VALUTAZIONE DELLA PLOIDIA DEL DNA IN CARCINOMI E LESIONI POTENZIALMENTE

MALIGNE DEL CAVO ORALE: CONFRONTO FRA CITOMETRIA A FLUSSO E STATICA

A. Marsico; I. Rostan; M. Pentenero; S. Gandolfo; R. Navone

La sopravvivenza del carcinoma squamoso orale non solo è più bassa di quella dei

tumori più comuni, ma, soprattutto, non è migliorata negli ultimi 25 anni, dal

momento che questo tumore è spesso diagnosticato in stadi avanzati (1)

(1) MASHBERG A et al: Appearance, site of occurrence, and physical and clinical

characteristics of oral carcinoma in Torino (Italy). Cancer 63: 2522-7, 1989

La sopravvivenza del carcinoma squamoso orale non solo è più bassa di quella dei

tumori più comuni, ma, soprattutto, non è migliorata negli ultimi 25 anni, dal

momento che questo tumore è spesso diagnosticato in stadi avanzati (1)

(1) MASHBERG A et al: Appearance, site of occurrence, and physical and clinical

characteristics of oral carcinoma in Torino (Italy). Cancer 63: 2522-7, 1989

Il ritardo diagnostico può Il ritardo diagnostico può dipendere nella difficoltà dipendere nella difficoltà

diagnostica, sicuramente la diagnostica, sicuramente la variabilità della diagnosi variabilità della diagnosi istologica nelle lesioni istologica nelle lesioni

squamose orali è più alta che squamose orali è più alta che in altre sedi in altre sedi (1(1,, 2) 2)

1.1. Karabulut A et al: Observer variability in the Karabulut A et al: Observer variability in the histologic assessment of oral premalignant histologic assessment of oral premalignant

lesions.lesions.J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995

2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating 2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating oral epithelial dysplasia, carcinoma oral epithelial dysplasia, carcinoma in situin situ and and

initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, 19851985

Il ritardo diagnostico può Il ritardo diagnostico può dipendere nella difficoltà dipendere nella difficoltà

diagnostica, sicuramente la diagnostica, sicuramente la variabilità della diagnosi variabilità della diagnosi istologica nelle lesioni istologica nelle lesioni

squamose orali è più alta che squamose orali è più alta che in altre sedi in altre sedi (1(1,, 2) 2)

1.1. Karabulut A et al: Observer variability in the Karabulut A et al: Observer variability in the histologic assessment of oral premalignant histologic assessment of oral premalignant

lesions.lesions.J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995J Oral Pathol Med 24: 198-200, 1995

2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating 2. Pindborg JJ et al: Subjectivity in evaluating oral epithelial dysplasia, carcinoma oral epithelial dysplasia, carcinoma in situin situ and and

initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, initial carcinoma. J Oral Pathol 14:698-708, 19851985

Malgrado le nuove teconologie Malgrado le nuove teconologie (liquid-based and computer (liquid-based and computer

assisted cytology, AgNORs, ICC, assisted cytology, AgNORs, ICC, etc.) abbiano migliorato la etc.) abbiano migliorato la

sensibilità e specificità della sensibilità e specificità della citologia esfoliativa orale per la citologia esfoliativa orale per la diagnosi di displasia/neoplasia, diagnosi di displasia/neoplasia,

alcuni casi restano non alcuni casi restano non diagnosticati(1, 2)diagnosticati(1, 2)

1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for 1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for the diagnosis of oral squamous dysplasia and the diagnosis of oral squamous dysplasia and carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004

2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral 2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral cytology on the diagnosis of oral dysplasia and cytology on the diagnosis of oral dysplasia and

carcinoma. Cytopathology in presscarcinoma. Cytopathology in press

Malgrado le nuove teconologie Malgrado le nuove teconologie (liquid-based and computer (liquid-based and computer

assisted cytology, AgNORs, ICC, assisted cytology, AgNORs, ICC, etc.) abbiano migliorato la etc.) abbiano migliorato la

sensibilità e specificità della sensibilità e specificità della citologia esfoliativa orale per la citologia esfoliativa orale per la diagnosi di displasia/neoplasia, diagnosi di displasia/neoplasia,

alcuni casi restano non alcuni casi restano non diagnosticati(1, 2)diagnosticati(1, 2)

1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for 1. Navone R et al: Usefulness of oral cytology for the diagnosis of oral squamous dysplasia and the diagnosis of oral squamous dysplasia and carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004carcinoma. Minerva Stomatol 53: 77-86, 2004

2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral 2. Navone R et al: The impact of liquid-based oral cytology on the diagnosis of oral dysplasia and cytology on the diagnosis of oral dysplasia and

carcinoma. Cytopathology in presscarcinoma. Cytopathology in press

““La diagnosi istocitologica di La diagnosi istocitologica di displasia indica nulla di più di una displasia indica nulla di più di una

lesione che ha un aumentato lesione che ha un aumentato rischio di trasformazione maligna, rischio di trasformazione maligna,

tuttavia questo dato non può tuttavia questo dato non può essere usato come indicatore essere usato come indicatore prognostico affidabile su ogni prognostico affidabile su ogni

singolo caso. Sono richiesti studi su singolo caso. Sono richiesti studi su potenziali biomarcatori per potenziali biomarcatori per

ottenere una maggiore ottenere una maggiore obbiettività”obbiettività”

Abbey LM et al: Intraexaminer and Abbey LM et al: Intraexaminer and interexaminer reliability in the diagnosis of oral interexaminer reliability in the diagnosis of oral

dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: 188-191, 1995)188-191, 1995)

““La diagnosi istocitologica di La diagnosi istocitologica di displasia indica nulla di più di una displasia indica nulla di più di una

lesione che ha un aumentato lesione che ha un aumentato rischio di trasformazione maligna, rischio di trasformazione maligna,

tuttavia questo dato non può tuttavia questo dato non può essere usato come indicatore essere usato come indicatore prognostico affidabile su ogni prognostico affidabile su ogni

singolo caso. Sono richiesti studi su singolo caso. Sono richiesti studi su potenziali biomarcatori per potenziali biomarcatori per

ottenere una maggiore ottenere una maggiore obbiettività”obbiettività”

Abbey LM et al: Intraexaminer and Abbey LM et al: Intraexaminer and interexaminer reliability in the diagnosis of oral interexaminer reliability in the diagnosis of oral

dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: dysplasia. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 80: 188-191, 1995)188-191, 1995)

““Tre problemi maggiori sono collegati Tre problemi maggiori sono collegati all’importanza della displasia epiteliale nel all’importanza della displasia epiteliale nel

predire l’evoluzione maligna”predire l’evoluzione maligna”

1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia 1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente

soggettiva”soggettiva”

2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una 2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una lesione maligna sia ben documentato dove è presente lesione maligna sia ben documentato dove è presente displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno

maligne”maligne”

3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la 3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la displasia epiteliale non era stata diagnosticata in displasia epiteliale non era stata diagnosticata in

precedenti biopsie”precedenti biopsie”

Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: significancesignificance

of clinical, histopathological, and molecular biological of clinical, histopathological, and molecular biological characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003

““Tre problemi maggiori sono collegati Tre problemi maggiori sono collegati all’importanza della displasia epiteliale nel all’importanza della displasia epiteliale nel

predire l’evoluzione maligna”predire l’evoluzione maligna”

1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia 1.“Sebbene i criteri per formulare una diagnosi di displasia siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente siano ben codificati, la diagnosi finale è essenzialmente

soggettiva”soggettiva”

2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una 2. “Sebbene un incremento del rischio di sviluppare una lesione maligna sia ben documentato dove è presente lesione maligna sia ben documentato dove è presente displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno displasia epitaliale, non tutte quete lesioni diverranno

maligne”maligne”

3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la 3. “Il carcinoma può svilupparsi anche da lesioni”in cui la displasia epiteliale non era stata diagnosticata in displasia epiteliale non era stata diagnosticata in

precedenti biopsie”precedenti biopsie”

Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: Reibel J: Prognosis of oral pre-malignant lesions: significancesignificance

of clinical, histopathological, and molecular biological of clinical, histopathological, and molecular biological characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003characteristics. Crit Rev Oral Biol Med 14: 47-62, 2003

Il contenuto di DNA cellulare Il contenuto di DNA cellulare (ploidia) (ploidia) è considerato un è considerato un

marcatore affidabile per predire marcatore affidabile per predire l’evoluzione di lesioni orali l’evoluzione di lesioni orali

potenzialmente maligne (PMLs) potenzialmente maligne (PMLs) (1, 2)(1, 2)

1.1. Greenspan DGreenspan D et al: The white lesion that kills – et al: The white lesion that kills – Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.

N Engl J Med 350: 1382-1384, 2004N Engl J Med 350: 1382-1384, 20041.1. Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of

DNA ploidy using oral scrapings obtained by DNA ploidy using oral scrapings obtained by curette. 11th International Congress on Oral curette. 11th International Congress on Oral

Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006

Il contenuto di DNA cellulare Il contenuto di DNA cellulare (ploidia) (ploidia) è considerato un è considerato un

marcatore affidabile per predire marcatore affidabile per predire l’evoluzione di lesioni orali l’evoluzione di lesioni orali

potenzialmente maligne (PMLs) potenzialmente maligne (PMLs) (1, 2)(1, 2)

1.1. Greenspan DGreenspan D et al: The white lesion that kills – et al: The white lesion that kills – Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.Aneuploid dysplastic oral leukoplakia.

N Engl J Med 350: 1382-1384, 2004N Engl J Med 350: 1382-1384, 20041.1. Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of Pentenero M et al: Flow cytometric analysis of

DNA ploidy using oral scrapings obtained by DNA ploidy using oral scrapings obtained by curette. 11th International Congress on Oral curette. 11th International Congress on Oral

Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006Cancer, Grado (Italy), 14-17 May 2006

Scopo della ricerca comparare la ploidia studiata con citometria a flusso (FCM 211 casi) e statica

(ICM 45 casi) con le diagnosi cito istologiche nelle PMLs

Materiali e metodi Il materiale da scraping è stato conservato in liquido di Thin prep e in soluzione

salina . Per la ploidia sono stai usati un citofluorimetro FACSCalibur (Beckton Dickinson)

con un kit di reagenti Cycletest Plus DNA. Il Dna index è stato elaborato mediante il

software ModFit. I campioni sono stati considerati inadeguati se I detriti cellulari erano > 20%, le cellule acquisite

<10.000 e il coefficiente di variazione >5%.

I 45 casi studiati con ICM sono stati fissati in Thin Prep e trattati dalla Ditta Perceptronix, Vancouver

BC, Canada (Dr. A. Doudkine)

Scopo della ricerca comparare la ploidia studiata con citometria a flusso (FCM 211 casi) e statica

(ICM 45 casi) con le diagnosi cito istologiche nelle PMLs

Materiali e metodi Il materiale da scraping è stato conservato in liquido di Thin prep e in soluzione

salina . Per la ploidia sono stai usati un citofluorimetro FACSCalibur (Beckton Dickinson)

con un kit di reagenti Cycletest Plus DNA. Il Dna index è stato elaborato mediante il

software ModFit. I campioni sono stati considerati inadeguati se I detriti cellulari erano > 20%, le cellule acquisite

<10.000 e il coefficiente di variazione >5%.

I 45 casi studiati con ICM sono stati fissati in Thin Prep e trattati dalla Ditta Perceptronix, Vancouver

BC, Canada (Dr. A. Doudkine)

CITOMETRIA A FLUSSOCITOMETRIA A FLUSSO

CITOMETRIA STATICA

CITOMETRIA STATICA

Risultati della citometria a fllusso:

Percentuali di anneuploidia

Risultati della citometria a fllusso:

Percentuali di anneuploidia

16/70 (22.8%)16/70 (22.8%)Lesioni senza displasiaLesioni senza displasia

24/40 (60.0%) 24/40 (60.0%)K. Squamoso K. Squamoso

140/190 (73.7%)140/190 (73.7%)Casi adeguatiCasi adeguati

17/30 (56.7%)

17/30 (56.7%) Lesioni con

displasiaLesioni con displasia

Risulati della citometria statica (image):

Percentuali di aneuploidia

Risulati della citometria statica (image):

Percentuali di aneuploidia

4/16 (25.0%) 4/16 (25.0%)Lesioni senza displasiaLesioni senza displasia

7/9 (77.7%)7/9 (77.7%)K . squamosoK . squamoso

37/45 (82.2%)37/45 (82.2%)Casi adeguatiCasi adeguati

8/12 (66.7%)

8/12 (66.7%)

Lesioni con displasiaLesioni con displasia

CONCLUSIONI CONCLUSIONI

L’ICM ha dimostrato una sensibilità lievemente superiore alla FCM in carcinomi e displasie orali, mentre i risultati per le PML senza displasia sono

sovrapponibili, per cui si può affermare che lo studio del DNA con ICM e/o FCM può dare utili informazioni. In particolare, la presenza di aneuploidia in lesioni orali senza evidenza morfologica (istologica o citologica) di displasia può avere impor-tanza prognostica, sia che si

tratti di leuco-eritroplachie, che dei marginidi una resezione per carcinoma

L’ICM ha dimostrato una sensibilità lievemente superiore alla FCM in carcinomi e displasie orali, mentre i risultati per le PML senza displasia sono

sovrapponibili, per cui si può affermare che lo studio del DNA con ICM e/o FCM può dare utili informazioni. In particolare, la presenza di aneuploidia in lesioni orali senza evidenza morfologica (istologica o citologica) di displasia può avere impor-tanza prognostica, sia che si

tratti di leuco-eritroplachie, che dei marginidi una resezione per carcinoma