CELL BLOCK

Preparazione e uso per immunoistochimica

Valentina Bartolucci

UOC Anatomia Patologica - Università Campus Biomedico Roma

EXPOSANITA’ 2018

PATOLOGIA NODULARE DELLA TIROIDE: focus sugli approcci diagnostici

COSA E’ UN CELL BLOCK?

E’ una metodica di allestimento che permette di ottenere un

preparato in paraffina a partire da un campione citologico.

Questa metodica permette di allestire numerosi vetrini per

colorazioni speciali e immunoistochimica da un unico blocchetto.

Aumenta sensibilità e specificità diagnostica rispetto allo striscio

classico.

COME SI ALLESTISCE UN CELL BLOCK

PLASMA/TROMBINA

ALBUMINA

AGAR

HISTOGEL

‘CELLIENT®’

PLASMA/TROMBINA

Tra le prime metodiche a essere utilizzata per la semplicità e la facilità di

reperimento dei materiali.

La trombina si acquista mentre il plasma viene fornito dal laboratorio analisi.

Metodica:

1. Centrifugazione

2. Scarto del sovranatante

3. 4 gocce di plasma per ogni ml di sedimento

4. 4 gocce di trombina

5. Risospendere

6. Lasciare riposare qualche minuto fino alla formazione del coagulo

7. Recuperare il coagulo e fissarlo in formalina

ALBUMINA

Metodica piuttosto rapida con un unico limite, non funziona se il paziente ha

assunto anticoagulanti.

Si basa sulla coagulazione dell’albumina bovina.

Metodica:

1. Centrifugazione

2. Scarto del sovranatante

3. 2-3 gocce di albumina bovina al 30%

4. Fissare in alcol 95°

5. Lasciare riposare qualche minuto fino alla formazione del coagulo

6. Recuperare il coagulo e fissarlo in formalina

GEL AGGREGANTI: AGAR/HISTOGEL

Sono entrambi gel che vengono fusi ad alte temperature, aggiunti al pellet, una

volta raffreddati trattengono al loro interno le cellule e possono essere

processati come un qualunque campione istologico.

E’ una metodica più lunga delle altre ma permette di ottenere ottimi risultati.

AGAR - ALLESTIMENTO -

Centrifugazione 1600 rpm per 10

min.

AGAR - ALLESTIMENTO -

AGAR - ALLESTIMENTO -

Centrifugazione 2700 rpm per 5

min.

AGAR - ALLESTIMENTO -

Si aggiunge agar sciolto a una temperatura di

90°C

AGAR - ALLESTIMENTO -

2 minuti a 90°C per far sciogliere nuovamente

l’agar

AGAR - ALLESTIMENTO -

AGAR - ALLESTIMENTO -

CELLIENT®

E’ uno strumento che permette di automatizzare l’allestimento e la

processazione dei citoinclusi.

Metodica:

• Il campione viene concentrato in un filtro grazie ad un

sistema sottovuoto.

• Questo pellet viene fissato con un fissativo a base di

metanolo. Si può utilizzare anche la formalina per una

questione di rispetto dei protocolli di immunoistochimica

del laboratorio.

• Il pellet viene processato e incluso in un blocchetto di

paraffina.

• Tutto il processo dura 45 minuti per singolo campione.

CELL BLOCK VS STRISCIO: VANTAGGI

Le cellule sono concentrate in un punto preciso del vetrino.

Possibilità di allestire ulteriori vetrini a partire dallo stesso pellet, anche a

distanza di tempo.

I cell block vengono fissati in formalina, quindi si possono eseguire tutte le

colorazioni speciali e immunoistochimica come su preparato istologico.

Il campione è rappresentato nella sua totalità compresi aggregati cellulari o

frammenti di tessuto (riconoscimento pattern tumorale).

CELL BLOCK VS STRISCIO: SVANTAGGI

Tempo: L’allestimento dei citoinclusi rispetto allo striscio richiede molto più

tempo.

Impiego di un operatore dedicato: L’allestimento del citoincluso a differenza

dello striscio può essere eseguito solo in laboratorio dal personale tecnico

addestrato, mentre lo striscio può essere allestito in ambulatorio da diverse

figure professionali.

IMMUNOISTOCHIMICA

I campioni allestiti come cell block vengono fissati in formalina.

Questo permette di effettuare immunoistochimica senza modificare i protocolli

ottimizzati per l’istologia, permettendo così standardizzazione e riproducibilità.

Vengono allestiti vetrini con sezioni spesse 4 µm.

Anticorpi testati su agoaspirato tiroideo:

HBME-1

GALECTINA3

CD56

CK 19

TIREOGLOBULINA

TTF-1

CALCITONINA

GRAZIE PER L’ATTENZIONE