Elettroforesi su gel dagarosioIstituto M. MontessoriA.S. 2010/2011

Esperimento effettuato il 3/2/2011 dalla classe 4As con la Prof.ssa Lucia CapassoRealizzazione grafica di Andrea DEusebi

ELETTROFORESI SU GELPermette la separazione di frammenti di DNA/RNA da una miscela complessa

E una tecnica fondamentale per:

lanalisi (elettroforesi analitica)

la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa)

-+RNA e DNA sono carichi negativamentecatodoanodo

Effetto setaccio in un gel uniforme-+

ELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIOLagarosio un polisaccaride costituito da residui alternati di D-galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio.

Celle elettroforeticheColorantiEtidio bromuroSiringhe da 1 ml Generatori di corrente- pile alcaline 9v MATERIALI

PREPARAZIONE GEL DAGAROSIOAlla soluzione dagarosiosi aggiunge Etidio Bromuro

Si scioglie lagarosio inpolvere in una soluzione tampone a 100CDopo la solidificazione del gel si pu rimuovere il Pettine.

45V0,2Atampone elettroforeticoPolo +Polo -gel di agarosio 1.2%scatola elettroforeticaELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

45V0,2APolo +Polo -ELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

45V0,2APolo +Polo -ONELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

45V0,2APolo +Polo -ONELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

1. Prelevare il colorante con la pipetta2. Inserire il colorante in uno dei pozzetti3. Colorazione dei pozzetti4. Cella pronta per elettroforesi

5. Prendere delle lamine di carbonio6. Inserire le lamine di carbonio nella fessura7. Attaccare i coccodrilli degli elettrodi sulle lamine di carbonio8. Verificare dopo pochi secondi la presenza delle bollicine vicino lanodo

Elettroforesi in corso, i colori migrano verso il polo positivo

Gli acidi nucleici a singolo filamento (come lRNA) tendono a formare complesse strutture secondarie, pertanto la loro corsa elettroforetica fortemente influenzata dal modo in cui si ripiegano.NBLRNA prima di essere separato per elettroforesi deveessere prima denaturato, al fine di mantenere le molecolein forma lineareNBELETTROFORESI IN CONDIZIONI DENATURANTIAgenti denaturanti comunemente usati: calore, formaldeide, formammide, urea

TUTTI AL LAVORO!

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