/ e móviles, fermentador de manitol . %a in"ibición selectiva de organismos

gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal violeta (in"ibidor de

http://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_pestishttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_pestishttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_enterocoliticahttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_pseudotuberculosishttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_pseudotuberculosishttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_enterocoliticahttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_pseudotuberculosishttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_pseudotuberculosishttp://es.wikipedia.org/wiki/Yersinia_pestis


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5ram3), deso6icolato sódico (in"ibidor de 5am3) y los agentes antimicrobianos:

cefsulodina, ;rgasan (riclosan) y novobiocina (in"ibidor de .epidermidis).

[c] Agar amp"losel + crecer& Campylobacter spp (bacilos 5ram/ con flagelos)como colonias pe!ue


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[e] Agar cone" (solo en algunos protocolos) + los coliformes aparecer&n comocolonias roas por ser lactosas (3)0 no es necesario>>>

[&] Agar T/' !tiosul&ato citrato bilis sacarosa (detectar /ibrio colerae) +aparecen colonias de color amarillo sacarosa (3), o6idasa (3) y son bacilos 5ram/

pleomórficos0 el e6tracto de levadura y la peptona proporcionan el nitrógeno y las

vitaminas. ?l citrato sódico, el tiosulfato sódico, la bilis de buey y un p alcalino fuerte

in"iben los organismos 5ram3 y suprimir los coliformes (in"ibidor para la mayoría de

las entero/bacterias), favoreciendo el crecimiento de Vibrio c"olerae por!ue este

organismo essensible a los entornos &cidos. %a alta concentración de sodio favorece el

crecimiento de Vibrio c"olerae !ue es "alotolerante (tolera el medio salado) y de otras

especies de Vibrio, cuya mayoría es "alofílica. %a sacarosa (3) es un carbo"idrato

fermentable, y el cloruro sódico estimula el crecimiento. ?l tiosulfato sódico es una

fuente de a#ufre y act4a con el citrato férrico como indicador para detectar laproducción de &cido sulf"ídrico'2. ?l a#ul de bromotimol y el a#ul de timol son

indicadores de p. ?n @c, Vibrio *"olerae es lactosa (/).

0. !udados vaginal y uretral (la muestra llegara en uno o varios escobillones0 se

siembra por agotamiento en cuadrantes).

[a] Agar 'angre (medio general) + buscamos treptococcus "emoliticos del

grupo ( S.agalactiae), !ue aparecer&n como colonias pe!ue


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[c] Agar Tha"er artin o Ne0 or + buscamos 3.gonorroeae o =.meningitis!ue aparecer&n como colonias de color

gris0 son diplococos 5ram/, catalasa (3), o6idasa (3) !ue fermentan la glucosa pero no

el resto de los a#ucares.

[d] Agar +ardnerella + buscamos Gardnerella vaginalis, como colonias /"emolíticas y al fresco como bacilo pe!ue


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5. Semen / la muestra llegara en contenedor estéril' bote de orina0 se siembra por

agotamiento en cuadrante en medios: *led, @c*onCey , -gar angre, -gar c"ocolate,

"ayer @artin o =eD EorC, Foiron, y cultivo de *lamydias, buscando en cada caso los

mismos gérmenes !ue en el caso del e6udado vaginal.

6. !sputo / la muestra "a de llegar en contenedor esteril y conservarse menos de 2

a *0 antes de sembrar se observa por el microscopio si la muestra es valida' no esta

contaminada por saliva0 se siembra por agotamiento en cuadrantes0 solo se siembra

cuando en el 5ram, el cociente leucocitos' celulas epiteliales sea 2,G (recuento en

fresco'al microscopio)0 si es 9 a 1,G es dudoso. *uando sean muestras de H*; o

provenientes de neumonías se siembran siempre.

[a] Agar 'angre + buscamos colonias de Streptococcus

pneumoniae o 7ranamella catarralis0 .pneumoniae colonias verdosas(alfa "emólisis) y al fresco como coco 5ram3, catalasa (/), sensible a la

Ipto!uina0 ran"amella catarralis colonias blanco/gris&ceas y al fresco como

cocos 5ram/, o6idasa (3), catalasa (3) !ue no utili#a ning4n a#ucar (no es

fermentadora), pero reduce los nitratos a nitritos' nitratasa3(lo !ue le diferencia del

genero =eisseria !ue ademas es fermentadora de glucosa y maltosa).

[b] Agar chocolate + buscamos 2aemopilus spp como colonias puntiformestranslucidas, !ue al fresco como coco/bacilos, 5ram/, catalasa y o6idasa variable0 agar

c"ocolate polyvite6 (contiene factor V' =-7 y factor A '"emina procedente de

ladegradación de b)

[c] Agar cone" + donde creceran ?nterobacterias y otros bacilos 5ram/.

[d] edio de #o0estein-3ensen (o oletsos) + pararescatar 4ycobacterium tuberculosis, bacilos acido alco"ol resistente (J"iel

=eelsen3) de crecimiento muy lento0 los niveles baos de la penicilina y el &cido


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nalidí6ico también est&n presentes en el medio de %K para in"ibir el crecimiento de lo

5ram3 y 5ram/, con el fin de limitar el crecimiento de especies de micobacterias

solamente. Lresencia de verde mala!uita en el medio in"ibe las floras mayoría

acompa


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[e] Agar 'abouraud (solo en orales) + deteccion de Candidas spp.

. !udados varios / abscesos "eridas ... (se sembrara por agotamiento en

cuadrantes. %a muestra "a de llegar en tubo estéril y se conservara a * menos de

2.

[a] Agar sangre + crecer& todo tipo de gérmenes

[b] Agar chocolate + idem

[c] Agar ac one" + crecer&n las ?ntero/bacterias y otros bacilos 5ram (/) pocoe6igentes.

[d] Agar NA 'agar sangre (de cordero) colistina nalidi6ico, medio selectivo para5ram3' in"ibidor 5ram/ + crecer&n bien los Steptococcus 7-emol;ticos.

[e] Agar ANA (agar sangre anaerobios' A'A , aun!ue también puede utili#arseagar A41 , agar sangre Canamicina y vancomicina) + medios selectivos para bacilos5ram/ anaerobios (estrictos) y 7acteroides.

[&] aldo Tioglicolato + crecen bien todo tipo de bacterias aerobias o anaerobias0permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los

nutricional/mente e6igentes. -dem&s, se observa !ue las bacterias estrictamente

aerobias, crecen en la parte superior, mientras !ue las anaerobias facultativas o

anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio.

2$#A.N %$ #A' /AT$2.A' N $# 6.+$N $N T.+#.#AT ?n base a la relación de las bacterias con el o6ígeno, estas se pueden clasificar en :

78 Aerobio estricto: Hn organismo el cual re!uiere utili#ar el o6ígeno como

aceptador terminal de electrones , puede tolerar un nivel del o6ígeno e!uivalente o

mayor de una atmósfera de aire (o6ígeno del 21O), y tiene un tipo terminantemente

respiratorio de metabolismo ( 4ycobacterium tuberculosis, 7acillus).

98 Anaerobio o Aerobio &acultati*o: Hn organismo !ue puede crecer bien en

ausencia del o6ígeno y en la presencia de un nivel de o6ígeno e!uivalente a una

atmósfera del aire (o6ígeno de 21O) + !nterobacterias, /ibrio spp,

2aemopilus spp..

:8 icroaero&ílico (anaerobio aerotolerante): Hn organismo !ue es capa# de un

crecimiento o6ígeno/dependiente, pero no puede crecer en la presencia de un nivel del

o6ígeno e!uivalente a una atmósfera de aire (o6ígeno de 921O) + Campylobacter


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fetus, %seudomonas y 3eisseria.

;8 Anaerobio estricto: Hn organismo !ue es incapa# de crecimiento o6ígeno/

dependiente y no puede crecer en la presencia de una concentración de o6ígeno

e!uivalente a una atmósfera de aire (o6ígeno de 21O / nada de I2). (Clostridium

botulinum).

58 Anaerobios aero-tolerantes: Lueden crecer con o sin o6ígeno pero su

metabolismo es siempre fermentativo ( 'actobacillus)


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y 7acteroides.

11. Cateteres y sondas / se siembra mediante la técnica de @aCi (rodamiento del

cateter)

[a] Agar chocolate + crecer&n casi todo tipo de gérmenes, y podr&n crecer bienalgunos e6igentes como el aemop"illus.

[b] Agar sangre + crecer&n bien casi todo tipo de gérmenes y podr& verse suscaracterísticas "emolíticas si las tuvieran.

[c] aldo tioglicolato + si se observa crecimiento se "ar& un pase por -garc"ocolate.

RdS ambién puede ponerse en una placa de agar @ac*onCey.

1. 2emocultivos / la muestra se introduce en el vial de "emocultivos, conservando

a $Q* en el actec (detecta *I2) "asta su identificación.

Tema < - edios de ulti*o en bacteriologíaclínica (lasi&icaci=n " Preparaci=n)

edios de culti*o / compuesto por distintos nutrientes re!ueridos para cultivargérmenes como las bacterias, "ongos y par&sitos seg4n sus necesidades nutricionales

de cada uno0 en función de sus re!uerimientos, e6isten grandes diferencias entre los

medios de cultivo !ue nos sirven para diferenciar cada tipo de microorganismo !ue

podr& crecer en unos medios de cultivo y no en otros.

>unci=n de medios culti*o:/ separar y aislar distintas especies microbiales presentes en una muestra.

/ paso previo para el estudio de identificación de un microorganismo problema.

/ conocer el metabolismo en función del nutriente o sustrato !ue utili#a (lactosa) o

metabolito !ue produce (indol).

/ estudios macroscópicos + visuali#ar las características de las colonias en medios

sólidos.

/ reali#ar antibiogramas determinando la sensibilidad (mayor'menor) de la bacteria

problema a distintos antibióticos.

/ pruebas de *@; (concentración minima in"ibitoria)

/ conservar las especies microbiales o muestras.

2e?uerimientos energ@ticos " no energ@ticos de los medios deculti*o / fuente de energia (fuente de carbono y de nitrogeno) y fuente noenerg$tica (a#ufre, fósforo, iones met&licos, factores de crecimiento, f. de arran!ue y


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in"ibidores) necesarios para el desarrollo (crecimiento) de cultivos microbiales0 fuente

de carbono + acido acetico, alco"ol, citrato sódico, a#ucares (mono o disac&ridos

incluso almidón + glucosa, lactosa, maltosa), *I2 (bacterias fotosinteti#antes y

!uimiolitotrofas)0 conocer el tipo de a#ucar utili#ado + 4til para su identificación

bio!uímica y clasificación ta6onómica0 fuente de nitrógeno (menos energética) +

proteínas completas (gelatina / determinar actividad proteolítica'gelatinasa0 e6tractos

de carne y sales de amonio), péptidos'polipeptidos (peptonas / e6tractos de levadura,

caseína / trípsica de caseína'triptófano + formación de indol) o amino&cidos y otros

+ nitratos, nitrogeno organico, amoniaco, sales de amonio, aminoacidos0 conocer la

fuente nitrogenada + util para clasificación ta6onómica0 fuente de a#ufre + sulfatos,

tiosulfatos, aminoacidos (metionina, cisteina, tiamina)0 fuente de fosforo +

fosfatos0 iones metalico + "ierro, potasio, sodio, magnesio y en concentraciones mas

baas + cinc, manganeso, cobre, cobalto, etc0

tros re?uerimientos no energ@ticos: >actores de crecimiento + componentes !ue muc"as bacterias no son capaces de

fabricar por si solas para su crecimiento (amino&cidos + cisteina0 factor A y factor V

procedente de la degradación b0 vitaminas, bases puricas y pirimidicas)0 factores

de arran(ue + sustancias !ue permite a la bacteria salir de su fase de latencia y

comen#ar su fase de crecimiento e6ponencial (fuentes de energía + glucosa0 iones

met&licos !ue estimula el crecimiento)0 factores inibidores + componentes !ue

blo!uar el proceso metabólicos de algun microbio0 muy 4tiles para la identificación y

tipificación bio!uímica de las bacterias

(a#ida sodica + impide 5ram/0 antibióticos + in"ibidores y destructores0 colorantes

laeosina a#ul de metileno utili#ado por medio %evine0 cristal violeta en medio @ac/

*onCey + impide 5ram3).

ondiciones ?ue ha de cumplir un medio de culti*o:1. Hna composición de nutrientes adecuada (re!uerimientos energéticos y no

energéticos)

2. *ondiciones físico/!uímicas apropiadas:

/ Temperatura optima!ideal (seg4n la especie microbiana

+ psicrófilas 92P*0mesófilas 1T/G*0 termófilas G*0 las bacterias patógenas del

"ombre $G/$Q*0 fuera de estas no crecen o crecen muc"o mas despacio0)e..: !ersinia 22*, Campylo"acterG* (los dos son gastrointestinales)

/ +rado de humedad (cantidad de agua !ue necesita para crecer)

/ p adecuado es en general cercano a la neutralidad 3'/ Q(estabili#ante de p + buffers o tampones !ue facilitan el crecimiento)0 p acido + #io"acilos (cerca a

P)0 p alcalino + bacilos ureasa positivo' $roteus (en torno a T) y %i"rio

cholerae (p U)


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/ Presi=n osm=tica en general isotnia ($PP miliosmoles)/ Presencia o ausencia de oigeno0 la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias son facultativos !ue se desarollan bien con y sin I20 e6isten pocos

anaerobios estrictos0 bacterias microaerofílica + produce mas *I2.

Principales tipos de medios de culti*o/ seg4n su proporción de agua ' su consistencia (sólidos, lí!uidos, caldo)

/ seg4n su uso ' su utili#ación (para aislamiento, crecimiento en general 'recuento,

identificacion, mantenimiento de cepas, para antibiogramas)

/ seg4n su origen del !ue proceden (naturales, sintéticos y semi/sintéticos, compleos)

/ seg4n su presentación (des"idratados o liofili#ados, sólidos en placa petri, sólidos en

tubo, lí!uidos en tubo, semi/sólidos en tubo, doble fase en frasco o tubo).

edios de culti*o segBn su proporci=n en agua:

/ 4edios slidos 1GO de agar0 para aislamiento, identificación, elaboración deantibiogramas) +1TT1 Noc" utili#a la gelatina (inconveniente + se funde a 2o* y

e6isten bacterias gelatinasa positiva !ue destruiran tal medio)0 posteriormente esse

su alumno usa el agar (medio inerte).

/ 4edios l;(uidos?caldos + contiene agua, fuente de carbono, sales minerales y

algunos lleva factores de crecimiento, vitaminas, peptonas y amino&cidos.

/ 4edios semisolidos + agar semi/sólidos (9GO de agar)

edios de culti*o segBn su uso o utiliCaci=n:/ 4edios para aislamiento + aW medios enri!uecidos (componentes basicos 3

caseina soa, triptofano para microorganismo e6igente0 e.. agar sangre'c"ocolate

bWmedios selectivos (componentes basicos 3 componentes !ue impiden el crecimiento

de alg4n tipo bacteriano para seleccionar) e.. medio Fot"e (para aislar Streptococcus

faecalis'5ram3) contiene a#ida sódica !ue impide 5ram/0 la mayoria de medios

selectivos son también medios diferenciales cW medios diferenciales (+ medios

selectivos 3 sustancias resalta las caracteristicas microbiales de algunas0 e..

medio %evine (contiene eosina y a#ul de metileno !ue in"ibe 5ram3 y algunas 5ram/,

facilita a las enterobacterias y lactosa(para las fermentadoras)

/ 4edios para crecimiento en general + li!uida o solida sirve para el

crecimiento de la mayor parte de las bacterias (componentes basicos 3 sales y agua) 0e.. el caldo comun (contiene e6tracto de carne, peptona, glucosa, cloruro sodico y

agua)0 el caldo ioglicolato.

/ 4edios de identificacin (+ medios diferenciales) + sirve para

clasificar ta6onómica/mente el microoganismo0 e.. agua peptonada + indol

positivo0 caldo tuart urea/indol + ureasa0 glucosa + fermentación de glucosa

(sacarolitico + sacarosa positivo).


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/ 4edios de mantenimiento de cepas + mantener las cepas vivas durante

periodos de tiempo relativamente largos a temperaturas baas para impedir su

crecimiento0 e..lec"e descremada congelada

/ 4edios para antibiogramas0 e.. Lroctor (antibiogramas fungicas), @ueller

inton(a.b.bacterianas), XilCins/*"apman (a.b. bacteriana anaerobicas).

edios de culti*o segBn su origen/ 4edios naturales + poco utili#ados, se preparan artesanalmente, constituidos

por ciertos teidos, li!uidos organicos (lec"e, "uevo, patata, suero sanguineo)

/ 4edios semi-sint$ticos + parte de su composicion son e6tractos

naturales(levadura, malta, patata, sagre, lec"e) 3 constituyentes sintéticos

/ 4edios sint$ticos + estructuras sintéticas mas o menos puras y !uímicamente

definidas disueltas en agua destilada (los mas utili#ados en bacteriologia y en general)0

contiene: fuente de carbono o a#ucar, fuente de nitrógeno inorg&nica como iones =I/

$, =3 o org&nica como peptona, amino&cidos, aminas, etc., compuestos mineralescomo oligoelementos, factores de crecimiento (vitaminas, aminoacidos, bases puricas o

pirimidínicas).

/ 4edios comple@os + son los primeros !ue se utili#aron en bacteriología0 en

actualidad se uss mas en parasitología y virología0 se preparan de forma complea

(teidos animales'carne de musculo, "igado, cora#on, yema de "uevo, a#ucares,

pepetonas, vegetales, etc.

edios de culti*o segun su presentacion/ @edios des"idratados o liofili#ados

/ @edios ya preparados

/ @edios solidos en placa Letri

/ @edios solidos en tubo

/ @edios li!uidos en tubo

/ @edios semisolidos en tubo

/ @edios de doble fase en frasco

Principales medios utiliCados en microbiología1. Agua peptonada (peptona en medio acuoso con p Q a $Q* 2/T "oras) +

determinación de la producción de indol debido a su alto contenido en triptófano0 traslaadición de G'Y gotas de reactivo Novacs en "idró6ido pot&sico (NI PO) + anillo

roo en la superficie indicara indol positivo.


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2. edio hapman (selectivo y diferencial) + aislamientode tap"ylococcus ("alófilos) S&aureus (coagulasa3)0 *omp: alto contenido de cloruro

sódico QG gr (agar manitol salado)0 1G gr de 7/manitol (diferencial + a#ucar utili#ado

por algunos estafilococos), 2G gr de roo fenol (indicador positivo de p a $Q* 2/T

"oras + amarillo dorado)0 es orientativa, se debe completar la prueba con pruebas bio!uímicas (coagulasa'late6)0 .epidermidis no fermentan el manitol, por tanto el

color sigue roi#o o purpureo.

$. Agar de Tha"er " artin (-gar =eD EorC *ity) + no permite el crecimiento demuc"os microorganismos, pero si permite aislar gonococos y meningococos

( Neisseria)0 *omp: agar c"ocolate' sangre calentado 3 formula polyvite6 (vitaminas y

amino&cidos) 3 V*- ( vancomicina + in"ibe los 5ram3, colistina + in"ibe

los coliformes '5ram/,anfotericina + antif4ngico, trimetropinsulfametro6a#ol +

antibiótico de amplio espectro).

. Agar chocolate Pol"*ite + medio general enri!uecidos donde crecen lamayoría de bacteria y Haemophyllus)0 *omp: agar c"ocolate 3 formula polyvite6


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(vitaminas y amino&cidos) incluyendo factores A ("emina) y V (=-7' nicotinamida

adenina dinucleótido) proporcionados por la "emoglobina y LolyViteA.

G. edio base hristensen (lí!uidos y sólidos) + para la prueba de la ureasa0ureasa3 de roo + rosa0 gérmenes con ureasa3 + $roteus y Helico"acter pilory

Y. edio citrato de 'immons (agar solido) + prueba de citrato (como fuente de

energía) para la investigación de bacilos 5ram/ (la diferenciación entre coliformes y

coliformes fecales. %os coliformes fecales (?.coli) no fueron capaces de utili#ar el

citrato como fuente de carbono ni a las sales de amonio como fuente de nitrógeno. %os

coliformes no fecales como 'ntero"acter aerogenes o Salmonella enteritidis podían

utili#ar el citrato en este medio dando una reacción alcalina)0 *omp: citrato

sódico, a#ul de bromotimol(indicador p, de !ue el citrato esta consumido 'se

alcalina0 verde + a#ul)0 gérmenes con citrato permeasa + Nlebsiella pneumoniae,

almonella, ?nterobacter aerogenes.


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Q. edio lar " #ubs (caldo' li!uido) + para diferenciar entero/bacteriasmedianteprueba de Voges/LrosCauer (producción de acetoína' acetil metil carbinol +

por reducción a 2,$ butanodiol o por o6idación a diacetilo)0 y prueba de Foo de

@etilo(acidificación del medio con p 9,G y cambio de color a roo)0 gérmenes

con VL3 + le"siella pneumoniae y 'ntero"acter aerogenes0 gérmenes

con F@3 + Lroteus, ?.coli y almonella.

T. edio led!"stine-#actose-$lectrol"te-%e&icient (solido) + recuento e

identificación de gérmenes en las vías urinarias0 *omp: lactosa en alta cantidad, a#ul

de bromotimol (indicador del consume lactosa verde + amarillo)0 las colonias mas

frecuente + '&coli (amarilla %3), Lroteus (a#ul %/), Nlebsiella (amarilla a#ulada y muy

mucosa (%3), Lseudomonas aeruginosa (verde %/), Streptococcus faecalis (amarilla

%3), Staphylococcus aereus (amarilla %3).

U. Agar sangre (se comerciali#a con nombre - + tripticasa, soa, agar)

+investigación de microorganismos "emolíticos (consume "ematíes)0 es un mediogeneral enri!uecida0 *omp: sangre de cordero (agar columbia) o caballo o ternero +

estériles y desfibrinadas0 alfa "emólisis' neumococo (parcial) + "alo verdoso'difuso

alrededor de la colonia0 beta "emólisis' Streptococcus *hemolítico y Staphylococcus

aureus !ue causan anginas (total) + "alo transparente0 gamma

"emólisis' Lseudomona causa gastro intestinales (no "emoli#ar) + sin "alo.


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1P. edio eosina aCul de metileno '?@ (@edio #e*ine) + selectivo y diferencial, para aislamiento de entero/bacterias 5ram/ (?.coli, ?nterobacter,

almonella, "igella, Lroteus, Nlebsiella) *omp: alto contenido de lactosa (indicador

fermentadora), eosina a#ul de metileno (indicador de p y in"ibidor los 5ram3 y las

floras de 5ram/ fastidiosas).

11. edio de agar etoen (diferencial y selectivo) + aislamiento de entero/ bacterias patógenas 5ram/0 *omp: sales biliares (in"ibe 5ram3), lactosa (indicador de

%3 + amarillo'narana) sacarosa, peptona, tiosulfato sódico y citrato férrico

amoniacal(indicador de la producción 2'2 + puntos negro), a#ul de

bromotimol, fusc"sina &cida (indicadores de p)0 en condición normal es verde +

fermentacion de lactosa'acidificación + vira a amarillo'narana (características

de fermentadora %3?sc"eric"ia, erratia, Nlebsiella, *itrobacter, ?nterobacter y Vibrio

c"olerae)0 cuando se consume lactosa 3 peptona (se acidifican primero, y después se

basifican) + verde0 cuando se consume a#ufre' disulfurasas3 + precipita el "ierro y

la colonia se vuelve negro (característica de Salmonella y $roteus +ulgaris).


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12. edio 4liger o 4.A (Nliger ;ron -gar) + medio solido en tubo (color caramelo)0muy semeante y mas utili#ado es ; (triple sugar, iron) 3 1P gr de sacarosa 0 muy

utili#ado para la identificación de entero/bacterias, pruebas de la lactosa, glucosa, gas y

20 *omp: lactosa (indicador de %3), peptonas, glucosa, citrato férrico amoniacal y

tiosulfato sódico (componentes para producir 2), roo fenol (indicador de p)0 los

gérmenes productor de '9D + $roteus, Salmonella y Citro"acter0 los productores

del gas 9D + almonella y *itrobacter y ?.coli.

1$. edio aconce" (color rosa) + aislamiento e identificación de entero/ bacterias 5ram/' poco e6igentes0 *omp: sales biliares (in"ibidor5ram3), lactosa (indicador %3), cloruro sodico, roo neutro, cristal violeta (in"ibidor

los cocos de 5ram3)0 #D (consumidor de lactosa) + roo (?.coli y ?nterobacteraerogenes), #- (no fermentador)+ almonella, "igella y Lseudomonas0 5ram/e6igentes + =eisseria, aemop"yllus.


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1. edio ueller inton (general) + para la reali#acion de antibiograma por elmétodo de auer/Nirby

1G. edio rnitina o*ilidad' @;I (preparado en tubo' semisolido) +

identificación de la movilidad bacteriana (entero/bacterias), capacidad paradescarbo6ilar la ornitina(orinitina descarbo6ilasa 'est& dada por un color p4rpura'

alcalinidad del medio y laproducción de indol (al a-'elenito (selectivo) + medio enri!uecido con fosfato para elaislamiento de Salmonella0 *omp: selenito sódico (in"ibidor de flora 5ram3 y

5ram/ e6cepto almonella)0 después también se "ace cultivo con agar .


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1Q. edio agar '-' (color caramelo) + aislamiento de las bacterias patógenasimportantes Salmonella y Sigella0 *omp: lactosa (indicador fermentadora de

%),tiosulfato sódico y citrato de "ierro (indicador de 2), sales biliares y verde

brillante(in"ibidor bacillos 5ram3), roo neutro (indicador de p)0 #D (coliformes /

?.*oli y Nlebsiella) + roas o rosadas0 #- " '9- + incoloras (típico de "igella)0 #- " '9Dcon la precipitación de "ierro + negro (típico de almonella).

1T. edio Agar 6#% (agar 6ilosa/lisina/deso6icolato) + se utili#a para elaislamiento y diferenciación de bacilos entéricos 5ram/, especialmente del

género Salmonella y especialmente Shigella (entero/bacterias patógenas)0*omp.: 6ilosa (la fermentan los entéricos menos "igella), sacarosa y

lactosa, deso6icolato de sodico (in"ibe 5ram3)0 se puede utili#ar para la identificación

de lactasa3, lisina descarboilasa+ +almonella !ue alcalini#a el medio y 23

(tiosulfato sódico 3 citrato de "ierro amoniacal).

1U. edio caldo olumbia + caldos para "emocultivos.


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2P. edio astaEeda (caldo y solido) + b4s!ueda de gérmenes 7rucella,/ibrios y %asteurella en sangre ("emocultivos).

21. edio de #o0enstein-3ensen (selectivo) + cultivo de Myco"acteriumtu"erculosis y otras micobacterias0 *omp: fécula de patata, verde mala!uita +

in"ibidor de la mayoría de gérmenes0 la prueba se confirma con tinción de acido

alco"ol resistencia(*on la tinción de Jie"l/=eelsen las micobacterias se observan como

bacilos de color roo)0micobacterias patógenas crecen muy lenta (3 Q días)0 los niveles

baos de la penicilina y el &cido nalidí6ico también est&n presentes en el medio de %K

para in"ibir el crecimiento de 5ram3 y 5ram/, con el fin de limitar el crecimiento

+ 4nico de micobacterias.

22. edio 'abouraud + para el aislamiento e identificación de "ongos micelares y

levaduriformes.

2$. edio 'abouraud gentamicina tetraColium + para el aislamientoeidentificación de Candida (levaduriformes)0 %a gentamicina in"ibe el crecimiento de

la mayoría de las bacterias 5ram/ y 5ram3.

2. edio 'chaedler con *itamina 4: (caldo o agar solido) + para cultivo


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deanaerobios (estrictos y facultativos)0 %a presencia de factores de crecimiento como el

e6tracto de levadura, la "emina y la vitamina N$ y la adición de sangre de

cordero permite el crecimiento incluso de las especies m&s e6igentes.

?l agente reductor (%/cistina) y la elevada concentración de de6trosa en el medio

favorecen el crecimiento

de especies anaerobias p.e. %actobacillus, treptococcus, *lostridios y acteroides.

2G. edio P' cromog@nico (agar' solido) + es un medio de aislamiento y de identificación destinado a las muestras urinarias0 permite reali#ar (7) el recuentomicrobiano (método de inoculación estandari#ado)0 (9) identi&icaci=n de: ?sc"eric"ia coli, ?nterococcus del grupo 7, N? (Nlebsiella, ?nterobacter, erratia), Lroteeae

(Lroteus, Lrovidencia, @organella)0 la concentración elevada de agar evita el

crecimiento invasivo de Lroteus0 el medio se inocua directamente a partir de la orina,

respetando técnicas adecuadas de toma de muestras y su transporte0 permite la

identificacion directa de:a. !.coli + coloración espontanea (rosa a burdeos) de las colonias productores de

/glucuronidasa (/5HF) y coloración a#ul revelada por el reactivo indol cuando la

cepa genera triptofanasa.

b. !nterococcus y 4$' + coloración espontanea aAul-verde de las cepas!ueproducen /glucosidasa (/5%H).

c. Proteeae + coloración marrón revelada por el reactivo 7- cuando la cepagenera triptófano desaminasa (sin reactivo es incoloro).

@odo operativo / dear atemperar las placas a temperatura ambiente0 inocular la

muestra con el asa calibrada de 1Pul + sumergir el asa en la orina, mantenerlo

verticalmente0 descargar el asa al reali#ar una estría sobre un radio de la placa0

reali#ar estrías perpendiculares muy apretadas sobre toda la superficie de la placa0

incubar en la estufa con la tapa "acia abao a $Q* en aerobiosis0 se e6aminan los

cultivos después de 2 "oras de incubación.

%ectura e interpretación:

Becuento / estimar la concentración bacteriana comparando la densidad de las

colonias presentes sobre la mitad superior de la placa con la del es!uema0 91PPP

(negativo), entre 1PPP / 1PP.PPP (dudoso), mas de 1PP.PPP (positivo)

dentificacin / observar las colonias

(1) *olonias de color rosa a burdeos o translucidas con centro rosa a burdeos+ presunción de ?.coli0 confirmar mediante una detección de indol (depositar

una colonia sobre un disco de papel previamente embebido de una gota de reactivo F1

del envase ;7 ;ndol 7-) + indol3 da una coloración a#ul ( !.coli)0 la ausencia de

color a#ul (indol/) se debe proceder a la pruebas de -L;.

(2) *olonias de color a#ul/verdoso y observación de cocos 5ram3 mediante e6amen

directo + !nterococcus0 si no cumple esta condición, se debe proceder a las


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pruebas de -L;.

($) *olonias de color a#ul/verdoso y observación de bacilos 5ram/ mediante e6amen

directo + grupo N?0 la identificación se debe proseguir mediante

pruebas bio!uímicas (ureasa3 + Nlebsiella0 ornitina descarbo6ilasa3 +

?nterobacter0 gelatinasa3 + erratia).

() *olonias incoloras a marrón/anaranado + efectuar 7- (depositar sobre algunas

colonias idénticas, una gota de reactivo F2 del envase ;7 ;ndol 7-), observar

la coloración después de unos $P segundos + 7-3 da una coloración marrón 3'/

oscuro0 efectuar indol + indol3 da color a#ul ( %roteus, %rovidencia o

4organella)0 ausencia de coloración a#ul es indol/ ( %roteus mirabilis)0 7-/ da

una coloración amarilla y la identificación se debe proceder a las pruebas de -L;.

Tema F - etodos de 'iembra (culti*o de lascepas)

'embrar / cultivar la muestra utili#ando técnica y medios adecuados para conseguirel obetivo (identificar el microorganismo).

Preparaci=n de in=culos (pe!ue


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+ 1,G 6 1P.Y'ml de microorganismos en el inoculo0 escala 1 + $ 6 1P.Y 'ml0 escala 2 + Y

61P.Y.'ml.

etodos de inoculaci=n " aislamiento de microorganismos1. 4etodos de siembra - inoculacin:

aW ?n medio li!uido0 con asa + se sumerge el asa cargada en el medio y se agita0 con

pipeta + se vierte el contenido de la pipeta sobre el medio de cultivo y se

"omogenei#a0 con escobillón + con asa.

bW ?n medio solido (en placa):

/ ;noculación previa al vertido en placa (técnica de arry / no se utili#a muc"o) + P,1

ml de inoculo 3 2G ml de medio cultivo + fundido' atemperado a G/GG* para no

esterili#ar + "omogenei#ar + verter en la placa de Letri.

/ ;noculación sobre la superficie del medio solidificado (técnica de Nirby/auer) + se

prepara el inoculo en un tubo estéril0 se introduce un escobillón estéril impregnando0

se elimina el e6ceso presionando el escobillón con movimiento de rotación contra las

paredes del tubo0 se siembra la placa emplenando la técnica de los tres giros

distribuyendo uniformemente el inoculo0 se dea secar la placa /G minutos en posicion

semiabierta e invertida, !uedando lista para ser utili#ada (en los antibiogramas).

cW ?n medio solido (en tubo):/ iembra por estria en superficie inclinada + se toma la muestra con el asa '"isopo0

se introduce en el tubo !ue contiene el medio0 desde el fondo y en progresión

ascendente se desli#a el asa en movimiento de #ig/#ag (se utili#a para pruebas

bio!uímicas y renovar cepas).

/ iembra en picadura (para ver la movilidad de los gérmenes en la #ona de punción 3

pruebas bio!uímicas) + se toma la muestra con la agua o "ilo0 se punciona en el

centro del medio introduciendo la punta de la agua "asta 2/$ mm del fondo del tubo0

se e6trae la agua por la misma linea !ue se introduo0 medio solido inclinado

+ puede reali#arse tambien una siembra en estría por la superficie del medio con la

misma agua0 agar semi/solido + puede usar el asa en lugar de la agua.


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2. 4etodos de siembra - aislamiento (para obtener cepas puras' bien aisladas) :

aW iembra en estria o #ig/#ag + se deposita el inoculo en el e6tremo superior de la

placa0 se siembra con el asa o con "isopo, a partir del inoculo, con un movimiento en

#ig/#ag cada ve# mas amplio de lado a lado de la placa0 el estriado "a de "acerse sin

presionar el medio, suavemente, sin levantar el asa y sin flamearla0 las colonias mas

aisladas las obtendremos en la #ona mas distal del inoculo, es decir al acabar la

siembra.

bW iembra en tres direcciones + se deposita el inoculo en el e6tremo superior de la

placa deando desli#ar "acia el centro para ello inclinaremos la placa (también se

puede arrastras con el asa)0 mediante asa o escobillón, "aremos movmientos laterales

de un lado a otro de la placa, deando las estrias muy untas0 giramos la placa UP y

reali#amos la misma operación, sin flamear o cambiar de asa0 volvemos a girar la placa

"aciendo lo mismo0 al final nos !ueda una placa muy bien tapi#ada. e reali#a en

urinocultivos para el contae de las colonias.cW iembra en estría multiple + se deposita el inoculo en un e6tremo de la placa0 con

el asa se reparte en varios tramos, siguiendo el borde de la placa0 entre cada tramo se

"a de flamear o cambiar el asa0 los segmentos seguidos describen un poliedro regular y

el ultimo tramo se efectua "acia el interior en el !ue se obtendran colonias aisladas.

dW écnica por agotamiento en cuadrantes (lo !ue usamos) + es muy similar a la

anterior pero sin flamear el asa y estriando mas los cuadrantes, aprovec"ando mas la

placa.

eW écnica de los cuadrantes + se divide la placa en cuadrantes (pueden rotularse

por la parte posterior)0 se deposita el inoculo en el e6tremo superior de uno de los

cuadrantes y se siembra en estría0 sin flamear el asa, se reali#a la misma operacion

sucesivamente en los otros $ cuadrantes0 en cada uno de ellos se sembrara el inoculo

!ue !ueda ad"erido al asa, tras la siembra del anterior0 en el ultimo de los cuadrantes

sembrado, se encuentran las colonias aisladas.

fW écnica de los tres giros + se siembra en estría la mitad de la placa0 flamear el asa0

se gira la placa UP, sembrando en estría la mitad superior de la misma0 se repite la


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operación, es decir se "a de flamear el asa, se gira la placa y se estría0 la colonia

aisladas aparecer& en la #ona sembrada en ultimo lugar.

Tema G - aracterísticas biol=gicas de la

bacteria (or&ología)

/acterias / organismos unicelulares de tama


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$structura " composicion de la pared celular / +ramD + mono/estratificada y gruesa, compuesta por mureina (peptidoglicano / mono/capa, GPO peso seco'muc"a

cantidad), polisac&ridos, proteínas y &cidos teicoicos0 +ram- + biestratificada y fina (1Z capa es mureina en poca cantidad y 2Z capa formada por polisac&ridos

proteínas, fosfolipidos y lípidos, no tiene &cidos teicoicos)0 las bacterias !ue no son

sensibles a la tinción de 5ram + --F' acido alco"ol resistentes (micobacterias)0 las

!ue sin pared celular + los de genero mycoplasma' patógenas0 la !ue tienen (formas

), pero la pierden (formas %).

embrana plasmática / estructura delgada !ue se e6tiende por dentro de la paredcelular, encerrando al citoplasma0 funciones + act4a como barrera selectiva,

interviene en la degradación de nutrientes y producción de energía, en algunas se

encuentran pigmentos y en#imas para la fotosíntesis0 estructura y composición +

fosfolípidos, proteínas y glicolípidos0 mesosomas + plegamientos "acia dentro de la

membrana plasm&tica, irregulares (no e6isten en las celulas eucarióticas), se encargan

de dirigir la duplicacin del -.N "acteriano y realiar la respiracin.

itoplasma / es todo lo !ue "ay en el interior de la membrana plasm&tica0 función +engloba los org&nulos celulares (región nuclear, ribosomas, inclusiones'depósitos de

reserva, vacuolas)0 no tienen ni aparato golgi, ni retículo endotelial plasm&tica, ni

mitocondria0 composicion + TPO de agua, en#imas, iones y principios inmediatos.

2egi=n nuclear / una #ona en el interior del citoplasma donde se acumula el acido

nucleico0 funciones + el acido nucleico transmite la información genética de la célula

sobre estructuras y funciones celulares0 estructura y composicion + es un n4cleo

difuso !ue contiene 1 molécula -7= bicatenario, formando = cromosomas (enroscada

en forma de anillo)0 plásmidos + estructuras !ue pueden e6istir ademas de -7=

cromosómico (formadas por moleculares de -7= e6tra/cromosómico bicatenario,

pueden estar libres o unidos al -7= cromosómico 'episomas), se replican

independientemente, se transmite por conugación, portan genes muy importantes !ue

determinan la resistencia a antibióticos, tolerancia a metales tó6icos y síntesis de


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en#ima.

2ibosomas / son org&nulos celulares muy abundantes (presentes en eucariotas y procariotas) dan aspecto granuloso a su citoplasma0 funciones + síntesis de

proteínas0estructura y composicion + en grupos de $ o unidos por un filamento de

-F= mensae (polirribosomas), cada ribosoma tiene 2 subunidades de $P y GP

vedberg (velocidad relativa de sedimentación), procariotas / QP y eucariotas / TP0

comp: YPO-F=r y PO proteínas.

$lementos &acultati*os (algunos no tienen / variables) / son elementos desupervivencia y virulencia

nclusiones citoplásmicas / aparecen en el citoplasma y no tienen una estructura

uniforme0 funciones + depósitos de reserva e intervienen en funciones de regulación0

ipos: (1) 5r&nulos de reserva + lipídicos, corp4sculos metacrom&ticos (fosfato

inorg&nico), polisac&ridos (glucógeno y almidón), gr&nulos de a#ufre0 (2) Vacuolas +ac4mulos de gases o lí!uidos rodeados de membrana (donde se fia *I2).

>lagelos / largos apéndices filamentosos frecuentes solo en los bacilos (su presencia

es rara)0 funciones + responsable de la movilidad (elementos patogénico: facilitar la

difusión de las bacterias a traves de las

membranas)0 estructura + tres partes (filamento, codo y corp4sculo

basal)0 tipos +monótricas (1 solo flagelo en un e6tremo), lofótricas (2 o mas en un

e6tremo), anfítricos(un grupo de flagelos en un e6tremo y otro grupo en el otro

e6tremo), perítricos (flagelos distribuidos en toda la superficie de la bacteria)0

%elos ?pilis o fimbrias / elementos rígidos constituidos por una proteína (pilina)0

cortos, muy numerosos, distribuidos sobre la superficie, mas frecuentes en 5ram/ !ue

en 5ram30 funciones + capacidad de fiación a superficies (pelos comunes),

proporcionan pelos comunes y se6uales (son morfológicamente iguales), sistema

de intercambio de información genética por conugación (pelos se6uales).

!ndosporas / solo en bacilos ( acillus aerobio estricto y Clostridium anaerobio

estricto)0 una forma de resistencia !ue adoptan algunas bacterias ante situaciones

adversas (deficiencia nutricional, desecación, frio, temperaturas elevadas, agentes!uímicos)0 se forman por un proceso de esporulación 'esporogénesis, pueden

permanecer latentes durante cientos de a


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componentes celulares0 @orfológicamente comien#a con el aislamiento del n4cleo y

elementos energéticos mediante el crecimiento en vaginante de la membrana0 los

elementos esenciales para la vida !uedan protegidos en esa nueva estructura

(endosporas)0 la bacteria !ueda en estado latente esperando una condición e6ternas

favorables para resurgir.

Capsula / estructura !ue rodea la pared bacteriana0 se visuali#a con tinción negativa

(tinta c"ina)0 funciones + regula el intercambio de agua, iones y nutrientes, sirve

comoalmacén e6terno de nutrientes, defensa frente a -cs, fagos y celulas

fagocíticas (elemento virulencia), protege de la desecación (contiene agua), formación

de colonias("abitualmente engloba mas de una bacteria)0 estructura y composición +

polisac&ridos y proteínas.

TamaEo " or&ología de las /acterias / P,2 / 2 um0 es preciso utili#ar elmicroscopio óptico0 la mor&ología + información primaria sobre el tipo de bacteria,pero no de forma concluyente (viene dada por la rigide# de la pared0 &ormas +esférica'coco, coco/bacilo, bastoncillo'cilíndrica'bacilo, "elicoidal'espirilo, en

coma'vibrio, espiral'espiro!ueta, estrella y cuadrangular 'forma de "ifas de "ongos

(actinomyces' streptomyces / productor de muc"os -, -M y

inmunosupresores)0 agrupacin de los cocos + aislados, en

pareas'diplococos (granos de cafe / típico de neisserias'meningitis), en

cadenas'estreptococos, tetradas o tretacocos ( celulas +

micrococcus'micrococacceae), en racimos'estafilococos, en formas cubicas de T

elementos'sarcinas (sarcinas ventriculi / tolerancia al medio &cida'

estomago)0agrupacin de los bacilos + aislados, en pareas'diplobacilos, en

cadena'estreptobacilos, algunos se parecen a cocos'cocobacilos (?.coli), enformaempali#ada'letra c"ina (corynebacterium / algunos son saprofitos de la piel y

también causante de difteria).

Aroma típicos + $seudomonas aureginosa (olor a abón)0 Haemophyllus (olorasemen'yeso)0 Citro"acter (olor a fétido)0 Lroteus (olor a amoniacal)0 le"siella y '&

coli (olor a levadura de pan).


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Tema 7H - >isiología de las bacterias

or&ología macrosc=pica / estudio de la forma y estructura de las colonias (masas

constituidas por muc"os millones de bacterias, se aprecian a simple vista y originadas

a partir de una bacteria en el medio solido)0 reconocible en función de+ 1. características o tipo de medio de cultivo solido donde se "a desarrollado (un

microorganismo puede dar lugar a distintos tipos de colonias) 2. tipo de

microorganismo (mayor movilidad + colonias e6tendidas y planas)0 la verificación de

las colonias (siempre en medios sólidos sembr&ndolo por estría) + en placa y en tubo

con agar inclinado.

#as colonias en placa - sembrándolo por estría?l tama


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#as colonias en tubo, con agar inclinado - sembrándolo por estría%as colonias presentan las mismas características !ue en placa, pero su visuali#ación es

muc"o peor (menor superficie)0 aspecto + filiforme, ri#oide, arborescente,

filamentoso, difuso, perlado, e!uinulada, arrosariada.

or&ología microsc=pica - estudio de la estructura &ina de las bacterias

1. !studio de su forma como c$lula procariota individual :

oval'esférica + coco'cocoidea0 cilíndrica'bastón + bacilo0 espiral'"elicoidal +

espirilo'sacacorc"os 'espiro!uetas0 filamentosa'forma de "ifas de "ongos +

filamentosas (actinomyces' streptomyces), formas intermedias + vibrio, coco/bacilos0

bacterias "elicoidales + orrelia (poca espiras y amplitud), reponema (tiene mas

espiras) y %eptospira (muy apretadas y enroladas).

2. !studio de su agrupacin bacteriana (no todas las formas bacterianas se

agrupan, p.e. los espirilos y los actinomicetos) + los mas frecuentes son las formas

cocoideas y las bacilares son menos frecuentes0 las cocoideas + diplococos (pareas

'granos de café + neisserias y neumococos)0 estreptococos (paralelos'cadenas +streptococcus)0 tetradas o tretacocos ( celulas + micrococcus'micrococacceae)0

estafilococos (racimos + stap"ylococcus' micrococcus)0 sarcinas (cuboidales de T

celulas o mas0 sarcina ventriculi y también stafilococcus)0 las bacilares +

diplobacilos'pareas, estreptobacilos' cadenas y formas irregulares'en

empali#ada'letra c"ina (corinebacterium).


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TA6NIA - #A'.>.A.JN %$ #A' /AT$2.A'%a clasificación definitiva de las bacterias esta aun por establecer0 los !ue se utili#an

actualmente deben considerarse como provisionales o transitiva0 la mas utili#ada

suelen ser recogidas de las manuales ?F5?E[ en la UZ edición de ergey[s @anual of

7eterminative acteriology de 1UU, se agrupan a las bacterias en $G grupos, situados

en categorías mayores:

78 $ubacterias +ram- (bacterias *erdaderas) con 7< grupos0 en esta categoríase incluyen a la mayor parte de las bacterias !ue provocan a la patología "umana.

$spiro?uetas:/ Mamilia 'eptospiraceae (genero / 0eptospira)

/ Mamilia Spirocaetaceae (genero / orrelia, #reponema)

elicoidales !*ibrioides aerobias - microaer=&ilas m=*iles (crecen meor a baas presiones de o6ígeno):

/ Mamilia Campylobacteriaceae (genero / Campylo"acter, Helico"acter)/acilos " cocos aerobios - microaer=&ilos (crecen meor a baas presiones deo6ígeno):

/ Mamilia %seudomonadaceae (genero / $seudomonas, Stenotrophomonas)

/ Mamilia Elcaligenaceae (genero / ordetella) + bacilos y coco/bacilos

/ Mamilia 'egionellaceae (genero / 0egionella)

/ Mamilia 3eisseriaceae (genero / Neisseria) + diplococos

/ Mamilia 4oraellaceae ' Mamilia 7ranamaceae (genero / Moraxella,

ranhamella) + diplococos

/ Itros generos + rucella (cocobacilos)

/acilos anaerobios " &acultati*os:/ Mamilia !nterobacteriaceae (genero / Citro"acter, 'ntero"acter, 'scherichia,

le"siella, Serratia, Hafnia RcoliformesS Morganella, $roteus, $ro+idencia,

Salmonella, Shigella, !ersinia/peste)

/ Mamilia /ibrionaceae (genero / %i"rio, -eromonas, $lesiomonas)

/ Mamilia %asteurellaceae (genero / Haemophilus)

/ Itros generos + 5ardnerella

ocos +ram- anaerobios + genero / Veillonella

/ Mamilia BicFettsiaceae (genero Coxiella, 'hrlichia, 1icettsia) / son par&sitos

intercelulares obligados, altamente pleomórficas cocos'bacilos'"ilos/ Mamilia Clamydiaceae (genero Chlamydia) / son par&sitos intercelulares

obligados de forma esférica.

98 $ubacterias +ramD con 7: grupos (7F-9K)0 en este grupo "ay los !ue provocan

patologia "umana (la mayoria).

ocos + genero / Staphylococcus y Streptococcus


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/acilos esporulados + genero / acillus (aerobio) y Clostridium (anaerobio)

/acilos regulares no esporulados + genero / %actobacillus y %isteria

/acilos irregulares no esporulados:/ Mamilia Corynebacteriaceae (genero / Coryne"acterium)

icobacterias:/ Mamilia 4ycobacteriaceae (genero / Myco"acterium)

:8 icoplasmas (ollicutes ! bacterias sin pared) de 7 solo grupo (:H)0dentro de este grupo, los !ue provocan patología "umana +

genero 4ycoplasma' Mycoplasma pneumoniae y Hreaplasma.

;8 Ar?ueobacterias con 5 grupos (:7-:5)0 todas las bacterias de este grupo noprovocan patologia "umanas (viven en las situaciones e6tremas + termofilas'

termogenas)

Taonomía + la ciencia de la clasificación !ue agrupa y separa los organismos deacuerdo con su características fenotípicas, estructurales o genéticas para facilitar su

estudio0 la misión + construir un es!uema racional, para clasificar y nombrar los

organismos0 el sistema er&r!uico de la ta6onomía se "a formado gradualmente a

partir del sistema binomial ' binominal ' binaria de nomenclatura genero y

especie establecida por %inneo en 1QGT (un bot&nico)0 la ta6onomía no es una ciencia

est&tico, go#a de gran dinamismo y esta en la relacion con los avances de los

procedimientos empleada para su estudio0 el termino de sistem&tica se utili#a como

sinónimo de ta6onomía0 los grupos de ta6onomía van de dominio / imperio / reino /

tribu / división / clase / orden / familia / genero y especie.

Lara la asignación de una bacteria, se siguen las normas recogidas por el código

internacional de nomenclatura bacteriana y ad!uieren valide# cuando "a sido

publicado por el ;nt\l Kournal of ystematic acteriology0 bien en un articulo o bien

dentro de los sistemas en las listas de las bacterias aprobadas !ue incluyen sus

n4meros0 una especie bacteriana, viene definida por un nombre genérico de un

nombre especifico latini#ado o "eleni#ado y concuerdan gramaticalmente0 la inicial de

genero va con letra may4sculas y el de especie con min4sculas0 tanto el nombre de

genero o especie se escriben con letra cursiva' italica o en su defecto, subrayado0 en ladenominación de un especie, la palabra !ue define genero puede ser abreviada a su

inicial seguida de un punto (p.e. ?.coli o ?.coli)0 los nombres de las bacterias no se

eligen de manera arbitraria, sino !ue pueden ser descriptivos, p.e. tap"ilococcus

aureus (cocos en forma de racimos / dorados)0 o pueden dar "omenae a un autor p.e.

Lasteurella, acilo de Noc", también puede dar referencia a un acontecimiento p.e.

%egionella0 el nombre generico es 4nico0 para referirse a un especie o varios especies


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no determinadas su genero + ?.spp' sp0 algunas de las categorías ta6onomia

superiores, se forman a#2A' /AT$2.ANA'>lora Normal de la especie humana + la población de microorganismoscomensales !ue normalmente coloni#a la piel y las membranas mucosas de las

personas adultas sanas0 la piel y las mucosas coloni#adas por microorganismos

din&micos + cambios cualitativos y cuantitativos constantemente0 2 poblaciones:

1. #a &lora residente (>2) + un numero relativamente fio de especies demicroorganismos (comensales y oportunistas) en una #ona definida (si se producen

alteraciones, suelen ser temporales)0 permanecen intactas0 encuentran condiciones

fisiológicas y nutritivas adecuadas0 no es esencial para la vida, pero es normalmente

beneficiosa (produce vitamina N en el intestino y ayudan en la absorción de nutrientes y impide la coloni#ación de microorganismos potencialmente patógenos.

2. #a &lora transitoria (>T) + microorganismos no patógenos o potencialmentepatógenos, !ue coloni#an la piel o las mucosas en periodo corto de tiempo0 tiene poca

importancia, pero si la flora residente se altera, la flora transitoria puede multiplicarse

y producir infecciones.

%a supresión de MF + vació ecológico + ocupación de microorganismos ambientales

o de otras #onas de cuerpo + infecciones.

>2 oportunistas + los !ue tienen acceso a lugares estériles0 algunos eemplos:/ Streptococcus +iridans son comensales del tracto respiratorio superior y de la boca, si

alcan#a el torrente sanguíneo + si v&lvula cardíaca da


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/ #as principales (en faringe y tra!uea) + Staphylococcusepidermiditis (coagulasa/), Staphylococcus aureus (coagulasa3) en pe!ue


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>lora normal de la *agina/ -l nacer, esta coloni#ada por %actobacilos aerobios (produce p acido),

posteriormente el p acido se convierte en neutro y aparece flora mi6ta de cocos y

bacilos, "asta la pubertad.

/ ?n la pubertad esta coloni#ada por %actobacilos aerobios y anaerobios !ue produce

&cidos por su metabolismo de "idratos de carbono + cambio a p acido (protección a

los otros microorganismos potencialmente patógenos.

/ ?n la muer adulta esta coloni#ada ademas de los anteriores ( 0acto"acillus

acidophillus / aerobios y anaerobios), estreptococos anaerobios ("emoliticos o no

"emoliticos) y otros0 el moco cervical contiene liso#ima con actividad bactericida.

/ ?n la menopausia la flora vaginal cambia, aparece de nuevo una flora mi6ta de cocos

y bacilos.

/ %a administración de antibióticos de amplio espectro, puede eliminar las especies

protectoras, produciéndose una multiplicación e6cesiva en la vagina de levaduras(candidas) u otras causantes de vaginitis.

>lora normal de la conLunti*a del oLoLredomina los difteroides (Coryne"acterium xerosis), Staphylococcus epidermidis y

estreptococos no "emolíticos0 pueden estar presentes otras especies0 el control de la

flora lo eercen las lagrimas, por su contenido en liso#ima.

Tema 77 - $amen icrosc=pico (obser*aci=n

de microorganismos *i*os)=ociones de microscopia (repasar apuntes de 1 curso)

icroscopio ^ instrumento !ue permite amplificar la imagen de un obeto o de unser pe!ue


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valor real. ?n el microscopio óptico compuesto, se calcula multiplicando el aumento

individual del obetivo por el aumento individual del ocular. Ibetivo / 6, 61P, 6P,

61PP. -umento óptico ocular / 6G, 61P

Fesolución ^ la capacidad del microscopio para mostrar los detalles m&s finos de un

obeto. Loder de resolución (limite de resolución o distancia resoluble) ^ la distancia

minima entre dos puntos !ue permite distinguirlos como tales (la capacidad de

microscopio para distinguir 2 puntos separados aun!ue est&n muy pró6imos entre si).

7isminuir la distancia resoluble + aumentar el poder de resolución + aumentar la

apertura numérica (-=) + disminuir la longitud de onda de la lu# empleada +

aumentar el &ngulo alp"a en el espacio obeto + aumentar el índice de refracción (;F)

en el espacio obeto (rellenar el espacio e6istente entre la muestra y el obetivo con una

sustancia de mayor índice de refracción, como aceite).

Numero de campo ^ di&metro de la imagen observada a través del ocular (en mm).

Lrofundidad de foco ^ el espesor de la muestra !ue es posible tener enfocado porcompleto 9 aumento y -= (apertura numérica) de la lente.

$l contraste ^ para meorarlo, disminuye el cono de iluminación (se controlamediante el diafragma de apertura) procedente del condensador.

Partes de un microscopio =ptico compuesto:

Parte mecánica ^ sistema de soporte o est&tico (pie, bra#o, cabe#al)0 sistema deauste (anillo de auste de las dioptrías, tornillo de fiación del cabe#al, tornillos

reguladores de la platina, tornillo de elevación del condensador, tornillos de centrado

del condensador, tornillo de seguridad del condensador, control del diafragma de

apertura del condensador, anillos de enfo!ue macro/métrico y micrométrico, control

de auste de la claridad' la lu#).

Parte =ptica ^ sistema de iluminación (fuente de lu# / lampara "alogena deintensidad graduable0 condensador / dispositivo !ue contiene una lente !ue concentra

la lu#, generada en la lampara, "acia la preparación0 diafragma de apertura / el control

adecuado del cono de iluminación !ue atraviesa la muestra y entra en el obetivo + se

austa -=)0 lentes (obetivos / generan imagen real, invertida y aumentada del obeto0

oculares / captan la imagen formada por el obetivo y la amplian)


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aterial necesario para la *isualiCaci=n microsc=pica ^ portaobetosesmerilado y biselado, cubreobetos 22622, lí!uido de inmersión (se usa sin

cubreobetos) es imprescindible cuando se observa muestra desecada con obetivo de

1PP6 (tradicionalmente aceite de madera de cedro, actualmente aceites sintético)

Tipos de microscopios:icroscopio de campo oscuro ^ si dentro de la muestra "ay elementos

transparentes, con un indice de refracción diferente al del medio !ue los circunda, la

lu# es difractada e incide sobre el obetivo y pueden ser visuali#ados0 permite la

observación de seres microscópicos transparentes y no te


39/74

vistos en un microscopio óptico, pero no sirve para observar elementos vivos, a causa

del vacío !ue "a de establecerse dentro del tubo y es muy costoso (solo se usa en lab de

investigación). ?l poder de resolucion en microscopio electronico es 61PPP !ue

microscopio óptico0 emplean electrones en lugar de unas fotones0 microscopio óptico 9

2PP nm / fotones: PP / QPP nm longitud de onda.

icroscopio electr=nico de barrido ($/) ^ no tiene tanto poder de resolucióncomo el de transmisión, pero sin embargo, proporciona una enorme profundidad de

campo y genera unas im&genes !ue producen una gran sensación de tri

dimensionalidad. 1UQ$ se comerciali#o el $ modelo !ue une las caracteristicas de los 2

anteriores (la gran resolucion de los ?@ y la gran definicion y contraste de los @?.

$amen en &resco de bacterias *i*as (+ota pendiente) / para conocer lamovilidad y la disposición bacteriana en una muestra se debe observar los gérmenes

vivos a partir de cultivos ovenes (lleva pocas "oras), !ue permiten visuali#ar meor sumovilidad y su preparación en fresco.

ondiciones ?ue debe cumplir para este &in:/ cantidad de muestra adecuada (ni muc"o ni poco)

/ la muestra recogida en condiciones de esterilidad

/ adecuadamente distribuida en el portaobetos (amplia y "omogénea)

/ cantidad de agua o colorante adecuada

/ para la fiación por calor + no debe calentarse demasiado (no !uemar el dorso de la

mano y la gota 3'/consumida) + para "acer tincion

/ seguir el método o técnica adecuada, se trabaa con limpie#a y orden, evitando

cual!uier contaminación.

T@cnicas para obser*ar los microorganismos *i*os / e6amen en fresco, entreportaobetos y cubreobetos, sobre gota pendiente en porta e6cavado (no lo "acemos) y

con tinción vital.

$amen en &resco / suspender el microorganismo en agua destilada o Mcolocandolo en un portaobetos y posteriormente visuali#arlo por microscopio su

morfología (cocos o bacilos), disposición'agrupación y motilidad0 @aterial +

portaobetos, microscopio, portaobetos e6cavado, cubreobetos, asa de siembra,mec"ero unsen o de alco"ol (para flamear el asa de siembra), muestra de

microorganismo problema, agua destilada estéril, vaselina (opcional).

$cnica - 4$todo de eamen en fresco entre portaob@etos y cubreob@etos :

/ preparar portaobetos y cubreobetos limpios y desengrasados

/ depositar una gota de agua estéril en el portaobetos (GPul'lambdas)

/ con el asa de siembra esterili#ada por flameado, tomar un poco de muestra del


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microorganismo y suspenderla en la gota.

/ "omogenei#ar la muestra, colocar con cuidado sobre la suspensión un cubreobetos,

evitando !ue se formen burbuas de aire al caer el cubre sobre la suspensión.

/ observar al microscopio con obetivo de P aumentos.

@todo de eamen en &resco sobre gota pendiente en porta eca*ado:/ colocar en el centro de un cubreobetos una gota de la suspensión microbiana con una

asa de siembra estéril.

/ colocar vaselina en los bordes del pocillo del porta e6cavado

/ invertir el cubre sobre el porta e6cavado, colocandolo encima del &rea cóncava del

portaobetos.

/ la vaselina ad"erir& el cubre al porta formando una c&mara evitando su evaporación y

corrientes de aire.

/ se invertir& la preparación

/ observar al microscopio con obetivo de P aumentos.

2esultados / es importante no confundirlos con los movimientos broDnianos !ue seproducen cuando se despla#a el medio li!uido y "ace !ue todos las bacterias siga dic"a

corriente en dic"a dirección0 el sellado con vaselina evita este problema.

oloraci=n *ital / es una técnica intermedia entre los e6&menes en fresco y lastécnicas de tinción después de fiación previa>>>0 consiste en te


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%a morfología bacteriana (es incolora) puede ser estudiada por visuali#ación de los

microorganismos + vivos sin te


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olorantes segBn su comportamiento ?uímico / se unir& de forma mas establea la estructura !ue ti


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T@cnica de tinci=n - los pasos:/reali#ar un frotis y fiación por calor (generalmente), con la intensidad de calor

adecuada !ue soporte el dorso de la mano.

/coloración segun el tipo de tincion (generalmente con colorantes basicos !ue ti


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($) Tinciones di&erenciales + fiación previa (en general por calor), se utili#a 2colorantes (el ultimo es de contraste), permite visuali#ar su morfología y características

estructurales (composicion de la pared bacteriana, su resistencia a la decoloración

&cida (t.5ram y t.J"iel=eelsen).

() Tinciones estructurales + fiación previa (en general por calor), se utili#a almenos 2 colorantes, nos permite observar su morfología y características estructurales

como esporas, flagelos, cilios, capsulas, corp4sculos metacrom&ticos (utili#a 1 solo

colorante>>>).

Tinci=n di&erenciales de +ram + descubierto en 1TT$ por *ristian 5ram, cuando

trabaaba con material de biopsias y utili#ada a partir de 1TTY como tinción diferencial0

es mas empleado en bacteriología, para clasificar 2 grandes grupos (5ram3 y 5ram/)0

distinto comportamiento debido a la distinta composicion de la pared de las celulas bacterianas0 se emplea como el primer colorante b&sico (cristal violeta o violeta de

genciana) !ue te


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mec"ero de unsen, pipeta Lasteur, asa de tinción (punte), frasco lavador, muestra

problema, aceite de inmersión, colorantes para la tinción de 5ram.

T@cnica:/ reali#ar la preparación de frotis + e6tender 1 gota de agua destilada estéril 3 una

colonia de la bacteria problema por la superficie de la portaobeto

/ fiación por el calor, pero no !uemar las bacterias

/ aplicar el colorante cristal violeta durante 1,G minuto o violeta de genciana durante 2

minutos

/ lavar abundantemente con agua para eliminar el e6ceso de colorante

/ a


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de calentar, para te


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2educci=n + captan electro nes.

atabolismo de hidratos de carbono / o6idación de a#ucares para obtener laenergía es muy importante, aun!ue también se cataboli#an lípidos y proteínas0 la 1Z

etapa de la degradación de la glucosa + o6idación de esta para formar acido pir4vico

(glucólisis)0 2 procesos + la respiración (necesita I2) o la fermentación (no necesita

I2)0 la glucólisis (no precisa I2) se produce en $ vías, en función de la dotación

en#im&tica.

7 *ía glucolítico! ruta de $mbden-e"erho& Parna ($P) fue descubiertoporLasteur + se obtiene 2 moleculas de -L mediante fosforilación por cada

molécula de glucosa !ue se o6ida0 este proceso se puede reali#ar en presencia o no de

I20 a partir de la formación de acido pir4vico, las bacterias !ue usan esta vía,

normalmente utili#an la vía fermentativa para acabar transformando este acido

pir4vico en &cidos mi6tos0degradación' "idrólisis de glucosa (Y*) + acido pir4vico 32 -L (fosforilación) + &cidos mi6tos (fermentacion)0 son U/1P reacciones !uímicas

con un en#ima diferente en cada una0 utili#ados por las bacterias fermentadoras !ue

poseen des"idrogenasas(Clostridium, 'ntero"acter, Salmonella)

9 *ía de las pentosas &os&ato !*ía &os&ogluc=nica (*ía P) / es una rutami6ta y vía alternativa0 este ciclo rompe los a#ucares de G carbonos 'pentosas

y también glucosa,mediante sucesivas reacciones y produce + pentosas

intermedias (precursores de síntesis de &cidos nucleicos y ciertos amino&cidos) de gran

utilidad para las celulas0 ademas de la glucólisis via ?@L, muc"as bacterias utili#an

@L como una vía alternativa para la o6idación de la glucosa + produce acido l&ctico

o acido mi6to 3 1-L (p.e. 'ntero"acterias/ '&coli )0 esta vía es un "íbrido de la vía ?7

y la ?@L, ya !ue en las primeras etapas, la o6idación de la glucosa es similar a la via

?7 y en las etapas posteriores es similar a la vía ?@L, es decir: proporcionan a las

bacterias no o6idativas un medio de o6idar la glucosa a acido pir4vico puro, por!ue no

tienen las en#imas necesarios para comen#ar la vía ?@L, apareciendo en los sistemas

analíticos como fermentadoras.

: *ía de $ntner-%oudoro&& (*ía $%! *ía aerobia O re?uiere 9) / es otra vía

por la cual la glucosa se o6ida a acido pir4vico0 por cada molécula de glucosa seproducen 1 molécula de -L para ser utili#ada por la célula en reacciones bio/

sintéticas0 esta víare!uiere en#imas específicos y solo los microorganismos !ue las

poseen pueden utili#arla sin seguir la vía de las pentosas fosfato ni la glucólisis 0 los

microorganismos !ue la utili#an son $seudomonas y Neisseria (aerobio estricto),

por carecer de las des"idrogenasas necesarias para o6idar el acido pir4vico al acido

l&ctico u otros &cidos0 los "idrogeniones se transfieren al ciclo de Nrebs y se acabaran


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obteniendo agua0 o6idación de glucosa + acido pir4vico 3 1-L ( no producen acido

l&ctico ni acido mi6to)

2espiraci=n / es un proceso fosforilación o6idativa de generación de -L y secaracteri#a por el aceptor final de electrones generalmente es una molécula inorg&nica

(I2)0 la glucosa se degrada + acido pir4vico se sigue o6idando por la vía de la

respiración o la fermentación (en función del sistema en#im&tico !ue tienen) + -L 3

*I2 3 2I0 durante la respiración, cual!uier molécula org&nica puede ser

degradada 'o6idada con un mayor rendimiento !ue en la fermentación.

2espiraci=n aer=bica / cuando el aceptor final de idrógenos (electrones) es el I20en la respiración, el acido pir4vico producido por la glucólisis se escinde en 2 partes:

una parte se unen con *o- + forman acetil *o- !ue entra en el ciclo de Nrebs donde

se liberan electrones y protones (3)0 la otra parte para biosíntesis>>>

*adena de transporte de electrones (se encuentra en la membrana citoplasm&tica delas celulas procarióticas y en las membranas internas de las mitocondrias en las celulas

eucarióticas) / los electrones se mueven desde los coen#imas reducidos "asta una

molécula inorg&nica como I2 en la respiración aeróbica o "asta una molécula

inorg&nica diferente del o6igeno =I$/ ion nitrato, I2/ ion sulfato, etc.0 las

moleculas transportadoras de electrones son 0 tipos + R1S flavoproteínas /

reali#an reacciones de o6idación reducción, R2S citocromos / proteínas con un grupo

prostéticos (Me) en forma o6idada, R$Subi!uinonas o coen#ima _ / transportadores no

proteicos de bao peso molecular.

2espiraci=n anaer=bica / cuando el aceptor final de electrones (/) es unasustancia inorg&nica distinta del I2, tal como iones nitratos =I/$, sulfatos I2/,

carbonatos *I2/$. ( $seudomonas y acillus)

>ermentaci=n / proceso !ue se inicia a partir de acido pir4vico formado en laglucólisis de ?@L '@L, en cual el aceptor final de los electrones es un compuesto

org&nico y no re!uiere I20 caracter;sticas principales + (7) no precisa I2, perose puede ocurrir en su presencia, (9) no necesita el ciclo de Nrebs ni cadenatransportadora de electrones,(:) utili#a 1 molécula org&nica como aceptor final de

electrones, (;) libera energía a partir de a#ucares y otras moleculas org&nicas

(amino&cidos, &cidos org&nicos, purinas, pirimidinas), (5) libera solamente 2moleculas de -L por cada molécula del sustrato inicial, (


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bacterias !ue tienen la dotación en#im&tica apropiada, pueden seguir degradando

estos &cidos mi6tos "asta *I2 y otros compuestos org&nicos0 es 4til el an&lisis de los

productos finales para identificar así los microorganismos0 la mayor parte de la energía

producida en la fermentación !ueda almacenada en los productos finales0 las

fermentadoras + Streptococcus, 0acto"acillus, Clostridium, 'scherichia, Salmonella,

'ntero"acter.

Prueba de la /-% +alactosidasa (NP+) / se basa en la capacidad !ue tienen losmicroorganismos de fermentar lactosa, mediante enAimas + %actosa

Lermeasa (esta en la membrana celular y es capa# de transportar la lactosa a traves de

ella) y /7/5alactosidasa (esta en el interior de la célula y es capa# de desdobla la

lactosa en glucosa y galactosa).

lasi&icaci=n de los microorganismos segun su capacidad de &ermentar o

no la lactosa:/ fermentadores activos de lactosa en 2 "oras (poseen ambos en#imas)

/ no fermentadores de lactosa (carecen de ambos en#imas, no degradan la lactosa, no

penetra en la célula)

/ fermentadores tardíos de lactosa (poseen el en#ima /7/5alactosidasa, permeabili#ar

la lactosa ligeramente cuando la concentración es alta en 2/1G días).

#a aplicaci=n &undamental es la di&erenciaci=n de

$nterobacteriaceae +?sc"eric"ia (3) es fermentadora activo, Lroteus (/) es nofermentadora y Nlebsiella (3) es una fermentadora tardía de lactosa, es decir lactosa (/)

y I=L5 (3)0 para detectar la en#ima /7/5alactosidasa + se utili#a un compuesto

similar a la lactosa (orto/nitrofenol): al liberarse al medio alcalino por la acción de75 produce un color amarillo.

aterial + 1 tubo de ensayos estériles, ba


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minutos)

2esultados + en I=L53 se produce una coloración amarillo y en I=L5/ no seproduce color (incoloro).

Tema 7; - Pruebas bio?uímicas para ladetecci=n del metabolismo proteico de las

bacterias

Principal productor de energía + catabolismo de la glucosa y las o6idaciones de

proteinas y lípidos (estan relacionados entre si)0 la "idrólisis de proteínas'

proteína3agua (mediante en#imas proteolíticos e6tracelulares, secretadas por ciertas

bacterias !ue sirve para su tipificación'tipación) + polipéptidos y amino&cidos0 las

pruebas bio!uímicas investigan fundamentalmente la capacidad de un

microorganismo de producir la "idrólisis de la gelatina0 catabolismo de proteínas'proteólisis se reali#a mediante proteinasas'proteasas y peptidasas (desaminación) para

obtener + ion amonio =3 (3) acido org&nico0 acido org&nico entrar al ciclo de

Nrebs y ion amonio =3 es secretado de la célula.

Producci=n de acido sul&hídrico / técnica con indicador incorporado al tubo'a la

placa + algunos microorganismos act4an metaboli#ando proteínas con amino&cidos

a#ufrados (cistina, cisteina) y liberan a#ufre en forma de gas acido sulf"ídrico 2 0 el

gas es detectado a traves del medio !ue contiene fuente de "idrógeno (a#ucar) fuente

de a#ufre(tiosulfato sodio, cistina, cisteina) y un indicador de p (sales de "ierro

'citrato férrico amoniacal) + un precipitado negro)0 se observara la liberación del gas2 por algunos microorganismo !ue poseen en#imas desulfurasas (activada por la

fermentación de la glucosa + acidifica'produce &cidos'baa el p) !ue act4an sobre

los amino&cidos a#ufrados0 la temperatura de incubación (estufa) tiene !ue oscilar

entre $G/$Y* (superior a $Q se in"ibiría la producción de 2).

aterial + tubo de cultivo (N;-'Cliger iron agar y ;'triple sugar iron), aguas y asas de siembra, estufa de cultivo, muestras de problema0 si se reali#a en placa de

cultivo (eCtoen y )0


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T@cnica + a partir de un cultivo puro y reciente de microorganismo problema setomara una muestra con una agua0 sembrar en picadura (tubo de N;- o ;) o con

agotamiento en cuadrante (eCtoen o )0 incubar durante 1T/2 "oras0 si la técnica se

reali#a con rucella (microaerofila), se debe incubar con una atmósfera de *I2.

2esultados + 2 positivo ( Salmonela y $roteus) se observa a lo largo de la lineade inoculación ennegrecimiento del medio0 2 negativo ( rucella y Shigella) no se

ennegrece el medio.

acteria con en#imas desulfurasas (activada por la fermentación de a#ucar) 3

indicador de p'sales de Me 3 fuente de 3 (3) + 2 gas 3 indicador p +

precipitado negro insoluble' puntos negros (Me)

Prueba de las descarboilasas / en#imas !ue act4an sobre el grupo carbó6ilo delos amino&cidos %isina, Irnitina, -rginina para formar + aminas (alcalinas) y se

desprende *I2 (el proceso se reali#a en anaerobiosis) + se reali#a mediante el

sistema multiprueba (-L; / buscar el código en el libro)0 estas pruebas se aplican parala identificación de ?nterobacteriaceas0 se investiga la alcalini#ación del medio

inicialmente de color purpura, se observara el virae del color del indicador del p0 la

presencia del en#ima investigado supondr& la alcalini#ación del medio (sigue el mismo

color como el inicio)0 cada pocillo contiene indicador de p y amino acido

correspondiente al en#ima a investigar0 cada descarbo6ilasa act4a sobre un amino&cido

especifico0 en cada reacción se desprende *I2 y se alcalini#a el medio:

/ %/lisina 3 %7*'lisina descarbo6ilasa + *adaverina 3 *I2

/ %/ornitina 3 I7*'ornitina descarbo6ilasa + Lutrescina 3 *I2

/ %/arginina 3 -7'arginina des"idrolasa + %/citrulina 3 =$ (descarbo6ilación) +

Lutrescina 3*I2

aterial + pruebas de -L;, pipeta Lasteur.

2eacti*os + caldo de @oller para descarbo6ilasas (lleva pe!ue


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T@cnica + se a


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aterial + placa sembrada con microorganismo problema, asa de pl&stico, papel defiltro, porta, reactivo o6idasa de Novacs.

T@cnica + me#clar una pe!ue


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%a nitratasa (nitrato reductasa) es el en#ima !ue catali#a el proceso en cual el nitratos

son reducidos a nitritos (presentes en algunos microorganismos anaerobios o

anaerobios facultativos !ue utili#an nitrógeno como ultimo aceptor de electrones en el

proceso metabólico' respiración anaeróbica)0 depende de la especie bacteriana se

trate, se pueden producir diversos productos finales0 reacción: nitrato'=I/$ 3

nitratasa + nitrito'=I/2+ =2 (nitrógeno molecular' gas nitrógeno) o otros +

amoniaco ' o6ido nítrico ' o6ido nitroso ' "idro6il amina0 la prueba detecta los

productos finales liberados al medio mediante un reactivo colorimétrico -L;0

aplicación + diferenciación de especies deaemop"ilus y =eisserias0 cuando no se

forma color )ro@o* al aDadir los reactivos, puede significar + [7] no se "areducido el nitrato, se comprueba a


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Prueba de Qreasa (se "ace en manual y con el sistema -L;) / detecta la presencia dela ureasa en los microorganismos cuando se observa la alcalini#ación de un medio

li!uido0 la ureasa catali#a la "idrólisis de la urea + carbonato amónico , !ue sube el

p, con lo !ue el medio se alcalini#a0 aplicaci=n + diferenciar $roteus () deotras 'ntero"acteriaceas / '&coli (*) o positivo retardado (3) como Nlebsiella0

aterial + tubos de cultivo, asas, pipeta Lasteur, estufa de cultivo o ba


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Prueba de Tript=&ano %esaminasa (T%A) / se basa en la capacidad !ue tienenalgunas bacterias de desaminar el triptófano por la acción de 7-, produciendo +acido indol pir4vico !ue reacciona con citrato férrico amoniacal y el cloruro férrico !ue

lleva el medio produciendo un color marrón (determina la presencia de la en#ima

7-)0t@cnica + en un medio li!uido de 7- (color &mbar)0 se puede utili#ar elreactivo urea/indol0 a


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fondo)0 la glucosa se metaboli#a meor !ue lactosa (la molécula es mas

pe!ue


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color narana (se alcalina mas la #ona con mas I2 + $seudomonas, $&aeruginosa)

[d] si no se consume ni glucosa, ni lactosa ni peptona + no "ay cambio de color en eltubo (gérmenes inertes).

Producci=n de gas 9 / aparecen burbuas, agrietamiento o despla#amiento delmedio del fondo del tubo, debido a la formación de "idrógeno y de an"ídrido carbónico

(*I2)

Producci=n de acido sul&hídrico '9 / se manifiesta por el color negro de la capaprofunda o un anillo negro cerca de la parte superior de la capa profunda o un

precipitado negro en la capa profunda (!ue puede enmascarar la acidificación del

medio + fermentación de la glucosa activa la desulfurasas)0 23 + $roteus y

Salmonella.

T'. (Triple 'ugar .ron) / identificación de !ersinia enterocolitica como sacarolítica(también $roteus, 0acto"acillus y Clostridium), ya !ue el medio lleva el $er "idrato de

carbono (sacarosa al 1O)0 los fundamentos y la interpretación de los resultados son los

mismos !ue en el método anterior, pero es imposible saber si el a#ucar utili#ado es uno

u otro o ambos.

Agar sul&uro-indol-motilidad! A'. o motilit"-indol-agar (.A) / tal comoindica su nombre, sirve para determinar la motilidad de los microorganismos, la

produccion de indol y la formacion de acido sulf"idrico0 la forma de reali#arla es la

siguiente + se siembra en picadura y se incuba a $Q* durante 1T/2 "oras0 la

motilidad se vera por la #ona del inoculo con un #ig/#ag (en la picadura)0 la produccion

de indol se vera con un cambio de color a violeta purpura (el medio es de color violetaclarito)0 la produccion de 2 se vera por un cambio a negro.


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.1. (.ndol - otilidad - roLo de etilo - 1oges-Prosauer - itrato) / seemplean en la identificación de la familia enterobacteriaceas0 se "acen de una en una y

conuntamente0

Prueba de indol + estudia el metabolismo proteico' la capacidad de degradar eltriptófano (amino&cido) y de formar seg4n la bacteria: indol y productos indólicos

(escatol, acido indol/acético), mediante triptofanasa (en#ima intracelular).

4aterial + tubos de ensayo, asa de siembra, pipeta Lasteur, estufa de cultivo,

mec"ero.

Beactivo + caldo urea/indol de la casa iomerieu6, reactivo indol de Novacs,

microorganismo.

$cnica + @étodo de Novacs: en el tubo con GPP lambdas de reactivo urea/indol, se

siembra el microorganismo problema, incubar a $Q* durante "oras, a


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reacciones metabólicas, utili#an la fermentación acido/mi6ta de los "idratos de

carbono produciéndose + acido succínico, acido acético, alco"ol etílico (&cidos

mi6tos)0 en F@ positivo, aparecen un color roo fuerte en la superficie y en F@

negativo, no "ay cambio en la superficie del medio.

4aterial + igual !ue anterior

Beactivo + @edio de *larC y %ubs en tubo (li!uido amarillo), solución de roo de

metilo y microorganismo

$cnica + (a) en el tubo del medio *larC y %ubs se siembra el microorganismo

problema (b) actualmente se utili#a la modificación de arry !ue es poner un inoculo

abundante en P,G ml de reactivo de *larC y %ubs y dear incubar entre 1T/2 "oras (c) a

este cultivo se le a


61/74

del medio0 VL negativa (/)p.e. ?.coli y Lroteus, la superficie del medio !ueda de color

amarillento o cobri#o (la reacción de los reacti

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