ColorazioniColorazioni

Esercitazione di microbiologia Esercitazione di microbiologia generalegenerale

I coloranti reagiscono con la cellula o con suoi componenti ma non con l’ambiente circostante permettendoci così di distinguerli

I vantaggi principali delle colorazioni consistono nel fatto che esse oltre a fornire il contrasto tra i microrganismi e l’ambiente circostante permettono la differenziazione tra i vari tipi morfologici e favoriscono lo studio di alcune strutture interne come la parete, i vacuoli, e le spore.

I coloranti

Uso di colorazioni per migliorare il Uso di colorazioni per migliorare il contrasto dei preparaticontrasto dei preparati

Utilizzando diverse classi di coloranti è possibile migliorare il contrasto delle immagini al microscopio. Si possono distinguere:

A. Coloranti vitali: le cellule possono essere colorate senza fissazione e sono quindi solo minimamente alterate dal trattamento; oggi vengono utilizzati coloranti fluorescenti per colorare selettivamente specie diverse o strutture cellulari diverse

B. Coloranti che richiedono fissazione: le cellule devono essere disidratate prima della colorazione

I coloranti si dividono in:

Composti basici: (bleu di metilene, safranina, cristalvioletto)

Composti acidi: (eosina, rosso congo, fuscina)

Composti neutri: (giemsa)

Composti mordenzanti: (permettono la fissazione del colorante)

Le colorazioni

•Semplici (bleu di metilene)

•Differenziali (gram, zihel-neelsen)

•Negativa (inchiostro di china)

Parete cellulareParete cellulare

Peptidoglicano 90% del peso secco della parete

Peptidoglicano 5-10% del peso secco della parete

La colorazione di La colorazione di GramGram

1. Aggiunta del cristal violetto 2. lavaggio

La colorazione di La colorazione di GramGram

3. Aggiunta della soluzione di iodio

4. lavaggio

La colorazione di La colorazione di GramGram

5. Dopo la decolorazione con alcool-acetone il passaggio finale è la colorazione di contrasto con safranina

La colorazione di La colorazione di GramGram

Un Gram positivo Un Gram negativo Un Gram positivo

La colorazione con La colorazione con bleubleu di di metilenemetilene

Colorazione che ci permette di distinguere cellule vive da cellule morte

Ciò avviene grazie al fatto che le cellule vive hanno enzimi capaci di degradare il bleu di metilene

La colorazione con blue di La colorazione con blue di metilenemetilene

Si prepara una soluzione allo 0,5% di bleu di metilene.

Si scioglie una ansata di coltura in 500 µl di H2O e si aggiungono 500 µl della soluzione colorante.

Dopo 10 min si osservano le cellule al microscopio, quelle vive appariranno normali mentre quelle morte appariranno colorate di blu.