VEQ in Biologia Molecolare ciclo 2013

HBV DNA

HIV RNA

HCV RNA

Genotipo HCV

Firenze 21 ottobre 2014 Maria Grazia Colao

VEQ 2013

2

7

1

54

1

2

14

4

3

2

4

2

3

517

112 partecipanti

Metodi utilizzati

Gruppi di elaborazione dati

Risultati QUALITATIVI

TMA o PCR

Risultati QUANTITATIVI

bDNA

PCR End Point

PCR Real Time Abbott

PCR Real Time Taqman Roche

Altre amplificazioni Real Time

Gruppi di elaborazione dati

Altre Real Time

Ditta Strumento per estrazione

Strumento per amplificazione

Genedia Rotor Gene 3000

Artus/Qiagen Rotor Gene 3000

Qiagen QiaCube Rotor Gene 3000

Bio Merieux Easy Mag RT PCR AppleraSystem

Siemens Versant Sample preparation

Versant K PCR

HCV RNA VEQ 2013

Campione 2 : Campione 2 : genotipo 1agenotipo 1a 108 risultati 108 risultati Campione 5 : Campione 5 : genotipo 2a2cgenotipo 2a2c 108 risultati * 108 risultati * risultati quantitativi espressi in UI/ mlrisultati quantitativi espressi in UI/ ml

Campione 8 : Campione 8 : genotipo 1a genotipo 1a 108 risultati **108 risultati **

*1 risultato inf. alla soglia di sensibilità della metodica utilizzata e **1 ris. NEGATIVO

HCV RNA VEQ 2013

VEQ 2013

HCV RNA VEQ 2013

HCV RNA VEQ 2013

VEQ 2013

HCV RNA VEQ 2013

HCV RNA VEQ 2013

VEQ 2013

HBV DNA VEQ 2013

Campione 3 : Campione 3 : 100 risultati 100 risultati Campione 6 : Campione 6 : 102 risultati 102 risultati risultati quantitativi espressi in UI/ mlrisultati quantitativi espressi in UI/ ml

Campione 9 : Campione 9 : 93 risultati 93 risultati

HBV DNA VEQ 2013

HBV DNA VEQ 2013

HBV DNA VEQ 2013

HIV RNA VEQ 2013

Campione 1 : Campione 1 : 81 risultati 81 risultati Campione 4 : Campione 4 : Campione 7 : Campione 7 :

Campione 1 : Campione 1 : 81 risultati 81 risultati Campione 4 : Campione 4 : 77 risultati *77 risultati * risultati quantitativi espressi in copie/ mlrisultati quantitativi espressi in copie/ ml

Campione 7 : Campione 7 : 75 risultati 75 risultati

*4 risultati neg/ inferiori alla soglia di sensibilità della metodica utilizzata

HIV RNA VEQ 2013

HIV RNA VEQ 2013

HIV RNA VEQ 2013

HIV RNA VEQ 2013

I test di Biologia Molecolare

nelle infezioni delle

epatiti (HBV e HCV) e di HIV

Infezioni virali croniche

Metodi molecolari

Identificare l’agente infettivo

Quantificare la carica virale

Caratterizzare il genotipo

Identificare le variazioni genetiche

Test molecolari NAT

Utilizzati per lo screening dei donatori

Molto sensibili

Risultato qualitativo

Test molecolari NAT

Sensibilità analitica Procleix Tigris System (Chiron)

Standard Test Probabilità di rilevamento (limiti fiduciali 95%)

OMS HIV1 (97/650) dHIV 1 Ultrio Plus 19.6 (15.6-27.6) UI/ml 11.8 (9.4-16.6) copie/ml

OMS HCV (96798) dHCV Ultrio Plus 3.3 (2.6-4.6) UI/ml

OMS HBV (97/750) dHBV Ultrio Plus 2.5 (2.0-3.7) UI/ml

Sensibilità analitica TaqScreen MPX (Roche)

Standard Test Probabilità di rilevamento (limiti fiduciali 95%)

II Standard OMS HIV 1 gruppo M 50.3 (43.3-59.9) UI/ml 30.2 (26.0- 35.9) copie/ml

II Standard OMS HCV 6.8 (5.8-8.3) UI/ml

II Standard OMS HBV 2.3 (2.0-2.8) UI/ml

Rischio Residuo

Test molecolari per HIV

Diagnosi precoce

Inquadramento e gestione del paziente

Decisione al trattamento

Monitoraggio terapia

Valutazione della farmacoresistenza

HIV

Solo una diagnosi precoce ci consente di controllare la trasmissione

Non abbiamo un vaccino

Disponiamo di molti farmaci ma non eradichiamo il virus

Obiettivo da raggiungere “soppressione virologica”

Limita i danni provocativirus

Limita l’insorgenza di mutazioni genetiche che rendono il virus resistente ai farmaci e che proprio la terapia farmacologica selezionerebbero

Test molecolari per HIV RNA

1° gen

2° gen

3° gen

Test molecolari Real Time

Utilizzati per il monitoraggio

Sensibilità e specificità elevata

Semplicità d’uso e basso rischio di contaminazione

Accuratezza ed ampio range dinamico (101-109)

Risultati: quantitativi e “qualitativi”

Test Molecolari Real Time: possibili risultati

Valore > LLoQ e all’interno del range dinamico del test

Risultato quantitativo

Valore < LLoQ

TARGET NOT DETECTED

< LLoQ (DETECTABLE)

Che peso può avere questa distinzione?

HIV RNA e VIREMIA RESIDUA

From Hilldorfer BB et al. Curr HIV/AIDS Rep 2012

Cinetica della viremia plasmatica in ART

HIV RNA - VIREMIA RESIDUA e rischio di rebound virologico

2012

2012

HIV RNA - VIREMIA RESIDUA e rischio di rebound virologico

Test molecolari per HBV e HCV

HBV Test qualitativo

Test quantitativo

Genotipizzazione

Test per la valutazione della farmacoresistenza

HCV Test qualitativo

Test quantitativo

Genotipizzazione

Test per la valutazione della farmacoresistenza

Test molecolari per HBV DNA

Diagnosi precoce

Inquadramento e gestione del paziente

Identificare portatori inattivi/attivi

Diagnosticare epatite B occulta

Decisione al trattamento

Monitoraggio terapia

Linee guida EASL 2012

HBV DNA:Monitoraggio della terapia

HBV DNA:Monitoraggio della terapia

Lo scopo della terapia è raggiungere e mantenere l’inibizione della replicazione virale

Possibile l’insorgenza di mutanti resistenti

ha importanza la valutazione della viremia residua?

Trattamento HBV e attività antivirale

Potenza: rapidità con cui un farmaco induce la soppressione della replica virale

Barriera genetica: n di mutazioni necessarie al virus per replicare in presenza di

quel farmaco bassa barriere genetica: alta probabilità di sviluppare resistenza

HBV DNA e VIREMIA RESIDUA

Test molecolari per HCV RNA

Diagnosi precoce

Inquadramento e gestione del paziente

Decisioni per il trattamento (valutare anche genotipo)

Monitoraggio terapia Rapida

Completa

Sostenuta

HCV terapia: obiettivo

Linee guida Europee 2014

RVG: Response Guided Therapy

HCV RNA:Monitoraggio della terapia

Lo scopo della terapia per HCV è raggiungere e mantenere una SVR

ha importanza la valutazione della viremia residua?

HCV RNA e VIREMIA RESIDUA

HCV terapia standard e nuove terapie

Terapia Standard Peg IFN + RBV Durata e dosi differenti a seconda del genotipo virale

Risposte variabili a seconda del genotipo insoddisfacente per g1 (30-50%)

Triplice terapia Peg IFN + RBV + 1DAA Migliora la risposta a g1 (60-70%)

Profilo di tollerabilità complesso ed effetti collaterali

Rapido emergere di resistenza farmacologica

Monitoraggio a tempi definiti e tempi rapidi di risposta

Necessità di aderenza alle stopping rules

HCV RNA: confronto tra metodi

Cobas TaqMan(Roche Molecular System)

Versant kPCR(Siemens Healthcare Diagnostic)

Not Detected< 15 IU/mL (Detected)

≥ 15 IU/mL

Not Detected 9 12 1

< 15 IU/mL (Detected)

3 12 2

≥ 15 IU/mL 2 19 82

Turriziani - Università La Sapienza Roma

Grazie per l’attenzione