LABORATORY OF CELLULAR THERAPY “G. LANZANI”Scientific Director: Dr. M Introna

USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti BergamoDirector: Prof. A Rambaldi

DL 24/4/2006 n° 219 “Codice comunitario”(attua le 2001/83/CE, 2003/94/CE, 2003/63/CE)

Regola tutto il ciclo di vita dei prodotti farmaceuticidalla produzione alla commercializzazione.

Allegato I. Parte IV: medicinali per terapie avanzate (celluleper terapia somatica e/o terapia genica).

Contiene il discusso articolo 28 sulle eccezioni ospedaliereVedi legge 07/07/2009 n° 88, G.U. 161 del 14/07/2009

Norme per la Sperimentazione Clinica

DPR 21/09/2001 n° 439 per Fasi I

DL026/04/2002 Documentazione ISS per fasi I

DL 24/06/2003 N° 211 (attua 2001/20/CE) per GCP e successivo DL 21/12/2007 (IMPD)

DL 06/11/2007 n°200 (attua 2005/28/CE) per GCP

DL 02/03/2004 e successivi per “Banca Dati”

DL 05/12/2006 per “Usi Consolidati”e successivi decreti “proroga”

DL 05/12/2006 per “Usi Compassionevoli”

DM 08/05/2003 per “Usi Compassionevoli”

Altre norme per la Sperimentazione Clinica

DL 06/11/2007 n°191 (attua 2004/23/CE)

DL 25/01/2010 N° 16 (attua 2006/17/CE e 2006/68/CE)

ISTITUTO DEI TESSUTI/CNT

AIFA

Area produzione e controllo

Ufficio autorizzazioni officine

Il Laboratorio di Terapia Cellulare “G.Lanzani” è autorizzato aprodurre prodotti per terapia cellulare sottoforma di

preparazioni liquide di piccolo volume per uso parenteralepreparate in asepsi.

Roma, 27.07.2007

N° aM-144/2007

30/07/2007 Preliminary authorization of the “Lanzani” Cell Factory by AIFA

28/11/2008 Official authorization of the “Lanzani” Cell Factoryby AIFA n° aM 189/2008

27/02/2008 2nd General inspection

JULY 07

FEBRUARY 08

NOVEMBER 08

12/04/2007 Inspection of follow up of corrective actionsAPRIL 07

NOVEMBER 09 3-6/11/09 Inspection of follow up

19/12/2005 1st General InspectionDECEMBER 2005

Chronology of the AIFA inspections up to finalauthorization of the Cell Factory

Other antigens or naive

Ruolo soppressorio sulla immunità da parte delle cellule MSC

Le Blanc et al. Lancet 2004

Clinical course and immunosuppression of the patient

Le Blanc et al, Lancet 2008

Survival from time of haemopoietic stem –cell transplantation inpatients given mesenchymal stem cells

n = 30n = 25

Production MSC

Expansion from BM Quality controls

Week0 12345678910

1incubatorMedium,½literPL 2‐3bagswith80‐100x106/batch

o1with100x106+2‐3smallbags/batch

LaboratoryTC2:2incubators

EndotoxinLAL

Sterility

MycoplasmaCulture(EP)

Phenotype,viability

From frozenvial P1

13

25

10

3

Number of frozenvials at p1

(~2x106cells/vial)

3

2

4

1

Frozen bags(mean:80x106cells/bag)

200.0

147.0

375.2

95.0

hMSC Frozen(x 106)

washout

washout

washout

washout

Origin ofmaterial

BG-MSC12

BG-MSC11

BG-MSC7

BG-MSC2

Code

1

20

5

1

n° vials usedFrozen bags

(mean 1x107cells/bags)Code

1BG-MSC12

32BG-MSC11

10BG-MSC7

3BG-MSC2

hMSC EXPANSIONS

…from “fresh material”

…from “frozen vials bank”

Capelli C. et al, BMT, 2007; Capelli C et al., Cytotherapy, 2009

24/11/2008 Submission of Phase I MSC/aGVHD IMPD to ISS

24/04/2009 Authorization by ISS

16/07/2009 Authorization by E.C. Monza

NOVEMBER 08

APRIL 09

JULY 09

Time scale of approval of Phase I clinicalstudy with MSC in aGVHD

NOVEMBER 09 Authorisation by E.C. Bergamo

MSC for the treatment of severe aGVHD

• Dossier n° Eudra CT: 2008/007869/23

• Usage of MSC for steroid resistant grade III-IV aGVHD

• Scientific project shared with Prof. A. Biondi and dott. E. Biagi,Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, UniversitàMilano Bicocca.

• Clinical PI: Dott. E. Biagi

Authorization by ISS on 24/04/2009Authorization by E.C. Monza on 16/07/2009

Pts GVHD Grading at MSC Infusion

No. of MSC

Infusion

Infused MSC (Dose/kg)

Response After MSC Infusion Follow-up

1A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade III)

1 1 x 106/kg Partial response temporary Skin and mucosae grade I

Alive with chronic skin and mucosae GVHD grade II

2A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade II)

1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive with skin chronic GVHD grade I

2B Chronic mucosae and liver grade III

1 1.4 x 106/kg Partial response temporary Chronic mucosae and liver grade II

3A Acute skin grade I 1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive, no GVHD

4A Acute skin grade I 1 0.7 x 106/kg No response Skin GVHD grade I

Alive, no GVHD

4B Chronic skin and liver grade III 4 2.8 x 106/kg

Partial response temporary Skin and liver grade II

5A Acute skin grade II 1 1.2 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive, no GVHD

5B Chronic skin GVHD grade I 1 1.2 x 106/kg No response Skin GVHD grade I

6A Chronic overlap (skin and mucosae grade III)

1 1.2 x 106/kg Complete response definitive

Alive, no GVHD

7A Acute skin grade I 2 2.4 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive, no GVHD

8A Acute (skin II and gut grade IV) 2 3.2 x 106/kg Partial response temporary Skin and gut grade II

Death for progressive gut GVHD And pulmonary aspergillosis

9A Acute (skin and gut grade IV) 2 2 x 106/kg No response Skin and gut grade IV

Death for sepsis

10A Acute gut grade IV 2 2.4 x 106/kg Partial response temporary Grade III

Alive, no GVHD

11A Acute gut grade IV 1 3.7 x 106/kg No response Deah for gut GVHD and pneumonia

Lucchini G. et al, BBMC, 2010, in press

MSC infusions in pediatric patients

Richiesta di emendamento sostanziale a ISSper allargamento a 13 centri ematologici italiani

e cambio dosaggio (3 somministrazioni al posto di 2)Aspetti logistici critici

Coordinamento pediatrico: MonzaCoordinamento adulti: Bergamo

In attesa di risposta formale da ISS

A novembre 2010 già arruolati 13 pazienti

MSC per il trattamento della GVHD acuta grave

CIK culturePBMCsDay 0

INFgamma1000 IU/ml

OKT3 50 ng/mlIL2 500 IU/ml

IL2 500 IU/mlevery 3-4 days

Day 1 Day 21

Protocol for generation of cytokine-induced killer cells

CD3

CD

56

CD

56

CD3

CD

56 NK

CD56

T

CD3

CIK

CD3CD56

Introna M. et al, BMT, 2006Franceschetti M. et al., Exp Hematol, 2009Pievani A et al., Blood in pressPievani A. et al., submitted

Murine CIK cells GFP transduced and i.v. injected in syngenic animals carrying s.c.lymphoma

Edinger, M. et al, Blood 2003

Homing of cytokine-induced killer cells in vivo

Day 0: early localization of CIK cells to the lungs;Day 1: distribution to other sites, including liver and spleen;Day 3: preferential infiltration of subcutaneous tumor site;Day 12: regression of tumor and minimal signal from remaining CIK cells

Nishimura, R. et al.Blood 2008;112:2563-2574

Trafficking and survival of CIK cells upon adoptive transfer

Produzione CIK

Produzione Controlli di qualità

Week0 12345678910

1incubatoreTerreno,OKT3,IFNg,IL‐23‐4sacche/produzione

LaboratorioTC1:3incubatori

NostroLALemycoplasma(Mycoalert)

Sterilità

MycoplasmaColtura(P.E.)

Feno[po,vitalità

• Dossier n° 64499-PRE.21-848

• Titolo: Impiego linfociti CIK: Fase I

• Approvazione in data 30/05/2005

• Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi eil dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo,Monza, Università Milano Bicocca.

Cellule CIK da donatore per le ricaduteleucemiche

Chiusura studio CIK Fase I

05/06 Arruolamento di 17 pazienti tutti singolarmenteautorizzati dall’Ufficio comma c del ISS dietro specifica

richiesta

06.12.06 Invio manoscritto con dati di 11 pazientiPubblicazione su Hematologica 2007, 92, 07, 948-955

06.10.08 Invio relazione finale chiusura Fase I

Results

Clinical responseNone 6Stable Disease 1Hematologic Improvement 1Complete response 3

Alive/dead 4/7

Days of Median Follow upfrom transplant 782 (188-1327)

Introna et al, 2007

RECIPIENT

DONOR

Days posttranplant

27

90

120

132

155

174

377

DLI (+102)

CIK (+132)

CIK (+174)

77%

22%

25%

6%

45%

97%

100%

0%

100%

Response of pt 765 as determined by chimerism analysis of CD3+ cells

Introna et al, 2007

AIFA

•Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi,Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca,con il Prof. S. Cortelazzo, Ospedale Bolzano.

•PI clinico: Prof. A Rambaldi

Infusione sequenziale di linfociti non manipolati del donatore (DLI) e linfocitikiller indotti da citochine (CIK) dopo il trapianto allogenico di cellule staminali

Protocollo CIK 2

Numero EudraCT: 2008-003185-26

Fase II autorizzata da AIFA il 14.04.09, Prot.n° AIFAII/37533/P

Autorizzazione da CE Bergamo: 30/07/2009

Therapeutic use

1st DLI: 1x106/kg

2nd DLI: 1x106/kg

10x106/kg5x106/kg5x106/kg4

10x106/kg5x106/kg1x106/Kg3

5x106/kg5x106/kg1x106/Kg2

5x106/kg1x106/Kg1x106/Kg1

3rd CIK cells infusion

2nd CIK cells infusion

1st CIK cells infusion

Combina-tion

None1,5,101-5-10BGFL.H.VIII

None1,5,101-5-10BZFA.G.VII

None1,51-5-5BZFM.A.VI

None1,51-5-5BZFV.D.V

None1-5-51-5-5BGMP.P.IV

None1-1-51-1-5BGMT.G.III

None1-11-1-5BGFV.A.II

None1-51-1-5BGMM.C.M.I

Toxicity(aGVHD)

TreatmentGroupCityGenderPatient N°

CIK II protocol: enrollment at November 2010

Laboratorio di Terapia Cellulare “G. Lanzani”Responsabile: M. Introna

1. Processazione dicellule staminali

emopoieticheResponsabile: M.

Introna

Referente Qualità delLaboratorio (RQL):

J. Golay

OperatoriG. BorleriC. CapelliE. Gotti

2. Produzione di prodotti diTerapia Cellulare in GMPQualified person: M. Introna

Assicurazione di QualitàResponsabile: J. Golay

Operatori:G. BorleriC. CapelliA. Pievani

E. GottiL. BolognaA. Amaru

3. Ricerca e SviluppoGroup leaders

M. IntronaJ. Golay

Personale AmministrativoE. Traini

Programma di Trapianto delleCellule Staminali EmopoieticheDirettore: Alessandro Rambaldi

USC Ematologia

OrganigrammaCentro di Raccolta

SIMTResponsabile: Dott.essa A.

Falanga

Unità Clinica

Laboratorio di Terapia Cellulare“G.Lanzani”

USC Ematologia, Ospedali Riuniti di Bergamo

Associazione ItalianaContro le Leucemie

Linfomi e Mielomi – ONLUSsezione PAOLO BELLI

Alessandro Rambaldi Direttore USC EmatologiaMartino Introna Qualified Person DT e RRPJosée Golay Quality Control e RRCQGianmaria Borleri Operator ProductionChiara Capelli Operator ProductionAlice Pievani Operator ProductionElisa Gotti Operator ProductionLuca Bologna Operator Quality ControlAriel Amaru PhD, Ricerca e sviluppoElisabetta Traini Operatore di supporto gestionale

Microbiologia OORRBGUfficio Tecnico OORRBGUfficio Qualità OORRBG

Uffici Amministrativi OORRBGUfficio Ambientale OORRBG/Impresa pulizie

Ricerca donatori: E. OldaniGestione software: F. Delaini

Gestione GCP: ML Ferrari