Il caso del cortisolo: tra certezze e pitfalls · Reynolds et al 1998 (29 soggetti sani) Odagiri et...
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Il caso del cortisolo: tra certezze e pitfalls Bari, 7-10 Novembre 2013
Massimo Terzolo Medicina Interna I
AOU S. Luigi - Orbassano Università di Torino
12° Congresso Nazionale AME 6th Joint Meeting with AACE
ASSE IPOTALAMO-IPOFISI-SURRENE
Cortisolo serico Cortisolo urinario Cortisolo salivare Cortisolo capello
Adrenal Insufficiency
Linkowski P. Pharmacopsychiatry 1994
CORTISOLO SIERICO h8 - diagnosi
Diagnosi Remissione
0
10
20
30
40
50
1 5 9 13 17 21 25 29 33 37 41 45 49 53 57 61 65 69 73
µg/dl 150
50
100
40
30
20
10
0
µg/dl
pazienti con malattia di Cushing
pazienti con malattia di Cushing
Courtesy of Pecori-Giraldi
0
5
10
15
20
25
30
1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43 46 49 52 55 58 61 64
CORTISOLO SIERICO h8 - variabilità
cortisolo (µg/dl) prelievi multipli mattutini
Variabilità individuale 2-13% tra prelievi
CV intralab
CV interlab
CV totale
Advia Centaur
Beckman Access
DPC Immulite
Roche Elecsys
Vitrios ECi
Steele et al. 2005 CV
µg/dl
variabilità su 330 laboratori a 6 mesi, CAP bias tra laboratori su 1015 laboratori, CAP
Ad
via
Cen
tau
r
Bayer
AC
S-1
80
Beck
man
Im
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Beck
Man
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s EC
i
CORTISOLO SIERICO h8 - variabilità
Palmer-Toy et al. 2005
Pecori-Giraldi et al., 2007
1.8 1.8 1.8
S. Luigi series
0
100
140340540740
50 nmol/l
138 nmol/l
Cor$sol values a,er 1-‐mg DST.
Terzolo et al., 2012
0
100
150300
400
500
600
50 nmol/l
Cor$sol values a,er 2 mg/2 day DST in the 40 non-‐suppressor pa$ents
Terzolo et al., 2012
Possibili farmaci interferenti
Falsi positivi
Falsi negativi
Falsi positivi
Falsi positivi
CORTISOLO dopo OST - variabilità
OST ripetuto dopo 1-10 settimane
variabilità: 50% a 200% del primo risultato
Reynolds et al 1998
(29 soggetti sani)
Odagiri et al 2004
CORTISOLO dopo OST - variabilità
malattia di Cushing (n=5)
adenoma surrenalico (n=5)
confronto cortisolo dopo OST con 4 kit
Cushing preclinico (n=7)
controlli (n=6)
Odagiri et al 2004
confronto cortisolo dopo 8 mg DEX con 4 kit
Cushing preclinico (n=7) controlli (n=6)
CORTISOLO dopo 8 mg DEX - variabilità
Malattia di Cushing ACTH ectopico
400
100
50
0
-50
-100
Cortisolo libero urinario (% basale)
-80 -80
Malattia di Cushing ACTH ectopico
100
50
0
-50
-100
Cortisolo plasmatico (% basale)
Invitti et al. 1999
CORTISOLO dopo 8 mg DEX Diagnosi Differenziale
se > capacità legante CBG (≈ 20 µg/dl): cortisolo in eccesso escreto
CORTISOLO LIBERO URINARIO
cortisolo CBG
libero albumina
UFC
6ßOH 20 oxoreduttasi 5 reduttasi 3 HSD glucuronazione sulfatazione
metaboliti
5 tetraidrocortisolo 20 diidrocortisolo 6ß idrocortisolo glucoronati etiocolanolone cortoli/acido cortolico
%
Migliardi et al, 2010
Arlt et al., 2011
IMMUNOCHIMICHE: RIA, EIA, ECLIA - diretti - estrattivi (dopo diclorometano)
Metodica uguale cortisolo sierico MA concentrazione di CLU è molto più bassa di quella di altre molecole steroidee interferenti
METODICHE di DOSAGGIO CORTISOLO LIBERO URINARIO
(Schöneshöfer 1980)
100 0.02 NR 0.26 11.4 0.94 NR 0.98 0.03 NR NR NR 2.3 0.04 0.34 NR NR NR 0.01
Coat-a-count
DOSAGGI del CORTISOLO LIBERO URINARIO
350
300
250
200
150
100
50
0
CLU (µg/24h)
kit di dosaggio
CPB BD corticote DPC extr in house RIA Abbott extr DPC Dab Baxter Bohringer ES600 Abbot direct Tutti kit IDS extr Pharmacia Bohringer ES300 DPC direct Amerlex Amerlite
0 100 -100 200 300
ACCURATEZZA
Bias da GC-MS (%)
RANGE DI NORMA
UKNEQAS - 1998 Gruppo di studio HPA
CROMATOGRAFICHE: - cromatografia liquida con rilevazione ultravioletti (LC-UV) - cromatografia liquida ad elevata prestazione e rilevazione ultravioletti (HPLC-UV) - cromatografia liquida e spettrometria di massa (LC-MS) - cromatografia liquida e spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS) - cromatografia gassosa e spettrometria di massa (GC-MS)
METODICHE di DOSAGGIO
prima ionizzazione elettrospray dopo ionizzazione elettrospray
LC-MS/MS intensità (cps)
m/z m/z
( Taylor 2002)
Variabilità individuale 41-46% da giorno a giorno (Deutschbein 2011)
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
CLU (µg/24h)
soggetti normali pazienti con sindrome di Cushing
1500
1250
1000
750
500
250
0
CLU (µg/24h)
VARIABILITA’ dell’ESCREZIONE di CORTISOLO LIBERO URINARIO
URINARY FREE CORTISOL IN PATIENTS WITH CUSHING’S SYNDROME
6000
3500
1000
750
500
250
0
100
Cushing’s Disease n = 288
Adrenal Adenoma
n = 80
Adrenal Carcinoma
n = 25
Ectopic Secretion
n = 26
(% upper limit) Invitti et al., 1999
Cortisolo a mezzanotte (8.3 µg/dL)
8%
DST 1 mg (4 µg/dL)
11%
CLU (238 µg/24 ore)
27%
Reimondo et al., 2005
100% SENSITIVITY or 100% SPECIFICITY
100% sensitivity [specificity]
100% specificity [sensitivity]
Midnight cortisol (µg/dL)
3.7 [67.9 ( 47.7- 84.1)]
11.0 [84.9 ( 74.6- 92.2)]
DST (µg/dL)
1.5 [68.2 ( 45.1- 86.1)]
14.4 [49.2 ( 36.6- 61.9)]
UFC (µg/24 h)
38 [18.5 ( 6.4- 38.1)]
277 [63.4 ( 51.1- 74.5)]
Reimondo et al. 2007
CORTISOLO LIBERO URINARIO dopo terapia
UFC (nmol/24h) dose chetoconazolo
pz
Castinetti et al 2008
efficace ≈ 50-90% pz
Colao et al 2012
efficace ≈ 25% pz
UFC (nmol/24h)