LABORATORY OF CELLULAR THERAPY “G. LANZANI”

Scientific Director: Dr. M Introna

USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti Bergamo

Director: Prof. A Rambaldi

DL 24/4/2006 n° 219 “Codice comunitario”

(attua le 2001/83/CE, 2003/94/CE, 2003/63/CE)

Regola tutto il ciclo di vita dei prodotti farmaceutici

dalla produzione alla commercializzazione.

Allegato I. Parte IV: medicinali per terapie avanzate (cellule

per terapia somatica e/o terapia genica).

Contiene il discusso articolo 28 sulle eccezioni ospedaliere

Vedi legge 07/07/2009 n° 88, G.U. 161 del 14/07/2009

AIFA

Area produzione e controllo

Ufficio autorizzazioni officine

Il Laboratorio di Terapia Cellulare “G.Lanzani” è autorizzato a

produrre prodotti per terapia cellulare sottoforma di

preparazioni liquide di piccolo volume per uso parenterale

preparate in asepsi.

Roma, 27.07.2007

N° aM-144/2007

Autorizzazione preliminare della Cell Factory da AIFA

2° Autorizzazione della Cell Factory n° aM 155/2010

LUGLIO 07

FEBBRAIO 08

NOVEMBRE 08

Ispezione di follow up delle azioni correttive APRILE 07

NOVEMBRE 09 Ispezione di follow up

1° ispezione generale AIFA DECEMBRE 2005

Time

GENNAIO 2004 Laboratorio Lanzani ready to go

2° ispezione generale AIFA

Idoneità del dott. Introna come Direttore Tecnico LUGLIO 2005

1° Autorizzazione della Cell Factory n° aM 189/2008

OTTOBRE 10

Divisione di EmatologiaOspedali Riuniti di Bergamo

Data inizio lavori: luglio 2002Data prevista fine lavori: 31 luglio 2003Inaugurazione del Centro: settembre 2003

TC4 TC3

Sterile

storeroom

Cell

Therapy 1

Co

rrid

or

4

Corridor 3

Lab Quality Control

Changing

room E

Changing

room D

Filter E

Filter D

Ch

an

gin

g r

oo

m

IN

Ch

an

gin

g r

oo

m

OU

T

Corridor 2

Corridor 1 Cell

Therapy 2

Lab

standard

Lab

CQII

Stoccaggio prodotti

Area di produzione dei prodotti per terapia

cellulare in GMP Stoccaggio

materie prime

Area di

congelamento e

stoccaggio

prodotti cellulari

Laboratori per i Controlli di Qualità sui

prodotti di Terapia Cellulare

Stoccaggio materiali

Locali adeguati

Ruolo soppressorio sulla immunità da parte delle cellule MSC

Production MSC

Expansion from BM Quality controls

Week 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 incubatorMedium, ½ liter PL 2-3 bags with 80-100x106/ batch

o 1 with 100 x106 + 2-3 small bags/batch

Laboratory TC2: 2 incubators

Endotoxin LAL

Sterility

MycoplasmaCulture (EP)

Phenotype , viability

From frozen

vial P1

CodeOrigin of material

hMSC Frozen (x 106)

Frozen bags (mean:80x106cells/bag)

Number of frozen vials at p1

(~2x106cells/vial)

BG-MSC2 washout 95.0 1 3

BG-MSC7 washout 375.2 4 10

BG-MSC11 washout 147.0 2 25

BG-MSC12 washout 200.0 3 13

Code n° vials usedFrozen bags

(mean 1x107cells/bags)

BG-MSC2 1 3

BG-MSC7 5 10

BG-MSC11 20 32

BG-MSC12 1 1

hMSC EXPANSIONS

…from “fresh material”

…from “frozen vials bank”

Capelli C. et al, BMT, 2007; Capelli C et al., Cytotherapy, 2009

24/11/2008 Submission of Phase I MSC/aGVHD IMPD to ISS

24/04/2009 Authorization by ISS

16/07/2009 Authorization by E.C. Monza

NOVEMBER 08

APRIL 09

JULY 09

Time scale of approval of Phase I clinical

study with MSC in aGVHD

NOVEMBER 09 Authorisation by E.C. Bergamo

MSC for the treatment of severe aGVHD

• Dossier n° Eudra CT: 2008/007869/23

• Usage of MSC for steroid resistant grade III-IV aGVHD

• Scientific project shared with Prof. A. Biondi and dott. E. Biagi,

Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università

Milano Bicocca.

• Clinical PI: Dott. E. Biagi

Authorization by ISS on 24/04/2009

Authorization by E.C. Monza on 16/07/2009

Pts GVHD Grading at MSC

Infusion

No. of MSC

Infusion

Infused MSC (Dose/kg)

Response After MSC Infusion

Follow-up

1A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade III)

1 1 x 106/kg Partial response temporary

Skin and mucosae grade I Alive with chronic skin and mucosae GVHD grade II

2A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade II)

1 1 x 106/kg Complete response definitive

No GVHD Alive with skin chronic GVHD grade I

2B Chronic mucosae and liver grade III

1 1.4 x 106/kg Partial response temporary

Chronic mucosae and liver grade II

3A Acute skin grade I 1 1 x 10

6/kg Complete response definitive

No GVHD Alive, no GVHD

4A Acute skin grade I 1 0.7 x 10

6/kg No response

Skin GVHD grade I Alive, no GVHD

4B Chronic skin and liver grade III 4 2.8 x 10

6/kg

Partial response temporary Skin and liver grade II

5A Acute skin grade II 1 1.2 x 10

6/kg Complete response definitive

No GVHD Alive, no GVHD

5B Chronic skin GVHD grade I 1 1.2 x 10

6/kg No response

Skin GVHD grade I

6A Chronic overlap (skin and mucosae grade III)

1 1.2 x 106/kg Complete response definitive

Alive, no GVHD

7A Acute skin grade I 2 2.4 x 10

6/kg Complete response definitive

No GVHD Alive, no GVHD

8A Acute (skin II and gut grade IV) 2 3.2 x 10

6/kg Partial response temporary

Skin and gut grade II Death for progressive gut GVHD And pulmonary aspergillosis

9A Acute (skin and gut grade IV) 2 2 x 10

6/kg No response

Skin and gut grade IV Death for sepsis

10A Acute gut grade IV 2 2.4 x 10

6/kg Partial response temporary

Grade III Alive, no GVHD

11A Acute gut grade IV 1 3.7 x 106/kg No response Deah for gut GVHD and pneumonia

Lucchini G. et al, BBMC, 2010, in press

MSC infusions in pediatric patients

CIK culturePBMCsDay 0

INFgamma

1000 IU/ml

OKT3 50 ng/ml

IL2 500 IU/ml

IL2 500 IU/ml

every 3-4 days

Day 1 Day 21

Protocol for generation of cytokine-induced killer cells

CD3

CD

56

CD

56

CD3

CD

56 NK

CD56

T

CD3

CIK

CD3

CD56

Introna M. et al, BMT, 2006

Franceschetti M. et al., Exp Hematol, 2009

Pievani A et al., Blood in press

Pievani A. et al., submitted

Produzione CIK

Produzione Controlli di qualità

Week 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 incubatoreTerreno, OKT3, IFNg, IL-2 3-4 sacche/ produzione

Laboratorio TC1: 3 incubatori

Nostro LAL e mycoplasma (Mycoalert)

Sterilità

MycoplasmaColtura (P.E.)

Fenotipo , vitalità

• Dossier n° 64499-PRE.21-848

• Titolo: Impiego linfociti CIK: Fase I

• Approvazione in data 30/05/2005

• Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e

il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo,

Monza, Università Milano Bicocca.

Cellule CIK da donatore per le ricadute

leucemiche

Chiusura studio CIK Fase I

05/06 Arruolamento di 17 pazienti tutti singolarmente

autorizzati dall’Ufficio comma c del ISS dietro specifica

richiesta

06.12.06 Invio manoscritto con dati di 11 pazienti

Pubblicazione su Hematologica 2007, 92, 07, 948-955

06.10.08 Invio relazione finale chiusura Fase I

Results

Clinical response

None 6

Stable Disease 1

Hematologic Improvement 1

Complete response 3

Alive/dead 4/7

Days of Median Follow up

from transplant 782 (188-1327)

Introna et al, 2007

RECIPIENT

DONOR

Days post

tranplant

27

90

120

132

155

174

377

DLI (+102)

CIK (+132)

CIK (+174)

77%

22%

25%

6%

45%

97%

100%

0%

100%

Response of pt 765 as determined by chimerism analysis of CD3+ cells

Introna et al, 2007

AIFA

•Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità

di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca, con il

Prof. S. Cortelazzo, Ospedale Bolzano.

•PI clinico: Prof. A Rambaldi

Infusione sequenziale di linfociti non manipolati del donatore (DLI) e linfociti

killer indotti da citochine (CIK) dopo il trapianto allogenico di cellule staminali

Protocollo CIK 2

Numero EudraCT: 2008-003185-26

Fase II autorizzata da AIFA il 14.04.09, Prot.n° AIFAII/37533/P

Autorizzazione da CE Bergamo: 30/07/2009

Therapeutic use

1st DLI: 1x106/kg

2nd DLI: 1x106/kg

10x106/kg5x106/kg5x106/kg4

10x106/kg5x106/kg1x106/Kg3

5x106/kg5x106/kg1x106/Kg2

5x106/kg1x106/Kg1x106/Kg1

3rd CIK cells

infusion

2nd CIK cells

infusion

1st CIK cells

infusion

Combina-

tion

Laboratorio di Terapia Cellulare “G. Lanzani”

Responsabile: M. Introna

1. Processazione di

cellule staminali

emopoietiche

Responsabile: M.

Introna

Referente Qualità del

Laboratorio (RQL):

J. Golay

Operatori

G. Borleri

C. Capelli

E. Gotti

2. Produzione di prodotti di

Terapia Cellulare in GMP

Qualified person: M. Introna

Assicurazione di Qualità

Responsabile: J. Golay

Operatori:

G. Borleri

C. Capelli

A. Pievani

E. Gotti

L. Bologna

A. Amaru

3. Ricerca e Sviluppo

Group leaders

M. Introna

J. Golay

Personale Amministrativo

E. Traini

Programma di Trapianto delle

Cellule Staminali Emopoietiche

Direttore: Alessandro Rambaldi

USC Ematologia

Organigramma

Centro di Raccolta

SIMT

Responsabile: Dott.essa A.

Falanga

Unità Clinica

Laboratorio di Terapia Cellulare

“G.Lanzani”

USC Ematologia, Ospedali Riuniti di Bergamo

Associazione Italiana

Contro le Leucemie

Linfomi e Mielomi – ONLUS

sezione PAOLO BELLI

Alessandro Rambaldi Direttore USC Ematologia

Martino Introna Qualified Person DT e RRP

Josée Golay Quality Control e RRCQ

Gianmaria Borleri Operator Production

Chiara Capelli Operator Production

Alice Pievani Operator Production

Elisa Gotti Operator Production

Luca Bologna Operator Quality Control

Ariel Amaru PhD, Ricerca e sviluppo

Elisabetta Traini Operatore di supporto gestionale

Microbiologia OORRBG

Ufficio Tecnico OORRBG

Ufficio Qualità OORRBG

Uffici Amministrativi OORRBG

Ufficio Ambientale OORRBG/Impresa pulizie

Ricerca donatori: E. Oldani

Gestione software: F. Delaini

Gestione GCP: ML Ferrari