TD d’histologie n°1

TECHNIQUE DE PRÉPARATION

D’UNE LAME HISTOLOGIQUE

BERRADA S.M.

MET MEBMO

Mise en bloc

50° 70° 90° 100°Alcool

Imprégnation

Toluène

4h à 56ºC

Inclusion de la Paraffine

Paraffine

Coupe 5 um

Deparaffinage

15min

45º à 60ºC

Réhydratation

Eau

100º 90º 70° 50°

Toluène Alcool

Coloration

Formol

Inclusion en

rèsine plastique

Coupe 0,1 um

Contraste

uranium, plomb

Métallisation

or, platine

échantillons

massifs

MO

MET

MEB

1-Prélèvement

1-Prélèvement

But: Figer les tissus dans l’état le plus proche de leur état initial

le formol ou Le liquide de BOUINMoyens:

2-Fixation

3-Deshydration

Alcool

50° 70° 90° 100°

Toluène

4-Imprégnation

Alcool à 50ºEau Alcool à 100ºAlcool à 90º

Cellule Deshydratée

toluèneAlcool pure

3-Deshydration

Paraffine

fondue

5-Inclusion de la

paraffine

Séjour dans l’étuve:24h à 56°C

5-Inclusion de la paraffine

Paraffine

On coule la paraffine fondue contenant le prélèvement

imprégné de Paraffine entre les Barres de Leuckart.

6-Mise en bloc

A température ambiante, la

paraffine se solidifie en blocmoule constitué de 2 barres

platforme de paraffine fondue

Le prélèvement est imprégné de paraffine fondue

afin de le rigidifier pour pouvoir le couper ensuite

platforme de paraffine fondue

Paraffine

fondue

toluène

Paraffine

5-Inclusion de la paraffine

6-Mise en bloc

7- Confection de coupe histologique

A l’aide du scalpel on coupe le ruban qu’on récupère à l’aide du pinceau.

Des portions du ruban sont disposées sur un support en verre: la lame

Les lames avec le ruban de paraffine sont disposées

sur une platine chauffante

Elimination de la paraffine peripherique par chauffage

15 min à 45-60°c sur unr plaque chauffante.

8- Deparaffinage

AlcoolToluèneEau

9-Réhydratation

Étape assurant la réhydratation de la coupe

pour d’éliminer la paraffine intracellulaire et pouvoir colorer

10-Coloration

automate de rehydratation et coloration

100º 90º 70° 50°

Cuve de colorant Support de lames

automate de rehydratation et coloration10-Coloration

cytoplasme Acidophile

noyau Basophile

La regle de base implique un cytoplasme riche en protéine donc basique décrit acidophile (attire le colorantacide). le colorant de routine utilisé est l’éosine (rose).

épithélium tubaire de la trompe de fallope

cytoplasme acidophile rose

cytoplasme basophile

Si la cellule présente une forte activité de synthèse, donc forte activitétranscriptionnelle, le cytoplasme sera rempli d’ARNm rendant son pHacide donc basophile (coloré en violet par Hemateine).

tissu conjonctif avec des fibroblastes hyperactives, cytoplasme basophile violet

on remarque aussi le nucléole indicateur d’une chromatine decondensée = cellule de synthèse

HISTOCHIMIE10-Coloration

cytoplasme acidophile

Hématéine + Eosineune coloration nucléaire par l’hématoxyline,

et une coloration cytoplasmique par un mélange

de colorants acides (éosine)

Hématéine+Eosine+Safran(Coloration du collagène au Safran, associé à une coloration nucléaire par l’hématoxyline,

et une coloration cytoplasmique par un mélange de colorants acides (éosine)

TRICHROME DE MASSON(Coloration du collagène) au Vert Lumière ou Bleu d’aniline, associé à une coloration nucléaire par l’hématoxyline, et une

coloration cytoplasmique par un mélange de colorants acides (éosine)

TRICHROME DE MASSON AU BLEU D'ANILINE TRICHROME DE MASSON AU VERT LUMIÈRE

HISTOCHIMIE

Hématéine + Eosine

Bleu Alcianune coloration du mucus par révélation des

mucopolysaccharides acides en bleu

Rouge Mucicarminune coloration du mucus par révélation des

mucopolysaccharides acides en rouge

HISTOCHIMIE

Q/ Quels sont les colorants acides et basiques ?

Colorant PHCompartiment ou Substance

colorée

Hémateine Basique Noyau

eosine Acide Cytoplasme

safran neutre fibre de collagene

bleu d’aniline Basique fibre de collagene

Vert lumière acide fibre de collagene

bleu d’Alcian basique mucines acide (mucus)

rouge mucicarmin basique mucines acide (mucus)

orceine resorcine acide Fibres élastiques

Noir soudan acide Lipides (vacuole d’adipocyte)

Periodic Acid Schiff

PAS*

glycogene/mucine neutre/

Lipopigments

Von Kossa * Sels de Calcium

Ziehl * mycobcterie (tuberculose)

Gram * Bactéries - ou +

ZiehlGram

PAS

rouge

mucicarmin

bleu

d’Alcian

orceine

resorcine

HE HES

Trichrome de masson

* association de plusieurs colorant à pH variables

Noir soudan

IMMUNOHISTOCHIMIE

un anticorps est conjugué à une enzyme qui peut

catalyser une réaction de production de couleur au

niveau du site des complexes Ag- Ac

ENZYMATIQUE

IMMUNOHISTOCHIMIE

Mise en évidence de

l’insuline dans un

îlot de Langerhans

technique d’immunoperoxydase sur tissu pancréatique

IMMUNOHISTOCHIMIE

IMMUNOFLUORESCENCE

les anticorps peuvent aussi être marqués

par un fluorophore (immunofluorescence)

En cas d’hépatite virale B on utilise un anticorps anti-HBs marqué à

la fluorescéine : les hépatocytes contenant l'antigène HBs en excès

ont un cytoplasme vert positif

technique Immuno-fluorescence sur tissu hepatique

HBcAg stains bright green, nuclei stain blue with DAPI and telomeres stain pink.

11-Montage et Observation

Mise au point et observation au microscope optique

Baume de canada

Lamelle

Grossissement : Occulaire (x10) x Objectif (x4;x10;x40;x100)

Zonula occludens

=jonction serrée

=tight jonction

Zonula adhaerens

=desmosome en branche

=jonction intermediaire

Macula adhaerens

=Desmosome en tache

Macula communicans

=gap jonction

=nexusHémidesmosome

point de contact focaux

Membranes

adjacentes

Bandes de proteines

transmembranaires

Espace

extracellulaire

Espace extracellulaire

Filament d'actine

Desmosomes

plaque

Connexons

Espace extracellulaire

Membranes adjacentes

Intégrines (recepteurs proteiques

transmembranaires)

Ancrage C/LB

Etanchéité

communication

Ancrage C/C