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AA 06 07AA 06 07 Biologia animale e MicrobiologiaBiologia animale e Microbiologia 11

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Classificazione morfologicaClassificazione morfologica

Filamentosi (pluricellulari)


MicetiMiceti

Lievitiformi (unicellulari)

Dimorfici

Caratteri generali (muffe e lieviti)Caratteri generali (muffe e lieviti)

� Nutrizione etrotrofica , assorbimento di sostanze organiche e minerali disciolte.

� Generalmente aerobi, alcune specie aerobie - anaerobie facoltative, nessuno è anaerobio obbligato.

�


� La riproduzione nei lieviti per gemmazione e scissione (blastospora) nei filamentosi mediante spore sessuate aploidi o

direttamente per divisione mitotica da una cellula singola, conidi.

� Molti miceti originano colonie filamentose a lanose altri colonie lisce e glabri, i primi dono miceti filamentosi i secondi lieviti, alcuni sono in grado di riprodursi nell’una o nell’altra forma.

Micologia: lievitiMicologia: lieviti

� Il gruppo comprende circa 500 specie divise in 60 generi.

� I lieviti sono funghi unicellulari con struttura semplice, per gemmazione

danno origine alle blastospore che a maturazione avvenuta si separano dalla

cellula madre.

� Da un punto di vista tassonomico la loro diversità in relazione ai generi si

basa essenzialmente sulle caratteristiche morfologiche delle cellule


basa essenzialmente sulle caratteristiche morfologiche delle cellule

vegetative e delle blastospore .

� Questo meccanismo è tipico di lieviti come Criptococcus laurentii e C.

neoformans, Saccharomyces spp. e altri le cui colonie per essere costituite

da cellule singole e gemmanti sono lisce e glabre.

� Il genere Candida origina le psuedoife in quanto le blastospore rimangono

contigue e ravvicinate limitate e definite comunque da una parete cellulare.

� Sprovvisti di clorofilla, incapaci di produrre prodotti di tipo organico necessari alla crescita, a partire dal substrato minerale, sono saprofiti, a volte parassiti.

� Necessitano di ossigeno fonti di carbonio organico e azoto organico o minerale, di temperatura e e di pH, alcuni hanno bisogno di vitamine e altri fattori di

crescita.

� Il ph ottimale per la crescita dei lieviti varia da 4,5 a 6,5 , molti tollerano condizioni più estreme di pH tra 2,8 -3 e 8-8,5.

Micologia: lievitiMicologia: lieviti


� La temperatura di crescita è compresa tra 5° e 30° - 37°, optimum a 25°C. Anche a 0° C si ha moltiplicazione ma con basso tasso di crescita.

� Sopportano anche quantità di Aw molto basse intorno a 0,65, a questo livello nessun altro organismo ha possibilità di sviluppo. .

� Alcuni sono in grado di crescere nell’una e nell’altra forma. (dimorfici).

� Candida albicans


�� La riproduzione nei filamentosi è assicurata da cellule La riproduzione nei filamentosi è assicurata da cellule specializzate dette spore mediante la fusione di due cellule aploidi specializzate dette spore mediante la fusione di due cellule aploidi ((spore sessuate o perfette) o da una cellula per mitosi (spore ) o da una cellula per mitosi (spore

imperfette o asessuate, conidi).imperfette o asessuate, conidi).

�� La crescita in colonia dei miceti filamentosi dipende dalla specie La crescita in colonia dei miceti filamentosi dipende dalla specie trattata esistono a riguardo importanti variazioni inoltre molti trattata esistono a riguardo importanti variazioni inoltre molti miceti filamentosi formano colonie variamente pigmentate e miceti filamentosi formano colonie variamente pigmentate e

filamentose (filamentose (Miceti filamentosiMiceti filamentosi).).

��

Micologia: muffeMicologia: muffe


�� Alcuni miceti patogeni crescono in entrambe le forme (dimorfismo Alcuni miceti patogeni crescono in entrambe le forme (dimorfismo termo dipendente) in dipendenza dei fattori ambientali. Le spore termo dipendente) in dipendenza dei fattori ambientali. Le spore disseminate nell’ambiente in condizioni ottimali germinano e disseminate nell’ambiente in condizioni ottimali germinano e originano singoli filamenti formati da catene di cellule tra loro originano singoli filamenti formati da catene di cellule tra loro

comunicanti o ife, che si raggomitolano in ammassi formando un comunicanti o ife, che si raggomitolano in ammassi formando un tallo filamentoso il micelio.tallo filamentoso il micelio.

�� Si dividono in relazione alla temperatura, in mesofile, criofile, Si dividono in relazione alla temperatura, in mesofile, criofile, psicrofile, termofile, per le muffe mesofile la quantità di Aw è del psicrofile, termofile, per le muffe mesofile la quantità di Aw è del 95 95 –– 100%, il pH ideale va da 5 a 6 ma diverse specie crescono 100%, il pH ideale va da 5 a 6 ma diverse specie crescono bene anche a pH acido riuscendo a modificarlo per le proprie bene anche a pH acido riuscendo a modificarlo per le proprie

esigenzeesigenze

Riproduzione gamica e agamica Riproduzione gamica e agamica nelle muffenelle muffe


� Su adatto substrato le spore danno origine a un tubo germinativo, che per accrescimento

origina l’ifa, struttura filamentosa cava, durante il processo di formazione dell’ifa a

intervalli regolari si formano dei setti trasversali molto ravvicinati in alcuni casi dovuti a

introflessioni della parete e della membrana citoplasmatica, l’ifa diventa settata e divisa

in settori comunicanti tra loro.

� In una colonia fungina le ife si allungano, si ramificano ripetutamente, si intrecciano, si

anastomizzano tra loro per dare origine ad un feltro fitto e compatto.

Micologia: muffeMicologia: muffe


� Il micelio che aderisce al substrato e assorbe da questo le sostanze si chiama vegetativo,

la porzione che cresce al disopra è detta micelio riproduttivo.

� Il micelio riproduttivo contiene le spore o le ife specializzate alla produzione delle spore.

� Le colonie sono variamente pigmentate con aspetti differenti, lanoso, granulare,

vellutato

� Gli zigomiceti hanno ife non settate.

Miceti dimorfiMiceti dimorfi

�I miceti manifestano una grande variabilità morfologica come conseguenza delle diverse condizioni ambientali di

crescita (pH, terreno, temperatura).

�Esistono miceti con dimorfismo termo-dipendente.


�Cinque specie fungine che a t. a. hanno aspetto filamentoso si trasformano in lieviti se incubati a 37° - 40° su idonei

terreni di coltura.

�Nei tessuti umani quindi vanno incontro a trasformazione.

�H. capsulatum, B. dermatidis, P.brasiliensis, C. immitis.

MicologiaMicologia

� I funghi sono organismi eucarioti la cui organizzaz ione non differisce da quella delle cellule eucariotiche

� Citoplasma delimitato da una membrana fosfolipidica con proteine e steroli, tra questi il più significativo è l’ ergosterolo.

� La membrana citoplasmatica è essenziale per il tras porto delle sostanze essenziali per il metabolismo e la diffusione dei soluti. Questa stru ttura è anche importante per i contatti


metabolismo e la diffusione dei soluti. Questa stru ttura è anche importante per i contatti con l’ambiente esterno e l’interazione con l’ospite infetto.

� La parete cellulare dei funghi è formata da polimer i polisaccaridici insolubili come chitina (polimero della n-acetilglucosamina), b-glucani (po limero del glucosio), ma anche da polisaccaridi solubili, sono inoltre presenti glic oproteine (determinanti antigenici).

� La parete cellulare conferisce stabilità morfologic a alla cellula fungina, la parete è una struttura rigida e inoltre media le interazioni con l’ambiente esterno.

I miceti come agenti patogeni� Le potenzialità patogene dei miceti dipendono molto dalle difese

che l’ospite è in grado di opporre.

� I dimorfici dimostrano una grande capacità nell’adattare il loro metabolismo a quello dell’ospite infetto.

� Si tratta di miceti patogeni primitivi e la loro patologie va incontro a guarigione spontanea.


a guarigione spontanea.

� Numerosissime specie fungine sono diffusissime nell’aria, e nell’ambiente esterno, molte sono termo-tolleranti ma non causano infezione, in soggetto adulto e sano le barriere

fisiologiche sono in grado di controllare l’eventuale infezione.

� L’uomo è naturalmente protetto da queste infezioni.(fanno eccezioni le dermatofitosi oppure se l’ inoculo è rappresentato da

un ingresso massivo di spore).

Patogenesi delle micosiPatogenesi delle micosi� Ospite predisposto per l’insorgenza di micosi secondarie

� Fattori predisponenti come: età neonatale, età avanzata, gravidanza, depressione del

sistema immunitario, uso di cortisonici e chemioterapici, manovre strumentali a scopo

terapeutico.


� Infezioni in pazienti ospedalizzati vengono considerate infezioni nosocomiali.

� Delle decine di migliaia di specie fungine solo poche decine sono quelle di interesse per

la micologia medica.

� La maggior parte riguarda micosi superficiali e cutanee o infezioni da miceti dimorfi,

sconosciute nei nostri territori.

Micosi secondarieMicosi secondarie

�� Soprattutto in pazienti immuno compromessi,da anni in Soprattutto in pazienti immuno compromessi,da anni in aumento costante.aumento costante.

�� Si tratta di miceti patogeni opportunisti come: Candida Si tratta di miceti patogeni opportunisti come: Candida spp., Aspergillus spp., C. neoformans e zigomiceti.spp., Aspergillus spp., C. neoformans e zigomiceti.

� Nel caso del genere Candida le cellule del lievito aderiscono alle


cellule del lievito aderiscono alle cellule epiteliali mediante

opportune glicoproteine inoltre l’adesione culmina con l’invasione

della stessa cellula.

� Dopo fagocitosi nel macrofago (proteolisi) sono in grado di

resistere e danneggiare queste cellule.

� I miceti del genere Candida sono in grado di danneggiare anche i

tessuti basali di epiteli ed endoteli che attraversano

facilmente.

� .

Il C. neoformans è protetto da una capsula

mucopolisaccaridica, questa struttura ne

maschera il riconoscimento da parte delle

cellule del nostro sistema immunitario,

abbassando quindi la capacità di reazione

del nostro sistema immunitario

Classificazione per sede di Classificazione per sede di insorgenza delle micosiinsorgenza delle micosi

� Micosi superficiali

� Risposta cellulare assente con il microrganismo che si localizza nella

cheratina della cute, unghie, apparto pilifero.

� Reazione infiammatoria locale, micosi localizzate su mucose che risultano

infiammate, sono considerate comunque micosi superficiali.


� Micosi sottocutanee

� Ingresso del micete per via transcutanea in seguito a ferite o traumi superficiali,entità eterogenee per eziologia, tutte comunque originano una

lesione a livello del punto di ingresso del microrganismo, che dopo la localizzazione coinvolge i tessuti contigui.

AspergillosiAspergillosi

� Le spore di Aspergillus sono in grado di resistere alla fagocitosi,

inoltre possono essere elaborate tossine che inibiscono questa

attività fagocitaria.

� Il meccanismo di insorgenza delle infezioni da aspergillo può


�

essere duplice : endogeno ed esogeno.

� le micosi endogene sono quelle dovute a miceti normalmente

presenti tra la flora commensale endogena della nostra cute. (C.

albicans mucosa gastro intestinale e vagina, Malassezia furfur

presente sulla cute).

AspergillosiAspergillosi� Sono abbondantemente diffusi in natura dove vivono come

saprofiti del suolo e della vegetazione.

� Si tratta di funghi filamentosi, con micelio settato. Che si riproducono mediante conidi posti all’apice di conidiofori.

� La crescita in coltura è rapida e l’identificazione si avvale del


� La crescita in coltura è rapida e l’identificazione si avvale del riconoscimento dell’aspetto delle colonie e del loro colore.

� Via di ingresso dell’infezione è quella inalatoria con manifestazioni allergiche, patologie erosive a carico del polmone, polmoniti

invasive, aspergillosi invasive.

� Identificazione mediante microscopia ottica o aspetto e colore delle colonie, oppure con metodi immunologici e sierologici, i

metodi non sono ancora standardizzati.

Crescita in vitro delle muffe Crescita in vitro delle muffe alimentarialimentari

A. flavus


A. niger

Terreni di colturaTerreni di coltura

� Terreno più utilizzato è quello di Sabouraud (liquido o agarizzato).

� Questo terreno viene addizionato con cicloeximide o altri antibiotici per inibire la crescita di

eventuali batteri.

� Nel caso di aspergilli e penicilli il terreno di riferimento è il Czapek Dox i lieviti vengo ben coltivati

su corn meal agar, la transizione da filamentoso a lievitiforme i usa l’agar sangue.


� Le caratteristiche di crescita possono variare in maniera notevole da un terreno all’altro al punto da

rendere un identificazione alquanto difficile.

Diagnosi di laboratorio delle micosiDiagnosi di laboratorio delle micosi

� Isolamento in coltura e identificazione dell’agente eziologico (osservazione della

morfologia).

� L’esame microscopico diretto è in grado di fornire elementi utili per l’identificazione.

� Colorazioni sono necessarie per l’identificazione come Gridley, Pas, GMS, spesso è

sufficiente la colorazione con ematossilina eosina.


� Ricerca di anticorpi con test sierologici come fissazione del complemento, agglutinazione,

immunofissazione, immunofluorescenza.

� Sono più attendibili i test che mettono in evidenza gli antigeni stessi, o altri componenti

immunogeni, in questo modo con particelle di lattice che legano anticorpi presenti su di

un vetrino si diagnostica la presenza dell’antigene capsulare mucopolisaccaridico di c.

neoformans sia nel liquor che nel siero.

DermatofitiDermatofiti

��DermatofitosiDermatofitosi

��Dovute ad un gruppo di miceti denominati Dovute ad un gruppo di miceti denominati dermatofiti con con diffusione ubiquitaria.diffusione ubiquitaria.

��Essenzialmente limitate agli strati più superficiali della Essenzialmente limitate agli strati più superficiali della cute.cute.


��I dermatofiti sono funghi a lenta crescita con micelio I dermatofiti sono funghi a lenta crescita con micelio settato 2 3 settimane.settato 2 3 settimane.

��Si presentano con notevoli differenze tra specie anche Si presentano con notevoli differenze tra specie anche appartenenti allo stesso genere che riguardano l’aspetto appartenenti allo stesso genere che riguardano l’aspetto delle colonie: Trichophyton mentagrophytes, Microsporum delle colonie: Trichophyton mentagrophytes, Microsporum

canis, Epidermophyton floccosumcanis, Epidermophyton floccosum

CandidosiCandidosi� Appartengono numerose specie a questo genere (Candida albicans,

krusei, parapsilosis, tropicalis)

� Si tratta di lieviti, crescono in 48 ore su terreni solidi a 30°formando colonie lisce, glabre, tondeggianti

� Si tratta di cellule al microscopio ottico di forma ovale, con diametro


� Si tratta di cellule al microscopio ottico di forma ovale, con diametro tra 3 e 7 um.

� Sono ubiquitarie, e diventano commensali delle mucose umane.

� Il fattore di rischio è lo stato immuno deficitario, per cui questi lieviti hanno poi l’opportunità di invadere i tessuti, moltiplicandosi in

eccesso. (micete opportunista).

CandidosiCandidosi� Danno origine a Candidosi cutanee, si tratta di un membra della

flora endogena in equilibrio con altri componenti microbici.

� Micosi opportuniste, anche a livello cutaneo dove si riconoscono alcuni fattori favorenti come età, obesità, alcoolismo, e attività

lavorativa come causa occasionale. C. albicans da lesioni cutanee e C. parapsilosis da onicomicosi.


� Patogenicità non limitata all’ epidermide ma assume caratteri clinici e istopatologici della dermatite cronica.

� Identificazione mediante test biochimici, ed esami microscopici, anche ricerca diretta per il rilevamento di anticorpi, più di recente

viene ricercato lo stesso antigene.

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