Laboratorio de Microbiología General · • Diarrea aguda: incremento en el número o volumen de...
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Laboratorio de Microbiología General Licda. Swuanny Valeska Villagran Herrarte Lic. Victor Hugo Soto Gramajo PRÁCTICA No. 7 EXAMEN EN FRESCO DE HECES Enfermedad diarreica Las infecciones del tracto gastrointestinal representan un grave problema de salud pública. La diarrea es la manifestación más común de esas infecciones, las cuales constituyen una de las causas más importantes de morbilidad y mortalidad en lactantes y niños menores de cinco años, con el mayor número de casos en los países en vías de desarrollo de Asia, África y Latinoamérica. La terapia de rehidratación oral, se ha identificado como la medida más eficaz para la reducción de la mortalidad por diarrea. Una mayor reducción de la misma se alcanzará al lograr el tratamiento integral de los casos, particularmente en los cuadros de disentería y de diarrea persistente. La etiología de la enfermedad diarreica es diversa y numerosos esfuerzos se han realizado para tratar de explicarla, observándose que el factor infeccioso continua sien-do el más importante, sin duda, por su carácter transmisible. De los agentes infecciosos, los bacterianos se encuentran entre los más frecuentes en todos los países del mundo. La utilidad del diagnóstico de la diarrea se enfoca fundamentalmente desde dos puntos de vista: 1. El clínico, para la atención y seguimiento de pacientes, particularmente cuando está indicado el tratamiento con antibiótico-terapia, como, por ejemplo, en la disentería. 2. Desde el punto de vista de salud pública: control de brotes, vigilancia epidemiológica y estudio sobre vacunas. Definiciones operativas: • Diarrea aguda: incremento en el número o volumen de las heces de 72 horas o me-nos de duración. • Diarrea crónica o persistente: incremento en el número o volumen de las heces de más de 14 días de duración. • Disentería: historia de moco o sangre en las heces con tenesmo o dolor al defecar y temperatura axilar de 38,5 ºC. • Gastroenteritis: diarrea líquida de color amarillo verdosa o no, acompañada con vómito y fiebre en algunas oportunidades. • Fiebre entérica: fiebre, cefalea, dolor abdominal, bradicardia relativa, esplenomegalia y leucopenia. Ej: Fiebre tifoidea. El estudio del material fecal, para el aislamiento e identificación de las bacterias productoras de diarrea se denomina: coprocultivo.
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Licda.SwuannyValeskaVillagranHerrarteLic.VictorHugoSotoGramajo
PRÁCTICA No. 7 EXAMEN EN FRESCO DE HECES
Enfermedaddiarreica
Las infecciones del tracto gastrointestinal representan un grave problema de salud pública. Ladiarreaeslamanifestaciónmáscomúndeesasinfecciones,lascualesconstituyenunadelascausasmás importantesdemorbilidadymortalidaden lactantesyniñosmenoresdecincoaños,conelmayornúmerodecasosenlospaísesenvíasdedesarrollodeAsia,ÁfricayLatinoamérica.
Laterapiaderehidrataciónoral,sehaidentificadocomolamedidamáseficazparalareduccióndelamortalidadpordiarrea.Unamayorreduccióndelamismasealcanzaráallograreltratamientointegraldeloscasos,particularmenteenloscuadrosdedisenteríaydediarreapersistente.
La etiologíade la enfermedaddiarreica esdiversa ynumerososesfuerzos sehan realizadoparatratardeexplicarla,observándosequeelfactorinfecciosocontinuasien-doelmásimportante,sinduda,porsucaráctertransmisible.Delosagentesinfecciosos,losbacterianosseencuentranentrelosmásfrecuentesentodoslospaísesdelmundo.
Lautilidaddeldiagnósticodeladiarreaseenfocafundamentalmentedesdedospuntosdevista:
1. El clínico,para la atención y seguimientodepacientes, particularmente cuandoestáindicadoeltratamientoconantibiótico-terapia,como,porejemplo,enladisentería.
2. Desdeelpuntodevistadesaludpública:controldebrotes,vigilanciaepidemiológicayestudiosobrevacunas.
Definicionesoperativas:
• Diarreaaguda:incrementoenelnúmeroovolumendelashecesde72horasome-nosdeduración.
• Diarreacrónicaopersistente:incrementoenelnúmeroovolumendelashecesdemásde14díasdeduración.
• Disentería: historia de moco o sangre en las heces con tenesmo o dolor al defecar ytemperaturaaxilarde38,5ºC.
• Gastroenteritis:diarrealíquidadecoloramarilloverdosaono,acompañadaconvómitoyfiebreenalgunasoportunidades.
• Fiebre entérica: fiebre, cefalea, dolor abdominal, bradicardia relativa, esplenomegalia yleucopenia.Ej:Fiebretifoidea.
Elestudiodelmaterial fecal,paraelaislamientoe identificaciónde lasbacteriasproductorasdediarreasedenomina:coprocultivo.
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Parásitosenheces
Lapruebadeparásitosenhecesseusaparadetectarlapresenciadeparásitosenhecesycontribuiraldiagnósticodeinfeccionesdeltractogastrointestinal(GI).ComopuedenexistirmuchostiposdeinfeccionesdeltractoGI,elestudiodeparásitosenhecessecombinaamenudoconotraspruebascomouncultivodehecesounperfildepatógenosgastrointestinales.
Elperfildepatógenosgastrointestinalesenhecespermiteevaluarsimultáneamentesiexistenvirus,baceriasyparásitoscomoagentescomunesdediarreas.Estosperfilessonrelativamentenuevosytodavíanosehaacabadodeestandarizarsuusoóptimo.Encasodenodetectarsemicroorganismosen el perfil de patógenos GI, o si se sospecha que la infección puede estar causada por unmicroorganismonoincluidoenelperfil,sepuedesolicitarunestudiodeparásitosenhecesyuncultivodeheces.
Normalmente, en personas sanas, las infecciones del tracto GI se resuelven sin tratamientoespecífico;seaplicanmedidasdesoporteynosuelensernecesariaspruebasde laboratorio.Sinembargo, pueden darse situaciones más graves en las que sean necesarias las pruebas delaboratorioparaidentificarelagentecausantedelainfecciónypoderestablecerasíeltratamientoadecuado,limitandoademáslapropagacióndelainfecciónalacomunidad.
La prueba de parásitos en heces puede también solicitarse para comprobar la eficacia deltratamientocuandoexisteunainfecciónparasitaria.
Pueden solicitarse además otras pruebas, como los antígenos de Giardia, Crytosporidium oEntamoebahistolyticasisesospechaquealgunodeestosparásitoseselresponsabledeladiarrea.Estaspruebasdetectanproteínasestructuralesdelosparásitosypermitenidentificarlainfección,inclusocuandonoseobservanlosmicroorganismosnilosquistesenlasheces.Debidoaqueestaspruebas antigénicas sólo pueden detectar algunos parásitos específicos, no pueden sustituirtotalmenteelestudiodeparásitosenheces,conelqueseconsiguedetectarunaampliavariedaddeparásitos.
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TABLA1.Tipodemuestra,métodosdetomademuestrayprocedimientodediagnósticodeparásitosintestinales
TABLA2.Parásitosintestinalesysumorfologíamicroscópicaymacroscópica
730 MICROBIOLOGÍA MÉDICA
Microorganismo infeccioso Tipos de muestra Métodos de recogida Procedimiento diagnóstico
Género Giardia Heces en frescoHeces conservadasContenidos duodenales
Contenedor impermeabilizadoFormol, PVAPrueba del cordón o aspirado
Examen microscópico En fresco Tinción permanenteAntígenos AIF EIACultivo
Género Cryptosporidium Heces en frescoHeces conservadasBiopsia
Contenedor impermeabilizadoFormol, PVASuero fisiológico
Examen microscópico (tinción ácido-alcohol resistente)
Antígenos AIF EIA
Microsporidios Heces en frescoHeces conservadasContenidos duodenalesBiopsia
Contenedor impermeabilizadoFormol, PVAAspiradoSuero fisiológico
Examen microscópico Tinción de Giemsa Tinción de Gram Tinción cromótropa
Oxiuros Frotis de huellas anales Tira adhesiva de celofán Examen macroscópicoExamen microscópico (huevos)
Helmintos Heces en frescoHeces conservadas
Contenedor impermeabilizadoFormol, PVA
Examen macroscópico (adultos)Examen microscópico (larvas y huevos)
Suero Venopunción Serología (anticuerpos)Cultivo (género Strongyloides)
Hígado, bazo
E. histolytica, género Leishmania AspiradosBiopsiaSuero
Estéril, recogido en cuatro alícuotas separadas (hígado)
Estéril; no estéril para la histologíaVenopunción
Examen microscópico En fresco Tinciones permanentesSerología Antígenos AnticuerposCultivo
Pulmones
De forma infrecuente: amebas (E. histolytica), trematodos (Paragonimus westermani), larvas (Strongyloides stercoralis) o ganchos de cestodos
EsputoLavadoAspirado transbronquialBiopsia por escobilladoBiopsia abierta de pulmón
Inducido, sin conservantesSin conservantesFrotis secados al aireFrotis secados al airePreparación en fresco; no estéril
para la histología
Examen microscópico Tinción de Giemsa Tinción de GramHematoxilina-eosina
Suero Venopunción Serología Antígenos Anticuerpos
Músculos
Trichinella spiralisT. cruzi
Biopsia No estéril para la histología Examen microscópico (tinciones permanentes)
Suero Venopunción Serología Anticuerpos Antígenos
Piel
Onchocerca volvulus, género Leishmania
Larva migratoria cutánea
RaspadosTrozos de pielBiopsia
Asépticos, frotis o en vialSin conservantesNo estéril para la histología
Examen microscópico En fresco Tinciones permanentes
Suero Venopunción Serología (anticuerpos)Cultivo (género Leishmania)
Sistema urogenital
Trichomonas vaginalis Flujo vaginalSecreciones prostáticasFlujo uretral
Torundas empapadas en salino fisiológico, medio de cultivo
Torundas empapadas en salino fisiológico, medio de cultivo
Torundas empapadas en salino fisiológico, medio de cultivo
Examen microscópico En fresco Tinciones permanentesAntígenos (AIF)CultivoSerología (anticuerpos)Sondas de ácidos nucleicos
Schistosoma haematobium OrinaBiopsia
Muestra única sin conservantesNo estéril para la histología
Examen microscópico
AIF, análisis de inmunofluorescencia; EIA, enzimoinmunoanálisis; PCR, reacción en cadena de la polimerasa; PVA, alcohol polivinílico.
Tabla 79-1 Localizaciones corporales, recogida de muestras y procedimientos diagnósticos en infecciones parasitarias seleccionadas (cont.)
Parásito Síndromeclínico Microscopía
PROTOZOOS
Entamoebahistolytica disentería
Giardialamblia Diarreacuosa
Balantidiumcoli balantidiasis
Cryptosporidium Diarreaacuosa
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Fuente:Vizcayaycol,1999;RomeroyHerrera,2002;RyanyRay,2004.
Cyclosporacayetanensis
Cystoisosporabelli
Nemátodos
Enterobiusvermicularis
Ascarislumbricoides
Trichuristrichiura
AncylostomaduodenaleyNecatoramericanus
Strongyloidesstercoralis
CESTODES
Taeniasolium
TaeniasaginataTeniasisoCisticercosis
Hymenolepisnana
CESTODOS 815
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frecuente de infección por cestodos en EE.UU. y en ocasiones se desarrolla en estado de cisticerco en cucarachas; el ratón y el ser humano pueden ingerir ocasionalmente estas cucara-chas en harina o grano contaminados. Los niños presentan un riesgo particularmente alto de desarrollar la infección y, debido al sencillo ciclo vital del parásito, las familias de niños que acuden a centros de día experimentan problemas para controlar la transmisión de este microorganismo.
Enfermedades clínicasSi sólo hay algunos gusanos en el intestino no se experimentan síntomas. En las infecciones masivas, especialmente si ha habido autoinfección e hiperinfección, los pacientes sufren diarrea, dolor abdominal, cefalea, anorexia y otras molestias mal definidas.
Diagnóstico de laboratorioEl examen de las heces revela la presencia de los huevos característicos de H. nana, con su embrión con seis ganchos y filamentos polares (fig. 85-13).
Tratamiento, prevención y controlEl fármaco de elección es el prazicuantel; una alternativa es la niclosamida. El tratamiento de los casos, la mejora de las condiciones sanitarias y la higiene personal adecuada, es-pecialmente en el ambiente familiar e institucional, resultan esenciales para controlar la transmisión de H. nana.
HYMENOLEPIS DIMINUTA
Fisiología y estructuraHymenolepis diminuta, especie íntimamente relacionada con H. nana, es un cestodo que afecta principalmente a ratas y ratones, pero que también se encuentra en el ser humano. Di-fiere de H. nana en su longitud, ya que mide de 20 a 60 cm. El escólice carece de ganchos y los huevos son de mayor tamaño, se tiñen por la bilis y no tienen filamentos polares (fig. 85-14). El ciclo vital de H. diminuta es más complejo que el de H. nana y requiere insectos en fase larvaria («gusano de la harina») para alcanzar la fase infecciosa de cisticerco.
EpidemiologíaSe han registrado infecciones en todo el mundo, incluido EE.UU. Las larvas de cucaracha o de otros insectos se infec-tan cuando ingieren heces de rata que transportan huevos de H. diminuta. El ser humano se infecta al ingerir insectos en fase larvaria (gusano de la harina) en grano contaminado (p. ej., harina, cereales).
Enfermedades clínicasLas infecciones moderadas no producen síntomas, pero una carga parasitaria más alta produce náuseas, dolores abdomi-nales, anorexia y diarrea.
Diagnóstico de laboratorioEl examen de las heces pone de manifiesto la presencia de los huevos teñidos de bilis que carecen de los filamentos polares característicos.
Tratamiento, prevención y controlEl fármaco de elección es la niclosamida; el prazicuantel es una alternativa. Es esencial el control de roedores en áreas donde se produce o almacena cereal. También es importante la inspección cuidadosa de los productos derivados de cerea-les con el fin de detectar la presencia de insectos.
DIPYLIDIUM CANINUM
Fisiología y estructuraDipylidium caninum, un pequeño cestodo que mide unos 15 cm de longitud, es principalmente un parásito de pe-rros y gatos, pero también puede infectar al ser humano, especialmente a niños cuyos labios son lamidos por animales domésticos infectados. El ciclo vital implica el desarrollo de larvas del gusano en las pulgas de perros y gatos. Estas pulgas, cuando son aplastadas por los dientes del animal infectado, se transportan a la lengua del niño cuando besa al animal o cuando el animal lame al niño. La deglución de la pulga infectada produce una infección intestinal.
Figura 85-13 Huevo de Hymenolepis nana. Los huevos tienen un diá-metro de 30-45 !m y poseen una delgada cápsula que contiene un em-brión con seis ganchos.
Figura 85-14 Huevo de Hymenolepis diminuta. Los huevos son grandes (70-85 !m × 60-80 !m) y tienen un embrión con seis ganchos rodeado de una membrana que está muy separada de la cubierta externa.
TaeniasoliumTaeniasaginata
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ExamenenFrescodeHeces
EXAMENMACROSCOPICODEHECES
• COLOR:Café,amarillo,verde,rojo,acólico(blanco),negro.• CONSISTENCIA:Dura,cíbalos,blanda,pastosaylíquida.• PRESENCIADEMUCUS:NegativooPositivo.• RESTOSALIMENTICIOS:Escasos,moderadosoabundantes.• pH
EXAMENMICROSCÓPICODEHECES
Analizar microscópicamente una muestra de heces en busca de la presencia de leucocitos yparásitos.
• PARÁSITOS:Anotarelnombredelgéneroyespecie,asícomosuestadoevolutivo.• LEUCOCITOS:Reportarelnúmerodeleucocitosporcampo.• ERITROCITOS:Reportarelnúmerodeeritrocitosporcampo.• RESTOSALIMENTICIOS:Escasos,moderadosoabundantes.• LEVADURAS:Escasas,moderadasoabundantes.• RESTOSDEGRASA:Reportardemoderadoaabundante.
MATERIALESYEQUIPO
• Frascosplásticosdebocaanchaytapónderoscaconcapacidadpara2onzas.• Aplicadoresdemadera.• Guantesdescartables.• Marcadordevidrio.• Láminasportaobjeto.• Laminillascubreobjeto.• Lápizmarcadordevidrio.• Aplicacionesdemadera.• Guantesdescartables.• Soluciónsalina0.85%.• SolucióndeLugolparaheces.• Papellimpialente.• Microscopio
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PROCEDIMIENTO:EXAMENMACROSCOPICO
1. Observarelcolordelamuestra. 2. Observarlaconsistenciadelamuestra.3. Utilizarunaplicadordemaderaparabuscarlapresenciademucusenlamuestra.4. Observarlapresenciaderestosalimenticiosenlamuestra.5. Anotarloshallazgos.
PROCEDIMIENTO:EXAMENMICROSCOPICO
• Identificarlaláminaportaobjeto• Colocarenunextremodelaláminaportaobjetounagotadesoluciónsalinaal0.85%yen
elotroextremoLugol.• Agregarunagotadehecespreviamenteconcentradaatravésdecentrifugación.• Cubrirlapreparaciónconunalaminillacubreobjeto.• Observarenformasistemáticaalmicroscopio,conelobjetivo10xyluegoconel40x.• Reportartodoloobservado.
*Consoluciónsalina0.85%, los trofozoitosyquistesde losprotozoariosseobservanenformanaturalyconlugolsevisualizanlasestructurasinternas,núcleosyvacuolas.
REPORTEDELABORATORIO:
Macroscópico• Color• Consistencia• Sangre• Restosalimenticios• Moco• pH
Microscópico
• Jabones• Almidones• Grasas• Célulasvegetales• parásitos
PRE-LABORATORIO
1. Investiguelostiposdediarreasqueproducencadaunodelosagentesdescritosenlatabla2.
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BIBLIOGRAFÍA
Vizcaya, L. En AraqueM, Nieves B, Sánchez K, Velásquez A, Velazco E, Vizcaya L. Manual práctico de bacteriología.UniversidaddeLosAndes,FacultaddeFarmacia,EscueladeBioanálisis,DepartamentodeMicrobiologíayParasitología,CátedradeBacteriologíaClínica.1.999.
RyanK,RayC.Sherris,Microbiologíamédica.4ªed.México:McGraw–HillInteramericana;2004.
ChengA,McDonaldJ,ThielmanN.Infectiousdiarrheaindevelopedanddevelopingcountries.JClinGastroenterol2005;39(9):757-773.
DelgadoA,AmichS,PrietoS,SalveM.Manualdelaboratorioclínicobásico:Microbiología.Colombia:McGrawHill;2000.
