UNIVERSITA' DEGLI STUDI DI TRIESTEUNIVERSITA' DEGLI STUDI DI TRIESTE

Dipartimento di Scienze della Riproduzione e dello SviluppoU.C.O. di Ginecologia ed OstetriciaDirettore: Prof. Secondo Guaschino

DottorandaDottoranda Dott. ssa STEFANIA INGLESE Dott. ssa STEFANIA INGLESE

Tutor: Tutor: Dott.ssa MONICA PICCOLIDott.ssa MONICA PICCOLI

FATTORI GENETICI COINVOLTI NEL PARTO PRETERMINE , FATTORI GENETICI COINVOLTI NEL PARTO PRETERMINE ,

NELLA PREECLAMPSIA E NEL RITARDO DI CRESCITA NELLA PREECLAMPSIA E NEL RITARDO DI CRESCITA

INTRAUTERINO: ANALISI DEI POLIMORFISMI GENICI CHE INTRAUTERINO: ANALISI DEI POLIMORFISMI GENICI CHE

CARATTERIZZANO LA RISPOSTA IMMUNITARIA INNATACARATTERIZZANO LA RISPOSTA IMMUNITARIA INNATA

IL SISTEMA IMMUNITARIOIL SISTEMA IMMUNITARIO

INNATO:INNATO: ACQUISITO:ACQUISITO:

•PEPTIDIPEPTIDI•via alternativa del COMPLEMENTOvia alternativa del COMPLEMENTO•FAGOCITIFAGOCITI

•LINFOCITI LINFOCITI

TT

•LINFOCITI LINFOCITI

BB

•LINFOCITI T ATTIVATILINFOCITI T ATTIVATI

•LINFOCITI B ATTIVATILINFOCITI B ATTIVATI

prostaglandine

IL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZAIL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZA

PARTO PARTO PRETERMINEPRETERMINE

IL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZAIL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZA

PREECLAMPSIAPREECLAMPSIA IUGRIUGR

LA GRAVIDANZA COMPORTA L’INTERAZIONE TRA TESSUTI LA GRAVIDANZA COMPORTA L’INTERAZIONE TRA TESSUTI ANTIGENETICAMENTE DIFFERENTIANTIGENETICAMENTE DIFFERENTI

È NECESSARIA UN’ADEGUATA OMEOSTASI IMMUNOLOGICA È NECESSARIA UN’ADEGUATA OMEOSTASI IMMUNOLOGICA

PER CONSENTIRE L’IMPIANTO E UN’ADEGUATA PER CONSENTIRE L’IMPIANTO E UN’ADEGUATA

PLACENTAZIONEPLACENTAZIONE

ABORTOABORTO

IL SISTEMA IMMUNITARIO INNATO E LA IL SISTEMA IMMUNITARIO INNATO E LA GRAVIDANZAGRAVIDANZA

ATTIVAZIONE DEI ATTIVAZIONE DEI GRANULOCITI GRANULOCITI

MBL MBL (140%)(140%)

•ATTIVAZIONE DEL COMPLEMENTOATTIVAZIONE DEL COMPLEMENTO•OPSONIZZAIONEOPSONIZZAIONE

L’ evidenza:L’ evidenza:

Il deficit di MBL è associato ad aborto Il deficit di MBL è associato ad aborto ricorrentericorrente

ATTIVAZIONE DEL ATTIVAZIONE DEL SISTEMA IMMUNITARIO SISTEMA IMMUNITARIO

INNATOINNATO

PREECLAMPSIAPREECLAMPSIA

IUGRIUGR

ABORTOABORTO

PARTO PARTO PRETERMINEPRETERMINE

METODIMETODIDISEGNO DELLO DISEGNO DELLO

STUDIO:STUDIO:STUDIO CASO-CONTROLLO ANNIDATO IN STUDI DI STUDIO CASO-CONTROLLO ANNIDATO IN STUDI DI

COORTE IN CORSO PRESSO L’ISTITUTOCOORTE IN CORSO PRESSO L’ISTITUTO

POPOLAZIONE:POPOLAZIONE:

TUTTE LE DONNE CHE AFFERISCONO AL SERVIZIO DI TUTTE LE DONNE CHE AFFERISCONO AL SERVIZIO DI DIAGNOSI PRENATALE IN OCCASIONE DELL’ECOGRAFIA DEL DIAGNOSI PRENATALE IN OCCASIONE DELL’ECOGRAFIA DEL PRIMO TRIMESTRE E CHE PARTORIANNO PRESSO QUESTO PRIMO TRIMESTRE E CHE PARTORIANNO PRESSO QUESTO

ISTITUTOISTITUTO(3000 pz)(3000 pz)

METODIMETODICASI:CASI:•Parto pretermine spontaneo (<34 settimane)Parto pretermine spontaneo (<34 settimane)

•Aborto spontaneo tardivo (12-24 settimane); morte Aborto spontaneo tardivo (12-24 settimane); morte endouterina (>24 settimananeendouterina (>24 settimanane

•Preeclampsia (PA >140-90 mmHg + proteinuria >300 Preeclampsia (PA >140-90 mmHg + proteinuria >300

mg/24h)mg/24h)

•Ritardo di crescita (peso alla nascita < 10° centile; Ritardo di crescita (peso alla nascita < 10° centile; deflessione ecografica della curva di crescita > 50 centili) deflessione ecografica della curva di crescita > 50 centili)

•Pazienti inviate da ospedali periferici al momento di Pazienti inviate da ospedali periferici al momento di esordio di patologia ostetrica: preeclampsia, minaccia di esordio di patologia ostetrica: preeclampsia, minaccia di parto pretermine, IUGRparto pretermine, IUGR

(150 pz)(150 pz)

(15 pz)(15 pz)

(100 pz)(100 pz)

(300 pz)(300 pz)

CONTROLLI:CONTROLLI:•Soggetti con decorso fisiologico della gravidanza fino al Soggetti con decorso fisiologico della gravidanza fino al

terminetermine

METODIMETODI

RACCOLTA DATI:RACCOLTA DATI:

•Consenso informatoConsenso informato

•Prelievo di sanguePrelievo di sangue

•Tampone vaginaleTampone vaginale

•Scheda clinico-Scheda clinico-

anamnesticaanamnestica

1. Al reclutamento1. Al reclutamento2. Dopo il 2. Dopo il

partoparto

•Tampone buccale Tampone buccale

neonataleneonatale

•Esame istologico della Esame istologico della

placentaplacenta

CRITERI DI CRITERI DI ESCLUSIONE:ESCLUSIONE:

Malformazioni fetali, anomalie Malformazioni fetali, anomalie cromosomichecromosomiche

Il sangue materno verrà in parte sottoposto Il sangue materno verrà in parte sottoposto all’estrazione del DNA, in parte conservato come all’estrazione del DNA, in parte conservato come banca di DNA genomico potenzialmente utilizzabile banca di DNA genomico potenzialmente utilizzabile in ricerche futurein ricerche future

METODIMETODI

ESTRAZIONE DEL DNA:ESTRAZIONE DEL DNA:

Sistema Custom Golden-Gate Genotyping: reazione di Sistema Custom Golden-Gate Genotyping: reazione di

estrazione allele specifica iniziale seguita da una reazione di estrazione allele specifica iniziale seguita da una reazione di

amplificazione mediante PCRamplificazione mediante PCR

165 GENI 165 GENI implicati a vari implicati a vari livelli nella risposta livelli nella risposta immunitaria innataimmunitaria innata

1536 1536 SNPsSNPs

ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI1.1. Suddivisione in gruppi per l’identificazione degli Suddivisione in gruppi per l’identificazione degli

specifici SNPs eventualmente associati ai singoli specifici SNPs eventualmente associati ai singoli

esiti in studio (parto esiti in studio (parto

pretermine, preeclampsia, IUGR);pretermine, preeclampsia, IUGR);

2.2. In ciascun gruppo, esclusione di casi imputabili a In ciascun gruppo, esclusione di casi imputabili a

cause note di quel determinato esito;cause note di quel determinato esito;

3. In ciascun gruppo, analisi multivariata in base alla 3. In ciascun gruppo, analisi multivariata in base alla

presenza di fattori di rischio aggiuntivi, noti per presenza di fattori di rischio aggiuntivi, noti per

quel determinato esitoquel determinato esito

Costruzione di modelli predittivi di outcome Costruzione di modelli predittivi di outcome sfavorevolesfavorevole

ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI

I GRUPPO: I GRUPPO: PARTO PARTO PRETERMINEPRETERMINE

Parto pretermine iatrogeno Parto pretermine iatrogeno (indicazione materna o fetale, (indicazione materna o fetale, placenta previa)placenta previa)

•GemellaritàGemellarità

•PolidramniosPolidramnios

•Fumo di sigaretta/sostanze Fumo di sigaretta/sostanze

d’abusod’abuso

•Precedente parto preterminePrecedente parto pretermine

ESCLUSIONEESCLUSIONE

FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO

ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI

II GRUPPO: II GRUPPO: ABORTO SPONTANEO TARDIVO-MEUABORTO SPONTANEO TARDIVO-MEU

FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO

•Anomalie cromosomicheAnomalie cromosomiche•Sindromi geneticheSindromi genetiche

•DiabeteDiabete

•PreeclampsiaPreeclampsia

•Isoimmunizzazione RhIsoimmunizzazione Rh

•Distacco intempestivo di Distacco intempestivo di

placentaplacenta

ESCLUSIONEESCLUSIONE

ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI

III GRUPPO: III GRUPPO: PREECLAMPSIAPREECLAMPSIA

FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO

•Età, parità, familiarità, BMIEtà, parità, familiarità, BMI

•Ipertensione, diabete, nefropatie Ipertensione, diabete, nefropatie

pregestazionalipregestazionali

•LES, APLsLES, APLs

•gemellarità gemellarità

• precoce (< 34 precoce (< 34

settimane)settimane)

• a terminea termine

± ± IUGRIUGR

ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI

IV GRUPPO: IV GRUPPO: IUGRIUGR

FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO

•Anomalie cromosomicheAnomalie cromosomiche•Sindromi geneticheSindromi genetiche

•Diabete pregestazionaleDiabete pregestazionale

•PreeclampsiaPreeclampsia

•Fumo, alcol, sostanze Fumo, alcol, sostanze

d’abusod’abuso

ESCLUSIONEESCLUSIONE

± ± alterazioni flussimetriche alterazioni flussimetriche

placentariplacentari

ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI

CORRELAZIONE GENOTIPO-FENOTIPOCORRELAZIONE GENOTIPO-FENOTIPO

IDENTIFICAZIONE DI SPECIFICI POLIMORFISMI “A IDENTIFICAZIONE DI SPECIFICI POLIMORFISMI “A RISCHIO” CHE, IN ASSOCIAZIONE A PARAMETRI RISCHIO” CHE, IN ASSOCIAZIONE A PARAMETRI

ANAMNESTICI, FLUSSIMETRICI E BIOCHIMICI, ANAMNESTICI, FLUSSIMETRICI E BIOCHIMICI, CONSENTA UNO SCREENING COMBINATO CONSENTA UNO SCREENING COMBINATO

(MULTIPLE MARKERS) PREDITTIVO DI OUTCOME (MULTIPLE MARKERS) PREDITTIVO DI OUTCOME SFAVOREVOLESFAVOREVOLE