APOPTOSI (I)APOPTOSI (I)

E’ la E’ la morte cellulare programmatamorte cellulare programmata (origina dal nucleo),(origina dal nucleo), la ritroviamo in numerosi meccanismi fisiologici e la ritroviamo in numerosi meccanismi fisiologici e patologici:patologici:

- eliminazione di cellule nell’ embriogenesi, per es. nella - eliminazione di cellule nell’ embriogenesi, per es. nella formazione del lume intestinaleformazione del lume intestinale- eliminazione di cellule al ridursi di uno stimolo ormonale, - eliminazione di cellule al ridursi di uno stimolo ormonale, es. nei tessuti estrogeno-sensibili del sistema riproduttivo es. nei tessuti estrogeno-sensibili del sistema riproduttivo femminile.femminile.- selezione clonale dei linfociti per l’ induzione di - selezione clonale dei linfociti per l’ induzione di tolleranza al “self” durante lo sviluppotolleranza al “self” durante lo sviluppo- eliminazione di cellule in tessuti ad elevata velocita’ di - eliminazione di cellule in tessuti ad elevata velocita’ di ricambio, per es. le cellule epiteliali di rivestimento dell’ ricambio, per es. le cellule epiteliali di rivestimento dell’ intestinointestino

APOPTOSI (II)APOPTOSI (II)

La morte cellulare programmata la ritroviamo in numerosi La morte cellulare programmata la ritroviamo in numerosi meccanismi fisiologici e patologici:meccanismi fisiologici e patologici:

-uccisione di cellule infettate da virus da parte dei linfociti -uccisione di cellule infettate da virus da parte dei linfociti T citotossiciT citotossici-eliminazione di cellule portatrici di danni al DNA per -eliminazione di cellule portatrici di danni al DNA per infezione, irradiazione o agenti citotossiciinfezione, irradiazione o agenti citotossici-eliminazione di cellule neoplastiche nei tumori-eliminazione di cellule neoplastiche nei tumori-morte di cellule nervose in malattie neurodegenerative -morte di cellule nervose in malattie neurodegenerative (malattia di Alzheimer).(malattia di Alzheimer).

APOPTOSI (IV)APOPTOSI (IV)

L’ apoptosi puo’ essere iniziata:L’ apoptosi puo’ essere iniziata:- dall’ - dall’ attivazione di un recettore di membranaattivazione di un recettore di membrana causanti una causanti una cascata di segnali che attiva le caspasi (induzione da citochine cascata di segnali che attiva le caspasi (induzione da citochine mediata dal recettore per il fattore di necrosi tumorale, TNFR)mediata dal recettore per il fattore di necrosi tumorale, TNFR)- dalle - dalle vie del dannovie del danno:: - - alterazione della membrana mitocondrialealterazione della membrana mitocondriale (aumento dei (aumento dei livelli di calcio libero nel citoplasmalivelli di calcio libero nel citoplasma,, danno da radicali liberi, danno da radicali liberi, anossia cellulare, morte cellulare mediata dalle perforine anossia cellulare, morte cellulare mediata dalle perforine rilasciate dai linfociti T citotossici)rilasciate dai linfociti T citotossici) - - danno irreparabile del DNAdanno irreparabile del DNA (sistema p53-p73): danno da (sistema p53-p73): danno da radiazioni, agenti chemioterapici antitumoraliradiazioni, agenti chemioterapici antitumorali - - danno della membrana cellularedanno della membrana cellulare (mediato dall’ attivazione (mediato dall’ attivazione della sfingomielinasi e conseguente generazione di ceramide): della sfingomielinasi e conseguente generazione di ceramide): danno da radiazioni, radicali liberidanno da radiazioni, radicali liberi..

PTPC= complesso dei pori di transizione della permeabilita’

AIF: Apoptosis Inducing Factor

APOPTOSI (V): regolazioni (I)APOPTOSI (V): regolazioni (I)

L’ apoptosi viene finemente regolata.L’ apoptosi viene finemente regolata.

-Bilancia delle proteine appartenenti alla famiglia Bcl-2.Bilancia delle proteine appartenenti alla famiglia Bcl-2.-Bid, bad, bax,…: significato pro-apoptoticoBid, bad, bax,…: significato pro-apoptotico-Bcl-2, Bcl-x,……: significato anti-apoptoticoBcl-2, Bcl-x,……: significato anti-apoptotico

Che stabilisce, in ultima analisi, l’ apertura o la chiusura dei Che stabilisce, in ultima analisi, l’ apertura o la chiusura dei pori mitocondriali.pori mitocondriali.

Anche tramite Anche tramite splicing alternativosplicing alternativo (che origina prodotti di (che origina prodotti di diversa potenza) e tramite modificazioni diversa potenza) e tramite modificazioni post-traduzionalipost-traduzionali (ad es. cambiamento della forma della molecola – Bax).(ad es. cambiamento della forma della molecola – Bax).

(cromatina addensata, bolle citoplasmatiche)

TECNICA TUNEL

TUNEL usa la Terminal deoxynucleotidyl Transferase per catalizzare il legame con dUTP coniugata con fluoresceina isotiocianato (FITC) alle rotture a doppio filamento del DNA (rivelazione della frammentazione del DNA mediante marcatura terminale di dUTP  catalizzata da TdT -> TUNEL).

Fixed cells were washed in PBS and permeabilized for 2 minutes on ice in 0.1% Triton X-100, 0.1% sodium citrate. Then cells are washed, resuspended in 50µl of TUNEL reaction mixture (Boehringer Mannheim), containing dUTP-FITC and TdT, and incubated for 60 minutes at 37° in the dark. After that, the samples were washed and resuspended in 2µg/ml propidium iodide (PI) and RNAse for at least two hours before the analysis. Flow cytometric analyses were performed using a FACSORT (Becton Dickinson), detecting dUTP-FITC with channel FL1

Necrosi: morte dal citoplasma

Necrosi. Patogenesi: carenza ATP, aumento concentrazione calcio, danno del citoscheletro, metaboliti reattivi dell’ ossigeno, danno delle membrane.

Danno cellulare subletale: fegato di alcolista.

V = vacuolo grasso