1

Enzimologia clinica

2

Scopo

valutare la concentrazione degli enzimi nei fluidi corporei a fini diagnostici

Enzimi: catalizzatori biologici aumentano la velocità di una reazione senza essere consumati

3

Cinetica Enzimatica

Enzimi a substrato singoloEs. Amilasi, lipasi

Enzimi a substrati multipli

E + S ES EP E + P

4

reactants

products

Fre

e E

nerg

y G*

Go

Free energyof activation

Free energychange

uncatalyzed

reactants

productsFre

e E

nerg

y

Reaction Progress

catalyzed

Cinetica Enzimatica

5

Velocità di reazione

Influenzata da concentrazione di

substrato concentrazione di

enzima temperatura pH cofattori coenzimi attivatori inibitori

6

Legge di Michaelis-Menten

Basse concentrazioni Reazione di primo ordine

Alte concentrazioni Reazione di ordine 0

Costante di Michaelis-Menten è la concentrazione di

substrato che corrisponde ad una velocità di reazione pari al 50% del massimo

7

Enzimi: specificità di substrato

8

Localizzazione Enzimatica

Liberi nelle cellule di diversi tessuti ed organi

Confinati in particolari strutture all’interno delle cellule stesse

In un determinato tessuto od organo specifico enzimi organo specifici

9

Gli enzimi nel sangue spesso non hanno un ruolo fisiologico presenti anche in situazioni normali

invecchiamento fisiologico turnover cellulare

eliminati da sistema reticolo endoteliale Rene (es. amilasi)

livello di attività normale nel siero è funzione di velocità di rilascio clearance

emivita 2 ore (CK-BB) 170 ore (ALP placentare)

10

Aumento degli enzimi nel plasma:

1. necrosi o danno cellulare citolisi fuoriuscita enzimi Fattori tossici Ischemia

2. aumentato turnover cellulare Accrescimento Rigenerazione cellulare Neoplasie Gravidanza

3. Induzione enzimatica Farmaci (es.

Fenobarbital, alcool) Patologie (es. colestasi)

4. Ostruzione dei dotti escretori enzimi presenti nelle secrezioni esocrine si trovano nel plasma

11

Liberazione enzimi nel circolo

la velocità di comparsa nel sangue dipende dapassaggio nel

sangue diretto attraverso il circolo

linfatico localizzazione

intracellulare citoplasmatica mitocondriale

12

Fluidi utilizzati

sierosangueplasmaorineliquor cefalorachidianoversamentifluidi extracellulari

13

usi

patologie epatichepatologie cardiachepatologie muscolaripatologie pancreatichepatologie osseepatologie autoimmunipatologie gastroentericheneoplasie

14

controllo di ed ottimizzazione dipH temperatura

concentrazione di substrato che permetta di ottenere una cinetica di grado 0

metodiche immunologiche

Metodiche di analisi

15

Metodiche enzimatichecontrollo di ed ottimizzazione di

pH temperatura

concentrazione di substrato che permetta di ottenere una cinetica di grado 0

metodiche immunologiche

Metodiche di analisi