LEUCEMIA A TRICOLEUCOCITI

(Hairy cell leukaemia)

Citologia (su sangue periferico)

n 1.5-2 volte la taglia di un linfocita maturo

n nucleo occupante i 2/3 della cellula

n caratteristica corona di proiezioni citoplasmatiche (“cellule capellute”)

n possibile rilievo di piccoli vacuoli (complessi ribosomiali lamellari)

“Hairy cell”microscopiaelettronica

Leucemia a tricoleucociti (LTL)

n 2% dei LNH-B periferici, n età mediana 55 anni n rapporto M/F=5:1n Splenomegalia + pancitopenia (neutropenia, possibile

piastrinopenia, anemia) e monocitopenia + alcuni trico-leucociti circolanti + “dry tap” al mielo-aspirato

n Decorso indolente (aumentata suscettibilità alle infezioni)n Remissioni di lunga durata con analoghi delle purine

(cladribrina/2cda, pentostatina)

Organi interessatin Midollo osseo: interstiziale, focale, diffuso

n Milza: interessamento della polpa rossa con risparmio e atrofia della polpa bianca

n Fegato: diffusione intrasinusoidale e localizzazione spazi portali

n Linfonodo: interessamento dei linfonodi occasionale; in genere adenopatie dell’asse celiaco, paraortiche alte, retropancreatiche; con ampie cellule neoplastiche = forma di trasformazione sia nel linfonodo che nel midollo; si associa a forme di LTL resistenti alla terapia (Mercieca J et al, Br J Haematol 1992; 82: 547, Br J Haematol 1996; 93: 409, Leuk Lymph 1994; 14 suppl 1: 79)

n Cute: occasionale localizzazione in paziente pediatrico con nodulo di 2 cm comparso in fase di remissione post terapia (Yetgin et al. Pediatr Hematol Oncol 2001 18:415)

Midollo osseo

Distribuzioneirregolarecon crescitainfiltrativa o “patchy” e risparmiodegli adipociti

No aggregati paratrabecolari

Focali aree diaplasia

Midollo osseo

OccasionalmenteLTL mima un’anemia aplasticasia clinicamente(pancitopenia)sia nell’aspettodella biopsiaosteomidollare

Soppressione emopoiesi da citochine prodotte da LTL

cellularita’ lassa/depletaaspetto

“a uovo fritto”

aspetti dovuti alcitoplasma abbondante e

poco evidente e adeposizione di fibronectina

Le cellule neoplastiche infiltrano e sostituiscono l’endoteliodei seni midollariprovocando ladegenerazione della membrana basale e lo stravaso di eritrociti

Emopoiesi residua costituita daisole eritroidi

Megacariocitopoiesiresidua

Incremento in plasmacellule policlonali

Frequente incrementodei mastociti in aree di infiltrazione

Fenomeni di accompagnamento

Fibrosi midollare

Deposizione di matricedi fibronectinaprodotta e secreta dagli elementineoplastici *e produzione edeposizione di fibrereticoliniche (fibrillecollagene tipo III) da parte dei fibroblasti

“dry tap”all’aspirato

* Burthem J et al. Blood 1994; 83: 497

Mastocitosi

Le caratteristiche nuclearie l’ aspetto distanziato della popolazione neoplastica, possonomimare processi patologicinon linfoidi:Mastocitosi, LAM-M5b, LAM-M3

Hairy cells Triptasi, CD117

aplLAM M5b LAM M3

Hairy cells

MPO, CD15, PML/RARaCD68/PG-M1, CD163

Milza: interessamento polpa rossa

Stravasi emorragici splenici

Pattern di infiltrazione epatica

Spazi portalisinusoidi

CD20 Reticolo

Linfonodo

CG

FENOTIPO

Su materiale fresco

SIg+(M+/-D, G or A), CD19+, CD20+, CD22+, CD79a+, CD79b+, CD25+, FMC7+, CD11c+s, CD25+s, CD103+, TRAP+

Su sezioni di routine

CD20+, CD79a+, CD22+,DBA.44+, Annexin A1+,CD25+, CD11c +, TRAP+,CD5 -, CD23 -, CD21 -, CD123 +,CD45/LCA+ CD45RA+, CD68/KP1+ , BSAP+, SIg+(M, D, G or A),BCL6-, IRF4-, IRTA1-

CD20

espressione markers pan-B

CD22

polpa bianca

Possibile target terapeutico per BL22

DBA44

milza midollo

Am J Surg Pathol 2005; 29: 474

DBA44: specifico per HCL, ma anche in LF (44%), PMBCL (44%), DLBCL, MCL, TCL

TRAP: specifico per HCL, ma anche in LM (57%), LLC-B (41%), MZL extranodali (29%), PMBCL (44%), DLBCL

DBA44/TRAP in tutte le HCL (solo 3% dei non-HCL rappresentati da LBCL, LLC-B, LM, LF,) (840 LNH esaminati)

Alta specificità dell’ espressionecombinata di TRAP+/DBA44+

CD103 non è espresso dagli elementi B normali; subunità alfa di integrina espressa dai linfociti T della mucosa intestinale(Mulliugam SP et al 1990; 76: 959)CD103

Antigeni espressi da linfociti Tcitotossici

CD11c: milza

Polpa biancanegativa

CD25/IL2rα: milza

Espressione di recettori per le citochine

CD123/IL3rα

Espressa da NK, neoplasie dei precursoridendritici, LAL-B

positivo in citofluorimetrianel 98% delle LTL (9% LTL-variante e 3% SLVL)(Del Giudice I et al Haematologica2004; 89:303)

Combinazione di CD11c + CD25 + CD103 ± CD123 compongono uno scoring-system per la diagnosi di LTL(Matutes E et al Leuk Lymphoma 1994; 14 suppl 1: 57)

proteina Ciclina D1+ iperespressa in 50-75% dei casicon reattività variabile > debole

NO anomalia genetica(no traslocazioni o mutazioni): meccanismi di attivazione CCND1 diversi rispetto a t(11;14)

CICLINA D1 +

Bosch F al. Br J Haematol 1995; 91: 1085Miranda RN et al Mod Pathol 2000; 13:1308

Marcatori occasionalmente espressi

CD10espresso nel 10-15% dei casi non si associa ad espressione di BCL6morfologia tipica della LTLclinica tipica di LTL (Tammy M et al AJCP 2003; 120:228Chen YH et al AJCP 2006; 125: 251)

CD10

CD5Positività riportata in un singolo case reportNon influisce su morfologia e clinica (Usha et al Acta Haematol 2000; 103:210)

CD23

IRF4/MUM1

CD68KP1

gene

proteina

Unsupervised clustering analysis of 11 BM biopsies and 3PB samples

N: naïve LCL: lymphoblastoidM: memory MM: multiple myelomaGC: germinal centre

HCL differisce dalle cellule B normali, da quelle del CG e dalle memory.Da queste differisce per espressione di citochine, chemochine e di molecole di adesione

Similmente alla B-CLL, HCL non ha translocazioni reciproche bilanciate (MBC derivation)!

Supervised analysis

Set of 89 deregulated genes:Adhesion: TIMP-1, TIMP-4, RECK, CCR7 (¯)Morphology: LSP1, F-actin, Gas7, EPB4.1L2Phagocytosis: Annexin A1, c-MafFibrosis: IL-3αR, FLT3Therapy: IFαR

Simple diagnostic assay for Hairy Cell Leukaemia by immunocytochemical detection of annexin A1

Brunangelo Falini, Enrico Tiacci, Arcangelo Liso, Katia Basso, Elena Sabattini, Roberta Pacini,

Robert Foa, Alessandro Pulsoni, Riccardo Dalla Favera, Stefano A. Pileri

The Lancet, 363:1869-70, 2004.

LYMPHOMA TYPE (N= 500) ANXA1*

HCL 64 62/64**

HCL variant 8 0/8

B-CLL 80 0/80

Prolymphocytic leukaemia

3 0/3

Splenic MZL*** 50 0/50

Nodal MZL 15 0/15

Lymphoplasmocytic lymphoma

30 0/30

Follicular Lymphoma 65 0/65

Mantle cell lymphoma 14 0/14

DLCL-B 100 0/100

Burkitt lymphoma 10 0/10

Myeloma 50 0/50

HCL: annexin A1: Pre-therapy HCL: annexin A1: Post-therapy

LYMPHOMA TYPE (N= 500) ANXA1*

HCL 64 62/64**

HCL variant 8 0/8

B-CLL 80 0/80

Prolymphocytic leukaemia

3 0/3

Splenic MZL*** 50 0/50

Nodal MZL 15 0/15

Lymphoplasmocytic lymphoma

30 0/30

Follicular Lymphoma 65 0/65

Mantle cell lymphoma 14 0/14

DLCL-B 100 0/100

Burkitt lymphoma 10 0/10

Myeloma 50 0/50

SMZL/BM: Annexin A1 FL/BM: Annexin A1

LPL/BM: Annexin A1 DLBCL/BM: Annexin A1

LYMPHOMA TYPE (N= 500) ANXA1*

HCL 64 62/64**

HCL variant 8 0/8

B-CLL 80 0/80

Prolymphocytic leukaemia

3 0/3

Splenic MZL*** 50 0/50

Nodal MZL 15 0/15

Lymphoplasmocytic lymphoma

30 0/30

Follicular Lymphoma 65 0/65

Mantle cell lymphoma 14 0/14

DLCL-B 100 0/100

Burkitt lymphoma 10 0/10

Myeloma 50 0/50

Hairy cell leukaemia

“variante”

Wu ML et al. Arch Pathol Lab Med 2000; 124: 1710.

Matutes E et al. Best Pract Res Clin Haematol 2003; 16:41.

HCL variant / HCL prolinfocitoide

Cawley et al. Leuk Res 1980; 4: 547.

Rara e controversa (caratteristiche che ricordano LTL, LPL, SMZL)

ØPazienti più anziani (8° decade), M/F=2/1ØSintomi (dolore addominale e/o pancitopenia);

Ø85% splenomegalia, 19% epatomegalia, 4% linfoadeno-patie;

Øleucocitosi (90%) (34,000/ml) con cellule atipiche (100%);Øno monocitopenia.

1. Patterns di infiltrazione midollare simili alla LTL classica

2. No “dry tap” per assenza di fibrosi

3. cellule di media taglia con citoplasma chiaro ed ampio, basofilo, cromatina meno dispersa e nucleolo prominente; occasionali cellule di grande taglia (tipo blasti trasformati)

4. Fenotipo:

ANNEXIN 1A -, CD25-, CD5-; CD11c+, FMC7+, CD22+;CD103+/-, CD72/DBA.44-/+, CD79b-/+, TRAP-/+, CD10rare (Japan), CD38 rare (Japan), IgG + o possibile co-espressione di diverse IgH, λ>k

4. Biologia molecolare: espressione del gene VH4-34 legata a prognosi peggiore. Arons E, Leuk Lymphoma, 2011, June

CD20

DBA.44

HCL variant/BM: Annexin A1

Storia naturale

n Decorso più aggressivo rispetto a LTL classica

n Meno responsiva alla terapia

n La mediana di sopravvivenza è di 10 anni dalla diagnosi

n Nel 5-10% dei casi evolve in forme più aggressive a grandi cellule mantenendo lo stesso fenotipo (sintomi B, leucocitosi, breve sopravvivenza) (Matutes et al Leukemia 2001; 15: 184)

Malattia congelata?

Determinazione della malattia minima residua

Quando i tricoleucociti non sono evidenziabili morfologicamente ma solo con IIC, citofluorimetria o PCRsi utilizza il termine MALATTIA MINIMA RESIDUA (MMR)

Diversi studi suggeriscono l’efficaciadella determinazione della MMR nelpredire la “relapse” clinica di malattia, ma è anche evidente che in parte dei pazienti con MMR, la LTL non progredisce o recidiva solo a distanza di molti anni (Ellison et al Blood 1994;84: 4319)

Nel 15-50% dei pazienti, è dimostrabile una malattiaresidua post-terapia

VALORE PREDITTIVO DELLA MMRINCERTO

DETERMINAZIONE DELLA MMR MEDIANTEIMMUNOISTOCHIMICA SU BOM

Se l’infiltrato neoplastico è <10% della cellularità midollare,per il pattern interstiziale di crescita e la somiglianza delle “Hairy cells “ con i monociti e gli elementi mieloidi, la MMR può non essere visibile all’esame morfologico

Immunoistochimica con CD20/DBA44(DBA44 può evidenziare i processi citoplasmatici)

N.B.: una piccola quota di elementi B midollari normali può esprimere DBA44

DBA44: post

DBA44: pre-terapia

DBA44: post

Splenic Lymphomas (CAC Meeting)

n Consensus to keep the current nomenclature for n Hairy cell leukemia variant, splenic marginal zone lymphoma,

splenic diffuse red pulp lymphoma and hairy cell leukemian Criteria will be added to clarify the diagnoses

n HCLv: Annexin 1 neg, no BRAF mutation, mutations in MAP2K1 and TP53

n SDRPL: Annexin 1 neg, no BRAF mutation, expression of CD180 and predominant V gene usage (V4-34 and V3-23)

n HCL: BRAF-V600E, alternative mutation may be present in exon 11, sequencing not necessary if classic HCL base on IHC and morphology, mutation can be detected by IHC

F Bacci, PP Piccaluga, E Sabattini, C Agostinelli, C Sagramoso, F Fuligni, M Rossi, S Righi, A Gazzola, T Sista, M Piccioli, MR Sapienza, C Mannu, F Fuligni, F Sandri, P

Artioli, G De Biase, G Da Pozzo, C Tigrini, M Monari and D Bignami