9/3/2018 Carátula de Trabajo

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Dudas o sugerencias sobre este sistema: feriadelasciencias@cch.unam.mx © 2018 Escuela Nacional Colegio de Ciencias y Humanidades, Hecho en México, Comité Organizador

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Propagación in vitro de Mammillaria schiedeana y M. bombycina

Resumen

Dentro de la familia de las cactáceas, el género Mammillaria es uno de los más abundantes,

gran parte de ellas ha sido considerada como amenazada o en peligro de extinción, ya que

son las más populares para su comercialización y sufren de una extensiva colecta ilegal de

ejemplares. La presente investigación experimental realizó la propagación in vitro de las

especies endémicas mexicanas Mammilaria schiedeana y M. bombycina donados por el

Jardín Botánico de la UNAM a partir de plantas completas, debido a su actual estado de

amenaza y el importante papel que tienen dentro de redes biológicas. La investigación buscó

analizar el efecto de los reguladores de crecimiento vegetal como las auxinas y citocininas

en explantes de la zona apical, media y basal de la planta madre.

Se preparó medio MS al 100% de sus componentes, se agregó 30 g/L de sacarosa, se

ajustó el pH a 5.7 y se añadió 8.5 g/L de agar. Se utilizaron reguladores de crecimiento ANA

y Kinetina en 4 tratamientos diferentes: A (0/0 mg/L), B (1/1 mg/L), C (1/0 mg/L) (ANA) y D

(0/1 mg/L) (K). Posteriormente las plantas fueron desinfectadas con la ayuda de enjuagues

de jabón, alcohol y cloro. En condiciones asépticas se realizó la siembra de los explantes en

medios de cultivo, obteniendo un total de 25 explantes, 6 a 7 en cada tratamiento; se

observaron durante cuatro meses. Para combatir hongos y colonias de bacterias crecidas

sobre el medio se aplicó un segundo proceso de desinfección, lo cual resultó muy estresante

para los explantes, razón por la que muchos murieron o cayeron en alta deshidratación. En

el tratamiento A o lote control únicamente 2 de los 6 iniciales mostraron una óptima

condición. En el tratamiento B se sembró el ejemplar de M. schideana murió a causa de

contaminación por bacteria, de los restantes, únicamente 4 vivieron, pero bajo condiciones

extremas de deshidratación. En el medio C sólo sobrevivieron 4 explantes de los cuales solo

uno se encuentra en óptimas condiciones. En el medio D, 5 de los 7 explantes iniciales

sobrevivieron, pero con un nivel muy alto de deshidratación. Se observó que la zona basal

fue la que presentó mayor contaminación debido a que necesita de una desinfección

profunda. Finalmente, la presencia de ANA y Kinetina sí influyen en el crecimiento y

desarrollo de explantes de M. bombycina, sin embargo, un exceso de ella puede resultar en

una reacción inhibitoria del crecimiento.

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Introducción

Las cactáceas son una familia de plantas con flores, que viven principalmente en zonas con

escasa humedad (CONABIO, 2009). Existen alrededor de 1,400 especies de cactáceas en el

mundo (Mabberley, 1997), de las cuales 669 son mexicanas y 518 endémicas (Guzmán et

al., 2003).

Constituyen una parte muy importante de los ecosistemas áridos, ya que son alimento de

una gran cantidad de insectos, aves y murciélagos, protegen el suelo de la erosión y captan

el agua y la humedad. Además, también tienen un gran valor económico y cultural, siendo

utilizados como fuente de alimento, piezas ornamentales y forman parte de la identidad

cultural de nuestro país.

Dentro de esta familia, el género Mammillaria destaca por su abundante cantidad de

especies y por su gran belleza, además, la mayoría son endémicas de México. Las plantas

de este género son pequeñas y con un tallo globoso, acondicionado para soportar las altas

temperaturas de los lugares donde se desarrolla. Su característica más importante son los

tubérculos que revisten al tallo por completo, dispuestos en espiral y de un tamaño pequeño,

cada tubérculo tiene una aréola de la cual se desarrollan las espinas. Cuentan con flores,

muy bellas y vistosas, que aparecen en verano y que están dispuestas en el ápice en forma

de corona (Bravo, 1978).

Debido a su gran belleza, este género es el más popular entre las cactáceas para su

comercialización (Ramírez et al., 2007). De las 1025 especies y subespecies mexicanas de

Mammillaria (Guzmán et al., 2003) una gran parte de ellas ha sido consideradas como

amenazadas o en peligro de extinción.

Mammillaria bombycina y M. schiedeana son dos especies de este género que destacan por

su gran belleza y, tristemente, por la escasez en sus poblaciones (Fitz y Fitz 2017; NOM-

059, 2010). M. bombycina es cultivada en viveros, en la población Ajijic en el municipio de

Chapala, Jalisco, para su venta como planta ornamental. Sin embargo, también es colectada

ilegalmente para el mismo fin, lo que la ha provocado su escasez (Yáñez, 2010). La

información sobre M. schiedeana, más allá de su descripción y distribución, es muy escaza,

existen ya muy pocas poblaciones de esta especie (Fitz y Fitz 2017).

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Técnica de Cultivo de Tejidos Vegetales

La restauración de los hábitats alterados y la regeneración de sus poblaciones por métodos

tradicionales es un proceso demasiado lento a comparación con el declive que se está

teniendo, por estas razones es absolutamente necesario que se busquen alternativas para la

solución de este problema (Valverde y Chávez, 2009).

Este proyecto busca propagar las especies Mammillaria shiedeana y M.bombycina para su

preservación a través de métodos más efectivos tales como el Cultivo de Tejidos.

Ambas especies son parte de una red biológica importante que con el paso de los años ha

disminuido drásticamente debido al cambio climático, comercio ilegal, especies invasoras,

depredadores naturales, eliminación de plantas nodrizas, cambios de uso de suelo o

conversión de hábitat para pastoreo.

Encontramos necesario promover el cuidado y la preservación de especies endémicas ya

que forman parte de nuestra identidad cultural mexicana, además qué si éstas llegan a

desaparecer arrasaría con la intrincada red de organismos que se vinculan con esta especie.

Por tales motivos consideramos que nuestro proyecto puede contribuir en otras posibles

investigaciones y protocolos relacionados con la preservación del género Mammillaria.

Cultivo de tejidos vegetales

El Cultivo de Tejidos Vegetales (CTV) ha sido

una técnica ampliamente reconocida por la

rápida y eficiente propagación de alguna

especie e incluso es útil para el mejoramiento

genético (Smith y Gould, 1989). El CTV

consiste, esencialmente, en aislar una porción

de la planta (explante) y proporcionarle

artificialmente las condiciones físicas y

químicas apropiadas para que las células

expresen su totipotencialidad y formen una nueva planta (Roca y Mroginski, 1991).

El desarrollo y maduración de las cactáceas puede llevar incluso años; este tipo de

propagación produce plantas iguales en cuanto a su información genética, libres de

patógenos, una rápida producción y en grandes cantidades; es clara su ventaja contra el

cultivo tradicional (Valverde y Chávez, 2009).

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Distribución geográfica de M. bombycina

(Pilbeam, 1999).

M. bombycina (Cactus Art, 2018)

Marco teórico

Mammillaria bombycina

Es un cactus cespitoso, cortamente columnar y

cubierto de espinas decorativas. Prefiere un suelo

relativamente humífero y soporta riegos repetidos.

Florece en primavera (Říha y Šubík, 1991). Tiene

un tallo pequeño con forma globosa, y está

cubierto por lana blanca; puede alcanzar hasta 20

cm de alto y 6 cm de diámetro. Los tubérculos

tienen una forma cilíndrica y son pequeños, y

rodean al tallo. Es de color verde claro y sus flores

son pequeñas y púrpuras, aparecen en forma de

corona (Craig, 1945).

Se puede encontrar en los estados de Aguascalientes y Jalisco en un área de 160 km2. Es

común visualizarla en altas montañas o encinares, pendientes pronunciadas y en

acantilados inaccesibles (Pilbeam, 1999).

Las últimas estimaciones señalan que en un periodo de 5 años ocurrió un 30% de reducción

poblacional. El área en donde es encontrada es muy pequeña (160 km2) por lo que está

catalogada por la Red List como Vulnerable A2a (Fitz y Fitz 2017). Está incluida en la NOM-

059-SEMARNAT-2010 en la categoría de Protección Especial.

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M. schiedeana (Cactus Art, 2018)

Distribución geográfica de M. schiedena.

(Pilbeam, 1999).

Mammillaria schiedeana

Tiene un tallo verde oscuro, globoso, de 5 a 10 cm

de alto y de 1.5 a 6 cm de diámetro; sus espinas

cubren toda la planta de forma circular y además

son de color amarillo, las axilas tienen lana blanca

que se extiende por todos los tubérculos. Los

tubérculos son redondos y se estrechan mientras

van creciendo. Sus flores son de color blanco y

aparecen en la cabeza de la planta (Craig, 1945).

Esta cactácea es endémica de México, se

encuentra únicamente en los estados de

Guanajuato, Hidalgo, San Luis Potosí, Querétaro

y Tamaulipas; en un área menor a 20000 km2.

Generalmente crece sobre la piedra caliza y en pendientes rocosas (Pilbeam, 1999).

La planta es ilegalmente recolectada con fines ornamentales, su población actualmente va

en descenso (Pilbeam, 1999). Está clasificada por la Red List como Vulnerable B1ab (v)

debido a que su área de distribución es menor a 20 000 km2, se conocen menos de 10

ubicaciones para encontrarla. En la NOM-059-SEMARNAT-2010 está en la categoría de

Amenazada (Fitz y Fitz 2017).

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Medios de Cultivo

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

organismos. Un medio de cultivo lleva minerales, macronutrientes (C, H, O, N, S, P, K, Ca y

Mg) que son los que la planta necesita en mayor cantidad, los micronutrientes (B, Zn, Mn,

Cu, Mo, Fe y Cl) en menor cantidad; los Reguladores de Crecimiento Vegetal, azúcar y en

algunos casos agente gelificante, que puede medios ayudar al éxito de la propagación (Roca

y Mroginski, 1991).

Los medios de cultivo se definen principalmente por sus cualidades químicas, suele elegirse

el medio que contenga la mayor cantidad de los nutrientes necesarios que permitan a la

especie alcanzar su mejor crecimiento (Pelacho y Closas, 2006).

La mayoría de los medios que se utilizan tienen el nombre dado por quien los formuló; otros

surgen de modificaciones sobre los medios genéricos, que son los más conocidos.

MS (Murashige y Skoog, 1962): Es el más utilizado en el cultivo in vitro de tejidos vegetales.

Murashige, quería encontrar una hormona de crecimiento en el jugo del tabaco; en cambio,

analizando la muestra del jugo encontró elevadas concentraciones de los minerales

específicos. Descubrió que variando las cantidades de estos minerales se obtenía un mayor

crecimiento de los tejidos. También encontró que el nitrógeno, promovía el crecimiento del

tejido del tabaco. Lo que más distingue al medio MS es su alta concentración de nitratos,

potasio y amonio (Smith, 1996).

Otros medios ampliamente utilizados (Pelacho y Closas, 2006; Razdan 2003):

● Knudson (1946)

● White (1963)

● N6 (Nitsch y Nitsch, 1969)

● B5 (Gamborg, 1968)

● WPM (Lloyd y McCown 1980)

● KM8p (Kao y Michayluk 1982)

Reguladores de Crecimiento Vegetal (RCV)

Son hormonas vegetales que son sintetizados naturalmente por las plantas, en muy bajas

concentraciones inducen efectos fisiológicos definidos; se agregan al medio de cultivo de

manera exógena para procurar el crecimiento del explante. Se conocen cinco grupos

principales de fitohormonas: las auxinas, las citocininas, las giberelinas, el etileno y el ácido

abscísico. Todas ellas actúan coordinadamente para regular el crecimiento en las diferentes

partes de una planta (Jordán y Casaretto, 2006).

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Auxinas

Su función principal es la elongación de tallos, formación de raíces adventicias, inducción de

floración y diferenciación vascular; por lo que las auxinas se presentan en mayor cantidad en

regiones de división celular, como la parte apical del tallo (Jordán y Casaretto, 2006).

Citocininas

Estimulan la división celular en tejidos no meristemáticos. Son producidas en las zonas de

crecimiento, como la punta de las raíces. Promueven la división celular, provocan la

iniciación de brotes y organogénesis (Smith, 1996), demora de la senescencia en las hojas,

la planta permanecerá más tiempo verde (Jordán y Casaretto, 2006).

Ambas, en grandes cantidades puede suprimir la morfogénesis (Smith, 1996).

Objetivo general

● Realizar la propagación in vitro de las especies Mammillaria schiedeana y M.

bombycina a partir de plantas completas.

Objetivos particulares

● Lograr el establecimiento aséptico de explantes de Mammillaria schiedeana y M.

bombycina.

● Comparar el efecto de la combinación de ANA y K (0/0, 1/1, 1/0, 0/1) en explantes de

la zona basal, media y apical de Mammillaria schiedeana y M. bombycina.

● Apoyar a futuros proyectos de propagación in vitro dentro de investigación.

Hipótesis

Si la auxina ANA y la citocinina Kinetina estimula el desarrollo vegetal entonces en explantes

de Mammillaria schiedeana y M. bombycina tendrá un efecto favorecedor respecto a su

crecimiento y desempeño.

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Ajuste de PH a los distintos tratamientos

Desarrollo

● Material biológico:

Los ejemplares de Mammillaria schiedeana y M. bombycina fueron donados por el Jardín

Botánico de la UNAM. Mammillaria bombycina presentaba fenotipo etoliado. Los procesos

experimentales se realizaron en el laboratorio LACE del plantel.

● Preparación de medio de cultivo MS:

Se elaboró medio de cultivo MS al 100% de sus componentes orgánicos e inorgánicos (ver

Anexo 1), se dividió en cuatro partes de 250 mL cada uno en vasos de precipitado. Fue

adicionado con ANA y K obteniendo cuatro tratamientos:

• Tratamiento A (0/0 mg/L) • Tratamiento C (1/0 mg/L, ANA)

• Tratamiento B (1/1 mg/L) • Tratamiento D (0/1 mg/L, K)

Se agregó 30 g/L de sacarosa y después se ajustó el pH a

5.7 con ayuda de tiras reactivas, HCl y NaOH,

posteriormente se adicionaron 8.5 g/L de Agar Bacto a cada

tratamiento. Se vertió 12 ml de medio en frascos de vidrio y

se cerraron con tapas de plástico. Se esterilizaron 40

frascos con medio de cultivo, agua destilada, antioxidantes,

bisturí, pinzas y cajas de petri en autoclave a 120 ºC por 17

minutos a 21 lb/in2.

Ejemplar de M. bombycina Ejemplar de M. schiedeana Laboratorio LACE

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Cepillado del ejemplar

Zona Apical

Zona Basal

Zona Medial

● Desinfección:

Los ejemplares de Mammillaria schiedeana y M. bombycina

fueron retirados de su maceta. Se retiró el exceso de tierra

con ayuda de un cepillo de dientes y se eliminaron las

espinas con ayuda de tijeras. Posteriormente, se sumergieron

en disoluciones desinfectantes en el siguiente orden: jabón

70% (en agitación por 20 min.), alcohol 70% (en agitación por

2 min.) e hipoclorito de sodio (en agitación por 30 min.). Se

encendió la campana de flujo laminar 15 min antes de trabajar y se desinfectó con alcohol

etílico al 96%. Antes de ingresar a la campana de flujo laminar se asperjaron las manos y

material que con el que se trabajó con alcohol al 96% para evitar cualquier contaminación.

Finalmente, dentro de la campana de flujo laminar se realizaron tres enjuagues de 1 min.

cada uno, con agua destilada estéril, para retirar cualquier resto de hipoclorito de sodio.

● Obtención de explanes:

Con pinzas y bisturí (previamente esterilizados y flameados) se realizaron cortes

horizontales a cada planta para obtener la sección apical, media y basal, cada una de ellas

se dividió en cuatro obteniendo explantes de 1cm2.

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Siembra in vitro Cortes de los explantes en la campana de flujo laminar

● Siembra in vitro:

Se flameó ligeramente cada frasco y tapa con medio de cultivo al ser abiertos dentro de la

campana de flujo laminar. Se sembró un solo explante por medio para M. bombycina y dos

para M. schideana se flamearon de nueva cuenta y se sellaron con película autoadherible.

Los frascos fueron registrados por tratamiento (A, B, C, D) y se les asignó un número.

● Observación:

Los medios de cultivo se incubaron a temperatura ambiente. Fueron monitoreados

semanalmente. Los registros ayudaron a visualizar la aparición de: contaminación

(crecimiento bacteriano o aparición de hongos), deshidratación, oxidación, y el

ensanchamiento de “mamilas”. Así como la relación de su ensanchamiento con el

tratamiento correspondiente.

Resultados

Se obtuvieron dos explantes del ejemplar de

Mammillaria schiedeana (figura 1) que fueron

colocados en el frasco B5 adicionado con la ANA y

Kinetina. Al cabo de 7 días presentó el desarrollo

de una bacteria y se realizó desinfección

nuevamente, sin embargo, no resistió el estrés de

esta. Se intentó de salvar al ejemplar, sin embargo,

murió por acción de la bacteria.

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En cambio, del ejemplar de Mammillaria bombycina se obtuvieron 24 explantes al realizar

cortes de las zonas apical (8), medial (8) y basal (8), en el lapso que comprende octubre

del 2017, mes de inicio del experimento, a enero del

2018, reaccionaron de la siguiente forma:

● Zona Apical: Durante el mes de octubre

únicamente fueron afectados los explantes

correspondientes a los medio D3, A4 y C3, por la

presencia de hongos, fueron cambiados a los

medios D10, A10 Y C14 respectivamente, sin

embargo, el explante del frasco D10 no resistió los

tratamientos de desinfección y murió.

De noviembre a enero los explantes mantuvieron una apariencia constante y

deshidratación media, el A1 el que se encontraba en óptimas condiciones, refiriéndonos a

esto como que tiene una tonalidad verde y mamilas hinchadas dejando la posibilidad de

que posteriormente desarrollen callo (células totipotenciales).; los explantes D2, D1 Y A10

cayeron en deshidratación alta de la cual no lograron recuperarse hasta la fecha actual.

● Zona Media: Durante el mes de octubre dos explantes fueron los afectados por la

presencia de hongos, el B4 y el A2, respectivamente fueron cambiados al B7 y A9, sin

embargo, el explante A9 no resistió el estrés del tratamiento y murió.

En los meses posteriores de noviembre, diciembre y enero la mayoría de los explantes se

mantuvieron en deshidratación media, siendo los explantes D5 y C5 (Fig 2) los que se

encuentran en óptimas condiciones; los explantes que cayeron de deshidratación alta

fueron los B7y D4, sin recuperarse a la fecha actual.

● Zona basal: Esta zona presentó mayor número de

casos de contaminación tanto por hongos como

bacterias; durante el mes de octubre los explantes

de los medios B6, A6, C6, B3, C2 D7 fueron

cambiados a los medios B9, A7 (Fig 3), C7, B10,

C8 y D9 respectivamente; específicamente los

explantes A8 y C10 recibieron una segunda

desinfección la cual resultó muy agresiva,

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Explantes contaminados por hongo, (señalados con rojo los explantes).

causando su muerte; los explantes B10 y C8 también murieron al poco tiempo. En los

meses posteriores los explantes no volvieron a contaminarse, sin embargo, cayeron en

deshidratación alta de la que no lograron recuperarse hasta la fecha actual; el explante

del medio A5 se encuentra en óptimas condiciones.

Referente al efecto que tienen diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento

ANA y K en los explantes:

● El tratamiento A o lote control, no posee ninguna de las dos hormonas de crecimiento

empleadas en el experimento. Al inicio del experimento 6 explantes le correspondían a

este medio; debido a los procesos de desinfección dos de ellos murieron y el restante

cayó en una deshidratación alta; dos medios correspondientes a este tratamiento

muestran una óptima condición.

● El tratamiento B, enriquecido con ANA y Kinetina, al inicio del experimento 6 explantes

le correspondían a este medio, 5 de ellos de M. bombycina y 1 de M. schideana; ningún

explante de los que poseen este tratamiento muestra una óptima condición.

● El tratamiento C, enriquecido únicamente por ANA, 6 explantes le correspondían al final

del experimento sobreviven 4 explantes, específicamente uno se encuentra en óptimas

condiciones.

● El tratamiento D, enriquecido únicamente con Kinetina abarcaba 7 explantes de los

cuales, 5 de ellos al final de experimento se encuentran una deshidratación alta,

específicamente un explante se encuentra en óptimas condiciones.

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Gráfica 1. Contaminación por corte.

Grafica 2. Deshidratación por corte, medida semanalmente.

Análisis de resultados

El ejemplar de Mammillaria schiedeana se encontraba en un mal estado al inicio del

experimento por haber sido regada en exceso. En el proceso de desinfección causó estrés

dejándola en un estado vulnerable, propensa a bacterias; ésta especie es delicada por lo

que los malos cuidados previos al experimento la afectaron demasiado impidiendo su

establecimiento in vitro.

El experimento prosiguió con el ejemplar de Mammillaria bombycina; presentó un mejor

desarrollo en los explantes de zona medial, probablemente debido al tamaño de los

explantes, mayores a los de las otras dos secciones.

La contaminación fue un grave

problema durante el primer mes del

experimento; la zona basal fue la más

afectada con un 75% de los explantes

contaminados como podemos observar

en la gráfica 1, la desinfección de esta

zona requiere de un proceso minucioso,

se recomienda realizar un buen

cepillado previo a la desinfección con

alcohol, cloro y jabón.

La deshidratación fue el mayor problema que los explantes enfrentaron, siendo los de

zona basal los más afectados; como se muestra en la Gráfica 2, siguiendo una escala de

0 al 3, siendo el 3 en nivel de deshidratación más alta.

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Grafica 3. No. explantes con mamilas (verdes y grandes), por corte, medida

mensualmente.

Se observa que la zona medial fue la más constante manteniendo desde el mes de

noviembre a sus explantes en una deshidratación baja, presentando una tonalidad verde y

sus mamilas un buen tamaño.

La zona apical presento una deshidratación media manteniendo en sus explantes una

tonalidad amarillenta siendo esta la acción de un tipo particular de oxidación.

La zona basal desde el comienzo del experimento debido a las

múltiples desinfecciones que se le realizaron a los explantes estos

cayeron en una deshidratación alta (Fig 4), comprobamos que el

aplicar demasiadas desinfecciones resulta dañino para los

explantes, principalmente por la acción del cloro que los reseca.

La hinchazón de mamilas y presencia de oxidación, representan

una buena reacción de activación del tejido, la presencia de

mamilas grandes y con tonalidad verde fue un aspecto importante

para evaluar el desempeño de los explantes.

Basándonos en la zona a la que pertenecen los explantes la

siguiente gráfica (Grafica 3) muestra los correspondientes a la

zona media que presentan un mayor número de frascos con

mamilas de tonalidad verde e hinchadas.

Analizando los deferentes tratamientos (Gráfica 4): El

tratamiento A (Fig 5) siendo el lote control obtuvo mejores

resultados, teniendo al final del experimento 3 frascos en

óptimas condiciones.

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Los tratamientos C (ANA) y D (Kinetina), tienen un sólo frasco cada uno en óptimas

condiciones lo que nos da a entender que cualquiera de las dos si bien impactan en el

desarrollo y el crecimiento del explante, la cantidad empleada posiblemente fue

demasiada, sin embargo, abre una nueva pregunta: ¿Si inicialmente se emplea una menor

cantidad de ANA y Kinetina, los explantes podrían tener un mejor desarrollo?

Los tratamientos C (ANA) y D (Kinetina), tienen un frasco cada uno en óptimas

condiciones por lo que se entiende que la cantidad empleada de estas hormonas

sobrepasan la necesaria, generando una reacción inhibitoria, como se observa en el

tratamiento B. Las auxinas y citocininas son hormonas que se encuentran por naturaleza

en cualquier planta; además, el ejemplar utilizado era joven, tenía 3 años, y había pasado

por un proceso de etiolación, por lo que la cantidad de hormonas era considerablemente

mayor.

Esto nos hace pensar en una nueva pregunta: ¿Si inicialmente se emplea una menor

cantidad de ANA y Kinetina, los explantes podrían tener un mejor desarrollo?

Mammillaria bombycina en la naturaleza requiere de bastante tiempo para desarrollarse y

crecer, en el laboratorio tarda en mostrar los primeros indicios de callo alrededor de 6

meses basándonos experimentos anteriores (Yáñez, 2010); se espera que al transcurso

de meses posteriores los 7 ejemplares que se encuentran en óptimas condiciones logren

desarrollarlo.

En el Cultivo de Tejidos Vegetales nunca se tiene un éxito del 100%, y aún así, la técnica

es sumamente eficiente. De los 25 explantes iniciales que teníamos; 7 aún pueden

generar una nueva planta; esta cifra parece desalentadora, menos de la mitad

sobrevivieron; pero analizándolo de otra manera, de una única planta que teníamos ahora

Grafica 4. No. explantes en óptimas condiciones, por tratamiento, medida mensual.

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tenemos 7 posibles nuevas plantas, y en un tiempo muchísimo menor al que tendría que

ocurrir si la planta se reprodujera de manera natural.

Consideramos importante difundir los usos y procedimientos de esta práctica, puesto que

el CTV significa un gran cambio para nuestra sociedad, ya que nos permitirá abastecer de

manera responsable las necesidades de toda una población. Y además es una solución a

una de nuestras problemáticas más ignoradas, la desaparición de especies.

Conclusiones

• Actualmente, 29.17% de los explantes de M. bombycina se encuentran en óptimas

condiciones y con posibilidad de formar callo en los meses posteriores; lo cual nos indica

que la micropropagación es una técnica viable para la restauración de especies que se

encuentren en peligro.

• La presencia de ANA y Kinetina sí influyen en el crecimiento y desarrollo de

explantes de M. bombycina, sin embargo, un exceso de ella puede resultar en una

reacción inhibitoria del crecimiento; lo que genera una nueva hipótesis: “Si se agrega una

menor cantidad de auxinas y citocininas tomando en cuenta la cantidad endógena de

hormonas que ya tiene la planta, entonces el desarrollo de explantes de M. bombycina

podría presentar reacciones más favorables.”

• El tamaño de los explantes influye en el desarrollo, se observa que los explantes de

mayor tamaño logran resistir los procesos de desinfección, realizar cortes muy pequeños

no resulta favorable. Recomendamos realizar cortes de mayor tamaño para obtener

explantes más grandes.

• Se observó que variantes poco controladas como la exposición prolongada a luz

solar y la temperatura variable afectan el crecimiento y desarrollo de los explantes

llegando a inducir la deshidratación. Por lo que se recomienda controlar estas variables,

manteniendo una temperatura y una exposición a la luz, constantes.

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Referencias

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Anexos

Anexo 1. Componentes orgánicos e inorgánicos del medio MS.