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CRIOCONSERVAZIONE OVOCITARIA:
Congelamento lento e vitrificazioneDott. Furlan Valentina
22 marzo 2010
PerchéPerché ricorrere al Congelamento Ovocitario?
Alternativa (obbligata) al congelamento embrionale LEGGE
40/2004 art 14 p.to 1: “è vietata la crioconservazione e la sopressione di embrioni, fermo
restando quanto previsto dalla legge 22 maggio 1978, n.194.”
Ovociti sovranumerari: LEGGE 40/2004 art 14 p.to 2: “le tecniche di
pruduzione degli embrioni, tenuto conto dell’evoluzione tecnico-scentifica e di quanto previsto dall’articolo 7, comma 3, non devono creare un numero di embrioni superiore a quello strettamente necessario ad un unico e contemporaneo impianto, comunque non superiore a 3.”
Preservare la fertilità in pazienti oncologiche;
Valutazione dei parametri di selezione ovocitaria e di numero di ovociti neccessari a garantire un trasferimento.
Valutazione clinica delle tecniche:GravidanzeDi impiantoGruppo di pazienti
Scopo della ricerca:Dati ISSCongelamento lento12% grav. Cliniche31% aborti
Dati ISSFivet /icsi 24% grav. Cliniche18% aborti
Caratteristica morfologica
Globulo polare
Citoplasma zona di addensamento
Citoplasma vacuolato
Congelamento lentoValutazione della tecnica:
N°ovociti crioconservati
145
N°ovociti scongelati 145
N°ovociti ritrovati 134
92 %
N°ovociti sopravvisuti 92 68 % (su ovociti trovati)
63 %
(su ovociti crio)
N°ovociti degenerati 16 38 % Nella prima soluzione
26 62 % Alla fine dello scong.
Congelamento lentoValutazione della tecnica:
N°ovociti sopravvisuti
63 % (su ovociti crioconservati)
Globulo polare congelamento Sopravvissuti g.p
g.p integro 59 (41%) 48 (81%)
g.p rugoso 43 (29%) 20 (46%)
g.p frammentato 43 (30%) 5 (11%)
citoplasma congelamento sopravvissuti
Normale 38 (65%) 32 (84%)
Vacuoli 8 (14%) 2 (25%)
Zone addensamento 12 (21 %) 3 (25%)
No IceThanks !
Vitrificazione Valutazione della tecnica:
N°ovociti crioconservati
109
N°ovociti scongelati 109
N°ovociti ritrovati 102
93 %
N°ovociti sopravvisuti 87 85% (su ovociti trovati)
80% (su ovociti crio)
Vitrificazione Sistema aperto: contatto diretto con azotoValutazione della tecnica:
N°ovociti sopravvisuti
80% (87 su 109) (su ovociti vitrificati)
Globulo polare congelamento presenza g.p
g.p integro 65 (59%) 61 (93%)
g.p rugoso 27 (25%) 20 (74%)
g.p frammentato 17 (15%) 4 (23%)
citoplasma congelamento sopravvissuti
Normale 38 (66%) 33 (86%)
Vacuoli 9 (16%) 2 (22%)
Zone addensamento 10 (17 %) 3 (30%)
Conclusioni Congelamento lento:
Vitrificazione:
Minimo 6 ovociti maturi sovrannumerariCon globulo polare integroCon citoplasma normale
Minimo 4/5 ovociti maturi sovrannumerariCon globulo polare integro o rugosoCon citoplasma normale
63% sopravvivenza81% ov. Con g.p.integro84% ov. Con cit. normale
80% sopravvivenza93% ov. Con g.p.integro e 74% g.p.rugoso86% ov. Con cit. normale
Congelamento lento risultati da gennaio 2008 a dicembre 2009
Cicli congelamento Cicli a fresco
Cicli congelati 59
Cicli scongelati 39 Cicli pick-up 110
Ov congelati 472 Ovociti raccolti 1067
Ov.scong 246 Ovociti maturi 842(79%)
Ov sopravv 152(62%)
Ov.inseminati 114 Ov.inseminati 307
Ov.fertilizzati normali
93 (81,5%)
Ov.fertilizzati 283 (92%)
Embrioni trasferiti 93 Embrioni trasferiti
278
Embrioni di B.Q 57 (61%) Embrioni di B.Q 195 (70%)
Congelamento lento Dati clinici
Cicli congelamento Cicli a fresco
Cicli scongelati
39
Cicli trasferiti 38
Gravidanze 8 (21%) 33%
Grav.biochi 1 17%
Grav.cliniche 7 (18%) 28%
Aborti 2 (28%) 22%
Grav.evolutive 5 (13%) 21%
Impianto 9/93 (9,6%) 12%
Dati ISS12% grav. Cliniche31% aborti
Congelamento lentoValutazioni per fattore maschile
Valutazione per fattore età
Fattore maschile
Cicli sc
% sopr %fert. %grav
normozoospermia 10 68% 87% 3 ( 30% cl)
teratozoospermia 12 77% 86% 1(8% cl)
Oligozoospermia 14 56% 66% 3(21% cl)
Azoospermia 2 57% 83% 0
età <35 >35<38
>38
Cicli trasferiti 19 13 6
Gravidanze 6 (31%)
2 (15%)
0
Grav.biochi 1 0 0
Grav.cliniche 5 (26%)
2 (15%)
0
Aborti 2 (40%)
0 0
Grav.evolutive 3 (16%)
2 (15%)
0
No congelamento azospermici
No congelamento sopra i 38 anni
vitrificazione risultati da gennaio a dicembre 2009
Cicli congelamento Cicli a fresco
Cicli congelati 25
Cicli scongelati 10 Cicli pick-up 110
Ov congelati 179 Ovociti raccolti 1067
Ov.scong 54 Ovociti maturi 842(79%)
Ov sopravv 43 (79.6%)
Ov.inseminati 34 Ov.inseminati 307
Ov.fertilizzati normali
28(83%) Ov.fertilizzati 283 (92%)
Embrioni trasferiti 28 Embrioni trasferiti
278
Embrioni di B.Q 17(60%) Embrioni di B.Q 195 (70%)
vitrificazione Dati clinici
Cicli congelamento Cicli a fresco
Cicli scongelati
10
Cicli trasferiti 10
Gravidanze 2 (20%) 33%
Grav.biochi 0 17%
Grav.cliniche 2 (20%) 28%
Aborti 0 22%
Grav.evolutive 2 (20%) 21%
Impianto 3/17 (17,5%)
12%
Conclusioni
Minimo 6 ovocitiCon globulo polare
integroCon citoplasma
normale
Congelamento lento Vitrificazione
Minimo 4/5 ovocitiCon globulo polare
integro o rugosoCon citoplasma
normale
18% grav.clin28% abortoNo pz azoospermiciNo pz al di sopra di 38 anni
20% grav.clin 0% aborto
Dati ISS12% grav. Cliniche31% aborti
Congelamento lento o vitrificazione?Congelamento lento o vitrificazione?lento: lenta disidratazione
rischio di formazione di cristalli richiesto strumento
lento controllo del congelamento bassi livelli di crioprotettore (meno tossicità) buoni risultati standardizzato
vitrificazione congelamento veloce alti livelli di crioprotettore (tossicità?) rischi di contaminazione azoto
non formazioni di cristalli non richiesto strumento ottimi risultati ma non standardizzati