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Procedura di verifica per le molecole reattive nell’ASEATM

Le molecole reattive nell’ASEATM sono prodotte da un complicato procedimento elettrochimico brevettato che riduce ed ossida la soluzione salina di base, creando un equilibrio di diverse note molecole reattive. Queste molecole sono stabili nell’ASEATM e sono misurabili usando metodi analitici standard. Tali molecole reattive sono le stesse prodotte naturalmente nelle cellule viventi e sono state misurate con successo negli ultimi 30 anni grazie all’uso di alcuni coloranti

fluorescenti che agiscono come indicatori. La verifica delle molecole reattive nell’ASEATM viene fatta regolarmente utilizzando tre di questi stessi indicatori fluorescenti standard, ovvero la R- ficoeritrina (RPE), l’Aminofillina fluoresceina (APF) e l’idrossifenile fluoresceina (HPF). Queste molecole fluorescenti cambiano fisicamente forma (e luminosità) quando vengono a contatto con delle molecole

reattive specifiche. Questi cambiamenti morfologici aumentano o riducono la fluorescenza degli indicatori a determinate

frequenze luminose. Questo cambiamento di fluorescenza viene quindi misurato usando uno spettrofluorimetro che

misura l’intensità dello spettro di luce emesso dagli indicatori.

Descrizione degli indicatori:

Le due nuove sonde, l’Aminofillina fluoresceina (APF) e l’idrossifenile fluoresceina (HPF), sviluppate da Tetsuo Nagano ed altri (1), sono calibrate per il rilevamento di ossigeno altamente reattivo (hROS). Entrambe le sonde mostrano scarsa reattività verso altre forme di ROS. Principio Assay: I cambiamenti morfologici nelle molecole APF e HPF cambiano le proprietà fluorescenti. Le proprietà spettrali del colorante fluorescente ficobiliproteina. Fluor Peso Massima Massima molecolare eccitazione (nm) emissione (nm) R- FICOERITRINA (RPE) 240.000 480, 545, 565 578

Figura 1: Descrizione dei tre indicatori usati per misurare la concentrazione di molecole reattive nell’ASEATM. La

tabella in basso elenca alcune delle proprietà per l’R-PE.

Pertanto, il cambiamento nella fluorescenza degli indicatori prima e dopo l’esposizione a queste molecole reattive indica

l’esistenza di tali molecole reattive. Ciascuno di questi tre indicatori è sensibile a determinati tipi di molecole reattive.

Tutti questi coloranti fluorescenti sono altamente resistenti a falsi positivi e sono stati studiati in modo approfondito.

L’ASEATM, LLC si avvale di analisti altamente professionali e di uno spettrofluorimetro NanodropTM 3300, della Thermo Fischer Scientific, per misurare regolarmente la quantità di molecole reattive contenute in ogni lotto di ASEATM. In un laboratorio indipendente sul luogo, quasi ogni giorno, uno o più di questi indicatori fluorescenti vengono esposti all’ASEATM e quindi la concentrazione delle molecole reattive nell’ASEATM viene misurata. Come parte del processo di Controllo Qualità, la concentrazione delle molecole reattive nel “Gold Standard” per

l’ASEATM è misurato insieme ad ogni campione. I lotti che non contengono una concentrazione di molecole reattive

sufficiente per il Gold Standard vengono respinte e scartate. Di converso, la soluzione salina di base ha sempre misurato

una quantità nulla di molecole reattive prima dell’avviamento del processo elettrochimico brevettato.

La figura 2 è un fermo immagine di un processo di calibrazione del Nanodrop 3300 che mostra il responso dell’indicatore R-PE a varie concentrazioni di ASEATM. Le differenze nella concentrazione delle molecole reattive sono facilmente visibili sui tracciati. Fino a tre misure vengono prese su ciascuna concentrazione di campione per garantire omogeneità. La soluzione salina di controllo non mostra cambiamenti nella fluorescenza, indicando che le molecole reattive

non esistono nella soluzione salina di base. Man mano che aumenta la concentrazione di ASEATM (diluita dalla soluzione salina di base), il cambiamento nella fluorescenza aumenta.

Figura 2. Fermo immagine che mostra il responso dell’indicatore R-PE a varie concentrazioni di ASEATM, mappato per 15 singole misure (3 per campione), superimposte. Le concentrazioni sono state registrate durante un test di calibrazione condotto nell’aprile 2008. La soluzione salina non dà alcun responso e le cinque diverse concentrazioni di ASEATM mostrano risultati chiaramente definiti.

L’altezza dei risultati, illustrati alla figura 2, indica la quantità di molecole reattive esistenti nel campione. I campioni da ogni lotto vengono misurati a confronto con il “Gold Standard”. Pertanto, garantiamo che ogni lotto di ASEATM conterrà la quantità e l’omogeneità giusti di molecole reattive.

Nel laboratorio Controllo Qualità si rispettano i più alti standard di eccellenza scientifica. I metodi scientifici e le procedure sono stati sviluppati da un Ph.D. in fisica atomica/medica. Le attrezzature sono calibrate regolarmente e gli indicatori sono testati contro gli standard conosciuti; i tecnici sono addestrati a riconoscere i possibili problemi. L’esistenza e la concentrazione delle molecole reattive nell’ASEATM sono stati chiaramente stabiliti. Vi sono validi dati scientifici che verificano la concentrazione delle molecole reattive che esistono in ogni bottiglia di ASEATM.

Il Dr. Gary L. Samuelson, Ph.D. (Fisica atomica e medica) è un consulente indipendente per varie aziende nel settore

delle scienze della salute, specializzato nelle strutture non a particelle sicure e stabili e nelle molecole di segnalazione

ossidoriduttiva. Egli aiuta diverse aziende a costruire una piattaforma di ricerca scientifica, con varie tecnologie

emergenti e promettenti.