SKY e M-FISH

Multi-band

CGH (Comparative genomic Hybridization)

Il DNA da studiare è marcato con un fluorocromo ed ibridato con un campione di DNA normale di controllo marcato con un diverso fluorocromo.Regioni sottorappresentate hanno segnale più debole perché legano meno sonda ed hanno colore diverso dalle regioni sovrarappresentate che legano più sonda.

Sono utili nello studio dei riarrangiamenti cromosomici sbilanciati

CGH

Microarray

851 Kb88.007 Mb88.000 Mb87,149 Mb87.139 Mb

Last presentprobe

First deleted probe

Last deletedprobe

First present probe

Deletionsize

244K

244K

244K

PATOLOGIE GENOMICHE

• Patologie genomiche: sindromi cliniche dovute a guadagno (duplicazione) o perdita (delezione) di uno specifico segmento cromosomico. Solitamente sono caratterizzate da difetti congeniti e/o deficit neurologici e cognitivi. Nella maggior parte dei casi le caratteristiche cliniche sono il risultato della variazione nel numero di copie di geni contenuti nell’intervallo genomico interessato. Più raramente il fenotipo può essere determinato dalla rottura di un gene, dalla creazione di geni di fusione, da un effetto di posizione o dallo ”smascheramento” di una mutazione recessiva per la realizzazione di una emizigosità.

NEXT GENERATION SEQUENTING

ESAME DEL DNA

ESAME DEL DNA

PREDITTIVO

DNA eMEDICINAFORENSE

IERI

OGGI

DNA

ALTRI TEST DIAGNOSTICI• PCR Quantitativa Real Time

• Test di Eterozigosità– Consiste nello studio di un pannello di marcatori

polimorfici (STR) che mappano all’interno della regione interessata. Se un marcatore è presente in doppia copia si può escludere la delezione del tratto che lo contiene, se è presente in singola copia ci possiamo trovare di fronte ad una delezione oppure ad una condizione di eterozigosità

• MLPA (Multiple Ligation-dependent Probe Amplification)– Con questa metodica è possibile valutare

contemporaneamente il numero di copie di più geni contenuti nella regione di interesse

IL LABORATORIO DI GENETICA

“chiedere bene per ottenere molto”

“chiedere a volte poco per ottenere molto”!

Diagnosi Prenatale

• I trimestre– Epoca: 10+4 - 13+6 settimane– NT + PAPP-A + free β hCG

• II trimestre– Epoca: 15 - 22 settimane– AFP + hCG + uE3 (+ inibina A)

• Integrato– I trim.: NT + PAPP-A +

II trim.: AFP + hCG + uE3 (+ inibina A)

Duo-Test /Bi-Test

Tri-Test

Quadri-Test

Test Combinato

Test predittivi ecografici

Detection rate (%)

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Età Età + AFP

Età + AFP + hCG

Età + AFP + hCG + uE3

I trim. Integrato

Dott.F. Lonardo

Il “superamento”dei test invasivi in gravidanza conesami genetici da sangue periferico della gestante

Una “carta d’identità” genetica…cioè la predisposizioneindividuale a ogni tipo di patologia

Altri tessuti ?

“Il Dottore” di Sir Luke Fildes, c.1891