Protocolo de Rotiferos

8/15/2019 Protocolo de Rotiferos

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Protocolo de rotíferos

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CONTENIDO

INTRODUCCION .................................................................................................................... 3 CAPITULO I GENERALIDADES ........................................................................................... 5

1. MORFOLOGIA ................................................................................................................... 5

2. CICLO DE VIDA Y DESARROLLO .................................................................................... 6

3. ALIMENTO ......................................................................................................................... 7

4. VALOR NUTRICIONAL ...................................................................................................... 7

CAPITULO II CONDICIONES GENERALES DEL CULTIVO .............................................. 8

1. SALINIDAD ......................................................................................................................... 8

2. TEMPERATURA ................................................................................................................ 8

3. OXÍGENO DISUELTO ........................................................................................................ 8

4. pH ....................................................................................................................................... 8

5. PRESENCIA DE MICROBIOS ........................................................................................... 8

6. DENSIDAD DE SIEMBRA.................................................................................................. 9

CAPITULO III SISTEMAS DE CULTIVO ............................................................................ 10

1.PRODUCCION DE ROTIFEROS....................................................................................10

2. CONCENTRACION Y LAVADO DE ROTIFEROS.........................................................12

3. CONTEO DE ROTIFEROS .............................................................................................. 12

4. PROTOCOLO ................................................................................................................... 13

5. PROTOCOLO DE LIMPIEZA ........................................................................................... 14

6. RUTINA DIARIA. .............................................................................................................. 15

ANEXO: BITACORA DE REGISTRO .................................................................................. 16

BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................................... 17


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INTRODUCCION

La acuicultura es una actividad que incluye varias prácticas y una amplia gama deespecies, sistemas y técnicas de producción. Puede definirse como el cultivo deorganismos acuáticos con técnicas encaminadas a hacer más eficiente su producción. Laacuicultura tiene una historia de 4.000 años, pero ha sido desde hace 50 cuando se haconvertido en una actividad socioeconómica relevante, dando empleo a más de 12millones de personas en el mundo.1

La acuacultura tiene a nivel mundial un importante papel que jugar en los esfuerzos porerradicar el hambre y la malnutrición, proveyendo alimentos ricos en proteínas, aceitesesenciales, vitaminas y minerales. Además, puede contribuir a reducir la pobreza

mejorando los ingresos económicos, fomentando el comercio, ofreciendo oportunidadesde empleo y mejorando el uso de los recursos. La FAO considera que la acuacultura esuna actividad que contribuye a la utilización eficaz de los recursos naturales, a laseguridad alimentaria y al desarrollo económico, con un limitado y controlable impactosobre el medio ambiente.

La tasa de crecimiento mundial 1980-2010 de la acuacultura: 8.8% con tendencias haciala intensificación de los sistemas de cultivo y el control de los aspectos nutricionales.

En la acuicultura, el alimento vivo es el grupo de organismos que componen el plancton(fitoplancton y zooplancton), el cual constituye la unidad básica de producción del material

orgánico en los ecosistemas acuáticos. La importancia del plancton en piscicultura marinaes mayor durante las fases de larvicultura y alevinaje, siendo su importanciaindependiente de la estrategia alimenticia del pez durante su vida adulta. Por reglageneral, después de la absorción del saco vitelino, el inicio de la alimentación exógena dela larva estará constituida de organismos planctónicos en las larvas altriciales, siendodemostrada la esencialidad de organismos vivos como alimento inicial para larvas depeces, ya que prácticamente todas las especies se alimentan de éstos durante su fasepostlarval.

Entre las diversas especies que componen el zooplancton, los rotíferos del géneroBrachionus se han utilizado regularmente como alimento vivo para otros organismos.

Brachionus plicatilis se cultiva como primer alimento para larvas de peces marinos, ya quetiene un tamaño pequeño, natación lenta, capacidad de mantenerse suspendido en lacolumna de agua, puede ser cultivado en altas densidades, alto índice reproductivo ypuede ser enriquecidos para mejorar su composición proximal. Por estas razones, elcultivo de B. plicatilis ha llegado a ser indispensable en la acuicultura (Fulks y Main,

1 APROMAR,2012


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1991). El Phylum Rotífera comprende un grupo de organismos filtro alimentadoresmicroscópicos (pluricelulares). La mayoría de las especies de este grupo pasan su vidaadheridas a un substrato, sin embargo el rotífero marino Brachionus plicatilis es unaespecie planctónica que llega a medir de 125 a 300 μm de longitud cuando es adulto. Su

forma de reproducción está adaptada a las condiciones cambiantes de su hábitat. Cuandolas condiciones ambientales son óptimas, se reproducen asexualmente, las hembrasamíticas producen huevos amíticos (diploide, cromosoma 2n) los que desarrollanuevamente en hembras amíticas. Cuando las condiciones son desfavorables sereproducen sexualmente, obteniendo con ello machos pequeños y huevos inactivos.Estos machos tienen aproximadamente un cuarto del tamaño de la hembra; ellos noposeen un tracto digestivo, pero tienen un testículo sobre dimensionado que se llena deesperma maduro. La cópula es por impregnación a través de la cloaca por la pared delgonoporo que actúa como pene adhiriéndose a la cutícula de la hembra, obteniendo alfinal huevos latentes que se convertirán en hembras (Sprent et al ., 1972; Coll-Morales,1983; CENAIM, 2002).

Dentro del género Brachionus se encuentra la especie plicatilis, que según Segers (1995)y aceptado ampliamente, comprende en realidad dos especies eurihalinas, unadenominada tipo S (pequeña), conocida también como Brachionus rotundiformis y otradenominada tipo L (grande) que sería Brachionus plicatilis.

En particular presentan cariotipos distintos, según Rumengan et al . (1991), Brachionus tipo S el número de cromosomas es (n= 25) y Brachionus tipo L es (n =22). El crecimientode B. plicatilis y B. rotundiformis se ve afectado principalmente por factores abióticoscomo la temperatura y la salinidad (Yufera et al . 1997, Fielder et al . 2000, Gama-Flores et al . 2005) así como por la calidad y cantidad de alimento (Maruyama et al . 1997, Hoff y

Snell 1999).

El objetivo de este protocolo es dar a conocer la metodología aplicada para la producciónde rotíferos.

El cultivo de rotíferos tiene un papel trascendental y por tanto, es importante adaptar ydesarrollar la tecnología de producción de estos organismos a fin de diversificar laactividad acuacultural en Colima, fomentando el crecimiento de esta actividad productivacon la participación de todos los sectores, contribuyendo así al desarrollo socioeconómicode la zona y colocando al Estado a la vanguardia en la transferencia tecnológica enmateria de producción de alimento vivo en las instalaciones del Centro Regional de

Investigación Pesquera (CRIP Manzanillo).


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CAPITULO I GENERALIDADES

1. MORFOLOGIA

Rotatoria (=Rotifera) pertenecen a los más pequeños metazoarios. Ellos raramentealcanzan 2 mm en la longitud del cuerpo. Los machos tienen un tamaño reducido y sonmenos desarrollados que las hembras; algunos miden tan solo 60 µm. El cuerpo de todaslas especies consiste de un número constante de células, las diferentes especies deBrachionus contienen aproximadamente 1000 células las que no deben considerarsecomo identidades únicas sino como un área de plasma. El crecimiento del animal esasegurado por el aumento de plasma y no por la división de la célula.

La epidermis contiene una capa densamente empaquetada de proteínas similar a laqueratina denominada la loriga. El cuerpo del rotífero se diferencia en tres partes distintas

que consisten de la cabeza, el tronco y pie. La cabeza lleva el órgano rotatorio o coronaque es reconocido fácilmente por sus cilios anulares (Figura 1). La corona retráctilasegura la locomoción y un movimiento del agua en forma de remolino que facilita lacaptación de pequeñas partículas alimentarias (principalmente algas y detrito).

El tronco contiene el tracto digestivo, consistiendo de un mastax que muele las partículasingeridas, el esófago, el estómago con glándulas gástricas y el intestino. El sistemaexcretorio consiste de un par de protonefridios con células terminales (cyrtocitos), elconducto y la vesícula. Los protonefridios expulsa líquido excretorio y juegan un papelimportante en la regulación osmótica. El órgano genital es impar (Monogononta) opareado en los órdenes Seisonidea y Bdelloidea. La apertura del conjunto externo de la

vesícula y el oviducto se llama cloaca.

El pie es una estructura anillada retráctil sin segmentación que termina en uno o cuatrodedos que posee glándulas pedales que segregan una sustancia adhesiva en rotíferosreptantes y sésiles.

Tipos de cepas (L y S)

Existen dos diferentes morfotipos de rotíferos: el tipo pequeño (S) y el tipo grande (L).Ellos difieren en la longitud de la loriga: 130-340 µm (promedio 239 µm) para el tipo L y100-210 µm (promedio 160 µm) para el tipo S. Existen también diferencias en el peso,

forma de las espinas occipitales y de las temperaturas óptimas de crecimiento (el tipo Ltiene un rango de temperatura más amplio, mientras el tipo S posee mayor resistencia atemperaturas más alta).


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Fig. 1 Morfología de los rotíferos

2. CICLO DE VIDA Y DESARROLLO

El ciclo de vida de Brachionus presenta dos modos de reproducción. Durante la

partenogénesis las hembras amícticas producen huevos amícticos (diploide, cromosomas2n) los que se desarrollan nuevamente en hembras amícticas. Esta es la manera másrápida de reproducción y por lo tanto la más importante para la producción intensiva derotíferos. Sin embargo, el ciclo de vida puede volverse en reproducción sexual máscomplicada por condiciones ambientales desfavorables. Durante la reproducción sexuallas hembras mícticas y amícticas son producidas. Aunque ambas no sonmorfológicamente diferentes, las hembras mícticas producen huevos haploides (ncromosomas). Las larvas que son incubadas fuera de estos huevos mícticos infértiles sedesarrollan en diminutos machos haploides. Estos machos son aproximadamente uncuarto del tamaño de la hembra; ellos no poseen tracto digestivo ni vesícula, pero tienenun sobredimensionado testículo que se llena esperma maduro. Los huevos mícticos queeclosionarán en machos son significativamente menores en tamaño, mientras que loshuevos mícticos fertilizados son más grandes y consisten de una capa externa gruesa ydébilmente granulada. Estos son los huevos latentes y únicamente eclosionarán hembrasamícticas bajo cambios repentinos en las condiciones ambientales. Estos pueden seroriginados por cambios en las condiciones climatológicas eventualmente provocandovariaciones en la temperatura, salinidad o en las condiciones alimenticias. Se debeenfatizar que la densidad de la población del rotífero juega también un papel importante


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en la estrategia del modo de reproducción. Aunque el mecanismo no es entendidocompletamente se acepta generalmente que el sentido biológico de producir huevoslatentes, por causa de condiciones ambientales desfavorables como sequía o frío, permiteasegurar la supervivencia de la población.

El lapso de vida de los rotíferos depende de la temperatura del cultivo, pero en unambiente controlado (25ºC) el período de vida se ha estimado en 3.4 a 4.4 días.Generalmente, las larvas llegan a ser adultas después de 0.5 a 1.5 días por lo cual lashembras comienzan a poner huevos aproximadamente cada cuatro horas. Se cree quelas hembras pueden producir diez generaciones de progenie antes que ellaseventualmente mueran. La actividad de reproducción de Brachionus depende de latemperatura del ambiente.

3. ALIMENTO

Los rotíferos del género Brachionus como filtrador no selectivo, puede ingerir partículas dealimento de 20-30 µm. En la naturaleza consumen microalgas, bacterias, levaduras yprotozoarios. Los animales cultivados se alimentan mayormente con algas unicelulares y/o levaduras. Nannochloropsis es una de las microalgas utilizadas usualmente comoalimento del rotífero. Tiene un tamaño de 2-3 µm. Sin embargo también Tetraselmis eIsochrysis son de alta calidad nutricional. La levadura de pan ha sido también empleadapara el cultivo de rotíferos, pero el valor nutritivo resultante de los rotíferos es muy pobre.Desde hace algunos años, existen dietas artificiales y de enriquecimiento en el mercado,las cuales son nutricionalmente completas y pueden reemplazar totalmente el uso dealgas y/ o levadura.

4. VALOR NUTRICIONAL

La composición bioquímica y valor nutricional es determinada por la dieta. Watanabe ycolaboradores en 1983 llevaron a cabo un estudio donde observaron que los rotíferosalimentados con Nannochloropsis contenían en peso seco un 75% de proteínas, 22% delípidos y 3% de cenizas mientras los alimentaos con levaduras un 71%, 17% y 12%respectivamente. También observaron que a diferencia de los rotíferos alimentados conNannochloropsis, los alimentados con levaduras, eran pobres en ácidos grasos altamente

insaturados de la serie n-3 esenciales en la larvicultura de peces marinos.


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CAPITULO II CONDICIONES GENERALES DEL CULTIVO

1. SALINIDAD

El rango de tolerancia de los rotíferos ( plicatilis) a la salinidad oscila entre 1 y 97g/l siendoóptimo entre 4 y 35g/l (Dhert 1996).

En el laboratorio se está manejando dos cepas de rotíferos:

1. Brachionus plicatilis “tipo L” aclimatado a una salinidad de 16 ppm

2. Brachionus rotundiformis “tipo S” aclimatado a una salinidad de 35 ppm.

2. TEMPERATURAEl rango óptimo de temperatura varía de acuerdo a factores específicos e intraespecíficoscomo especie o cepa (Fielder et al., 2000). Los rotíferos del morfotipo “L” crecen mejorcuando la temperatura del agua está entre 18 y 25ºC mientras que los del morfotipo “S” crecen mejor entre 28 y 35ºC (Dhert, 1996).

3. OXÍGENO DISUELTO

Está reportado que los rotíferos pueden sobrevivir en aguas con niveles de oxígeno tan

bajos como 2 ppm (Dhert 1996)

4. pH

En el medio natural los rotíferos pueden vivir a niveles de pH inferiores a 6.6 El rangoóptimo de producción ha sido establecido entre 6.6 y 8.0 (Hoff y Snell 1999)

Amonio (NH3). En el agua los niveles de amonio no ionizado (NH3) están en equilibrio conel ionizado (NH4

+) en una relación NH3/NH4+ que es afectada por la temperatura y el pH

del agua. Altos niveles de NH3 son tóxicos para los rotíferos por lo que en cultivos debe

vigilarse que estos no superen 1 ppm de concentración (Dhert, 1996)

5. PRESENCIA DE MICROBIOS

Los cultivos de rotíferos son adecuados para la proliferación de microorganismos que


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pueden afectar el cultivo o representar un riesgo sanitario a las larvas por alimentar. Algunos microorganismos (Pseudomonas) producen vitamina B12, necesaria para lareproducción de los rotíferos; otros son oportunistas que deterioran la calidad del agua yaparecen indicando exceso de materia orgánica (los ciliados Euplotes y Uronema),

también existen patógenos como las bacterias Vibro spp y los hongos Aspergillus queproducen una disminución drástica de la población de rotíferos (Dhert, 1996).

6. DENSIDAD DE SIEMBRA

La densidad a inocular depende tanto del tipo de alimento como del sistema de cultivo.Dhert (1996) recomienda densidades entre 50 y 100 rotíferos/ml cuando se usaNannochloropsis a 6 x106 cels/ml en sistemas de cultivo por lotes. La densidad de siembrapermite clasificar los cultivos como extensivos cuando ésta es de 50 a 100 rotíferos/ml y elvolumen de los tanques de 100 a 150 m3, e intensivos cuando la densidad varía de 500 a

1000 rotíferos/ml y el volumen de los tanques de 1 a 2 m3 (Fukusho 1989).


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CAPITULO III SISTEMAS DE CULTIVO

Su clasificación depende del tipo de cosecha, manejo del agua y alimentos. Hoff y Snell

(1999) y Dhert (1996) se refieren a la clasificación según el tipo de cosecha como sistemade recolección completa (batch), que tiene dos variantes: Densidad constante (BDC),donde el volumen del tanque incrementa a lo largo del cultivo sin afectar la densidad, y larecolección completa con volumen constante (BVC). Otros sistemas son el semi-continuo,cuando a partir del tercer día se hacen cosechas parciales reponiéndose el volumen deltanque; y el continuo cuando se cosecha un volumen especifico y se renueva el mediomanteniendo la población en fase logarítmica mediante un control ya sea quimostático(nivel estable de nutrientes) o turbidostático (densidad constante de rotíferos).

1. PRODUCCION DE ROTIFEROS

En el proceso de cultivo de rotíferos se observan dos fases distintas: el mantenimiento deun stock (cultivo en volúmenes pequeños) y el cultivo masivo (cultivo en gran volumen).

1.1. MANTENIMIENTO DEL STOCK DE ROTIFEROS

Para este propósito se inoculan volúmenes pequeños (por ejemplo tubos de ensayo de20ml) con 20 rotíferos (densidad de no más de 1 rotíferos por ml). Alimentados conMicroalgas (Tetraselmis o Nannochloropsis), estos cultivos llegan a densidades de 10rots/ml dentro de un periodo de 2 a 3 semanas. Posteriormente se filtra la suspensión delcultivo utilizando un filtro con malla de 50 – 60 micras, se enjuagan los rotíferos y setransfieren a recipientes de 250 ml en agua marina (filtrada y esterilizada), alimentandocon 250ml de Microalgas.

Cuando se estima una densidad de 10 rots/ml, se cosechan y se utiliza la cantidadrequerida de rotíferos previamente limpios para re-inocular tubos de ensaye y el cicloempieza nuevamente.

Para el mantenimiento del stock de rotíferos se debe utilizar agua de mar filtrada yesterilizada. Se alimenta los cultivos solamente una vez (al inicio). Para el mantenimientode la cepa, los recipientes deben ser almacenados en un área con clima controlado dondese observa muy estrictamente las medidas para que el riesgo de contaminación seamínimo.


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1.2. CULTIVO MASIVO DE ROTIFEROS

La técnica implantada de producción de rotíferos, se basa en el tipo de cultivo derecolección completa (cultivo “batch”). Consiste en inocular el cultivo y una vez que se ha

alcanzado la densidad máxima se realiza la cosecha completa. Para alimentar conMicroalgas, inicialmente se realiza un bloom fitoplanctónico en agua marina (35ppm) obien agua salobre.

El alimento a utilizar varía de acuerdo a las necesidades, pudiendo ser este Microalgas olevadura o combinación de estos. Se recomienda utilizar un gramo de levadura por cada1´000,000 de rotíferos y solo se sugiere que la levadura sea utilizada en cultivos masivos.

El escalamiento es similar al de la microalga en sistema por lotes o batch, sin embargo,los volúmenes pueden variarse de acuerdo a las necesidades del sistema; siempredeberá utilizarse microalga en una fase de crecimiento exponencial y una concentración

mínima de 2´000,000 millones células/ml.

FRASCOS DE 3 LITROS

1. Lavar y desinfectar el recipiente con cloro (1ml/litro), enjuagar y por último, aplicar0.30gramos/litro de tiosulfato de sodio para eliminar restos de cloro.

2. Llenar el recipiente con 3 litros de microalga y poner aireación suave.

3. Inocular y/o sembrar los rotíferos a una densidad aproximada entre 100-200 rot/ml(total de 75,000 rotíferos).

4. La cosecha de los rotíferos se realiza a los 5 días de cultivo, y dependiendo de latemperatura del cultivo, se puede obtener una concentración aproximada entre 100-200rot/ml (total de 450,000 organismos) en dicho ciclo.

GARRAFONES DE 18 LITROS

1. Lavar y desinfectar el recipiente con cloro (1ml/litro), enjuagar y por último, aplicar

0.30gramos/litro de tiosulfato de sodio para eliminar restos de cloro.

2. Llenar el garrafón con 18 litros de microalga, poner aireación, aproximadamente 10cmdel fondo con aireación suave, generando un anillo de turbulencia en la superficiealrededor de los 20cm.


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3. Lavar los rotíferos a inocular y sembrar el garrafón con aproximadamente 450,000rotíferos.4. Después de 5 días, se cosechan los rotíferos a concentración entre 50 – 100 rot/ml(total de 1´000,000 rotíferos).

COLUMNAS DE 150 LITROS

1. Lavar y desinfectar el recipiente con cloro (1ml/litro), enjuagar y por último, aplicar0.30gramos/litro de tiosulfato de sodio, para eliminar restos de cloro.

2. Llenar la columna con 50 litros de su capacidad con microalga, colocar una piedra deaireación, aproximadamente 20 cm del fondo con flujo suave, generando un anillo en lasuperficie de 20 -25cm.

3. Lavar los rotíferos a inocular y sembrar la columna con aproximadamente 1´000,000 derotíferos.

4. Al día 1, subir el volumen de cultivo adicionando 50 litros de microalga.

5. Al día 2, subir el volumen de cultivo agregando 50 litros de microalga.

6. Del día 3 – 5, alimentar los rotíferos con levadura a una proporción de 1 gramo / millónde rotíferos, y suministrando la levadura una vez al día.

7. Al día 5, realizar la cosecha de los rotíferos

2. CONCENTRACION Y LAVADO DE ROTIFEROS

Un aspecto importante en el cultivo de rotíferos es la concentración y lavado de rotíferos.Normalmente se hace la cosecha y lavado cada tres o cuatro días, para desdoblar elcultivo y remover las heces y contaminantes del cultivo.

Primero pasan los rotíferos para un tamiz de 200µm para quitar basura y partículasgrandes, recibiéndose finalmente en un tamiz o bolsa de 50 µm para su lavado.

3. CONTEO DE ROTIFEROS

El conteo se realizará en un porta objetos excavados o cámaras Sedgwick-Rafter dehasta 5 ml, (figura 2) o dispositivo similar bajo estereoscopio o microscopio.


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Fig. 2 Cámara Sedgwick-Rafter para conteo de rotíferos

Colocar un volumen de muestra conocida (ej. 1 ml de muestra) y hacer la identificación derotíferos adultos y de huevos. (Figura 3) Contabilizar el total, tanto de huevos como deadultos implementando una técnica de conteo de barrido de forma horizontal o vertical;posteriormente se realizará una proyección ajustada al volumen del cultivo. Es importanterealizar por triplicado el conteo para reducir el margen de error.

Fig.3 Identificación de organismos

4. PROTOCOLO

1. Preparar el tanque para sembrar los rotíferos cosechados.

2. Desinfectar todo el equipo para lavar los rotíferos.


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3. Poner el sistema de lavado como en el diagrama que se muestra más adelante.

4. pasar por gravedad los rotíferos a la estructura de cosecha, pasando primero por la

malla de 200µm y recibiéndose en la bolsa de 50µm, se dejan lavando con agua corriente

por 10-15 minutos hasta que el exceso de microalgas y heces se han retirado y al

observarlos se ve el agua clara. (Figura 4)

5. Se transfieren los rotíferos de la bolsa de 50µm al nuevo tanque, el cual previamente ha

sido inoculado con microalga o levadura según sea el caso.

NOTA: El proceso debe ser rápido para que los rotíferos no estén mucho tiempo sinalimento.

Fig. 4 Sistema de filtración y lavado para rotíferos

5. PROTOCOLO DE LIMPIEZA

El material a utilizar deberá ser enjuagado con agua de mar filtrada o salobre y tratada

para quitar los desechos del cultivo, rotíferos muertos, etc.

Agua filtrada y

tratada con UV

Rotíferos del tanque

de cultivo

Aire

Tamiz de 60µm

Tamiz de 200µm


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Para el lavado de tanques se deberá agregar ácido muriático (1 litro de ácido en 15 litros

de agua de mar o salobre filtrada. Posteriormente se realiza un enjuague par remover el

ácido y se desinfecta con una solución de cloro (1 ml de cloro por 1 litro de agua filtrada y

tratada). Enjuagar con abundante agua y es recomendable utilizar tiosulfato de sodio paraneutralizar el cloro. Revisar el agua del último enjuague con un kit para detección de cloro

(ortotolidina). Si se detecta cloro, enjuagar una vez más y revisar de nuevo.

6. RUTINA DIARIA.

• Revisar temperatura.

• Conteo en las tolvas que se van a cosechar.

• Alimentación con levadura.

• Cosecha de las tolvas.

• Lavar las tolvas que se cosecharon.

• Conteo del rotífero cosechado.

• Entrega del rotífero al área de larvario de peces marinos.

• Inoculo y reinoculo de rotíferos en tolvas.

• Alimentación y aumento de volumen (microalga y levadura).

• Lavado de materiales y piso.


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ANEXO: BITACORA DE REGISTRO

FECHA: PRODUCCION DIARIA DE ROTIFEROS TECNICO:

REGISTRO DE PARAMETROS CONTEOS ALIMENTACI N OBSERVACIONES:

Número de tanqueDía de

Cultivo

Vol. De Tot.rot. Microalga/Levadura

T°C O2 (mg/l) Salinidad pH Cultivo(L)#

rotíferos # huevos (millones)

Total Cosecha:


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BIBLIOGRAFÍA

CENAIM. 2002. Manual para la producción y uso de organismos zooplanctónicos. CentroNacional de Acuicultura e Investigaciones Marinas (CENAIM).Guayaquil,Ecuador.http://www.cenaim.espol.edu.ec/publicaciones/ artemia/index.html.

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Dhert, P. 1996. Rotifers In P. Lavens and P. Sorgeloos (Eds.), Manual on the productionand use of live for aquaculture. Technical paper FAO-ARC.

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