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Regolamento REACH ‐ BPL Prospettive e Progetti ArpaER

Bologna, 20 giugno 2011

Il quadro delle competenzeSezione di Bologna

Monica Vaccari

CTR Cancerogenesi Ambientale e Valutazione del Rischio - Sezione di Bologna

1

2

5

3

4

SOMMARIOPresentazione del CTR Cancerogenesi Ambientale e Valutazione del

Rischio

Test che verranno portati in certificazione successivamente

Progetti di ricerca/sviluppo per test alternativi/migliorativi in ambito REACH

Test da portare in certificazione nel 2012

Esperienza del CTR sui test di riferimento per il REACH


CTR Cancerogenesi Ambientale e Valutazione del Rischio

CTR CANCEROGENESI AMBIENTALE E VALUTAZIONE DEL RISCHIO

esame dell’impatto di contaminanti ambientali sulla salute umana, con particolare riferimento al ruolo dei contaminanti nella insorgenza e progressione dei tumori

studio delle interazioni gene‐ambiente

sostegno scientifico all’applicazione del Regolamento REACH (CE 1907/2006)

AREATOSSICOLOGIA SPERIMENTALE

laboratorio di Meccanismi di Cancerogenesi e Anticancerogenesi (MCA)

sviluppo e utilizzo di metodi alternativi in vitro per lo studio e la valutazione degli effetti tossici e cancerogeni di contaminanti

ambientali

AREATOSSICOGENOMICA

laboratorio di biotecnologie avanzate

MATER

applicazione di tecnologie innovative per la valutazione delle

interazioni gene‐ambiente


AREA

DI TO

SSICOLO

GIA SPERIM

ENTA

LE

TEST DI CRESCITA IN AGAR SOFFICE

TEST DI CITOTOSSICITA’ TEST DI INVASIONE/MIGRAZIONE


TEST DI TRA

SFORM

AZIO

NE IN

VITROTEST DI TRASFORMAZIONE IN VITRO

BALB/c 3T3 A31-1-1

NORMALE

Inibizione da contatto

Dipendenza dall’ancoraggio

cancerogeno

TRASFORMATO

Inibizione da contatto

Dipendenza dall’ancoraggio

Possibile alternativa ai saggi a lungo termine nell’animale per la predizione del rischio cancerogeno nell’uomo


TEST DI TRA

SFORM

AZIO

NE IN

VITRO

A – CONTROLLO NEGATIVO ‐ cellule trattate con il solvente (DMSO)

B – CONTROLLO POSITIVO ‐ cellule trattate con il cancerogeno (3‐MCA)

A B


TEST DI TRA

SFORM

AZIO

NE IN

VITRO

• screening di cancerogeni genotossici e non genotossici• determinazione dell’attività trasformante di agenti chimici o fisici

composti chimici

miscele complesse

estratti da matrici ambientali

amiantofibre sostitutive

radiazioni ionizzanti


TEST DI TRA

SFORM

AZIO

NE IN

VITRO

In press

2010


B.21. SAGGIO IN

VITRO DI TRA

SFORM

AZIO

NE

Annex V to Directive 67/548/EECPart B: Methods for the determination of toxicity

B.21. IN VITROMAMMALIAN CELL TRASFORMATION TESTS

IUCLID B.21. = genetic toxicology


B.21. SAGGIO IN

VITRO DI TRA

SFORM

AZIO

NE

I FASE ‐ SELEZIONE DELLE DOSI

SELEZIONE DELLE DOSI

IC 10 IC 50 IC 90


B.21. SAGGIO IN

VITRO DI TRA

SFORM

AZIO

NE

II FASE ‐ TEST PRINCIPALE


ALTRI TEST D

A PO

RTARE IN

CERTIFICAZIO

NE IN

FUTU

RONEUTRAL RED UPTAKE ASSAY


ALTRI TEST D

A PO

RTARE IN

CERTIFICAZIO

NE IN

FUTU

RO

REGOLAMENTO REACH Recital 40

La Commissione, gli Stati membri, l'industria e gli altri soggetti interessati dovrebbero continuare a contribuire alla promozione, a livello internazionale e nazionale, di metodi di prova alternativi, tra cui metodologie assistite da computer, appropriate metodologie in vitro, metodologie basate sulla tossicogenomica e altre metodologie pertinenti. La strategia comunitaria di promozione di metodi di prova alternativi è una priorità e la Commissione dovrebbe garantire che essa rimanga tale nell'ambito dei suoi futuri programmi quadro di ricerca e di iniziative quali il piano d'azione comunitario per la protezione e il benessere degli animali 2006‐2010. Si dovrebbe puntare alla partecipazione degli operatori e ad iniziative che coinvolgano tutte le parti interessate.

TOSSICOGENOMICAapplicazione delle tecnologie genomiche alla tossicologia per studiare gli effetti avversi dei composti chimici

• Monitorare l’esposizione • Valutare la pericolosità e il meccanisimo

d’azione• Classificare le sostanze tossiche • Definire la risposta a dosi differenti• Contribuire all’estrapolazione da specie

a specie• Predire la variabilità individuale


TOSSICO

GEN

OMICA

MICROARRAY: APPROCCIO ONE COLOUR

TRASCRITTOMICA SLIDE PER VIBRIO FISCHERI

E’ stato utilizzato il Software per il disegno degli oligonucleotidi dedicati alla espressione genica di Agilent : Nearest Neighbour” ‐SantaLucia 98 (genoma di V.fischeri ES114, Selezione Best Probe, Controllo cross‐hybridcon Olicheck)

Il formato della slide è 8X15K e include: Tre repliche dell’ intero genoma di V. fisheri (3747 probe 60merControlli positivi e negativi371 probe contro V. cholerae(controllo addizionale di specificità)

I profili trascrizionali ottenuti dall’analisi microarray riescono a classificare con alta efficienza le matrici contaminate da FB1 ed FB2 rispetto alle non contaminate.

Questi risultati mettono in evidenza le potenzialità che le tecniche tossicogenomiche hanno rispetto al Microtox Test System, soprattutto nell’intervallo delle “basse dosi”.


PROGETTO

APTEC

OBIETTIVOapplicazione della trascrittomica all’ecotossicologia, con particolare riferimento ai pesci, in modo da rifinire e ridurre gli esperimenti sull’animale grazie alla individuazione in vivo di biomarcatori, rilevanti ai fini del meccanismo di azione tossica, da trasferire poi in modelli in vitro basati su colture cellulari

PROGETTO APTECPROGETTO APTECApplicazione della Applicazione della tossicogenomicatossicogenomica in in ecotossicologiaecotossicologia

Identificazione di un profilo Identificazione di un profilo trascrizionalitrascrizionaliin risposta a contaminanti di riferimento in risposta a contaminanti di riferimento nella specie nella specie OncorhynchusOncorhynchus mykissmykissancorando l’espressione genica all’ ancorando l’espressione genica all’ endend‐‐pointpoint di di ecotossicitàecotossicità in vivoin vivo

Verifica dei marcatori Verifica dei marcatori trascrizionalitrascrizionaliin risposta a contaminanti di in risposta a contaminanti di riferimento nella specie autoctona riferimento nella specie autoctona DicentrarcusDicentrarcus labraxlabrax, ancorando , ancorando l’espressione genica all’ l’espressione genica all’ endend‐‐pointpoint di di ecotossicitàecotossicità

Verifica dei profili di Verifica dei profili di espressione in risposta a espressione in risposta a contaminanti di riferimento contaminanti di riferimento nel sistema cellulare in vitronel sistema cellulare in vitro

Analisi statistica ed interpretazione Analisi statistica ed interpretazione biologica dei dati di biologica dei dati di microarraymicroarray


Maria Grazia MascoloStefania Perdichizzi

Francesca Rotondo

Monica Vaccari

Annamaria Colacci

Elena Morandi

Daniele Quercioli

Paola Silingardi

CTR CANCEROGENESI AMBIENTALE E VALUTAZIONE

DEL RISCHIO

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