Boletin Informativo N°6 - Gob · Estandarización de PCR multiplex para el diagnóstico de las...
1
INSPI INFORMA Boletín N° 6 / Marzo 2017 / PROPAD / Edición # 2 "ENTEROPARASITOSIS EN NIÑOS ESCOLARES DEL ECUADOR: INTERVENCIÓN Y RESULTADOS PRELIMINARES" Dr. Leopoldo Izquieta Pérez INTRODUCCIÓN PROYECTO CICLOS BIOLÓGICOS PROYECTO PRUEBAS INMUNOLÓGICAS PROYECTO PRUEBAS MOLECULARES PROYECTO DE RESISTENCIA ANTIPARASITARIA PROYECTO PREVALENCIAS www.investigacionsalud.gob.ec síguenos Las parasitosis figuran entre las primeras causas de morbilidad en el Ecuador, especialmente en zonas de escasos recursos y difícil acceso a servicios básicos, lo que conlleva a potenciar la relación pobreza-enfermedad. Desde una perspectiva holística se pretende, a través de este programa, identificar los hechos sucesivos a escala macro y micro social que promueven la reproducción de esta relación en la población ecuatoriana. Se contempla además, el impartir conocimientos para promover prácticas higiénicas enfocadas en prevenir la parasitosis. El PROPAD es un programa que a través de sus 5 proyectos de investigación, pretende estudiar tanto aspectos sociales como desarrollar innovadoras metodologías de diagnóstico temprano, a más de generar datos estadísticos robustos y actualizados en el campo de las parasitosis; todo esto dentro del marco del cambio de la matriz productiva del país y el Programa Nacional del Buen Vivir. A continuación se detallan los objetivos y logros de proyectos del programa PROPAD durante el segundo semestre del año 2016. Objetivo: Estudiar y establecer los ciclos biológicos naturales y experimentales de las parasitosis desatendidas del Ecuador. Durante este período el proyecto ha trabajado en la implementación y mantenimiento del ciclo biológico del cestodo Echinococcus sp. en ratones CD1. Mediante la estandarización de la técnica de ELISA se ha realizado el análisis de aproximadamente 1240 muestras séricas de niños de edades entre 10 y 15 años, donde la seropositividad de anticuerpos IgG mostrada a las diferentes proteínas parasitarias se indican en la Figura 2. Objetivo: Estandarizar e implementar pruebas moleculares para el diagnóstico y profilaxis temprana de las parasitosis. El proyecto ha participado en eventos de transferencia de conocimiento donde ha compartido los resultados que se han obtenido hasta el momento con la comunidad. Ha trabajado también en la estandarización de técnicas moleculares de diagnóstico de las parasitosis. Objetivo: Determinar la prevalencia general de las parasitosis desatendidas del Ecuador. En el segundo semestre del 2016, el proyecto de prevalencias del programa PROPAD visitó los cantones: Guano, Riobamba, Pedro Vicente Maldonado, Pueblo Viejo, Buena Fe, Guayaquil, Naranjito, El Carmen y Santo Domingo, en donde se realizaron pruebas para el diagnóstico de las parasitosis en niños escolares. La prevalencia de las parasitosis en niños escolares se muestra en la figura 4. Objetivo: Estudiar la resistencia antiparasitaria en los esquemas terapéuticos nacionales y el efecto antiparasitario de extractos de plantas nativas del Ecuador. Durante este período el proyecto de resistencia antiparasitaria ha trabado en el estudio del efecto antihelmíntico de extractos de plantas nativas del Ecuador y en el estudio de la tasa de resistencia a fármacos en los parásitos recolectados en campo. Objetivo: Realizar un diagnóstico temprano de parasitosis mediante pruebas inmunológicas. Durante este período, el proyecto de pruebas inmunológicas ha estandarizado tres pruebas de inmunodiagnóstico (ELISA) para el análisis de infecciones por Ascaris lumbricoides, Echinococcus granulossus y Strongyloides estercoralis, en la población participante del estudio. Figura 1. Mantenimiento del ciclo biológico de Echinococcus sp. en ratones CD1. A. Aislamiento de protoscolex en quistes hidratídicos de hígado de cerdo. B. Tinción con eosina para estimación de viabilidad. Si el color es rojizo, los protoscolex no son viables (esquina inferior izquierda). C. Inoculación vía intraperitoneal de 2000 protoscolex es ratones CD1. D. Mantenimiento del biomodelo infectado para evaluación del ciclo biológico del parásito. Figura 2. Prevalencia de anticuerpos IgG para A. Placa de ELISA para estrongiloidiasis sin muestras positivas. CP: Control positivo, CN: Control negativo. B. Placa de ELISA para ascariasis con presencia de muestras positivas. CP: Control positivo, CN: Control negativo. C. Prevalencia de anticuerpos IgG para ascariasis (24%), echinococcosis (6%) y estrongiloidiasis (4%). AL: Ascariasis, EG: Echinococcosis y SS: Estrongiloidiasis. Figura 3. Estandarización de PCR multiplex para el diagnóstico de las parasitosis. A. PCR triplex para diagnóstico de Ascaris sp., Taenia sp. y Giardia sp. MM: Marcador de peso molecular de 100 pb. C+G: Control positivo de Giardia sp. C+T: Control positivo Taenia sp. C+A: Control positivo de Ascaris sp. M2: Muestra positiva para los tres parásitos. B. PCR dúplex para Strongyloides y Giardia sp. MM: Marcador de peso molecular de 100 pb. 139: Muestra positiva para Giardia sp. 151 y 152: Muestra positiva para Strongyloides. C. Los integrantes del proyecto presentan sus resultados en las XL Jornadas de Biología en la ciudad de Guayaquil. Figura 4. Prevalencia preliminar obtenida hasta diciembre 2016 para las parasitosis desatendidas consideradas dentro del programa PROPAD en la población objetivo. El parásito más prevalente en niños escolares Blastocystis hominis con un 38.53%. Figura 5. A. Porcentaje de huevos no viables en ensayo de resistencia. Se puede apreciar un incremento del número de huevos no viables a las 48 horas de exposición al fármaco con respecto al control, lo cual podría significar ausencia de resistencia al fármaco. B. Cuantificación de fosfatasa alcalina (marcador de muerte celular) en larvas L3 de S. venezuelensis expuestas a diferentes concentraciones de extracto natural. Se muestra un incremento dosis – dependiente del contenido de fosfatasa alcalina en el medio, lo cual podría deberse a un efecto larvicida del extracto natural. MANTENIMIENTO DEL CICLO BIOLÓGICO DE ECHINOCOCCUS SP EN RATONES CD1. PREVALENCIAS DE ANTICUERPOS IGG PARA ASCARIASIS HUMANA, ECHINOCOCCOSIS Y ESTRONGILOIDIASIS. A B C D A. B. C. Ascaris sp. Taenia sp. Giardia sp. S. stercolaris Giardia sp. A. A. B. A. B. B. C. Figura 5. Resultados nutricionales obtenidos por el proyecto a partir de datos antropométricos en niños escolares. A. Estado nutricional de los participantes del estudio determinado a partir del índice de masa corporal. N: Normal, SP: Sobrepeso, O: Obesidad, E: Emaciado. Se puede observar que el porcentaje de individuos con obesidad y sobrepeso es menor en niños parasitados. B: Investigadores del proyecto procesando muestras de heces y sangre durante una salida de campo, con la finalidad de estudiar la prevalencia parasitaria. g ascariasis, echinococcosis y estrongiloidiasis. us
Transcript of Boletin Informativo N°6 - Gob · Estandarización de PCR multiplex para el diagnóstico de las...
INSPI INFORMAB o l e t í n N ° 6 / M a r z o 2 0 1 7 / P R O P A D / E d i c i ó n # 2
"ENTEROPARASITOSIS EN NIÑOS ESCOLARES DEL ECUADOR: INTERVENCIÓN Y RESULTADOS PRELIMINARES"
D r . L e o p o l d o I z q u i e t a P é r e z
INTRODUCCIÓN
PROYECTO CICLOS BIOLÓGICOS
PROYECTO PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
PROYECTO PRUEBAS MOLECULARES
PROYECTO DE RESISTENCIA ANTIPARASITARIA
PROYECTO PREVALENCIAS
www.investigacionsalud.gob.ec síguenos
Las parasitosis figuran entre las primeras causas de morbilidad en el Ecuador, especialmente en zonas de escasos recursos y difícil acceso a servicios básicos, lo que conlleva a potenciar la relación pobreza-enfermedad.
Desde una perspectiva holística se pretende, a través de este programa, identificar los hechos sucesivos a escala macro y micro social que promueven la reproducción de esta relación en la población ecuatoriana. Se contempla además, el impartir conocimientos para promover prácticas higiénicas enfocadas en prevenir la parasitosis.
El PROPAD es un programa que a través de sus 5 proyectos de investigación, pretende estudiar tanto aspectos sociales como desarrollar innovadoras metodologías de diagnóstico temprano, a más de generar datos estadísticos robustos y actualizados en el campo de las parasitosis; todo esto dentro del marco del cambio de la matriz productiva del país y el Programa Nacional del Buen Vivir.
A continuación se detallan los objetivos y logros de proyectos del programa PROPAD durante el segundo semestre del año 2016.
Objetivo: Estudiar y establecer los ciclos biológicos naturales y experimentales de las parasitosis desatendidas del Ecuador.
Durante este período el proyecto ha trabajado en la implementación y mantenimiento del ciclo biológico del cestodo Echinococcus sp. en ratones CD1.
Mediante la estandarización de la técnica de ELISA se ha realizado el análisis de aproximadamente 1240 muestras séricas de niños de edades entre 10 y 15 años, donde la seropositividad de anticuerpos IgG mostrada a las diferentes proteínas parasitarias se indican en la Figura 2.
Objetivo: Estandarizar e implementar pruebas moleculares para el diagnóstico y profilaxis temprana de las parasitosis.
El proyecto ha participado en eventos de transferencia de conocimiento donde ha compartido los resultados que se han obtenido hasta el momento con la comunidad. Ha trabajado también en la estandarización de técnicas moleculares de diagnóstico de las parasitosis.
Objetivo: Determinar la prevalencia general de las parasitosis desatendidas del Ecuador.
En el segundo semestre del 2016, el proyecto de prevalencias del programa PROPAD visitó los cantones: Guano, Riobamba, Pedro Vicente Maldonado, Pueblo Viejo, Buena Fe, Guayaquil, Naranjito, El Carmen y Santo Domingo, en donde se realizaron pruebas para el diagnóstico de las parasitosis en niños escolares. La prevalencia de las parasitosis en niños escolares se muestra en la figura 4.
Objetivo: Estudiar la resistencia antiparasitaria en los esquemas terapéuticos nacionales y el efecto antiparasitario de extractos de plantas nativas del Ecuador.
Durante este período el proyecto de resistencia antiparasitaria ha trabado en el estudio del efecto antihelmíntico de extractos de plantas nativas del Ecuador y en el estudio de la tasa de resistencia a fármacos en los parásitos recolectados en campo.
Objetivo: Realizar un diagnóstico temprano de parasitosis mediante pruebas inmunológicas.
Durante este período, el proyecto de pruebas inmunológicas ha estandarizado tres pruebas de inmunodiagnóstico (ELISA) para el análisis de infecciones por Ascaris lumbricoides, Echinococcus granulossus y Strongyloides estercoralis, en la población participante del estudio.
Figura 1. Mantenimiento del ciclo biológico de Echinococcus sp. en ratones CD1. A. Aislamiento de protoscolex en quistes hidratídicos de hígado de cerdo. B. Tinción con eosina para estimación de viabilidad. Si el color es rojizo, los protoscolex no son viables (esquina inferior izquierda). C. Inoculación vía intraperitoneal de 2000 protoscolex es ratones CD1. D. Mantenimiento del biomodelo infectado para evaluación del ciclo biológico del parásito.
Figura 2. Prevalencia de anticuerpos IgG para ascariasis, echinococcosis y estrongiloidiasis. A. Placa de ELISA para estrongiloidiasis sin muestras positivas. CP: Control positivo, CN: Control negativo. B. Placa de ELISA para ascariasis con presencia de muestras positivas. CP: Control positivo, CN: Control negativo. C. Prevalencia de anticuerpos IgG para ascariasis (24%), echinococcosis (6%) y estrongiloidiasis (4%). AL: Ascariasis, EG: Echinococcosis y SS: Estrongiloidiasis.
Figura 3. Estandarización de PCR multiplex para el diagnóstico de las parasitosis. A. PCR triplex para diagnóstico de Ascaris sp., Taenia sp. y Giardia sp. MM: Marcador de peso molecular de 100 pb. C+G: Control positivo de Giardia sp. C+T: Control positivo Taenia sp. C+A: Control positivo de Ascaris sp. M2: Muestra positiva para los tres parásitos. B. PCR dúplex para Strongyloides y Giardia sp. MM: Marcador de peso molecular de 100 pb. 139: Muestra positiva para Giardia sp. 151 y 152: Muestra positiva para Strongyloides. C. Los integrantes del proyecto presentan sus resultados en las XL Jornadas de Biología en la ciudad de Guayaquil.
Figura 4. Prevalencia preliminar obtenida hasta diciembre 2016 para las parasitosis desatendidas consideradas dentro del programa PROPAD en la población objetivo. El parásito más prevalente en niños escolares Blastocystis hominis con un 38.53%.
Figura 5. A. Porcentaje de huevos no viables en ensayo de resistencia. Se puede apreciar un incremento del número de huevos no viables a las 48 horas de exposición al fármaco con respecto al control, lo cual podría significar ausencia de resistencia al fármaco. B. Cuantificación de fosfatasa alcalina (marcador de muerte celular)
en larvas L3 de S. venezuelensis expuestas a diferentes concentraciones de extracto natural. Se muestra un incremento dosis – dependiente del contenido de fosfatasa alcalina en el medio, lo cual podría deberse a un efecto larvicida del extracto natural.
MANTENIMIENTO DEL C ICLO B IOLÓG ICO DE ECH INOCOCCUS SP EN RATONES CD1 .
PREVALENCIAS DE ANTICUERPOS IGG PARA ASCARIASIS HUMANA, ECHINOCOCCOSIS Y ESTRONGILOIDIASIS.
A B C D
A. B. C.
Ascaris sp. Taenia sp. Giardia sp.
S. stercolaris Giardia sp.
A.
A. B.
A.B.
B. C.
Figura 5. Resultados nutricionales obtenidos por el proyecto a partir de datos antropométricos en niños escolares. A. Estado nutricional de los participantes del estudio determinado
a partir del índice de masa corporal. N: Normal, SP: Sobrepeso, O: Obesidad, E: Emaciado. Se puede observar que el porcentaje de individuos con obesidad y sobrepeso es menor en niños parasitados. B: Investigadores del proyecto
procesando muestras de heces y sangre durante una salida de campo, con la finalidad de estudiar la prevalencia parasitaria.
g
ascariasis, echinococcosis y estrongiloidiasis.
us
