Tecniche Di Sterilizzazione

7/23/2019 Tecniche Di Sterilizzazione

http://slidepdf.com/reader/full/tecniche-di-sterilizzazione 1/27

Tecniche di sterilizzazione

La sterilizzazione è un processo il cui

scopo è quello di stabilire condizioni

asettiche, mediante rimozione di tutti imicrorganismi.

La sterilizzazione è molto importante nellaricerca algologica, specialmente nel

mantenimento dei ceppi isolati in coltura.



• Tecniche di sterilizzazione



• Inoltre l’uso di tecniche disterilizzazione minimizza la

contaminazione, e consente dicondurre esperimenti in modo piùpreciso. Le tecniche di sterilizzazione

non sono difficili, ma richiedono moltacura. I materiali sterilizzati espostiall’ambiente si contaminano

rapidamente, a causa dei milioni dispore presenti nell’aria.



• Il termine disinfettare viene spesso confuso consterilizzare.

• Disinfettare vuol dire operare per uccidere tutti o

gran parte dei microrganismi patogeni presentiin un ambiente o in una superficie.

• Per esempio, lavarsi le mani e pulire le superfici

con detergenti tipo etanolo al 70% prima dimaneggiare colture sterili è una procedura didisinfezione che fa parte delle tecniche di

sterilizzazione, ma non le esaurisce.



• I metodi di sterilizzazione invece

prevedono l’eliminazione di qualsiasimicrorganismo. Possiamo dividerli in 4

categorie:

- a caldo;

- mediante onde elettromagnetiche;

- per filtrazione;

- con reagenti chimici



• La sterilizzazione a caldo è la più usata.

Richiede temperature ≥100°C;• Essa richiede inoltre che i materiali da

sterilizzare siano termoresistenti (es.vetreria, strumenti metallici,fogli di

alluminio)



• Le sostanze liquide possono essere sterilizzate

mediante filtrazione, quando in soluzione siamopresenti sostanze termolabili.

• Es. componenti organici tipo vitamine.



• Le onde elettromagnetiche (raggi ultravioletti[UV], raggi gamma, raggi x, e microonde)sonousate come alternativa per i materiali solidi che

non possono essere esposti ad alte temperature(es. prodotti in plastica).



• Infine, molti tipi di sostanze chimiche

possono essere usate per lasterilizzazione.

• Bisogna comunque considerare che tracce

di queste sostanze possono rimanere neirecipienti, interagendo negativamente congli organismi.

• Per questo motivo, oggi queste proceduresono usate molto di rado.



Tecniche di sterilizzazione a caldo



autoclave• L’autoclave è la macchina più efficace per effettuare la

sterilizzazione a caldo.

• E’ un apparato consistente in una camera d’acciaio,chiusa ermeticamente al cui interno del vapore sottopressione produce temperature di 121 senza che i liquidivadano in ebollizione.

• 10 minuti di autoclave a 121°C bastano per sterilizzareprovette di 18 mm di diametro, mentre 1 ora è richiestaper sterilizzare contenitori di 10 l.



Un modello di autoclave



• Alcune precauzioni sono fondamentali per effettuare con

successo una sterilizzazione con autoclave• Per i liquidi è importante lasciare uno spazio libero nel

contenitore.

• Inoltre il tappo dovrebbe essere chiuso nonermeticamente, per evitare che la pressione salga troppo.

• Dopo essere passati in autoclave alcuni materiali sonoancora umidi, soprattutto i materiali tipo cotone o carta. In

questo caso una successiva sterilizzazione a secco(150°C per almeno un’ora) è consigliata.



Sterilizzazione tramite stufa

• Per le sterilizzazioni a secco si usane

generalmente le stufe.• Perché sia efficace le temperature devono

essere più alte e i tempi più lunghi di

quanto non sia richiesto quando si usil’autoclave.

• Il modo più rigoroso richiederebbe 250°Cper 3 -5 ore; nella pratica di solito bastariscaldare a 150°C per 3 o 4 ore.



Tecniche di sterilizzazione tramite

filtrazione



• La Sterilizzazione mediante filtrazione è richiesta

per componenti termolabili.• E’ un metodo rapido, se deve essere sterilizzato

un piccolo volume di liquido.

• Esiste in commercio una grande varietà di filtri, adifferente porosità, fatti di materiali diversi e didifferenti dimensioni.

• In genere i filtri possono essere autoclavati edhanno portosità minore di 0.2 mm; soltanto i virussono più piccoli e possono passare.

• Se la soluzione è viscosa o contiene particelle insospensione, conviene effettuare prefiltrazione conun filtro dai pori di 1mm di diametro.




onde elettromagnetiche



Sterlilizzazione tramite UV

• La sterilizzazione con raggi X o Gamma, sirealizza a livello industriale e non viene

applicata in laboratorio, per ragioni di sicurezza.• La radiazione UV può essere usata in

laboratorio per sterilizzare piccoli ambienti,

quando non ci sia nessuno all’interno(es. cappea filtro laminare, banchi di laboratorio).

• La radiazione UV è efficace soprattutto a 260

nm, causando la formazione di legami covalentitra timine adiacenti nel DNA. Questi dimericausano errori di replicazione del DNA,provocando mutazioni letali.



• Una lampada UV produce radiazioni con lunghezza

d‘onda tra 240 and 280 nm. L’energia varia con il

bulbo, e va da 40 a 40.000 microwatt/s .cm2.

• La scelta del bulbo dipende dallo scopo. Bulbi a

base energie sono usati per sterilizzare cappe e

banchi, mentre quelli ad elevata energia servonoper sterilizzare l’acqua.

• I raggi UV non attraversano il vetro. Per sterilizzarei liquidi ci vorrà un bulbo ad immersione.



• La sterilizazione con il forno a microonde è la

più rapida.

• L’effetto prodotto dalle microonde è di due tipi: lemicroonde possono uccidere direttamente le

cellule o indirettamente, facendo innalzare la

temperatura dei liquidi fino all’ebollizione.

• Si raccomanda l’uso di un microonde con un

tavolo girevole e con una potenza di 700 watt.

T i h di t ili i t it




composti chimici

St ili i t it i l it di



Sterilizzazione tramite ipoclorito di

sodio• La sterilizzazione con sodio ipoclorito è molto usata in acquacultura,

le cui pratiche richiedono sterilizzazione di ampi volumi di liquidi.

• L’applicazione di questa tecnica può non essere sufficiente peruccidere le forme di resistenza di taluni microganismi (cisti).

• Generalmente il trattamento prevede l’uso di 1-5 ml di sodioipoclorito per litro di acqua. Durante il trattamento le acque nonvanno agitate. Il trattamento dovrebbe durare alcune ore, altrimenti

si devono usare concentrazioni maggiori della sostanza.• Ler soluzioni non devono essere esposte alla luce del sole durante il

trattamento.

• A fine trattamento il sodio ipoclorito viene neutralizzato conl’aggiunta di sodio tiosolfato (Na2S2O3 · 5H2O).

• Generalmente si aggiunge 1 ml di sodio tiosolfato per 4 ml di sodioipoclorito



Camere a flusso laminare

• Una camera a flusso laminare posta in unapiccola stanza chiusa è la scelta migliore permaneggiare il materiale e le culture sterili.

• Di solito sono attrezzate con una lampada UV,

per sterilizzare l’ambiente quando non è in uso,e con un bruciatore Bunsen.

• Nella zona di lavoro la circolazione dell’aria

dovrebbe essere ridotta al massimo el’operatore dovrebbe muoversi il meno possibilee molto lentamente.



Sterilizzazione di terreni solidi

• Come per i terreni di coltura liquidi, la sterilizzazione sieffettua autoclavando a 121°C per 15 minuti.

• Gli slants nelle provette devono essere riscaldatitenendoli inclinati, in modo che l’agar si solidifichiformando una superficie in pendenza vicino all’estremitàdella provetta. Questo faciliterà le operazioni di

trasferimento del campione algale.• Quando si usano piastre Petri, il terreno agarizzato va

versato in Piastre sterili e sotto cappa a flusso laminare.Per ridurre la contaminazione l’agar non deve riempire

più della meta della piastra• Eventuali componenti termolabili vanno aggiunti prima

che l’agar solidifichi (50-60°C), sterilizzandoli a freddo.

Tecniche Di Sterilizzazione

Documents

Transcript of Tecniche Di Sterilizzazione