Teatro  Franco  Paren,,  Milano,  7  Giugno  2014

Centro  Ricerca  Te;aman,,  Clinica  Pediatrica,

Università  Milano  Bicocca,  Osp.  San  Gerardo/Fondazione  MBBM

Proge&o  Amici  di  Duccio  2014la  terapia  genica  alla  sconfi;a  della  leucemia

SLIDE  1:  Buongiorno  a  tuO,  la  serata  del  7  giugno  è  stata  l’occasione  per  aggiornarvi  rispe;o  agli  avanzamen,  del“proge;o  Amici  Di  Duccio:  la  terapia  genica  alla  sconfi;a  della  leucemia”.  Ringraziamo  in  questa  occasione  Riccardoe  Donatella  per  aver    ancora  una  volta  organizzato  una  serata  così  emozionante.

E;ore  BiagiPediatra  Ricercatore,  PhD,Chiara  Francesca  Magnani,Biotecnologa,  PhD.

Nei   nostri   laboratori   della   Fondazione   Te;aman,   di   Monza   vengonocreate   cellule   del   sistema   immunitario   gene,camente  modificate   con   iCAR  per  comba;ere  specificamente  le  cellule  tumorali  del  sangue.

I  rece;ori  chimerici  (CAR):  nuovo  strumento  terapeu,co  percomba;ere  la  leucemia  acuta

Tumor

T  cell

CAR

SLIDE  2:  La  terapia  genica  viene  ormai  considerata  nel  panorama  scien,fico  internazionale  una  strategia  potente  eprome;ente  per  conferire  alle  cellule  del  sistema  immunitario  la  capacità  di  comba;ere  i  tumori,  quali  le  forme  piùaggressive  di  leucemia.

I  CAR:  radar-­‐bazooka  per  le  cellule  del  sistemaimmunitario

Rece;ori  chimerici

 CARs

Una  parte  extracellularederivata  da  un  an,corpo  chericonosce  la  cellula  tumorale

Una  parte  intracellulareche  rende  aOvi  lecellule  del  sistemaimmunitario

modified  from  Chekmasova  AA,  BrentjensRJ  (2010),  Discov  Med,  9(44):62-­‐70

SLIDE  3:  Le  cellule  del  sangue  aven,  un  ruolo  chiave  nello  sviluppo  delle  risposte  immunitarie,  in  par,colare  i  linfoci,T,  vengono  modificate  nel  laboratorio  Te;aman,  di  Monza  con  i  rece;ori  chimerici  o  CAR,  molecole  derivate  daglian,corpi  che  fungono  da  radar-­‐bazzoka  per  comba;ere  specificamente  la  leucemia  acuta.

Le  “Super  Cellule  T”:grazie  al  CAR  i  linfoci,  diventano  Killers  tumorali

Linfocita  T  CAR+  riconosce  la  cellula  leucemica

Uccisione  ed  eliminazione    della  cellula  leucemica

Linfocita  T  CAR+ Cellula  leucemica

Flusso  sanguigno

SLIDE  4:  Grazie  all’espressione  del  CAR,  i  linfoci,  diventano  super,  killers  tumorali  molto  più  poten,,  sia  dei  normalilinfoci,,   che   dell’an,corpo   d’origine.   Una   volta   infusi   nel   paziente,   il   linfocita   T   con   il   CAR   incontra   la   cellulaleucemica,  la  riconosce  un  modo  specifico  e,  come  un  killer  seriale,  la  uccide  per  poi  cercare  altre  cellule  tumorali.

Update  del  proge;o  “CHILDHOPE”:Sempre  più  vicini  alla  cura  dei  nostri  bambini…

15  pazienB  già  arruolaB,  6  pazienBtra&aB  …..  2  evidenze  di  risposta  clinica

SLIDE  5:  Rispe;o  al  proge;o  di  CHILDHOPE,  lo  studio  clinico  europeo  in  cui  siamo  coinvol,  per  il  tra;amento  dellaleucemia  linfoblas,ca  acuta,  un  update  vi  mostra  come  siamo  sempre  più  vicini  a  curare  i  nostri  bambini.

Il  laboratorio  di  sviluppo  e  l’officina  di  produzione  dellecellulle  “farmaco”

da ricercatori a ricercatori-produttoriFondazione Tettamanti

Laboratorio di terapia cellulare Stefano Verri

SLIDE  6:  L’ideazione  e  lo  sviluppo  dei  protocolli  di  terapia  genica  avviene  all’interno  della  fondazione  M.  Te;aman,,stru;ura  di  ricerca  che  opera  in  modo  integrato  con  la  stru;ura  di  cura.  Quando  saremo  pron,  per  tra;are  i  pazien,con  queste  terapie  avanzate,  la  produzione  delle  cellule  avverrà  nel  laboratorio  di  terapia  cellulare  Stefano  Verri.

Un  approccio  innova,vo  di  terapia  genica:Il  sistema  trasposone  Sleeping  Beauty

Modificato da Koseki H. (2008),Riken Research, 3, 7

Il  DNA  circolare  con,ene  SleepingBeauty  che  porta  il  CAR

Un secondo DNA circolare portal’enzima trasposasi che taglia e incollail CAR nel DNA dei linfociti

CARCAR

Il Nucleofector permette di far entrarei due DNA circolari nei linfociti

(in  collaborazione  con  L.  Cooper,  MD  Anderson,  Houston,  TX,  USA)

SLIDE  7:  Lo  scopo  di  questo  proge;o  è  quello  di  sviluppare    un  protocollo  di  cura  possibile  nel  nostro  centro.  Abbiamopensato   quindi   di   usare   una   tecnologia   di   terapia   genica   innova,va,   un   an,co   trasposone   'risvegliato'   dal   sonno   edenominato  Sleeping  Beauty  (SB),  la  bella  addormentata,  per  rendere  la  terapia  genica  più  facilmente  perseguibile.

%  cellule  uccise

Cellule  di  leucemiamieloide

Cellule  malatedei  nostri  bambini

P<0.0001

P<0.0001

P<0.0001

P=0.0002

CAR  anB-­‐leucemia  mieloide CAR  anB-­‐leucemia  linfoblasBca

Le  “Super  Cellule  T”  alla  sconfi;a  della  leucemia

Uccisione  ed  eliminazione    della  cellula  leucemica

%  cellule  uccise

Cellule  di  leucemialinfoblasBca

Cellule  malatedei  nostri  bambini

Senza  CAR

Con  CAR

Senza  CAR

Con  CAR

SLIDE  8:  Le  cellule  farmaco  modificate  con  il  sistema  trasposone  “Sleeping  Beauty”  sono  efficaci  nello  sconfiggere  laleucemia.  Nei  grafici  potete  osservare  come   le   super  cellule  T,   la  barra  nera,  aumentano   la  percentuale  di   celluletumorali  uccise  rispe;o  al  controllo  senza  terapia  genica,  la  barra  bianca.

Ul,me  no,zie:  risulta,  prome;en,!

SLIDE  9:  I  risulta,  della  nostra  ricerca  hanno  ricevuto  grandi  riconoscimen,:  tre  ar,coli  pubblica,  nell’ul,mo  anno  ediverse  esposizioni   in  congressi   internazionali.   Inoltre,  al  congresso   ISCT  mi  è  stato  consegnato   il   young   inves,gatorawards  mentre  a  Praga  il  poster  dei  nostri  risulta,  ha  vinto  il  premio  come  miglior  poster.

Riprendendo  l’anno  scorso:Il  protocollo  per  arrivare  in  clinica  con  i  trasposoni

Nucleofezione

INFUSIONE

CELLULE  DEL  DONATORE

+

Giorno  0 Giorno  1OKT3+IL-­‐2

Espansione

Criopreservazione

Giorno  21

Transgene

CAR

IFN-­‐g

IL-­‐2

Ci  serve  un’officina  dove  produrre  le  cellule  super  con  ilnostro  metodo  innova,vo  di  terapia  genica

TERAPIA  GENICA

SLIDE   10:   Riprendendo  da   dove   ci   eravamo   lascia,   l’anno   scorso:   con   il   sistema   trasposone  pensiamo  di   ideare   unprotocollo  per  arrivare  finalmente  a  curare   i  nostri  bambini.  Ci  serve  però  un’officina  dove  produrre   le  cellule  supercon  il  nostro  metodo  innova,vo  di  terapia  genica.

Ci  siamo  vicini:  dalla  situazione  a;uale  alla  creazione  dellastanza  di  terapia  genica

Figura1

FILTROD

CLASSED FILTRO

C

ARMADIO LABORATORIOCELLULARE 3

LABORATORIOCELLULARE 1

LABORATORIO CELLULARE

2

SPOGLIATOIOLAB.CELL.1

SPOGLIATOIO LAB.CELL.2

SPOGLIATOIO

LAB.CELL.3

Non classificato Classe D Classe C Classe B Classe A

ΔP=55pa

ΔP=55pa

ΔP=35pa

ΔP=35pa

ΔP=35pa

ΔP=35pa

ΔP=35pa

ΔP

=50p

aΔ

P=5

0pa

U.S.

U.S

. U.S.

U.S.

U.S. U.S.

U.S.

Legenda:

Pass-Box

Autoclave passante

Panca

Uscita di sicurezza

ΔP= differenza rispetto all’esterno (Pascal)

U.S.

ΔP=30pa

ΔP

= 5p

a

ΔP=10pa

ΔP=55pa

ΔP=20pa

ΔP

=50pa

ΔP

=50pa

Stanza n 4

Laboratorio di terapia cellulare Stefano VerriLaboratorio di terapia cellulare Stefano Verri

SLIDE   11:   Il   prossimo   traguardo   sarà   quello   di   iniziare   al   più   presto   presso   il   nostro   Centro   un  protocollo   clinico   inpazien,  pediatrici  affeO  da  forme  aggressive  di   leucemia.  Perciò  ci  s,amo  a;rezzando  modificando   il   laboratorio  diterapia  cellulare  Stefano  Verri  con  una  stanza  di  terapia  genica  munita  di  Nucelofector.

Laboratorio  terapia  cellulare  Stefano  Verri:un’officina  autorizzata  dall’Agenzia  Italiana  del  Farmaco

La  terapia  cellulare  rappresenta  una  nuova  fron,era  della  medicina,  ma  il  suo  sviluppodeve  avvenire  nel  contesto  di  studi  clinici  sperimentali  approva,  dalle  autorità  competen,.

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SLIDE  12:  Importante  so;olineare  che  la  nostra  è  un’officina  autorizzata  dalle  autorità  competen,.

Verso  la  stanza  di  terapia  genica….  dal  laboratorioal  le;o  del  malato

Cappa a flussoCappa a flusso

centrifugacentrifugaincubatoreincubatore

bancobanco

pass boxpass box

sedimentazionesedimentazione contattocontatto SASSAS

Cappa a flussoCappa a flusso

centrifugacentrifugaincubatoreincubatore

bancobanco

pass boxpass box

Cappa a flussoCappa a flusso

centrifugacentrifugaincubatoreincubatore

bancobanco

pass boxpass box

sedimentazionesedimentazione contattocontatto SASSAS

Il Nucleofector per la terapia genicamediante i trasposoni SleepingBeauty

Il prodotto cellulare: le super cellule T con il CAR

SLIDE   13:   Il   Laboratorio   di   Terapia   Genica   e   Cellulare   “Stefano   Verri”   ci   consen,rà   di   creare   le   super   cellule   Tmodificate  con  i  CAR  per  la  cura  dei  nostri  bambini  nel  rispe;o  degli  standard  internazionali  più  avanza,.

GRAZIE!

Andrea  BiondiE&ore  BiagiNice  Turazzi

Sarah  Te&amanBSilvia  Arcangeli

 Maria  Caterina  RoB  RoBMaltese  FrancescaGreta  GiordanoVirna  MarinIrene  Pizzitola

Elisabe&a  Cribioli

Rossi  VincenzoSongia  Simona

Federica  ColnaghiArianna  ColomboFederica  Mo&adelli

Alice  Plevani              Michela  Bardini        Angela  Savino

Fondazione  M.Te&amanB

LA  CooperMonBni  Eugenio

BenedicenB  FabrizioAndrea  CalabriaBiasco  Luca

AiuB  Alessandro

Amici  di  DuccioSilvia

ArcangeliNiceTurazzi Sarah

Te&amanB

E&oreBiagiChiara

FrancescaMagnani Maria

CaterinaRoBroB

SLIDE   14:   Ringraziamo   tu;e   le   persone   che   hanno   concorso   a   questo   lavoro   e   sostenuto   il   proge;o,   in   par,colareRiccardo  e  Donatella.  I  nostri  pazien,  hanno  un  grande  bisogno,  aiutateci  a  cogliere  questa  sfida.

www.amicididuccio.comCodice  IBAN          IT48  B033  5901  6001  0000  0060  581Causale          Proge;o  Amici  di  Duccio