1

Sottofamiglia Genere Tipo

AlphaherpesvirinaeSimplexvirus

Herpes simplex virus tipo 1

Herpes simplex virus tipo 2

Varicellovirus Virus VaricellaZoster

Betaherpesvirinae

Cytomegalovirus Citomegalovirus

Roseolovirus

Herpesvirus umano 6

Herpesvirus umano 7

Gammaherpesvirinae Lymphocrypto-virus

EpsteinBarr virus

Rhadinovirussarcoma di

Herpesvirus 8 associato al

Kaposi

Capside icosaedricorivestito da involucro

150 nm

2

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Sequenze Uniche = U (L e S)

Sequenze Ripetute = R (L e S; T e I)

HSV-1: genoma DNAds lineare(150 Kb) con sequenze ripetute

3

CICLO DIREPLICAZIO

NE

Geni - E

Geni e

Geni - IE (ICP0, ICP4, ICP27)

Sintesi del DNA

cascata di espressione genica

4

La replicazione del DNA virale avviene nel nucleo per circolarizzazione e sintesi tramite cerchio rotante

L’assemblaggio della particella virale avviene nel nucleo e l’acquisizione del tegumento esterno avviene per gemmazione sulla membrana nucleare

proteine beta

5

From DeClercq Nature Reviews Drug Discovery 1, 13 (2002)

Blocco della replicazione del DNA virale

• farmaci inattivi (prodrug)

• Base della selettività:convertiti nella forma attiva dalla Timidina chinasi virale, e successivamente da chinasi cellulari

• L’incorporaazione della forma trifosfato porta alla terminazione dell’allungamento di catena da parte della DNA polimerasi

6

genoma di ADENOVIRUS

ds DNA lineare(30-35 Kb)

ITR = Inverted Terminal Repeat

geni E (Early): E1A (transattivattore), E1B, E2A, E2B (DNA pol), E3, E4 (proteine enzimatiche)

geni L (Late): L1, L2, L3, L4, L5 (proteine strutturali, 13 mRNA)

Terminal proteinp55

5’desossicitosina

Trascrizione suentrambi I filamenti

7

Replicazione del DNA viraleReplicazione del DNA virale

From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press

l’elica di DNA dislocata forma un “panhandle” via “inverted terminal repeats” presenti al 3’ e 5’

associazione Pol--TP e ……

sintesi del filamento complementare

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DNA polimerasi virale

Replicazione asimmetrica: inizia al 3’ di uno dei filamenti

Primer: proteina terminale p55 (sequenza ORI in ITR al 3’ del filamento stampo)

8

- il rilascio avviene per lisi della cellula ospite

- il virus si assembla nel nucleo

9

Genere: ORTHOPOXVIRUS

- Virus del vaiolo umano - Virus vaccino*

AVIPOXVIRUSENTOMOPOXVIRUSLEPORIPOXVIRUS

*modello di studio

10

NUCLEOIDE

1 molecola lineare DNAds(180-200 kpb)

sequenze ITR (terminali ripetute invertite)

contiene circa 200 geni

legami fosfodiestere 3’-5’ scissi da endonucleasi virali durante la replicazione del genoma

Proteine del NUCLEOIDE (

Strutturali (simil-istone) associate al DNA

Enzimi: RNA polimerasiPoliadenilato sintetasi Metil-transferasiGuanilil-transferasi

Trascrizione precoce nel coremRNA senza introni- assenza di splicing

11

- Eparan solfato- EGF (Epidermal Growth Factor)

- Endocitosi

Trascrizione precoce nel core di: -proteasi che rimuovono il core (uncoating)-DNA polimerasi virale

- Uscita per lisi della cellula ospite

Trascrizione tardiva: -proteine strutturali

12

il vaiolo è debellato al livello mondiale

Dal 1979 il virus è

completamente eradicato

Centers for Disease Control and Prevention (Atlanta, USA)Laboratorio di Ricerche Virologiche e Biotecnologiche (Novosibirsk, Russia)

In Italia la vaccinazione è stata sospesa nel 1977 e

definitivamente abrogata dal 1981

13

Capside icosaedrico nudo45 nm

72 capsomeriformati da pentameri di VP1+1 mol. VP2 o VP3 interna

DNA ds circolare (5.2 kbp) legato a istoni cellulari (H2A, H2B, H3 e H4)

Minicromosoma con 24 nucleosomi

14

SV40

tardive: proteine strutturali (VP1, VP2, VP3)

Funzione delle Proteine

precoci: proteine (T, t) regolatorie e multifunzionali

T,t: reprime la sua stessa sintesi transazione della trascrizione da precoce a tardivaT,t: attiva l’espressione dei geni tardivi

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T,t: essenziale per la replicazione del DNA virale

interazione con pRB e p53 (induzione della fase S nella cellula ospite ed inibizione dell’apoptosi cellulare

trascritti primari da differenti ORF e modificati da splicing

15

L1

L2

DNA ds circolare (8000 bp)legato a istoni cellulari

Capside icosaedrico nudo (55 nm) L1,L2

Specie-specificiTropismo per cellule dell’epitelio squamoso

16

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E4DNA viralenuclei

infezione produttiva in cellule epiteliali differenziate

trasmissione: diretta (sessuale)

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strato spinosoe granuloso amplificazione

del genoma insieme al

DNA cellulare

strato granuloso e corneo

incapsidamento

strato basale

proliferazione cellulare (E6, E7)

rilascio del virus

17

Risposta immunitaria

Infezione produttiva

REGRESSIONE

Il DNA del virus si integra nel genoma della

cellula ospite

CARCINOMA DELLA CERVICE

incremento della trascrizione di E6 e E7

inattivazione del gene E2

18

VLP

vaccini profilatticibasati su HPV VLPs

bivalente

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Cervarix

azione crociata verso HPV 45 e 31

L1 espresse in Saccaromyces Cerevisiae

Adiuvante :Sali di alluminio

Efficaci al 100% sull’incidenza di lesioni CIN2/ 3 pre-cancerose

Efficaci al 99% sulla protezione da condilomi

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quadrivalente

L1 espresse in Baculovirusadiuvante :Sali di alluminio

19

Genoma dsDNA circolare incompleto

filamento negativo completo3200 b filamento positivo incompleto50-80% del filamento complementare

virus EPATITE B

Particella di DANE(42 nm)

capside icosaedrico rivestito da involucro

20

Regione preS/S i peplomeri di HBV

Large protein: Antigene AustraliaHBsAg

Particella di DANE(42 nm)

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21

Hepadnaviridae

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Nel citoplasma-dopo la penetrazione il filamento positivo viene completato ad opera della DNA polimerasi virale

Nel nucleo trascrizione di mRNA subgenomici trascrizione di mRNA pre-genomico

Replicazione nucleare e citoplasmatica

- retrotrascrizione dell’mRNA pre-genomico a DNA

Nel citoplasma

22

Replicazione di HBVattraverso un

intermedio ad RNA

RNA 3500 b = pregenoma

5 mRNA = 900 - 3500 b

Trascrizione inversa

fibronectinaApolipoproteina H

23

• antigene di superficie del virus dell Epatite B (HbSAg)

• Prodotto in lievito (S. cerevisiae)

Vaccino contro HBV a subunità