Post on 25-Jan-2016
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Complessi d'inizio
IRES di EMCV
eIF3
40S
IRES di HCV
Fattori necessari per la traduzione
IRES di CrPV
Sequenze IRES virali
IRES negli mRNA cellulari
Strutture secondarie delle IRES
Fattori trans-agenti delle IRES
Ruolo delle IRES
Meccanismi di traduzione negli eucarioti
Regolazione della traduzione
•generale
•specifica
Initiation Factors Activity
prokaryotes eukaryotes
IF3 eIF-1 Fidelity of AUG codon recognition
IF1 eIF-1AFacilitate Met-tRNAiMet binding to small subunit
eIF-2 Ternary complex formation
eIF-2B (GEF) GTP/GDP exchange during eIF-2 recycling
eIF-3 (12 subunits) Ribosome antiassociation, binding to 40S
eIF-4F (4E, 4A, 4G) mRNA binding to 40S, RNA helicase activity
eIF-4A ATPase-dependent RNA helicase
eIF-4E 5' cap recognition
eIF-4G Scaffold for of eIF-4E and -4A
eIF-4B Stimulates helicase, binds with eIF-4F
eIF-4H Similar to eIF4B
eIF-5 Release of eIF-2 and eIF-3, GTPase
IF2 eIF5B Subunit joining
eIF-6 Ribosome subunit antiassociation
Via delle MAP chinasiVia delle MAP chinasi
stress
Chinasi di eIF2Chinasi di eIF2
Azione delle chinasi di eIF2
Risposta UPR (Unfolded Protein Response)
Risposta UPR (Unfolded Protein Response)
Interferenza dei virus nella traduzione negli eucarioti
Meccanismi virali d'inibizione della fosforilazione di eIF2
Regolazione eIF2Regolazione eIF2
Fosforilazione su ser 51 in risposta a stress da parte di 4 chinasi: PKR, GCN2, PERK, HRI
La fosforilazione impedisce il riciclo da parte di eIF2B
La traduzione di alcuni mRNA è stimolata da bassi livelli di eIF2 attivo
Molti virus hanno sistemi per impedire la fosforilazione di eIF2
eIF4F
Fosforilazione di 4E-BPFosforilazione di 4E-BP
Regolazione di eIF4ERegolazione di eIF4E
Regolazione eIF4ERegolazione eIF4E
Fosforilazione su ser 209 da parte di Mnk1 (e Mnk2) correlata con attivazione
Mnk interagiscono con eIF4G e sono attivate dalla via delle MAP chinasi
Doppio KO per Mnk1 e 2 è normale
eIF4E è inibito dall’interazione con 4E-BP (1, 2 e 3)
4E-BP sono inibite da fosforilazione dipendente dalla via di mTOR
Alterazione della traduzione da parte dei virus
mTOR è un regolatore centralemTOR è un regolatore centrale
Struttura di mTORStruttura di mTOR
Inibizione della rapamicinaInibizione della rapamicina
mTOR è un regolatore centralemTOR è un regolatore centrale
Complessi formati da mTOR
Bersagli di mTORBersagli di mTOR
mTOR regola l'inizio e l'allungamento
Alterazione della traduzione e tumoriAlterazione della traduzione e tumori
Traduzione e cancroTraduzione e cancro
Regolazione della traduzione
•generale
•specifica
Transcriptional control
gene
mRNA
protein
Translational control
•Slow•Lasting•Transcription-dependent
•Rapid•Short-lived•Transcription-independent
mRNA ferritina
mRNA actina
ferritina
actina
northernnorthern westernwestern
-Fe +Fe
Indicazione di controllo traduzionale
-Fe +Fe
METODI PER STUDIARE IL CONTROLLO METODI PER STUDIARE IL CONTROLLO TRADUZIONALETRADUZIONALE
• Confronto tra la variazione della quantità di mRNA e quella del prodotto proteico
gel poliacrilammide 2D (DIGE)western blot
• Analisi della stabilità delle proteine mediante l'uso di inibitori della traduzione
• Analisi della quantità di mRNA sui polisomi (distribuzione)
Polysome analysis
TOP mRNA translational control in cultured cells
Meccanismi di regolazione traduzionaleMeccanismi di regolazione traduzionale
Meccanismi di Meccanismi di regolazione regolazione traduzionaletraduzionale
Bersagli di mTORBersagli di mTOR