“LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA Y DE

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INFORME DE PRÁCTICAS PRE-PROFESIONALES

PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:

QUÍMICO FARMACÉUTICO

“LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA Y

FARMACOBOTANICA DE LA FACULTAD DE

FARMACIA Y BIOQUIMICA”

AUTOR:

Bach. LORENZO MEDINA ZUMARÁN

ASESOR:

Dr. SEGUNDO GUIILLERMO RUIZ REYES

TRUJILLO – PERÚ

2016

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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ÍNDICE

Presentación…………………………………..….……ii

Jurado dictaminador…………………………………iii

Agradecimientos:……………………………..…..…..iv

Resumen:…………………………………………..….v

Abstract………………………………………...……..vi

INTRODUCCIÓN:……………………………………1

LA INSTITUCIÓN O EMPRESA:…………………..7

ACTIVIDADES DESARROLLADAS:………………11

PRESENTACIÓN DE RESULTADOS:……………..23

CONCLUSIONES:…………………………………….27

RECOMENDACIONES:………………………………28

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:………………29

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PRESENTACIÓN

Señores miembros del Jurado:

Dando cumplimiento a las disposiciones establecidas en el reglamento de la facultad de

farmacia y bioquímica de la universidad nacional de Trujillo, someto a su consideración

y elevado criterio científico el presente Informe de Practicas Pre-profesionales:

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA Y FARMACOBOTANICA DE LA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA - Evaluación en el rendimiento de

las extracciones variando pH y Cuantificación de Antocianinas Totales por el

método de pH diferencial en el Extracto Etanolico Vaccinium myrtillus

“Arándano” respectivamente.

Es propicia la oportunidad para manifestar muestro eterno y sincero agradecimiento a

los excelentes profesores de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, quienes en su

meritoria labor de educadores nos han orientado incondicionalmente durante la

formación profesional.

Agradecemos la colaboración desinteresada de quienes en algún momento nos han

brindado el apoyo necesario para la culminación de este trabajo de investigación.

Por tanto, señores miembros del jurado sometemos el presente trabajo para su respectiva

evaluación y veredicto, esperando sea de interés y de gran utilidad para la Facultad y la

Comunidad.

Trujillo 04 de Agosto del 2016

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JURADO DICTAMINADOR

______________________________________

Q.F. Gilmer Zari Gil

_____________________________________

Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruiz Reyes

_________________________________________

Dr. Q.F. Edmundo Arturo Venegas Casanova

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AGRADECIMIENTOS

Expreso mi especial agradecimiento a la Universidad Nacional de Trujillo

Facultad de Farmacia y Bioquímica - Cátedra de Farmacognosia y

Farmacobotànica, que permitiese la práctica en el área de Docencia e Investigación.

Así mismo a todos los profesores competentes quienes me han brindado todo su apoyo,

dándome la oportunidad de poder ampliar mis conocimientos y de quien recojo su

ejemplo para ponerlos en práctica en mi vida profesional.

A mi asesor Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes, Docente del Departamento

Académico de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.

Agradecerle su apoyo, paciencia, así como las ganas de aprender y mejorar que me ha

transmitido y que tan útiles han sido. Gracias por darme la oportunidad de lograr

obtener mi tan ansiado título profesional.

A mi Familia Por su cariño, comprensión y apoyo sin condiciones ni medida.

Gracias por guiarme sobre el camino de la educación, y muchas cosas más que no

terminaría de mencionar.

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RESUMEN

El presente informe da a conocer las actividades desarrolladas en el Laboratorio de

Farmacognosia y Farmacobotanica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica; y por

consiguiente; La Evaluación en el rendimiento de las extracciones variando pH y

Cuantificación de Antocianinas Totales por el método de pH diferencial

respectivamente. La muestra de estudio fue Vaccinium myrtillus “Arándano”. Primero

se seleccionó las muestra, luego se cortó en trozo pequeños luego se preparó un extracto

etanolico del filtrado se llevó a una concentración del 5%. Para la cuantificación de

antocianinas totales se utilizó el método de pH diferencial, con lectura

espectrofotométrica a 510nm, datos obtenidos se calculó la concentración de

antocianinas totales donde se obtuvo un rendimiento mayor en la concentración de

antocianinas del extracto etanolico a pH acido que fue de 8.961mg/L.

Palabras Clave: Vaccinium myrtillus. Antocianinas Totales

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ABSTRACT

This report reveals the activities carried out in the Laboratory of Pharmacognosy and

pharmacobotany of the Faculty of Pharmacy and Biochemistry; and therefore

performance Evaluation extractions varying pH and Quantification of total anthocyanins

by the method of differential pH respectively. The study sample was Vaccinium

myrtillus "Blueberry". First the sample was selected, then cut into small piece then an

ethanolic extract of the filtrate brought to a concentration of 5% was prepared. the

method of differential pH was used, with spectrophotometric reading at 510 nm for

quantification of total anthocyanins data from the concentration of total anthocyanins

where a higher yield was obtained in the concentration of anthocyanins of ethanol

extract at pH acid was 8,961 calculated mg / L.

Keywords: Vaccinium myrtillus. Total anthocyanins

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I. INTRODUCCIÓN

El uso de medicinas alternativas como las plantas medicinales y los suplementos

dietarios ha sido una práctica tradicional que no ha caído en desuso. Se estima que 80%

de la población mundial depende de remedios herbolarios tradicionales y que al menos

35 000 especies vegetales presentan potencial para uso medicinal. La gran diversidad

vegetal y la amplia riqueza cultural de los países de Sudamérica han favorecido el

aprovechamiento de las plantas con fines medicinales desde épocas prehispánicas. Este

patrimonio cultural se ha transmitido de generación en generación, de manera que

algunas costumbres subsisten y son ejercidas de manera cotidiana, tanto en áreas rurales

como urbanas1.

La investigación de plantas medicinales se ha desarrollado vertiginosamente en la

actualidad y gracias a los diferentes tipos de ensayos (fitoquímicos, farmacológicos,

toxicológicos y clínicos) que a estas se les practican cientos de ellas vienen siendo

utilizadas como recurso terapéutico dentro de la medicina convencional1,2,3

.

Una de las ramas que apoya la investigación de plantas medicinales es la

farmacognosia; que se constituye como el estudio de las materias primas y de las

sustancias de origen biológico con fines terapéuticos, es decir todas aquellas

provenientes de fuentes vegetales, animales o de microorganismos.

Estudiar una planta permite definir su identidad, detallar sus parámetros de calidad,

analizar su composición química y las propiedades y características de los principios

activos a los cuales se les puede atribuir su actividad farmacológica4.

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Los componentes de una planta se subdividen en dos grandes grupos: Los metabolitos

primarios y los metabolitos secundarios o productos naturales. Los primeros

(carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos) están universalmente distribuidos

y participan en la actividad celular de todo ser viviente; mientras que los últimos,

comprenden los llamados principios activos, compuestos químicos de estructura

relativamente compleja y de distribución más restringida, que los anteriores. Los

metabolitos secundarios no son indispensables en las plantas, no se ha descubierto aún,

alguna función metabólica en la cual ellos intervengan, sin embargo, su aislamiento,

reconocimiento estructural y comprobación de su actividad farmacológica tanto in vitro

como in vivo dan lugar a la obtención de posibles drogas que finalmente redunden en la

conservación o recuperación de la salud de las personas5,6.

Los metabolitos secundarios más ampliamente estudiados en la actualidad pertenecen a

la familia de los flavonoides, estos justifican su creciente demanda en las diferentes

propiedades farmacológicas que ostentan, siendo la más relevante la antioxidante, esta

propiedad química que presentan este tipo de moléculas les permite formar parte de las

terapias coadyuvantes al tratamiento de diferentes procesos fisiopatológicos en los

cuales se ve involucrado el estrés oxidativo7.

El interés en los flavonoides entre ellos las antocianinas se debe a la apreciación de su

amplia actividad farmacológica. Pueden unirse a los polímeros biológicos, tales como

enzimas, transportadores de hormonas, y ADN; quelar iones metálicos transitorios, tales

como Fe2+, Cu2+, Zn2+, catalizar el transporte de electrones, y depurar radicales libres.

Debido a este hecho se han descrito efectos protectores en patologías tales como

diabetes mellitus, cáncer, cardiopatías, infecciones víricas, úlcera estomacal y duodenal,

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e inflamaciones. Otras actividades que merecen ser destacadas son sus acciones

antivirales y antialérgicas, así como sus propiedades antitrombótica y

antiinflamatoria7,8

.

Las antocianinas son un grupo de pigmento de color rojo, hidrosoluble, ampliamente

distribuido en el reino vegetal. Químicamente las antocianinas son glucosidos de las

antocianididanas, es decir, están constituidas por una molecula de antocianidina, que es

la aglicona a la que se le une un azúcar por medio de un enlace β-glucosidico. La

estructura química básica de las agliconas es el ion flavilio, también llamado 2-

fenilbenzopirilo, que consta de dos grupos aromáticos: un benzopirilo (A) y un anilllo

fenólico (B); el flavilio normalmente funciona como catión. Las agliconas libres

raramente existen en los alimentos, excepto posiblemente como componentes traza de

las reacciones de degradación.9

De todas las antocianidinas que actualmente se conocen (aproximadamente 20), las más

importantes (cianidina, malvidina, pelargonidina, petunidina, delfinidina y peonidina).

El interés por los pigmentos antociánicos e investigación científica se han incrementado

en los últimos años, debido no solamente al color que confieren a los productos que las

contienen sino a su probable papel en la reducción de las enfermedades coronarias,

cáncer, diabetes; a sus efectos antiinflamatorios y mejoramiento de la agudeza visual y

comportamiento cognitivo. Por lo tanto, además de su papel funcional como colorantes,

las antocianinas son agentes potenciales en la obtención de productos con valor

agregado para el consumo humano8.

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Las principales fuentes de antocianinas son los frutos, entre ellos tenemos al de Vitis

vinífera, Vaccinium corymbosum, Solanum melongena, Myrcianthes discolor, Zea

mays, etc.

En los campos y en la selva de nuestro país se encierran tesoros enormes, aún poco

estudiados, y que son conservados por nuestros pobladores1, 2.

La especie Vaccinium myrtillus conocida también en español como arándano, mirtilo,

mirtilo negro; en portugués como mirtilo, arándano, uva de monte; en inglés como

blueberry o bilberry.

Esta planta se trata de un sub arbusto perteneciente a la familia de las Ericáceas, que

mide entre 30 y 60 cm de alto. Presenta hojas alternas, de color verde brillante, de

aspecto ovoide y finamente dentadas, que pueden alcanzar los 3 cm de longitud. Las

flores son pequeñas, aisladas, de tonalidades que viran entre el verde, azul y el rosa.

Nacen de las axilas de las hojas, desde la primavera hasta el final del verano. Los frutos

son rojos purpureo midiendo entre 6 y 10 mm.11

El arándano es originario de Europa y del norte de Ásia, existiendo también algunas

especies en Norteamérica. Crece en los suelos ácidos, húmedos, con abundante humus;

preferentemente en bosques y turberas hasta los 2600 m de alto. ). Posee en sus frutos

una composición química de antocianinas y antocianósidos (0.50%), que están

compuestos de delfinidina, 3-glucosildelfinidina, cianidina, petunidina, peonidina y

malvidina. A este conjunto de antocianinas o antocianósidos se le conoce con el nombre

de mirtillina.11, 12

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El Vaccinium myrtillus “arándano” tiene muchos compuestos, pero ante todo

compuestos fenólicos especialmente los antocianos, teniendo como principal antociano

(flavonoide) la cianidina 3- glucósido con un porcentaje de 70%. Estos antocianos son

los que le proporcionan el color morado a éste maíz; se ha reportado que las

antocianinas tienen varias actividades biológicas entre ellas podemos citar su actividad

antioxidante, antimutagénica, anticancerigena entre otras9, 10, 12

El Perú presenta una flora variada calculada aproximadamente en 80 000 especies; se

cuenta con 28 climas de los 32 existentes en el planeta y 84 de las 103 zonas de vida

reconocidas en la tierra3.

Según estadísticas de la Organización Mundial de la Salud, se estima que un 80% de la

población mundial satisface sus necesidades de salud con hierbas y plantas silvestres.

De las especies vegetales presentes en el Perú la gran mayoría son carentes de estudios

que avalen su composición fitoquímica y/o propiedades farmacológicas.12

Vaccinium myrtillus “arándano” una especie endémica del norte del país, usada

tradicionalmente como espasmolítico y oxitócico, presenta frutos con potencial

contenido de compuestos antioxidantes además de sus propiedades nutricionales

inherentes. Actualmente Vaccinium myrtillus “arándano” demanda de estudios que

validen su uso como droga en la medicina tradicional y que de esta forma generen la

base para futuras investigaciones en relación a sus propiedades farmacológicas in

vivo13

.

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1. OBJETIVOS:

1.1. OBJETIVOS GENERALES:

- Desarrollo del informe de prácticas pre- profesionales:; Evaluación en el

rendimiento de las extracciones variando pH y Cuantificación de

Antocianinas Totales por el método de pH diferencial en el Extracto

Etanolico Vaccinium myrtillus “Arándano” en la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo en el año 2015.

1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

- Determinar las características farmacognósticas del fruto de Vaccinium

myrtillus “Arándano”

- Cuantificar las antocianinas totales presentes en el extracto etanolico del

fruto de Vaccinium myrtillus “Arándano” por el método pH diferencial.

- Determinar mejor rendimiento a pH acido para la extracción de

antocianinas totales extracto etanolico del fruto de Vaccinium myrtillus

“Arándano”

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2. LA INSTITUCIÓN O EMPRESA:

1. RAZÓN SOCIAL:

Universidad Nacional de Trujillo.

Facultad de Farmacia y Bioquímica.

Departamento Académico de Farmacología.

Cátedra de Farmacognosia.

2. MISIÓN, VISIÓN, OBJETIVOS Y FUNCIONES:

2.1. MISIÓN:

“Al, 2024, seremos una facultad acreditada nacional e internacionalmente,

reconocida por formar profesionales, humanistas, científicos y

tecnológicos, que respondan a la demanda social, y aportar al desarrollo

sostenible de la región y el país.”

2.2. VISIÓN:

“Somos la primera Facultad de Farmacia y Bioquímica del Norte del Perú,

formamos profesionales humanistas, científicos y tecnólogos, son sentido

ético y social, generando y transfiriendo conocimiento; que contribuye a la

salud publica en el ámbito de su competencia para el desarrollo sostenible

de la región y el país”

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2.3. OBJETIVOS

- Formar profesionales químicos farmacéuticos con elevada calidad

humanística, científica y tecnológica, capaces de asumir un rol para

satisfacer las necesidades locales, regionales y nacionales, en el

ámbito que le corresponde.

- Vincularse con la comunidad a través de proyectos y programas

que conduzcan a solucionar problemas locales, regionales y

nacionales.

- Desarrollar una constante capacitación profesional mediante,

cursos de actualización, de postgrado, certámenes científicos,

humanísticos y tecnológicos.

- Auspiciar eventos educativos, culturales, deportivos y

recreacionales, para la formación integral de sus estudiantes y

graduandos.

- Interrelacionados con Facultades afines, Instituciones y Empresas,

para solucionar problemas comunes.

2.4. FUNCIONES:

- Planificar, aprobar y administrar la investigación relacionada a su

área de formación profesional.

- Describir, caracterizar y explicar que estructuras de las especies

vegetales presentan mayor propiedad medicinal.

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- Familiarizar al alumno con las diferentes técnicas de extracción de

los principios activos a partir de las plantas medicinales.

- Analizar y aplicar métodos de separación, identificación y

cuantificación de metabolitos secundarios contenidas en especies

vegetales de propiedad medicinal

- Investigar nuevas fuentes de especies vegetales que presentan

propiedad medicinal y desarrollar nuevos métodos de análisis

- Analizar y aplicar técnicas de extracción y separación de principios

activos contenidos en drogas naturales.

- Demostrar interés por la investigación química de los productos

naturales mediante análisis Farmacognósticos.

- Lograr el dominio de conversiones de un sistema a otro en pesas y

medidas

- Analizar y aplicar técnicas de extracción y separación de principios

activos contenidos en drogas naturales

- Conocer los métodos de extracción continuos y discontinuos

- Describir los diferentes procesos metabólicos para la formación de

carbohidratos -Analizar y conocer los principales usos de los

carbohidratos

- Explicar los procesos biosintéticos de las drogas lipídicas

- Aplicar técnicas para extraer y valorar las sustancias lipídicas en

las drogas naturales

- Conocer las drogas con aceites de interés farmacognóstico

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3. ORGANIGRAMA GENERAL Y DEL ÁREA DE PRÁCTICA:

4. LOCALIZACIÓN

Av. Juan Pablo II s/n

Trujillo – La Libertad

5. INFRAESTRUCTURA ADMINISTRATIVA Y PRODUCTIVA

5.1. Infraestructura administrativa

- Facultad de Farmacia y Bioquímica - Dpto. de Farmacotecnica

5.2. Infraestructura productiva

- Laboratorio de Farmacognosia y Farmacobotánica

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III. ACTIVIDADES DESARROLLADAS

1. CRONOLÓGICAMENTE:

I SEMESTRE: ABRIL-AGOSTO 2015

FARMACOGNOSIA I

I UNIDAD

DENOMINACIÓN: FARMACOGNOSIA: GENERALIDADES,

ESTABILIZACIÓN, CONTROL DE DROGAS VEGETALES: PESOS Y

MEDIDAS USADAS EN FARMACIA Y OTROS, MÉTODOS DE

EXTRACCIÓN DE DROGAS VEGETALES.

INICIO: 2015-04-01 TÉRMINO: 2015-04-29 NÚMERO DE

SEMANAS/DÍAS: 4

ACTIVIDAD I UNIDAD:

Analizar y aplicar técnicas de extracción y separación de principios activos

contenidos en drogas naturales.

Demostrar interés por la investigación química de los productos naturales

mediante análisis Farmacognósticos.

Lograr el dominio de conversiones de un sistema a otro en pesas y medidas.

- Conformación de grupos de Práctica de Laboratorio.

- Pesas y Medidas. Ejercicios de aplicación.

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II UNIDAD

DENOMINACIÓN: MÉTODOS DE EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN

PRELIMINAR DE PRINCIPIOS ACTIVOS DE PRODUCTOS NATURALES.


SEMANAS/DÍAS: 4

ACTIVIDAD II UNIDAD:

Analizar y aplicar técnicas de extracción y separación de principios activos

contenidos en drogas naturales.

Conocer los métodos de extracción continuos y discontinuos.

Métodos de Extracción discontinua: Maceración, Digestión, Infusión,

Decocción.

- Métodos de Extracción continúa. Tipos de Percolación.

- Métodos de Extracción continúa. Soxhlet.

- Identificación preliminar de principios activos de productos naturales.

III UNIDAD

DENOMINACIÓN: CARBOHIDRATOS


SEMANAS/DÍAS: 4

ACTIVIDAD III UNIDAD:

Describir los diferentes procesos metabólicos para la formación de

carbohidratos.

Analizar y conocer los principales usos de los carbohidratos.

- Reacciones de identificación y diferenciación de monosacáridos.

Título del licor de Fehling. Valoraciones de monosacáridos.

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- Extracción, identificación y valoración de disacáridos.

- Extracción, identificación y valoración de polisacáridos. Marcha

analítica para la identificación de carbohidratos.

IV UNIDAD

DENOMINACIÓN: LÍPIDOS


SEMANAS/DÍAS: 4

ACTIVIDAD IV UNIDAD:

Explicar los procesos biosintéticos de las drogas lipídicas.

Aplicar técnicas para extraer y valorar las sustancias lipídicas en las drogas

naturales.

Conocer las drogas con aceites de interés farmacognóstico:

- Extracción e identificación de lípidos de drogas vegetales.

Reacciones cromáticas.

- Índice de acidez de aceites vegetales Índice de saponificación e

índice de ésteres de aceites vegetales.

- Índice de yodo, índices de peróxidos de aceites vegetales.

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II SEMESTRE: SEPTIEMBRE-DICIEMBRE 2015

FARMACOGNOSIA II

I UNIDAD

DENOMINACIÓN: ACEITES ESENCIALES Y COLORANTES


SEMANAS/DÍAS: 4

ACTIVIDAD I UNIDAD:

Lograr el sentar en los alumnos los conocimientos Teórico-prácticos básicos

en relación al estudio de aceites esenciales y colorantes naturales

Extracción de aceites esenciales de drogas vegetales de interés

farmacéutico por arrastre de vapor de agua e hidrodestilación;

determinación de sus características organolépticas y físico-químicas.

Utilizar los aceites esenciales y colorantes naturales como materia prima para

la formulación de un fitofármaco.

Separación y determinación del porcentaje relativo de componentes

hidrocarbonados y oxigenados de un aceite esencial. Formulación de

un fitofármaco a partir de Aceites esenciales.

Extracción de colorantes naturales de drogas vegetales de interés

farmacéutico

Extracción y separación de clorofila y carotenoides por cromatografía

en columna preparativa.

Elaboración de un fitofármaco.

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II UNIDAD

DENOMINACION: COMPUESTOS FENOLICOS


SEMANAS/DÍAS: 4

ACTIVIDAD II UNIDAD:


en relación al estudio de los compuestos fenólicos (flavonoides,

antocianinas, taninos, lignanos, cumarinas, etc.) puntualizando en temas

específicos tales como su biogénesis, características fisicoquímicas,

clasificación, usos medicinales y las técnicas específicas para su extracción,

identificación, separación, análisis y cuantificación.

Extracción y cuantificación gravimétrica de rutina.

Cinética de transformación de rutina en Quercetina durante el proceso

de extracción. Monitorización de la hidrolisis por cromatografía en

capa fina.

Cuantificación de taninos por método volumétrico de Jean.

Fomentar el desarrollo de investigación en relación al estudio de los

compuestos fenólicos involucrando activamente al alumno en actividades

científicas de significancia académica, pertinentes y factibles dentro de

nuestro medio.

Estabilidad acelerada de drogas vegetales y extractos que contienen

flavonoides.

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III UNIDAD

DENOMINACIÓN: ALCALOIDES


SEMANAS/DÍAS: 4

ACTIVIDAD III UNIDAD:


en relación al estudio de los diferentes tipos de alcaloides puntualizando en

temas específicos tales como su biogénesis, características fisicoquímicas,

clasificación, usos medicinales y las técnicas específicas para su extracción,

identificación, separación, análisis y cuantificación.

Extracción de alcaloides por maceración en medio ácido, básico y

neutro. Extracción de alcaloides por soxhlet.

Identificación preliminar de alcaloides mediante reacciones

decoloración y precipitación; y Cromatografía en Capa Fina.

Separación y purificación de los alcaloides de Catharanthus roseus

“chabelita” por método contracorriente.

Caracterización ambiental y sanitaria del Centro Poblado menor

Miramar-Distrito de Moche.

IV UNIDAD

DENOMINACION: METABOLITOS SECUNDARIOS DE NATURALEZA

DIVERSA Y PRODUCTOS DIVERSOS.


SEMANAS/DÍAS: 4

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ACTIVIDAD IV UNIDAD:


en relación al estudio de metabolitos secundarios de naturaleza diversa

puntualizando en temas específicos tales como su obtención a partir de

fuentes naturales, clasificación, identificación y usos.

Extracción de sapogeninas. Determinación de índice afrosimétrico

Extracción y caracterización de glucósidos cardiotónicos.

Extracción, identificación y separación cromatográfica de

antraquinonas y cannabinoides.

Extracción e identificación de los componentes del propóleos.

Preparación de un fitofármaco.

Conocer los principales productos diversos de origen natural de interés

farmacéutico.

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TRABAJO DE INVESTIGACIÓN

2.1.MÉTODO

2.1.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:

Para el análisis se recolectaron frutos de Vaccinium myrtillus “Arándano”

procedentes de la ciudad de Contumazá, provincia Contumazá,

Departamento de Cajamarca de la cual una vez llegada al laboratorio será

preparada, para luego ser conservada en recipientes secos y estériles, hasta

el momento de preparar el extracto etanolico.

2.1.2. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO ACUOSO AL 5%:

Se pesará 50 gramos de muestra (grano + tuza cortada en trocitos) luego se

llevará a cocción con 400 mL de agua destilada durante 15 minutos, luego

filtramos con papel filtro Whatman y se vuelve a llevar a cocción con 300

mL agua destilada seguidamente se vuelve a filtrar y se da una última

cocción con 300mL más de agua destilada y se filtra de nuevo; luego se

juntará todo lo filtrado y se afora a un litro. Para cada una de las muestras se

precederá de la forma anterior (ver anexo 1).

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2.1.3. DETERMINACIONES QUÍMICAS:

2.1.3.1. Determinación de concentración de antocianinas totales mediante el

método de pH diferencial:

Principio del método: A pH 1,0 (forma oxonium) las antocianinas existen

en la forma altamente coloreada y a pH 4,5 están predominantemente en

forma incolora (forma hemiacetal). Una alícuota de una solución acuosa de

antocianinas es ajustada a pH 1,0 y otra a pH 4,5. La diferencia en la

absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción será proporcional al

contenido de antocianinas12

.

Preparación de buffers

Buffer pH 4, 5: el buffer se preparará de la siguiente manera: 40mL de

acetato de sodio 1M más 24 ml de HCl 1N y 36 mL de agua destilada.

Buffer pH 1, 0: el buffer se preparará de la siguiente Manera: 12, 5 ml de

KCl 0, 2 N más 38, 5 ml de HCl 0, 2 N

El pH de los buffers deberá ser ajustado a medida que se requiera para

obtener valores de pH final de 1,0 y 4,5 12

.

Método de pH diferencial:

Para medir la absorbancia, el extracto acuoso debe ser diluido con buffer. La

dilución debe ser tal que la muestra a pH 1,0 tenga una absorbancia menor a

1,0 y preferentemente en el rango de 0,4 a 0,6. El factor de dilución debe ser

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el mismo para ambas muestras (pH 1,0 y pH 4,5). En este caso se va tomar

0.4 mL de macerado y 3.6 mL de buffer para tener un factor de dilución 10.

Las muestras diluidas deben estar claras, sin turbidez ni sedimento. Si la

muestra está libre de turbidez, la absorbancia a 700 nm debería ser 0. La

turbidez puede ser corregida midiendo la absorbancia a 700 nm y

sustrayendo este valor de la absorbancia a la longitud de onda de máxima

absorción (510-540).Una vez diluidas las muestras se mide su absorbancia

(pH 4,5 y pH 1,0) a la longitud de onda de máxima absorción (entre 510 y

540 nm), para éste caso será de 510nm.

La determinación del contenido de antocianinas está basada en la Ley de

Lambert-Beer (A=ε·C·L). A corresponde a la absorbancia que es medida

con un espectrofotómetro. ε corresponde a la absorbancia molar, una

constante física para especies moleculares en un solvente a una determinada

longitud de onda. La absorbancia molar también se conoce como coeficiente

de extinción molar. C es la concentración molar y al reestructurar la

ecuación de Lambert-Beer esta sería:

L es la longitud de recorrido en cm y la mayoría de las cubetas para

espectrofotómetro tienen una longitud de 1. La concentración en mg/L puede

ser determinada multiplicando por el peso molecular (MW) del pigmento:

20

20



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Para el cálculo del contenido de antocianinas se utiliza el peso molecular y la

absorbancia molar del pigmento antociano presente en mayor proporción. En

el maíz morado se encuentra principalmente cianidina -3- glucósido cuyo

peso molecular es 449.2 y su absorbancia molar 26900 6,10, 12-17

.

La absorbancia se obtiene sustrayendo el valor obtenido a pH 4,5 del valor

obtenido a pH 1,0:

A = (A510 nm pH 1,0 – A700 nm pH 1,0) – (A510 nm pH 4,5 – A700nm pH 4,5)

SESIÓN

TEMA

FA

RM

AC

OG

NO

SIA

I

I UNIDAD

PESOS Y MEDIDAS

II UNIDAD

MÉTODOS DE

EXTRACCIÓN

III UNIDAD

CARBOHIDRATOS

IV UNIDAD

LIPIDOS

FA

RM

AC

OG

NO

SIA

II

I UNIDAD

ACEITES

ESENCIALES Y

COLORANTES

II UNIDAD

COMPUESTOS

FENOLICOS

III UNIDAD

ALCALOIDES

IV UNIDAD

PRODUCTOS

DIVERSOS

T. I

TRABAJO DE

INVESTIGACIÓN

14

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2. Importancia de las áreas

2.1.En la formación del practicante

Adiestrarse en los diversos métodos y técnicas utilizadas para la Extracción, e

Identificación, Separación y Cuantificación de metabolitos secundarios a partir

de drogas vegetales, en el laboratorio de Farmacognosia y Farmacobotànica;

tales como son los Aceites Esenciales, Flavonoides, Alcaloides, Productos

diversos etc, los cuales se investiga en su debida función y acción farmacológica

y terapéutica como tratamiento alternativo a la medicina convencional.

2.2.En la institución

Ayudar en la Investigación Fitoquimica aplicando nuevos métodos y técnicas

científicas que se utilicen para la obtención y mejoras en la Extracción, e

Identificación, Separación y Cuantificación de metabolitos secundarios a partir

de drogas vegetales, en el laboratorio de Farmacognosia y Farmacobotànica;

tales como son los Aceites Esenciales, Flavonoides, Alcaloides, Productos

diversos etc,

2.3.En la profesión del químico farmacéutico

Especializarse en el campo de fitofármacos y productos naturales identificando

metabolitos secundarios para su posterior dosificación como tratamiento

alternativo en la prevención de enfermedades comunes y recurrentes que aquejan

a población y comunidad en general para así coadyuvar y mejorar la calidad de

vida.

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3. PRESENTACION DE RESULTADOS DE LA PRACTICAS

PRE PROFESIONALES:

RESULTADOS DEL ACTIVIDADES

Tabla 1: Descripción morfológica y organoléptica de los

frutos de Vaccinium myrtillus “Arándano”

DESCRIPCION MORFOLOGICA

FORMA Esférica

SUPEFICIE Lisa

PESO (W) 0,1127 g

ANCHO (cm) 2,3 cm

LARGO (cm) 2,9 cm

DESCRIPCION ORGANOLEPTICA

COLOR De morado a marrón.

OLOR Sui géneris

SABOR Ligeramente acido.

Tabla 2: Características físico-químicas de los frutos de

Vaccinium myrtillus “Arándano”

CARACTERISTICAS FISICO-

QUIMICAS

HUEMEDAD RESIDUAL 3.02%

SUSTANCIAS SOLUBLES 0.45 mg/mL

CENIZAS TOTALES 9.4%

CENIZAS SOLUBLES EN

AGUA 49.27%

CENIZAS INSOLUBLES

EN ACIDO 0.32%

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Tabla 3: Identificación Preliminar de principios activos de los frutos de Vaccinium


ENSAYOS METABOLITOS DICLORO

METANO

ETANO

L

AGUA AGUA

ACIDA

CLORURO

FERRICO 1% Polifenoles

-

-

-

-

GELATINA Taninos

-

-

-

-

SHINODA Flavonoides

-

++

+

++

LIEBERMANN-

BURCHARD

Triterpenos/esterol

es

-

-

-

-

BORNTRAGER Quinonas

-

-

-

-

ROSENHEIM Antocianidinas

-

+++

+

++

DRAGENDORFF Alcaloides

-

-

-

-

MAYER Alcaloides

-

-

-

-

BOUCHARDAT Alcaloides

-

-

-

-

ENSAYO pH

ACIDO/BASE Antocianinas

-

+++

+

++

FLUORESCENCI

A UV. cumarinas

-

-

-

-

Leyenda:

Fuertemente positivo: (+++)

Positivo moderado: (++)

Positivo débil: (+)

Negativo: (-)

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Cuantificación de Antocianinas Totales

Cuadro 1: Cuantificación de antocianinas (cianidina-3-glucósido) del extracto etanolico

de Vaccinium myrtillus “Arándano”

MUESTRAS

Concentraciones

mg/L

Media

mg/L

M 1 7.01

6.45

M 2 6.17

M 3 6.17

Lecturas Espectrofotómetro UV para Cuantificación de antocianinas (cianidina-3-

glucósido) del extracto etanolico de Vaccinium myrtillus “Arándano”

Dónde:

MUESTRAS

Lecturas Método pH Diferencial

A C PROMEDIO

D.E.

Ph 1,0 Ph 4,5

510nm 700nm 510nm 700nm

Muestra 1 0,053 0,002 0,011 0,002 0,042 7.01

6.45 0.502 Muestra 2 0,0045 0,002 0,007 0,001 0,037 6.17

Muestra 3 0,045 0,003 0,008 0,003 0,037 6.17

C = Concentración (cianidina -3- glucósido) mg/L

A = (Abs. a pH 1, 0) – (Abs. a pH 4, 5)

PM = 449.2 g/mol

ε = 26900 L /mol cm

𝐶= 𝐴,PM 103,PM.𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 Dilución

𝜀,𝐿

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Cuadro 2: Cuantificación de antocianinas (cianidina-3-glucósido) del extracto etanolico

acido de Vaccinium myrtillus “Arándano”

MUESTRAS

Concentraciones

mg/L

Media

mg/L

M 1

10.186

8.961

M 2

7.848

M 3

8.850

Lecturas Espectrofotómetro UV para Cuantificación de antocianinas (cianidina-3-

glucósido) del extracto etanolico acido de Vaccinium myrtillus “Arándano”

Dónde:

MUESTRAS

Lecturas Método pH Diferencial

A C PROMEDIO

D.E.

Ph 1,0 Ph 4,5

510nm 700nm 510nm 700nm

Muestra 1 0,083 0,009 0,021 0,008 0.061 10.186

8.961 0,719 Muestra 2

0,065 0,005 0,017 0,004 0.047 7.848

Muestra 3 0,068 0,003 0,018 0,006 0.053 8.850

C = Concentración (cianidina -3- glucósido) mg/L

A = (Abs. a pH 1, 0) – (Abs. a pH 4, 5)

PM = 449.2 g/mol

ε = 26900 L /mol cm

𝐶= 𝐴, PM, 103,𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 Dilución

𝜀,𝐿

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4. CONCLUSIONES:

1. Se determinó las características farmacognosticas del fruto de Vaccinium


2 Se cuantifico las antocianinas totales presentes en el extracto etanolico del fruto

de Vaccinium myrtillus “Arándano” por el método pH diferencial.

3 El determino mayor rendimiento de concentración de antocianinas totales en el

extracción etanolica acido del fruto de Vaccinium myrtillus “Arándano” que fue

de 8.961mg/L.

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5. RECOMENDACIONES:

1. Realización de la cuantificación de la concentración de antocianinas totales por

HPLC

2. Determinar la posible capacidad antioxidante de las antocianinas totales frente al

radical libre 2,2 difenil-1-picrilhidrazil (DPPH•)

3. Identificación, Aislamiento y separación de antocianinas para su análisis por

cromatografía de masas y gases.

4. Elaboración de fitofármacos a base de antocianinas de uso terapéutico medicinal

para aporte a la comunidad.

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6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

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pomegranate fruit extract and its anthocyanidins: delphinidin, cyaniding, and

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13. Leyva., D. “Determinación de antocianinas, fenoles totales y actividad

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Ingeniero en alimentos). Universidad Tecnológica de la Mixteca, Mexico.

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Facultad de Farmacia y Bioquímica. 2014.

15. Zari G., Boncun B., Ruiz G., Venegas E., Soto M., Cuéllar A., Cosavalente

K. Guía de Prácticas de Farmacognosia II. Universidad Nacional de Trujillo–

Facultad de Farmacia y Bioquímica. 2014.

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