Elementi di Chimica e Biochimica Rita Roberti, Giovanni Alunni Bistocchi

Copyright © 2007 – The McGraw-Hill Companies s.r.l.

ELETTROFORESILe proteine possono essere separate le une dalle altre mediante elettroforesi, una tecnica che sfrutta la diversità della loro carica elettrica ad un determinato valore di pH. La carica elettrica complessiva di una proteina dipende dal numero e dal segno delle cariche elettriche presenti nelle catene laterali degli amminoacidi e dalle cariche dei gruppi ammino- e carbossi-terminale. Ogni proteina ha un punto isoelettrico caratteristico, che riflette il numero e il segno delle cariche elettriche. La carica netta della proteina è positiva a un valore di pH inferiore al pI, negativa a un valore di pH superiore al pI, zero quando pH = pI.

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Ad un determinato valore di pH della soluzione, la miscela di proteine ne conterrà alcune con carica netta negativa (pI pH), altre con carica netta positiva (pI pH), altre ancora con carica netta zero (pI = pH). La miscela di proteine da separare viene depositata su una striscia di acetato di cellulosa o su un gel di poliacrilammide per impedire la diffusione libera. Il supporto è imbevuto con il tampone a pH costante.

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Si applica quindi una campo elettrico, collegando le estremità del supporto con due elettrodi. Le proteine dotate di carica negativa migreranno verso il polo positivo (anodo), quelle con carica positiva verso il polo negativo (catodo), mentre quelle con carica netta zero non si sposteranno. La velocità di migrazione delle proteine verso i rispettivi poli dipende dalla densità di carica. Alla fine del processo le proteine possono essere visualizzate con coloranti specifici.