CAPILLARYS CDT (2) - SEBIA Italiaitaly.sebia.it/italy/12009_it.pdf · Per la pulizia QuotidiAnA...

CAPILLARYS CDT (2)Ref. 2009Ref. 2029*

2015/11

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USO

il kit CAPillArYs Cdt (2) permette la separazione in tampone alcalino (pH 8.8) delle isoforme della transferrina sierica umana per elettroforesicapillare tramite il sistema automatico CAPillArYs. le isoforme della transferrina sono separate in cinque frazioni secondo il loro grado disialilazione : asialotransferrina (forma non sialilata), disialotransferrina, trisialotransferrina, tetrasialotransferrina e pentasialotransferrina. l’insiemedelle isoforme debolmente sialilate (disialotransferrina associata in certi casi alla forma asialotransferrina) viene definito Cdt (Carbohydrate deficienttransferrin), e rappresenta un marcatore biochimico di consumo cronico di alcol. il sistema CAPillArYs permette di realizzare tutte le sequenze dell’elettroforesi fino all’ottenimento del tracciato elettroforetico della transferrina edel valore quantitativo della Cdt. le isoforme dellla transferrina, separate in capillari di silice fusa, sono rilevate direttamente per spettrofotometria diassorbimento a 200 nm. la lettura diretta dà automaticamente la percentuale di Cdt calcolata rispetto alla quantità totale di transferrina rilevata.

Per uso diagnostico in vitro.

NOTE : in questo libretto di istruzioni il nome "CAPILLARYS" è usato per gli strumenti CAPILLARYS, CAPILLARYS 2 e CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING.

PRINCIPIO DEL TESTil dosaggio della Cdt per elettroforesi delle isoforme della transferrina contenute nel siero umano è un’analisi che permette di determinare il consumocronico di alcol. l’elettroforesi capillare offre il vantaggio di un’automazione completa dell’analisi, di separazioni rapide e di una buona risoluzione. sidefinisce come una tecnica di separazione elettrocinetica effettuata in un capillare di diametro interno inferiore a 100 µm riempito con un tamponecomposto da elettroliti. Per molti aspetti, questa metodologia può essere considerata intermedia tra l’elettroforesi zonale classica su supporto solidoe la cromatografia in fase liquida.il sistema CAPillArYs usa il principio dell’elettroforesi capillare in fase libera, che rappresenta la forma più comune di elettroforesi capillare. Conquesta tecnica le molecole cariche sono separate secondo la loro mobilità elettroforetica in un tampone alcalino a pH specifico. la separazioneavviene in funzione del pH dell’elettrolita e del flusso elettro endo-osmotico. il sistema CAPillArYs è costituito da 8 capillari in parallelo, chepermettono l’esecuzione di 7 test simultaneamente per il dosaggio della Cdt. su questo sistema, l’iniezione del campione (diluito in un diluentespecifico per la Cdt) nei capillari è effettuata all’anodo per aspirazione. la separazione è quindi realizzata applicando una differenza di potenziale didiverse migliaia di Volts alle estremità di ogni capillare. la lettura diretta delle proteine viene effettuata a 200 nm all’estremità catodica del capillare. icapillari vengono quindi lavati con la soluzione di lavaggio e con il tampone di analisi. Con il tampone utilizzato a pH alcalino, l’ordine di migrazionedellle transferrine è il seguente: asialotransferrina, disialotransferrina, trisilaotransferrina, tetrasialotransferrina e pentasialotransferrina.

REAGENTI FORNITI NEL KIT CAPILLARYS CDT (2) & CAPILLARYS CDT MAXI-KIT

ATTENZIONE : Prendere visione delle schede di sicurezza.

* CAPILLARYS CDT MAXI-KITPER RISULTATI OTTIMALI :I componenti di uno stesso kit devono essere sempre utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit.LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO.

ATTENZIONE: Non utilizzare l'acqua deionizzata disponibile in commercio, per esempio, acqua per ferro da stiro (rischio di deterioramentodei capillari). Utilizzare esclusivamente l'acqua di qualità ultrapura, tipo acqua per soluzione iniettabile.

1. TAMPONEPreparazioneil tampone è pronto all’uso. Contiene : tampone a pH 8,8 ± 0,5 ; composti chimici, non pericolosi alle concentrazioni utilizzate, necessari per ottenereprestazioni ottimali.Usotampone per analisi delle isoforme della transferrina in elettroforesi capillare.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentoConservare il tampone a temperatura ambiente (tra 15 e 30 °C) o in frigorifero (tra 2 e 8 °C). la soluzione è stabile fino alla data di scadenza indicatasulla scatola del kit o sull’etichetta del flacone di tampone. non conservare il tampone in prossimità di una finestra o di una fonte di calore.NOTA: Se il tampone d’analisi è conservato tra 2 e 8 °C, prima dell’uso si raccomanda di attendere che il reagente torni a temperatura ambiente.non CongElArE.il flacone di tampone aperto e collocato sullo strumento CAPillArYs è stabile per un massimo di due mesi (in totale). se si prevede si utilizzare ilflacone di tampone in un arco di tempo superiore a 2 mesi, è necessario rimuovere il flacone dallo strumento dopo ogni utilizzo e conservarlo atemperatura ambiente (tra 15 e 30 °C) o in frigorifero (tra 2 e 8 °C) ; in queste condizioni è stabile fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta delflacone di tampone.smaltire il tampone se muta di aspetto, o diviene torbido a causa di contaminazione microbica, di un precipitato o di particelle in sospensione.

COMPONENTI REF N° 2009 REF N° 2029*tampone (pronto all’uso) 2 flaconi da 700 ml 24 flaconi da 700 mldiluente del campione (pronto all’uso) 1 flacone da 80 ml 12 flaconi da 80 mlsoluzione di lavaggio (soluzione concentrata) 1 flacone da 75 ml 12 flaconi da 75 mlsoluzione di lavaggio Cdt (pronto all’uso) 2 flaconi da 80 ml 24 flaconi da 80 mlCoppette multiple per diluizione 1 confezione da 70 12 confezioni da 70Barrette lavaggio Cdt 1 confezione da 20 12 confezioni da 20Filtri 3 filtri 36 filtri

CAPILLARYS CDT (2) - 2015/11

Foglio di istruzioni sEBiA - Italiano

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2. DILUENTE DEL CAMPIONEPreparazionela soluzione di diluizione è pronta all’uso. Contiene dei composti chimici, non pericolosi alle concentrazioni usate, necessari per ottenere prestazioniottimali.Usosoluzione per la diluizione automatica dei campioni di siero da analizzare su CAPillArYs.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentoConservare il diluente del campione a temperatura ambiente (tra 15 e 30 °C). E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit osull’etichetta del flacone.NOTA: Il diluente del campione può intorbidirsi o precipitare a temperatura ambiente. Si ridissolve facilmente a 37 °C. Omogeneizzarlo agitandolodelicatamente prima di ogni utilizzo.non CongElArE.smaltire il diluente del campione se muta di aspetto, o se diviene torbido a causa di contaminazione microbica.

3. SOLUZIONE DI LAVAGGIOPreparazioneil flacone di soluzione di lavaggio concentrata deve essere portato al volume di 750 ml con acqua distillata o deionizzata.dopo la diluizione, la soluzione di lavaggio contiene una soluzione alcalina a pH ≈ 12.Usolavaggio dei capillari dopo la separazione elettroforetica delle isoforme della transferrina.IMPORTANTE: Prima di riempire il contenitore della soluzione di lavaggio, si raccomanda di sciacquare abbondantemente il collo del flacone, ilconnettore ed il tubo di pescaggio con acqua distillata o demineralizzata per evitare l’accumulo di sali.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentola soluzione di lavaggio, sia concentrata che diluita, deve essere conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in flaconi chiusi per evitarel'evaporazione. la soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza indicata sul kit o sull’etichetta del flacone della soluzione di lavaggio.la soluzione diluita è stabile per 3 mesi.smaltire la soluzione di lavaggio se muta di aspetto, ad esempio se diviene torbida a causa di contaminazione microbica.

4. SOLUZIONE DI LAVAGGIO CAPILLARYS / MINICAP CDT 4.1. Per la pulizia quotidiana dell'ago di prelievo con le versioni di PHORESIS < 8.61Preparazioneil flacone di soluzione di lavaggio CAPillArYs / MiniCAP Cdt è pronto all’uso. Contiene additivi, non pericolosi alle concentrazioni utilizzate,necessari per ottimizzare le prestazioni.UsoPer la pulizia QuotidiAnA dell’ago di prelievo dello strumento per elettroforesi capillare CAPillArYs, sEBiA, da effettuare alla fine di ogni sessioneanalitica o prima di utilizzare un’ altra tecnica analitica di CAPillArYs. Vedi il foglio di istruzione di CAPILLARYS, SEBIA.• utilizzare il portacampioni designato per la manutenzione (n° 100).• Posizionare una provetta da emolisi contenente 1 ml di lavaggio CAPillArYs / MiniCAP Cdt, in posizione n° 1 sul portacampioni.• inserire il portacampioni n° 100 di manutenzione nel sistema CAPillArYs.• nella finestra "MAnutEnzionE" che compare a video, selezionare "Avviare la pulizia dell’ago (soluzione di lavaggio Cdt)" e convalidare. Conservazione, stabilità e segni di deterioramentola soluzione di lavaggio deve essere conservata a temperatura ambiente (tra 15 e 30 °C) in un contenitore chiuso per evitarne l’evaporazione.E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sul kit o sull’etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. non CongElArE.NOTA : La soluzione di lavaggio può intorbidirsi o precipitare a temperatura ambiente Si ridissolve facilmente a 37 °C. Omogeneizzare agitandodelicatamente prima di ogni utilizzo.Eliminare la soluzione di lavaggio se muta di aspetto o se diventa torbida a causa di contaminazione microbica.4.2. Per la pulizia quotidiana dell'ago di prelievo con le versioni di PHORESIS ≥ 8.61Preparazioneil flacone della soluzione di lavaggio CAPillArYs / MiniCAP Cdt è pronto all’uso. Contiene dei composti chimici, non pericolosi alle concentrazioniutilizzate, necessari per ottenere prestazioni ottimali.UsoPer la pulizia QuotidiAnA dell’ago di prelievo e dei capillari dello strumento per elettroforesi capillare CAPillArYs, sEBiA, da effettuare alla finedi ogni sessione analitica e, in maniera assolutamente obbligatoria, prima di utilizzare un’altra metodica analitica di CAPILLARYS.Vedere il manuale di istruzione di CAPILLARYS, SEBIA.• utilizzare il rack designato per la manutenzione (n° 100).• Posizionare una provetta da emolisi contenente 1 ml di soluzione di lavaggio CAPillArYs / MiniCAP Cdt, in posizione n° 1 sul rack.• dispensare 100 μl di soluzione di lavaggio CAPillArYs / MiniCAP Cdt in ciascun pozzetto di una nuova barretta di lavaggio verde e posizionare

la barretta sul rack n° 100.• inserire il rack n° 100 nello strumento CAPillArYs.• nella finestra "MAnutEnzionE" che compare a video, selezionare "Avvia la pulizia dell’ago (soluzione di lavaggio Cdt)" e confermare.• il ciclo di lavaggio parte quindi automaticamente.IMPORTANTE : dopo la pulizia dell’ago e dei capillari, non riutilizzare la barretta di lavaggio.NOTA : Dopo questa fase di lavaggio, non è necessario effettuare un ciclo di "procedura CAPICLEAN" quando si cambia metodica da "CDT" a"PROTEIN(E) 6" o "IMMUNOTYPING".


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Conservazione, stabilità e segni di deterioramentola soluzione di lavaggio deve essere conservata a temperatura ambiente (tra 15 e 30 °C) in un contenitore chiuso per evitarne l’evaporazione.È stabile fino alla data di scadenza indicata sul kit o sull’etichetta dei flaconi. non CongElArE.NOTA : La soluzione di lavaggio può intorbidirsi o precipitare a temperatura ambiente Si ridissolve facilmente a 37 °C. Omogeneizzare agitandodelicatamente prima di ogni utilizzo.smaltire la soluzione di lavaggio se muta di aspetto o se diventa torbida a causa di contaminazione microbica, di un precipitato o di particelle insospensione.

5. COPPETTE PER DILUIZIONEUsoCoppette multiple monouso per la diluizione dei campioni di siero tramite lo strumento. da collocare sul portacampioni.AVVERTENZA: Le coppette di diluizione, contenenti i campioni biologici, devono essere manipolate con precauzione.

6. BARRETTE PER IL LAVAGGIOUtilizzoBarrette, monouso, per la pulizia dell’ago e dei capillari dello strumento automatizzato (versioni PHorEsis ≥ 8.61) con la soluzione di lavaggioCAPillArYs / MiniCAP Cdt. da posizionare sul rack n° 100.ATTENZIONE : Non utilizzare le barrette per il lavaggio CDT per l’analisi dei campioni.

7. FILTRIUsoFiltri monouso per la filtrazione del tampone d’analisi, della soluzione di lavaggio ricostituita e dell’acqua distillata o deionizzata (utilizzata per ilrisciacquo dei capillari).IMPORTANTE: Alla sostituzione del kit, cambiare sistematicamente i tre filtri. Avvitare il filtro al connettore situato all’estremità di ciascun tubo inserito nei flaconi di tampone, soluzione di lavaggio e acqua distillata o deionizzata.Quando i filtri vengono sostituiti, sciacquare i connettori e i tubi con acqua distillata o deionizzata. ConservazionePrima dell’uso, conservare i filtri nella loro confezione sigillata in luogo asciutto a temperatura ambiente o refrigerata.

REAGENTI RICHESTI

ATTENZIONE : Prendere visione delle schede di sicurezza.

1. ACQUA DISTILLATA ADDIZIONATA CON BATTERIOSTATICO (SEBIA, ref. N° 1066021, 2 flaconi da 5 L)PreparazioneAcqua distillata addizionata con batteriostatico è pronta all’uso. Contiene : acqua distillata, derivati isotiazolinoninici < 0,0001 %, reagenti nonpericolosi alle concentrazioni usate, necessari per ottenere prestazioni ottimali.UsoPer il risciacquo dei capillari del sistema automatico per elettroforesi capillare CAPillArYs, sEBiA.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentoConservare l’acqua distillata addizionata con batteriostatico a temperatura ambiente (tra 15 e 30 °C). la soluzione è stabile fino alla data di scadenzaindicata sulla etichetta del flacone. non conservare in prossimità di una finestra o di una fonte di calore. smaltire l’acqua distillata se muta di aspetto,o diviene torbida a causa di contaminazione microbica, di un precipitato o di particelle in sospensione.

Oppure

2. ACQUA DISTILLATA O DEIONIZZATAUsoPer il risciacquo dei capillari del sistema automatico per elettroforesi capillare CAPillArYs, sEBiA.si raccomanda di utilizzare acqua distillata o deionizzata filtrata (con filtro di porosità ≤ 0,45 µm) e con conduttività inferiore a 3 µs/cm, corrispondentea una resistività superiore a 0,33 MΩ.cm.Per prevenire la proliferazione microbica, sostituire l’acqua quotidianamente. Per funzionamento ottimale, si raccomanda di aggiungere 350 μl/l di ClEAn ProtECt (sEBiA, ref. n° 2059 : 1 flacone da 5 ml) all'acqua distillatao deionizzata oppure di utilizzare direttamente la soluzione CAPiprotect pronto all'uso (sEBiA, ref. n° 2061 : 2 taniche da 5 l di acqua distillata conClEAn ProtECt).IMPORTANTE: Prima di riempire il flacone, si raccomanda di lavarlo abbondantemente con acqua distillata o deionizzata.

3. CAPICLEANComposizioneil flacone di soluzione enzimatica concentrata CAPiClEAn (sEBiA, ref. 2058, 1 flacone da 25 ml) contiene: enzimi proteolitici, surfattanti e compostichimici, non pericolosi alle concentrazioni utilizzate, necessari per ottenere prestazioni ottimali.UsoPer la pulizia della sonda di campionamento nel sistema automatico per elettroforesi capillare CAPillArYs, sEBiA, nella sequenza di puliziaCAPiClEAn.IMPORTANTE :- se si effettuano meno di 500 analisi alla settimana, eseguire una sequenza di lavaggio con CAPiClEAn almeno una volta a settimana.- se si effettuano meno di 500 analisi al giorno e più di 500 analisi alla settimana, eseguire una sequenza di lavaggio con CAPiClEAn ogni

500 analisi.


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- se si effettuano più di 500 analisi al giorno, eseguire una sequenza di lavaggio con CAPiClEAn una volta al giorno.Vedi il foglio istruzioni CAPICLEAN, SEBIA.IMPORTANTE: non riutilizzare il segmento di diluizione del campione dopo la pulizia della sonda.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentoConservare CAPiClEAn in frigorifero (2 - 8 °C). la soluzione è stabile fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta del flacone. non CongElArE.nel flacone di CAPiClEAn si possono osservare un precipitato o delle particelle aggregate in sospensione (flocculato) senza che ciò alteri il suoutilizzo.non risospendere questo precipitato o queste particelle. si raccomanda di prelevare esclusivamente il surnatante.

4. SOLUZIONE DI IPOCLORITO DI SODIO (per la pulizia dell’ago di prelievo)PreparazionePreparare una soluzione di ipoclorito di sodio (tra il 2 e il 3 % di cloro) portando 250 ml di una soluzione concentrata di cloro 9.6 % ad un litro conacqua distillata o deionizzata fredda.UsoPer la pulizia dell’ago di prelievo nel sistema automatico per elettroforesi capillare CAPillArYs, sEBiA, (manutenzione settimanale volta ad eliminarele proteine adese all’ago).Vedi il foglio di istruzione di CAPILLARYS, SEBIA.• utilizzare il portacampioni designato per la manutenzione (n° 100).• Posizionare una provetta da emolisi contenente 2 ml della soluzione di ipoclorito di sodio precedentemente preparata, in posizione n° 1 sul

portacampioni.• inserire il portacampioni n° 100 di manutenzione nel sistema CAPillArYs.• nella finestra "MAnutEnzionE" che appare sullo schermo, selezionare "Avvia la pulizia della sonda (soluzione di ipoclorito di sodio)"e confermare.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentoConservare la soluzione di lavoro di ipoclorito di sodio a temperatura ambiente in un contenitore chiuso. E’ stabile per 3 mesi. Evitare l’esposizione alsole, a fonti di calore, a fiamme, ad acidi e ammoniaca.

5. SOLUZIONE DI LAVAGGIO CAPILLARYS / MINICAPPreparazioneCiascun flacone di soluzione di lavaggio concentrata (sEBiA, ref. 2052: 2 flaconi da 75 ml ciascuno) deve essere portato al volume di 750 ml conacqua distillata o deionizzata.dopo la diluizione, la soluzione di lavaggio contiene una soluzione alcalina a pH ≈ 12.Usolavaggio dei capillari di CAPillArYs. reagente supplementare necessario per serie analitiche inferiori a 40 analisi.IMPORTANTE: Prima di riempire il contenitore della soluzione di lavaggio, si raccomanda di sciacquare abbondantemente il collo del flacone, ilconnettore ed il tubo di pescaggio con acqua distillata o demineralizzata per evitare l’accumulo di sali.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentola soluzione di lavaggio, sia concentrata che diluita, può essere conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in flaconi chiusi per evitarel’evaporazione. la soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza indicata sul kit o sull’etichetta del flacone della soluzione di lavaggio.la soluzione diluita è stabile per 3 mesi.Eliminare la soluzione di lavaggio se muta di aspetto o se diventa torbida a causa di contaminazione microbica.

6. SOLUZIONE DEI TRATTAMENTO DI CAMPIONI CAPILLARYS / MINICAP CDTPreparazionela soluzione di trattamento dei campioni CAPillArYs / MiniCAP Cdt (sEBiA, ref. 2054 : 1 flacone da 50 ml) è pronta all'uso. Contiene deicomposti chimici, non pericolosi alle concentrazioni utilizzate, necessari per ottenere prestazioni ottimali.UsoPer il trattamento, se necessario, di alcuni campioni che presentano delle interferenze ; vedere " Profili elettroforetici ", con alcuni esempi di campionicon interferenze.la soluzione di trattamento dei campioni ha un'azione precipitante su alcune immunoglobuline, che può perturbare il profilo elettroforetico.NOTA: La soluzione di trattamento dei campioni agisce, in particolare, sulle seguenti interferenze :

- presenza di uno o più picchi aggiuntivi tenui sul profilo o di una frazione larga prima della frazione disialotransferrina,- slittamento del profilo, che impedisce la quantificazione della CDT.

Vedere il paragrafo " Preparazione dei campioni " per l'uso della soluzione di trattamento.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentola soluzione di trattamento dei campioni deve essere conservata in frigorifero (tra 2 e 8 °C). E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sullaconfezione del kit o sull’etichetta del flacone. non CongElArE.Eliminare la soluzione di trattamento dei campioni se muta di aspetto o se diventa torbida a causa di una contaminazione microbica o della presenzadi particelle in sospensione.

7. CONTROLLO CDT NORMALE IMPORTANTE: Per la ricostituzione del Controllo Cdt normale, è necessario il diluente Controlli Cdt, sEBiA (1 flacone da 5 ml).Composizioneil Controllo Cdt normale (sEBiA, ref. n° 4795) è ottenuto a partire da un pool di campioni di siero umano normali.una procedura di stabilizzazione permette di conservare il Controllo Cdt normale in forma liofilizzata.il diluente Controlli Cdt, necessario per la ricostituzione del Controllo Cdt normale, è pronto all’uso. Contiene: additivi, non pericolosi alleconcentrazioni usate, necessari per un risultato ottimale.Destinazione d'usoil controllo Cdt normale è destinato alla normalizzazione dei capillari al momento del primo utilizzo oppure quando il sistema automaticoCAPillArYs non è stato impiegato per un periodo prolungato (oltre una settimana) per dosare le isoforme della transferrina umana con la metodicaelettroforetica CAPillArYs Cdt, oppure dopo una sostituzione o un'attivazione dei capillari.• ricostituire, con precisione, ogni flacone liofilizzato di Controllo Cdt normale con il volume di diluente dei Controlli Cdt indicato nel foglio di

istruzioni del Controllo Cdt normale. lasciare riposare per 30 minuti e agitare dolcemente, cercando di evitare la formazione di schiuma.il Controllo Cdt normale deve essere utilizzato come un normale siero umano.


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• dispensare il Controllo Cdt normale ricostituito in una microprovetta.• tagliare il tappo della microprovetta.• Caricare la microprovetta, posizionata su una provetta da emolisi nuova che servirà da supporto, in posizione 1 sul rack specifico n° 0 di

CAPillArYs, previsto a questo scopo, con una coppetta multipla di diluizione nuova.IMPORTANTE: Per un uso ottimale del Controllo Cdt normale, è indispensabile utilizzare le etichette con codice a barre destinate a identificare laprovetta da emolisi che funge da supporto alla microprovetta contenente il Controllo Cdt (tagliare il tappo della microprovetta al momento del suoutilizzo).

• dispensare 1 ml del diluente del campione CAPillArYs Cdt in una provetta da emolisi vuota senza prelevare bolle d’aria e posizionare laprovetta in posizione 8 sullo stesso rack.IMPORTANTE: Verificare l'assenza di schiuma nella provetta del diluente prima di caricarla sul rack.

• iniziare l’analisi introducendo il portacampioni num. 0 nello strumento CAPillArYs.

i risultati ottenuti sono allora automaticamente acquisiti dal programma per il trattamento dei dati. i valori trovati devono essere compresi nei valori di riferimento specifici di ogni lotto.Conservazione, stabilità e segni di deterioramentoVedi il foglio di istruzione del Controllo CDT Normale.

ATTENTIONE: Poiché nessun metodo può fornire la completa garanzia di assenza di HiV, virus dell'epatite B e di altri agenti infettivi, il Controllo Cdtnormale deve essere manipolato molto attentamente per evitare eventuali contaminazioni.Questo lotto di siero di controllo, testato con tecniche approvate dalle competenti autorità (FdA, AnsM…), è risultato negativo contro :- l’antigene di superficie dell’epatite B ;- gli anticorpi anti-HCV ;- gli anticorpi anti-HiV1 ed HiV2.

NOTE :I test di convalida dei reagenti dimostrano che, per le diverse soluzioni e con l'utilizzo di un materiale adatto al volume da ricostituire, una variazionedel volume finale di ± 5 % non altera la qualità dell'analisi.L’acqua distillata o deionizzata utilizzata per ricostituire le soluzioni deve essere priva di colonie batteriche o di muffe (utilizzare un filtro con porosità≤ 0,45 µm) e presentare una conduttività inferiore a 3 µS/cm, corrispondente a una resistività superiore a 0,33 MΩ.cm.

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI

1. sistema per elettroforesi capillare CAPillArYs sEBiA : CAPillArYs ref. n° 1220, CAPillArYs 2 ref. n° 1222 o CAPillArYs 2 FlEX-PiErCing ref. n° 1222.

2. Portacampioni forniti con il sistema CAPillArYs.3. Contenitori di plastica forniti con il sistema CAPillArYs: tanica per la soluzione di risciacquo dei capillari (da riempire con acqua deionizzata o

distillata) e tanica per lo scarico.

Per il trattamento dei campioni, se necessaria :• Microprovetta da 1,5 ml.• Provetta da emolisi da 75 mm di altezza e 13 mm di diametro.• Centrifuga da 600 / 1700 g.

CAMPIONI PER L’ANALISI

Prelievo e conservazione dei campioniPer l’analisi sono raccomandati campioni di siero freschi. i campioni devono essere prelevati secondo le procedure utilizzate per i test di laboratoriodi analisi cliniche.I campioni non devono essere conservati a temperatura ambiente. Possono essere conservati in frigorifero (tra 2 e 8 °C) fino a un massimo di10 giorni.NOTA: Durante il trasporto, il campioni possono restare a temperatura ambiente per 48 ore al massimo. Tuttavia, si raccomanda fortemente ditrasportarli a 2 – 8 °C.Per conservazioni prolungate, congelare i campioni rapidamente (al massimo entro le 8 ore dal prelievo). i sieri congelati sono stabili fino ad 12 mesi.le proteine dei campioni conservati tra 2 e 8 °C si degradano, in particolare il complemento C3. sul profilo delle isoforme di transferrina si osserval’apparizione di un picco supplementare di C3d. Questo picco è visibile dopo la forma pentasialotransferrina e non interferisce con l’analisi delleisoforme di transferrina separate per elettroforesi. la sua intensità aumenta con l’invecchiamento del siero.

Preparazione dei campioniutilizzare campioni di siero non diluito.dopo la conservazione in frigorifero (fra i 2 e 8 °C) o il congelamento, alcuni sieri (in particolare quelli che contengono crioglobuline o criogel) possonodiventare viscosi o torbidi. dopo ridissouzione, questi sieri possono essere analizzati tal quali.Prima dell’analisi si raccomanda di osservare l’aspetto dei campioni (casi di emolisi, presenza di crioglobuline o torbidità).

Preparazione dei campioni che presentano delle interferenze (vedere " Profili elettroforetici ", con alcuni esempi di campioni con interferenze) :• Dispensare 200 µL di siero da trattare in una microprovetta.• Aggiungere 50 µL di soluzione di trattamento dei campioni CAPILLARYS CDT.• Vortexare per 5 secondi.• Centrifugare la microprovetta per 10 minuti a 600 g.• Prelevare il sovranatante e applicarlo in una microprovetta nuova per effettuare l'analisi.


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• Tagliare il tappo della microprovetta e smaltirlo.• Posizionare la microprovetta contenente il sovranatante del campione trattato sul rack di CAPILLARYS in una provetta da emolisi nuova, che servirà

da supporto.• Effettuare quindi l'analisi come per un campione non trattato.

Campioni da evitare• non usare campioni emolizzati. l’emolisi comporta la deformazione dei profili delle isoforme che rende impossibile la quantificazione della Cdt.• non utilizzare campioni di sieri vecchi o conservati in condizioni non ottimali.• Evitare campioni di plasma. il fibrinogeno migra catodicamente rispetto all'asialo transferrina ed induce una deformazione del profilo elettroforetico.

se il picco del fibrinogeno è troppo abbondante, può interferire con l'analisi delle isoforme della transferrina e perturbare il dosaggio della Cdt.• Evitare campioni contenenti l'EdtA o il citrato. la deformazione del profilo elettroforetico rende impossibile la quantificazione della Cdt.

NOTA : Le provette da prelievo e i parametri di centrifugazione dei campioni biologici sono descritti nella documentazione disponibile relativa alla fasepreanalitica delle analisi cliniche (dati forniti dai fabbricanti di provette, guide e raccomandazioni sui prelievi di campioni biologici...). In assenza diindicazioni sul tipo di provetta da utilizzare o sulla centrifugazione nelle istruzioni per l'uso, fare riferimento a questa documentazione e, per ledimensioni della provetta, fare riferimento al documento SEBIA "Caratteristiche delle provette da utilizzare in funzione dello strumento". La fasepreanalitica deve essere realizzata secondo lo stato dell'arte, le diverse raccomandazioni, tra cui quelle fornite dai fabbricanti di provette, e lanormativa applicabile.

PROCEDURAil sistema CAPillArYs è uno strumento multiparametrico che permette l’analisi delle isoforme della transferrina in parallelo secondo le seguenti fasi:• lettura dei codici a barre delle provette primarie (fino a 7) e del portacampioni;• diluizione dei campioni a partire da provette primarie;• lavaggio dei capillari;• iniezione dei campioni diluiti;• separazione e lettura diretta delle proteine sui capillari.

le fasi manuali sono le seguenti:• caricamento delle provette primarie nei portacampioni in posizione da 1 a 7;• caricamento della provetta contenente la soluzione di diluizione in posizione 8 nei portacampioni;• inserimento dei portacampioni nel sistema CAPillArYs;• recupero dei portacampioni dopo l’analisi.

lEggErE AttEntAMEntE il MAnuAlE di istruzionE di CAPillArYs.

I. PREPARAZIONE DELL’ANALISI ELETTROFORETICA1. Accendere CAPillArYs ed il computer.2. Avviare il programma, lo strumento si inizializza quindi automaticamente.3. utilizzare il kit CAPillArYs Cdt (2) con il programma d’analisi "Cdt". Per selezionare il programma di analisi "Cdt" e collocare il flacone

di tampone Cdt sullo strumento leggere attentamente il manuale di istruzioni di CAPillArYs. IMPORTANTE: si raccomanda di associare e identificare sempre il tappo a vite, il tubo e il filtro del flacone rispetto al tampone utilizzato. sequesta procedura non viene rispettata perfettamente, la contaminazione del tampone di migrazione da parte del tampone precedente puòcausare degli artefatti di migrazione che perturberanno l'analisi.

4. il portacampioni dispone di 8 posti per le provette. in ciascun portacampioni caricare fino a 7 provette primarie (posizione da 1 a 7), facendoattenzione che il codice a barre di ciascuna provetta sia visibile attraverso le fessure del portacampioni.IMPORTANTE: se il numero di provette da analizzare è inferiore a 7, completare il portacampioni con provette contenenti acqua distillata odeionizzata.

5. dispensare 1 ml di soluzione di diluizione in una provetta da emolisi vuota senza prelevare bolle d’aria e posizionare la provetta in posizione8 sul portacampioni.

6. Collocare una coppetta di diluizione nuova su ogni rack. se manca la coppetta, il rack viene espulso.7. inserire il(i) portacampioni completo(i) nel sistema CAPillArYs attraverso l’apposito vano di ingresso situato al centro dello strumento.

Possono essere inseriti fino a 13 portacampioni in successione e, durante il corso dell’analisi, possono essere inseriti nuovi portacampioni(caricamento continuo).

8. togliere dal comparto di uscita, situato alla sinistra dell’apparecchio, i portacampioni con le provette già analizzate.8. rimuovere, con precauzione, la coppetta multipla di diluizione usata e smaltirla.

AVVERTENZA: Le coppette di diluizione, contenenti campioni biologici, devono essere manipolate con precauzione.

DILUIZIONE - MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE SEQUENZE AUTOMATICHE1. lettura dei codici a barre delle provette primarie dei campioni e del portacampioni.2. diluizione dei sieri con la soluzione di diluizione, l’ago di campionamento viene lavato dopo ogni diluizione.3. lavaggio dei capillari.4. i campioni diluiti sono iniettati dentro i capillari.5. Migrazione a tensione costante e temperatura controllata per effetto Peltier, per una durata di 8 minuti.6. le proteine sono rilevate direttamente con lettura a 200 nm e, in contemporanea il profilo delle isoforme della transferrina appare sul monitor del

sistema.NOTA: Queste fasi sono eseguite una dopo l’altra per il primo portacampioni inserito. I profili corrispondenti ai campioni analizzati appaiono sulloschermo dopo circa 20 minuti. Per il portacampioni successivo le fasi 1 e 2 (lettura del codice a barre e diluizione dei sieri) vengono eseguite durantel’analisi del portacampioni precedente.


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II. ANALISI DEI RISULTATIAl termine delle analisi, viene effettuata automaticamente la quantificazione percentuale delle frazioni di transferrina, che appaiono nell’ordineseguente: pentasialotransferrina associata alla tetrasialotransferrina, trisialotransferrina, disialotransferrina e asialotransferrina. le frazioni pentasialotransferrina e tetrasialotransferrina sono integrate separatamente e la frazione pentasialotransferrina viene individuata da uncolore specifico.sul profilo elettroforetico ottenuto, tutti i picchi delle frazioni della transferrina, tranne l'asialotransferrina, calcolate per deconvoluzione, vengonoridisegnate (o fittate) e sovrapposte alla curva originale.È possibile modificare l'integrazione automatica delle frazioni effettuando un'integrazione manuale. A questo scopo, sopprimere l'integrazione frazioneper frazione e / o integrare manualmente una o più frazioni.NOTA : Quando si analizza il Controllo CDT Normale, identificato dall'apposita etichetta con codice a barre, un simbolo di allerta viola compare in casodi densità ottica (DO) insufficiente (Contattare il Servizio Post-Vendita SEBIA).

III. FINE DELLA SEQUENZA DI ANALISIAl termine della sessione di lavoro l’operatore deve avviare la procedura di spegnimento del sistema CAPillArYs in modo da conservare i capillariin condizioni ottimali.

IV. RIEMPIMENTO DELLE TANICHE DEI REAGENTIil sistema CAPillArYs consente una gestione automatizzata dei reagenti.IMPORTANTE: E’ necessario seguire la procedura prevista per il cambio dei flaconi (rischio di depressurizzazione dei flaconi e perturbazione delleanalisi) rispettando il codice colore flacone-connettore durante ogni sostituzione di flacone.Quando necessario, uno dei seguenti messaggi compare sul monitor:• inserire un nuovo flacone di tampone e/o,• riempire il flacone della soluzione di lavaggio ricostituita e/o,• riempire il flacone con acqua distillata o deionizzata filtrata per il risciacquo dei capillari e/o,• svuotare il flacone dei liquidi reflui.

ATTENZIONE: Non utilizzare l'acqua deionizzata disponibile in commercio, per esempio, acqua per ferro da stiro (rischio di deterioramentodei capillari). Utilizzare esclusivamente l'acqua di qualità ultrapura, tipo acqua per soluzione iniettabile.

IMPORTANTE: Prima di riempire il flacone della soluzione di risciacquo, si raccomanda di lavarlo abbondantemente con acqua distillata o deionizzatasi PrEgA di lEggErE AttEntAMEntE il MAnuAlE di istruzionE di CAPillArYs.

CONTROLLO DI QUALITàPer ogni serie analitica, si raccomanda di includere un siero normale (siero Cdt normale, sEBiA, ref. n° 4795).

RISULTATI

Valoriil rilevamento diretto sui capillari a 200 nm permette di definire le percentuali relative di ciascuna delle isoforme della transferrina.uno studio, realizzato su una popolazione di 225 soggetti, ha stabilito che il limite superiore del valore di riferimento della Cdt è di 1,3 %(F schellenberg, JPM Wielders, 2010).la soglia decisionale basata sul limite superiore del valore di riferimento, aumentata dell’incertezza di misura, è stata determinata in 1.6 %. Questovalore di soglia è stato confermato da un secondo studio interno realizzato su 104 campioni.

i risultati dell’analisi della Cdt possono quindi essere classificati nella maniera seguente:- Cdt ≤ 1.3 %: risultato normale,- Cdt > 1.3 % et ≤ 1.6 %: risultato non conclusivo,- Cdt > 1.6 %: risultato patologico.

Si raccomanda a ciascun laboratorio di stabilire i propri valori normali.NOTA: I valori sono stati ottenuti utilizzando i parametri standard del programma (programma di analisi CDT, lisciatura 2 e quantificazione automaticadelle isoforme della transferrina).

Interpretazionei valori di Cdt > di 1.6 % sono considerati positivi e causati da un abuso cronico di alcool. ATTENZIONE: La graduazione dell’asse delle ascisse non permette in alcun caso di identificare una frazione che non sia stata identificataautomaticamente dal software.

Interferenze e limitii fattori sotto elencati possono interferire con l'analisi delle isoforme della transferrina e perturbare o impedire il dosaggio della Cdt. si raccomandadi osservare attentamente il profilo elettroforetico ottenuto per rilevare una distorsione del profilo, una frazione supplementare o qualsiasi altraanomalia rispetto a un profilo normale o con Cdt aumentata (vedere ProFili ElEttroForEtiCi, Figure n° 1 e 2). in caso di anomalia del profiloelettroforetico, il valore della Cdt eventualmente visualizzato non deve essere preso in considerazione.• disordini Congeniti della glicosilazione,• Certi casi di varianti genetiche della transferrina,• Proteine monoclonali o presenza di un fondo policlonale importante,• Fibrinogeno e campioni emolizzati,• Anticoagulanti (citrato, EdtA),


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• Campioni vecchi o conservati in cattive condizioni.• Epatopatie (gravi, stadio finale della malattia).Vedere CAMPioni PEr l’AnAlisi.si raccomanda di utilizzare la procedura complementare CAPillArYs Cdt / is, eseguita con l’antisiero tetravalente Cdt / is, sEBiA, Pn 2057, peril trattamento del campione, soprattutto quando nel quadro elettroforetico è osservata la comparsa di una o più frazioni complementari o di una frazioneallargata prima della disialotransferrina, o quando uno spostamento di tutto il quadro elettroforetico invalida la quantificazione Cdt.la Cdt può essere quantificata in sieri che presentano varianti delle isoforme della transferrina. in questo caso, la quantificazione della Cdt è ottenutatramite un calcolo, la voce " Cdt (*) " compare quindi sullo schermo e il commento " Cdt calcolata " viene stampato sul referto vicino alla voce" Cdt (*) ". Quando si ottiene un valore della Cdt prossimo al cut-off, si raccomanda di studiare la cartella clinica del paziente.delle malattie epatiche possono alterare la quantificazione della Cdt.un blocco disialotransferrina / trisialotransferrina può essere osservato quando si analizzano campioni di pazienti con epatopatia, per esempio cirrosialcolica (vedere " ProFili ElEttroForEtiCi "). in questi casi, si osserva generalmente una diminuzione della transferrina, associata a un aumentodella frazione trisialotransferrina.IMPORTANTE: Per avere delle informazioni complementari, è indispensabile analizzare la cartella clinica del paziente.tenuto conto della varietà degli interferenti, non si può garantire che la soluzione di trattamento dei campioni sia totalmente efficace per laquantificazione della Cdt. Quando la frazione disialotransferrina è superiore al 3 % e la frazione asialotransferrina è assente, sullo schermo appare un simbolo giallo di allerta.la presenza di questo simbolo può indicare la presenza di una potenziale interferenza a livello della disialotransferrina. in questo caso si consiglia distudiare con attenzione il profilo elettroforetico e, se necessario, trattare il campione con la soluzione di trattamento dei campioni CAPillArYs /MiniCAP Cdt oppure utilizzare la metodica complementare CAPillArYs Cdt / is con l'antisiero tetravalente Cdt / is. un'analisi del siero tramiteelettroforesi delle proteine può essere utile per verificare che non siano presenti anomalie monoclonali in prossimità della zona Beta.se l'analisi rivela una variante della Cdt, è importante verificare se:- il campione è stato conservato a temperatura ambiente (e per quanto tempo),- la concentrazione del C3 è aumentata,- qual è la concentrazione della transferrina.Quando la concentrazione del C3 è aumentata e se il campione è stato conservato diversi giorni a temperatura ambiente, il picco del C3 degradato(C3d) aumenta e può raggiungere una densità ottica (do) simile a quella del picco della tetrasialotransferrina (4-sialo).nel caso di una debole concentrazione della transferrina (causata p.es. da un'insufficienza epatica), il picco della tetrasialotransferrina (4-sialo) puòdiminuire in maniera significativa.la combinazione di queste condizioni può condurre a un profilo di tipo variante. in questo caso, si raccomanda di ripetere l'analisi su un siero fresco,oppure su un siero conservato a 2 - 8 °C o congelato.

Assistenza tecnicaContattare il servizio Post-Vendita sEBiA in caso di test difettosi.le schede di dati di sicurezza dei diversi reagenti del kit, le informazioni relative alla pulizia e allo smaltimento dei rifiuti, alle regole di etichettatura edi sicurezza applicate da sEBiA, all'imballaggio per il trasporto dei campioni biologici e alla decontaminazione degli strumenti sono disponibili nel dVd"instruCtions & sAFEtY dAtA sHEEts".

DATI SULLE PRESTAZIONI

i risultati seguenti, ottenuti per analisi quantitativa con il kit CAPillArYs Cdt sul sistema CAPillArYs, indicano una ripetibilità e una riproducibilitàmolto buone del kit CAPillArYs Cdt relativamente a tutti gli aspetti analizzati con un coefficiente di variazione medio dell’ordine di 4,4 % sui valoripercentuali della Cdt.le percentuali della Cdt sono state ottenute con i parametri di integrazione per difetto del programma (lisciatura 2 e integrazione automatica).

Riproducibilità nella serietre differenti campioni di siero sono stati analizzati simultaneamente sui 7 capillari del sistema CAPillArYs con il kit CAPillArYs Cdt. la media,deviazione standard (sd) e il coefficiente di variazione (CV) (n = 7) sono stati calcolati per ogni campione analizzato.la tabella mostra i valori per i 3 campioni di siero testati.

Riproducibilità tra le seriesette campioni di siero sono stati analizzati 10 volte sui 7 capillari del sistema CAPillArYs con il kit CAPillArYs Cdt e 2 differenti lotti di tamponed’analisi. la media, deviazione standard (sd) e il coefficiente di variazione (CV) (n = 10) per la frazione Cdt sono stati calcolati per ciascun campionee ciascun lotto.la tabella riporta l’intervallo dei valori di Cdt per i 7 sieri testati con i due lotti di tampone e il CV medio calcolato dai CV collezionati per tutti i campioni(n = 14).

% FRAZIONE CDT Siero A MEdiA (%) 0.8sd 0.05CV (%) 6.7Siero B MEdiA (%) 1.6sd 0.06CV (%) 4.0Siero CMEdiA (%) 6.0sd 0.12CV (%) 2.1


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Riproducibilità tra lottisette campioni di siero sono stati analizzati 10 volte sui 7 capillari del sistema CAPillArYs con il kit CAPillArYs Cdt e 2 lotti differenti di tamponed’analisi. le media, la deviazione standard (sd) e il coefficiente di variazione (CV) (n = 20) per la frazione Cdt sono stati calcolati per ogni siero econ i 2 lotti. la tabella seguente riporta l’intervallo dei valori di Cdt per i 7 sieri testati con i due lotti di tampone e il CV medio calcolato dai CV collezionati pertutti i campioni (n = 7).

AccuratezzaQuesto studio ha incluso 21 campioni patologici e 83 campioni normali (n = 104) che sono stati processati con il kit CAPillArYs Cdt e con unatecnica di riferimento per la quantificazione della Cdt in HPlC. il risultato indica una buona concordanza fra i due sistemi analitici, con una sensibilitàdel 76.2 % e una specificità del 95.2 %, calcolate secondo il metodo raccomandato (Wendling, 1986).i parametri di correlazione calcolati per la zona di migrazione della Cdt sulla base dei dati aggregati, per CAPillArYs Cdt vs. HPlC sono(y = CAPillArYs Cdt), sono :

Sensibilità un siero patologico che presenta una concentrazione elevata di Cdt è stato diluito scalarmente. l’analisi delle diverse diluizioni sul sistemaCAPillArYs con il kit CAPillArYs Cdt ha evidenziato che la più bassa concentrazione rilevabile è dell’ordine di 0.35 % per i campioni analizzati.

Linearitàl'analisi di 2 miscele di due campioni di siero diversi in proporzioni variabili (miscela n° 1 di campioni contenenti 0,3 % e 8,7 % di Cdt e miscela n° 2di campioni contenenti 0,5 % e 26,2 % di Cdt) ha permesso di dimostrare che la percentuale della Cdt è perfettamente correlata alla proporzionedi ogni siero nella miscela e che le variazioni della Cdt sono rilevate in maniera lineare con la metodica CAPillArYs Cdt.la metodica CAPillArYs Cdt è quindi perfettamente lineare nella gamma di concentrazioni di Cdt studiate, tra lo 0,3 e il 26,2 %, sull'insieme deicampioni analizzati.

FRAZIONE MEDIA (%) SD CV (%) CV MEDIO (%)Cdt 0.7 – 6.0 0.03 – 0.10 1.0 – 6.6 3.9

FRAZIONE MEDIA (%) SD CV (%) CV MEDIO (%)Cdt 0.8 – 5.9 0.06 – 0.10 1.6 – 8.3 5.5

Frazione Coefficiente di correlazione Intersezione con l’asse y Pendenza Limiti del %CAPILLARYS CDT

Cdt 0.937 -0.232 0.974 0.3 – 5.7


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1. Anton rF. Carbohydrate-deficient transferrin for detection and monitoring of sustained heavy drinking. What have we learned ? Where do we gofrom here ? Alcohol, 25, 185 - 188 (2001).

2. Anton rF, Moah dH. Carbohydrate-deficient transferrin and gamma-glutamyltransferase as markers of heavy alcohol consumption : genderdifferences. Alcohol Clin. Exp. Res., 18 (3), 747 - 754 (1994).

3. Arndt t. Carbohydrate-deficient transferrin as a marker of chronic alcohol abuse : A critical review of preanalysis, analysis and interpretation.Clin. Chem., 47 (1) 13 - 27 (2001).

4. Behrens u, Womer t, Braly l, schaffner F, lieber C. Carbohydrate-deficient transferrin (Cdt), a marker for chronic alcohol consumption indifferent ethnic population. Alcohol. Clin. Exp. Res., 12, 427 - 432 (1988).

5. Conigrave K et al. Cdt, ggt and Ast as markers of alcohol use : the WHo / isBrA Collaborative Project. Alcol. Clin. Exp Res., 26 (3), 332 -339 (2002).

6. gjerde H, Johnsen J, Bjørneboe A, Bjørneboe gE, Mørland J. A comparison of serum carbohydrate-deficient transferrin with other biologicalmarkers of excessive drinking. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 48, 1 - 6 (1988).

7. Hackler r et al. investigation by isoelectric focusing of the initial carbohydrate-deficient transferrin (Cdt) and non-Cdt transferrin isoformfractionation step involved in determination of Cdt by the ChronAlcol. d. Assay. Clin. Chem., 46 (4), 483 - 492 (2000).

8. Huseby nE, nilssen o, Erfurth A, Wetterling t, Kanitz rd. Carbohydrate-deficient transferrin and alcohol intake dependency : Variations inresponse to alcohol intake among different groups of patients. Alcohol Clin. Exp. Res., 21 (2), 201 - 205 (1997).

9. landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495 - 509 (1995).10. lesch oM et al. Alcohol dependance : is carbohydrate-deficient transferrin a marker for alcohol intake ? Alcohol Alcohol, 31, 257 - 264 (1996).11. lesch oM et al. Carbohydrate-deficient transferrin as a screening marker for drinking in a general hospital population. Alcohol Alcohol, 31, 249

- 256 (1996).12. oda rP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715 -

1723 (1997).13. oslin dW, Pettinati HM, luck g, semwanga A, Cnaan A, o'Brien C. Clinical correlation with carbohydrate-deficient transferrin levels in women

with alcoholism. Alcohol Clin. Exp. Res., 22 (9), 1981 - 1985 (1998).14. schellenberg F., Bénard J., le goff A., Bourdin C., Weill J. Evaluation of carbohydate-deficient transferrin compared with tf index and other

markers of alcohol abuse. Alcohol Clin. Exp. Res., 13, 605 - 610 (1989).15. sillanaukee P, olsson u. improved diagnostic classification of alcohol abusers by combining carbohydrate-deficient transferrrin and

γ–glutamyltransferase. Clin. Chem., 47 (4), 681 - 685 (2001).16. stibler H, Borg s., Joustra M, Hultcrantz. Carbohydrate-deficient transferrin (Cdt) in serum as a marker of high alcohol consumption. Advances

in the Biosciences (Eds nordmann, ribiere, rouach), Pergamon Press 71, 353 - 357 (1988).17. stibler H. Carbohydrate-deficient transferrin in serum : a new marker of pottentially harmful alcohol consumption reviewed. Clin. Chem., 37 (12),

2029 - 2037 (1991).18. Wuyts B, delanghe Jr. Carbohydrate-deficient transferrin as a marker for chronic alcohol consumption. LabMedica International, July-August :

10 - 12 (2001).19. Yersin B, nicolet JF, decrey H, Burnier M, van Melle g, Pecoud A. screening of excessive alcohol drinking. Comparative value of carbohydrate-

deficient transferrin, gamma-glutamyltransferase, and mean corpuscular volume. Arch. Intern Med., 155 (17), 1907 - 1911 (1995).20. Arndt t, Erkens M, Holtkamp K, Keller t and gressner AM. High prevalence of increased trisialotransferrin concentrations in patients with

anorexia nervosa : implications for determination of carbohydrate-deficient transferrin. Clinica Chimica Acta, 379, 150-153 (2007).21. delanghe Jr, de Buyzere Ml. Carbohydrate deficient transferrin in forensic medicine. Clin. Chim. Acta, 2009, 406, 1 - 7.22. schellenberg F, Wielders JP. Evaluation of capillary electrophoresis assay for Cdt on sEBiA’s CAPillArYs system: intra and inter laboratory

precision, reference interval and cut-off. Clin. Chim. Acta., 2010.23. Helander A, Husa A, Jeppsson Jo. improved HPlC method for Carbohydrate deficient transferrin in serum. Clin. Chem., 2003, 49, 1881 – 1890.24. Kenan n, et al. importance of HPlC confirmation of problematic carbohydrate-deficient transferrin (Cdt) results from a multicapillary

electrophoresis routine method. Clin. Chim. Acta (2010), doi:10.1016/j.cca.2010.08.006.25. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.

Impact-Internat, sept : 93 - 97 (1986).26. l. guis, A. Chaumier, V. le gall, s. Havrez (Février 2013) intégration du Capillarys 2 Flex Piercing (sebia) dans un laboratoire de biologie

médicale spécialisée. Revue Francophone des Laboratoires, 449, 47 – 56.27. J. Baraud, F. schellenberg, J.C. Pagès (2009) intérêt de l’immunosoustraction des immunoglobulines et de la transferrine dans le dosage de la

transferrine désialylée en électrophorèse capillaire. Ann. Biol. Clin., 67 (4) : 451 – 455.28. J. Caslavska, W. thormann (2012) Monitoring of alcohol markers by capillary electrophoresis. J. Sep. Sci. 00, 1 – 21, doi 10.1002/

jssc.201200706.29. J. Joneli, u. Wanzenried, J. schiess, C. lanz, J. Caslavska, W. thormann (2013) determination of carbohydrate-deficient transferrin in human

serum by capillary zone electrophoresis: Evaluation of assay performance and quality assurance over a 10-year period in the routine arena.Electrophoresis, 34, 1563 – 1571.

30. d.A. leon et al (2013) Hazardous alcohol consumption is associated with increased levels of B-type natriuretic peptide: evidence from twopopulation-based studies. Eur. J. Epidemiol. doi 10.1007/s10654-013-9808-9.

31. t.M. Maenhout, g. Baten, M.l. de Buyzere and J. r. delanghe (2012) Carbohydrate deficient transferrin in a driver’s license regrantingprogram. Alcohol and Alcoholism, doi: 10.1093/alcalc/ags013.

32. A. szymanowicz (2013) À propos du dosage de la transferrine désialylée (Cdt) et de ses indications. Ligand Assay 18 (1), 79 – 86.33. C. Weykamp, J.P.M. Wielders, A. Helander, r.F. Anton, V. Bianchi, J.o. Jeppsson, C. siebelder, J.B. Whitfield, F. schellenberg (2012) toward

standardization of carbohydrate-deficient transferrin (Cdt) measurements: iii. Performance of native serum and serum spiked withdisialotransferrin proves that harmonization of Cdt assays is possible. Clin. Chem. Lab. Med. doi 10.1515/cclm-2012-0767.

BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY

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Disialotransferrin

Trisialotransferrin

Tetrasialotransferrin

Pentasialotransferrin

Profil normalNormal pattern

SCHÉMAS / FIGURES

Asialotransferrin

Disialotransferrin

Trisialotransferrin



Profil à CDT augmentéePattern with increased CDT

Figure 1

Figure 2

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS

- 224 -


Figure 3


SCHÉMAS / FIGURES

Disialotransferrin

Trisialotransferrin



Profil avec complément C3 dégradéPattern with degradated C3 complement

C3d

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Figure 4


SCHÉMAS / FIGURES

Variants de la CDT - CDT variants

- 226 -


Figure 5


SCHÉMAS / FIGURES

Solution de traitement des échantillons (exemples)Samples treatment solution (examples)

Disialotransferrin

Trisialotransferrin



Sérum normal - avant traitementNormal serum - before treatment

Disialotransferrin

Trisialotransferrin



Sérum normal - après traitementNormal serum - after treatment

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Figure 6


SCHÉMAS / FIGURES


Trisialotransferrin



Sérum N° 1 avec interférent - avant traitementNormal No. 1 with interferent - before treatment

Disialotransferrin

Trisialotransferrin



Sérum N° 1 avec interférent - après traitementSerum No. 1 with interferent - after treatment

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Figure 7


SCHÉMAS / FIGURES


Disialotransferrin

Trisialotransferrin



Sérum N° 2 avec interférent - avant traitementSerum No. 2 with interferent - before treatment

Disialotransferrin

Trisialotransferrin




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Figure 8


SCHÉMAS / FIGURES


Disialotransferrin

Trisialotransferrin




Disialotransferrin

Trisialotransferrin




- 230 -


Figure 9


SCHÉMAS / FIGURES



Disialotransferrin

Trisialotransferrin




- 231 -


Figure 10


SCHÉMAS / FIGURES

Disialotransferrin

Trisialotransferrin



Profil avec bloc Disialo -TrisialotransferrinePattern with Disialo - Trisialotransferrin block

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