FARMACOCINETICA DE AZITROMICINA EN VACAS LECHERAS …
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Tesis de Doctorado FARMACOCINETICA DE AZITROMICINA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO Esteban Turic
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Tesis de Doctorado
FARMACOCINETICA DE AZITROMICINA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO
Esteban Turic
II
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA
FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS
Trabajo de Tesis realizado como requisito para optar al tiacutetulo de DOCTOR EN CIENCIAS VETERINARIAS
FARMACOCINETICA DE AZITROMICINA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO
Autor Med Vet Esteban Turic Director Prof Dr Jorge O Errecalde Codirector Prof Dra Nora Mestorino Lugar de trabajo Caacutetedra de Farmacologiacutea Farmacotecnia y Terapeacuteutica Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata 2000-2010
Miembros del Jurado
Dr Prof Carlos Lanusse
Dr Prof Rodolfo Rothlin
Dr Prof Modesto Rubio
III
TABLA DE CONTENIDOS
I RESUMEN II INTRODUCCIOacuteN ________________________________________________________4 II1 Fundamentos de la eleccioacuten del tema ______________________________________ 5 II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana ________ 5 II111 Tratamiento parenteral _______________________________________________ 8 II112 Tratamiento intramamario ____________________________________________ 10 II12 Azitromicina ________________________________________________________ 13 II121Actividad antimicrobiana _____________________________________________ 15 II122 Farmacocineacutetica y farmacodinamia ____________________________________ 16 II123 Toxicidad ________________________________________________________ 19 II2 Hipoacutetesis ____________________________________________________________ 20 II3 Objetivos ____________________________________________________________ 21 II31 Objetivos generales __________________________________________________ 21 II32 Objetivos especiacuteficos _________________________________________________ 21 III MATERIALES ________________________________________________________ 22 III1 Formulacioacuten experimental ______________________________________________ 23 III11 Intramamaria Secado ________________________________________________ 23 III12 Intramamaria Lactacioacuten ______________________________________________ 23 III13 Intramuscular ______________________________________________________ 23 III14 Endovenosa _______________________________________________________ 23 III2 Animales experimentales ______________________________________________24 III21 Grupos experimentales ________________________________________________24 III211 Criterios para seleccioacuten animal ________________________________________24 III212 Criterios inclusioacuten __________________________________________________25 III213 Criterios de no inclusioacuten _____________________________________________25 III214 Criterios de exclusioacuten _______________________________________________25 III3 Instrumental y equipamiento _____________________________________________26 III31 Instrumental y equipamiento de campo ___________________________________26 III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio ________________________________27 IV MEacuteTODOS ___________________________________________________________ 29 IV1 Manejo animal alimentacioacuten identificacioacuten _________________________________30 IV2 Descripcioacuten de dosis y administracioacuten ____________________________________ 30 IV21 Administracioacuten endovenosa ___________________________________________30 IV23Administracioacuten intramuscular __________________________________________ 30 IV23Administracioacuten intramamaria __________________________________________ 30 IV3Toma de muestras y conservacioacuten ________________________________________31 IV31 Muestras de sangre _________________________________________________ 31 IV32 Muestras de leche __________________________________________________ 31 IV4 Anaacutelisis de las muestras _______________________________________________ 32 IV41 Teacutecnica analiacutetica ____________________________________________________32 IV411 Fundamento ______________________________________________________32 IV412 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo ____________________________ 32 IV413 Validacioacuten ________________________________________________________35
IV
V EXPERIMENTOS REALIZADOS 43 V1 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V2 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramuscular en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V3 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramamaria en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V4 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenica 45 V5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ____________________________45 VI RESULTADOS _______________________________________________________ 47 VI1 Resultados del ensayo endovenoso ______________________________________50 VI11 Concentraciones en suero y leche ______________________________________52 VI12 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________57 VI121 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________63 VI2 Resultados del ensayo intramuscular _____________________________________ 64 VI21 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 66 VI22 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 71 VI221 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 77 VI3 Resultados del ensayo intramamario en lactancia ____________________________78 VI31 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 80 VI32 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 85 VI321 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 91 VI4 Resultados del ensayo intramamario al secado ______________________________92 VI41 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 94 VI42 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 99 VI421 Anaacutelisis estadiacutestico ________________________________________________ 105 VI5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________106 VII DISCUSION ________________________________________________________ 111 VI1 Fundamento de la eleccioacuten del modelo de anaacutelisis farmacocineacutetico _____________112 VI2 Resumen __________________________________________________________ 116 VI3 Ensayo Endovenoso _________________________________________________ 117 VI4 Ensayo Intramuscular _________________________________________________122 VI5 Ensayo Intramamario en lactancia _______________________________________127 VI6 Ensayo Intramamario al secado _________________________________________132 VI7 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________135 VIII CONCLUSIONES ____________________________________________________ 137 VIII1 Comentarios Acerca de las hipoacutetesis planteadas __________________________ 138 VIII2 Conclusiones finales ________________________________________________ 138 IX BIBLIOGRAFIA ______________________________________________________ 140
V
Abreviaturas y siacutembolos
AUC0-24h Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 hasta las 24 h
AUC0-infin Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 al infinito
AZI Azitromicina
BC Bicompartimental
degC Grados centiacutegrados
Cc Concentracioacuten calculada
CIM Concentracioacuten inhibitoria miacutenima
Cl Aclaramiento o clearance
cm Centiacutemetros
Ci Concentracioacuten inicial
Cmaacutex Concentracioacuten maacutexima
Cr Concentracioacuten real
CV Coeficiente de variacioacuten
DE Desviacuteo estaacutendar
EPA Efecto post-antibioacutetico
F Biodisponibilidad farmacoloacutegica
Flaacutectea Disponibilidad laacutectea
g Gramos
h Horas
IMM Intramamaria
IM Intramuscular
IV Intravenosa
kg Kilogramos
VI
L Litros
LOQ Liacutemite de cuantificacioacuten
LOD Liacutemite de deteccioacuten
M Molar
MC Monocompartimental
mg Miligramos
mL Mililitros
mm Miliacutemetros
mm Masa en masa
min Minutos
mv Masa en volumen
n Nuacutemero de mediciones
NMC National Mastitis Council
nm Nanoacutemetros
PK Farmacocineacuteticao
PD Farmacodinamia
PMN Polimorfonucleares neutroacutefilos
PO Oral
SCC Recuento de ceacutelulas somaacuteticas
Tmaacutex Tiempo al que se alcanza la Cmaacutex
Tfrac12λ Semivida de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
λ Constante de la tasa de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
MRT Tiempo medio de residencia
Vd Volumen de distribucioacuten aparente
Vss Volumen de distribucioacuten al estado estable
Media aritmeacutetica
Xi Valor adjudicado a cada observacioacuten
VII
Σ Sumatoria
micro Media poblacional
microg Microgramos
microL Microlitros
infin Infinito
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
II
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA
FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS
Trabajo de Tesis realizado como requisito para optar al tiacutetulo de DOCTOR EN CIENCIAS VETERINARIAS
FARMACOCINETICA DE AZITROMICINA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO
Autor Med Vet Esteban Turic Director Prof Dr Jorge O Errecalde Codirector Prof Dra Nora Mestorino Lugar de trabajo Caacutetedra de Farmacologiacutea Farmacotecnia y Terapeacuteutica Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata 2000-2010
Miembros del Jurado
Dr Prof Carlos Lanusse
Dr Prof Rodolfo Rothlin
Dr Prof Modesto Rubio
III
TABLA DE CONTENIDOS
I RESUMEN II INTRODUCCIOacuteN ________________________________________________________4 II1 Fundamentos de la eleccioacuten del tema ______________________________________ 5 II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana ________ 5 II111 Tratamiento parenteral _______________________________________________ 8 II112 Tratamiento intramamario ____________________________________________ 10 II12 Azitromicina ________________________________________________________ 13 II121Actividad antimicrobiana _____________________________________________ 15 II122 Farmacocineacutetica y farmacodinamia ____________________________________ 16 II123 Toxicidad ________________________________________________________ 19 II2 Hipoacutetesis ____________________________________________________________ 20 II3 Objetivos ____________________________________________________________ 21 II31 Objetivos generales __________________________________________________ 21 II32 Objetivos especiacuteficos _________________________________________________ 21 III MATERIALES ________________________________________________________ 22 III1 Formulacioacuten experimental ______________________________________________ 23 III11 Intramamaria Secado ________________________________________________ 23 III12 Intramamaria Lactacioacuten ______________________________________________ 23 III13 Intramuscular ______________________________________________________ 23 III14 Endovenosa _______________________________________________________ 23 III2 Animales experimentales ______________________________________________24 III21 Grupos experimentales ________________________________________________24 III211 Criterios para seleccioacuten animal ________________________________________24 III212 Criterios inclusioacuten __________________________________________________25 III213 Criterios de no inclusioacuten _____________________________________________25 III214 Criterios de exclusioacuten _______________________________________________25 III3 Instrumental y equipamiento _____________________________________________26 III31 Instrumental y equipamiento de campo ___________________________________26 III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio ________________________________27 IV MEacuteTODOS ___________________________________________________________ 29 IV1 Manejo animal alimentacioacuten identificacioacuten _________________________________30 IV2 Descripcioacuten de dosis y administracioacuten ____________________________________ 30 IV21 Administracioacuten endovenosa ___________________________________________30 IV23Administracioacuten intramuscular __________________________________________ 30 IV23Administracioacuten intramamaria __________________________________________ 30 IV3Toma de muestras y conservacioacuten ________________________________________31 IV31 Muestras de sangre _________________________________________________ 31 IV32 Muestras de leche __________________________________________________ 31 IV4 Anaacutelisis de las muestras _______________________________________________ 32 IV41 Teacutecnica analiacutetica ____________________________________________________32 IV411 Fundamento ______________________________________________________32 IV412 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo ____________________________ 32 IV413 Validacioacuten ________________________________________________________35
IV
V EXPERIMENTOS REALIZADOS 43 V1 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V2 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramuscular en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V3 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramamaria en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V4 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenica 45 V5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ____________________________45 VI RESULTADOS _______________________________________________________ 47 VI1 Resultados del ensayo endovenoso ______________________________________50 VI11 Concentraciones en suero y leche ______________________________________52 VI12 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________57 VI121 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________63 VI2 Resultados del ensayo intramuscular _____________________________________ 64 VI21 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 66 VI22 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 71 VI221 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 77 VI3 Resultados del ensayo intramamario en lactancia ____________________________78 VI31 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 80 VI32 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 85 VI321 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 91 VI4 Resultados del ensayo intramamario al secado ______________________________92 VI41 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 94 VI42 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 99 VI421 Anaacutelisis estadiacutestico ________________________________________________ 105 VI5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________106 VII DISCUSION ________________________________________________________ 111 VI1 Fundamento de la eleccioacuten del modelo de anaacutelisis farmacocineacutetico _____________112 VI2 Resumen __________________________________________________________ 116 VI3 Ensayo Endovenoso _________________________________________________ 117 VI4 Ensayo Intramuscular _________________________________________________122 VI5 Ensayo Intramamario en lactancia _______________________________________127 VI6 Ensayo Intramamario al secado _________________________________________132 VI7 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________135 VIII CONCLUSIONES ____________________________________________________ 137 VIII1 Comentarios Acerca de las hipoacutetesis planteadas __________________________ 138 VIII2 Conclusiones finales ________________________________________________ 138 IX BIBLIOGRAFIA ______________________________________________________ 140
V
Abreviaturas y siacutembolos
AUC0-24h Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 hasta las 24 h
AUC0-infin Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 al infinito
AZI Azitromicina
BC Bicompartimental
degC Grados centiacutegrados
Cc Concentracioacuten calculada
CIM Concentracioacuten inhibitoria miacutenima
Cl Aclaramiento o clearance
cm Centiacutemetros
Ci Concentracioacuten inicial
Cmaacutex Concentracioacuten maacutexima
Cr Concentracioacuten real
CV Coeficiente de variacioacuten
DE Desviacuteo estaacutendar
EPA Efecto post-antibioacutetico
F Biodisponibilidad farmacoloacutegica
Flaacutectea Disponibilidad laacutectea
g Gramos
h Horas
IMM Intramamaria
IM Intramuscular
IV Intravenosa
kg Kilogramos
VI
L Litros
LOQ Liacutemite de cuantificacioacuten
LOD Liacutemite de deteccioacuten
M Molar
MC Monocompartimental
mg Miligramos
mL Mililitros
mm Miliacutemetros
mm Masa en masa
min Minutos
mv Masa en volumen
n Nuacutemero de mediciones
NMC National Mastitis Council
nm Nanoacutemetros
PK Farmacocineacuteticao
PD Farmacodinamia
PMN Polimorfonucleares neutroacutefilos
PO Oral
SCC Recuento de ceacutelulas somaacuteticas
Tmaacutex Tiempo al que se alcanza la Cmaacutex
Tfrac12λ Semivida de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
λ Constante de la tasa de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
MRT Tiempo medio de residencia
Vd Volumen de distribucioacuten aparente
Vss Volumen de distribucioacuten al estado estable
Media aritmeacutetica
Xi Valor adjudicado a cada observacioacuten
VII
Σ Sumatoria
micro Media poblacional
microg Microgramos
microL Microlitros
infin Infinito
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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151
X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
III
TABLA DE CONTENIDOS
I RESUMEN II INTRODUCCIOacuteN ________________________________________________________4 II1 Fundamentos de la eleccioacuten del tema ______________________________________ 5 II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana ________ 5 II111 Tratamiento parenteral _______________________________________________ 8 II112 Tratamiento intramamario ____________________________________________ 10 II12 Azitromicina ________________________________________________________ 13 II121Actividad antimicrobiana _____________________________________________ 15 II122 Farmacocineacutetica y farmacodinamia ____________________________________ 16 II123 Toxicidad ________________________________________________________ 19 II2 Hipoacutetesis ____________________________________________________________ 20 II3 Objetivos ____________________________________________________________ 21 II31 Objetivos generales __________________________________________________ 21 II32 Objetivos especiacuteficos _________________________________________________ 21 III MATERIALES ________________________________________________________ 22 III1 Formulacioacuten experimental ______________________________________________ 23 III11 Intramamaria Secado ________________________________________________ 23 III12 Intramamaria Lactacioacuten ______________________________________________ 23 III13 Intramuscular ______________________________________________________ 23 III14 Endovenosa _______________________________________________________ 23 III2 Animales experimentales ______________________________________________24 III21 Grupos experimentales ________________________________________________24 III211 Criterios para seleccioacuten animal ________________________________________24 III212 Criterios inclusioacuten __________________________________________________25 III213 Criterios de no inclusioacuten _____________________________________________25 III214 Criterios de exclusioacuten _______________________________________________25 III3 Instrumental y equipamiento _____________________________________________26 III31 Instrumental y equipamiento de campo ___________________________________26 III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio ________________________________27 IV MEacuteTODOS ___________________________________________________________ 29 IV1 Manejo animal alimentacioacuten identificacioacuten _________________________________30 IV2 Descripcioacuten de dosis y administracioacuten ____________________________________ 30 IV21 Administracioacuten endovenosa ___________________________________________30 IV23Administracioacuten intramuscular __________________________________________ 30 IV23Administracioacuten intramamaria __________________________________________ 30 IV3Toma de muestras y conservacioacuten ________________________________________31 IV31 Muestras de sangre _________________________________________________ 31 IV32 Muestras de leche __________________________________________________ 31 IV4 Anaacutelisis de las muestras _______________________________________________ 32 IV41 Teacutecnica analiacutetica ____________________________________________________32 IV411 Fundamento ______________________________________________________32 IV412 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo ____________________________ 32 IV413 Validacioacuten ________________________________________________________35
IV
V EXPERIMENTOS REALIZADOS 43 V1 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V2 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramuscular en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V3 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramamaria en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V4 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenica 45 V5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ____________________________45 VI RESULTADOS _______________________________________________________ 47 VI1 Resultados del ensayo endovenoso ______________________________________50 VI11 Concentraciones en suero y leche ______________________________________52 VI12 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________57 VI121 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________63 VI2 Resultados del ensayo intramuscular _____________________________________ 64 VI21 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 66 VI22 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 71 VI221 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 77 VI3 Resultados del ensayo intramamario en lactancia ____________________________78 VI31 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 80 VI32 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 85 VI321 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 91 VI4 Resultados del ensayo intramamario al secado ______________________________92 VI41 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 94 VI42 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 99 VI421 Anaacutelisis estadiacutestico ________________________________________________ 105 VI5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________106 VII DISCUSION ________________________________________________________ 111 VI1 Fundamento de la eleccioacuten del modelo de anaacutelisis farmacocineacutetico _____________112 VI2 Resumen __________________________________________________________ 116 VI3 Ensayo Endovenoso _________________________________________________ 117 VI4 Ensayo Intramuscular _________________________________________________122 VI5 Ensayo Intramamario en lactancia _______________________________________127 VI6 Ensayo Intramamario al secado _________________________________________132 VI7 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________135 VIII CONCLUSIONES ____________________________________________________ 137 VIII1 Comentarios Acerca de las hipoacutetesis planteadas __________________________ 138 VIII2 Conclusiones finales ________________________________________________ 138 IX BIBLIOGRAFIA ______________________________________________________ 140
V
Abreviaturas y siacutembolos
AUC0-24h Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 hasta las 24 h
AUC0-infin Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 al infinito
AZI Azitromicina
BC Bicompartimental
degC Grados centiacutegrados
Cc Concentracioacuten calculada
CIM Concentracioacuten inhibitoria miacutenima
Cl Aclaramiento o clearance
cm Centiacutemetros
Ci Concentracioacuten inicial
Cmaacutex Concentracioacuten maacutexima
Cr Concentracioacuten real
CV Coeficiente de variacioacuten
DE Desviacuteo estaacutendar
EPA Efecto post-antibioacutetico
F Biodisponibilidad farmacoloacutegica
Flaacutectea Disponibilidad laacutectea
g Gramos
h Horas
IMM Intramamaria
IM Intramuscular
IV Intravenosa
kg Kilogramos
VI
L Litros
LOQ Liacutemite de cuantificacioacuten
LOD Liacutemite de deteccioacuten
M Molar
MC Monocompartimental
mg Miligramos
mL Mililitros
mm Miliacutemetros
mm Masa en masa
min Minutos
mv Masa en volumen
n Nuacutemero de mediciones
NMC National Mastitis Council
nm Nanoacutemetros
PK Farmacocineacuteticao
PD Farmacodinamia
PMN Polimorfonucleares neutroacutefilos
PO Oral
SCC Recuento de ceacutelulas somaacuteticas
Tmaacutex Tiempo al que se alcanza la Cmaacutex
Tfrac12λ Semivida de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
λ Constante de la tasa de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
MRT Tiempo medio de residencia
Vd Volumen de distribucioacuten aparente
Vss Volumen de distribucioacuten al estado estable
Media aritmeacutetica
Xi Valor adjudicado a cada observacioacuten
VII
Σ Sumatoria
micro Media poblacional
microg Microgramos
microL Microlitros
infin Infinito
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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151
X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
IV
V EXPERIMENTOS REALIZADOS 43 V1 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V2 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramuscular en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V3 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten Intramamaria en vacas lecheras HA en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenica 44 V4 Anaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenica 45 V5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ____________________________45 VI RESULTADOS _______________________________________________________ 47 VI1 Resultados del ensayo endovenoso ______________________________________50 VI11 Concentraciones en suero y leche ______________________________________52 VI12 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________57 VI121 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________63 VI2 Resultados del ensayo intramuscular _____________________________________ 64 VI21 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 66 VI22 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 71 VI221 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 77 VI3 Resultados del ensayo intramamario en lactancia ____________________________78 VI31 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 80 VI32 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 85 VI321 Anaacutelisis estadiacutestico _________________________________________________ 91 VI4 Resultados del ensayo intramamario al secado ______________________________92 VI41 Concentraciones en suero y leche ______________________________________ 94 VI42 Anaacutelisis farmacocineacutetico nocompartimental _______________________________ 99 VI421 Anaacutelisis estadiacutestico ________________________________________________ 105 VI5 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________106 VII DISCUSION ________________________________________________________ 111 VI1 Fundamento de la eleccioacuten del modelo de anaacutelisis farmacocineacutetico _____________112 VI2 Resumen __________________________________________________________ 116 VI3 Ensayo Endovenoso _________________________________________________ 117 VI4 Ensayo Intramuscular _________________________________________________122 VI5 Ensayo Intramamario en lactancia _______________________________________127 VI6 Ensayo Intramamario al secado _________________________________________132 VI7 Estudio de penetracioacuten de azitromicina en tejidos ___________________________135 VIII CONCLUSIONES ____________________________________________________ 137 VIII1 Comentarios Acerca de las hipoacutetesis planteadas __________________________ 138 VIII2 Conclusiones finales ________________________________________________ 138 IX BIBLIOGRAFIA ______________________________________________________ 140
V
Abreviaturas y siacutembolos
AUC0-24h Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 hasta las 24 h
AUC0-infin Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 al infinito
AZI Azitromicina
BC Bicompartimental
degC Grados centiacutegrados
Cc Concentracioacuten calculada
CIM Concentracioacuten inhibitoria miacutenima
Cl Aclaramiento o clearance
cm Centiacutemetros
Ci Concentracioacuten inicial
Cmaacutex Concentracioacuten maacutexima
Cr Concentracioacuten real
CV Coeficiente de variacioacuten
DE Desviacuteo estaacutendar
EPA Efecto post-antibioacutetico
F Biodisponibilidad farmacoloacutegica
Flaacutectea Disponibilidad laacutectea
g Gramos
h Horas
IMM Intramamaria
IM Intramuscular
IV Intravenosa
kg Kilogramos
VI
L Litros
LOQ Liacutemite de cuantificacioacuten
LOD Liacutemite de deteccioacuten
M Molar
MC Monocompartimental
mg Miligramos
mL Mililitros
mm Miliacutemetros
mm Masa en masa
min Minutos
mv Masa en volumen
n Nuacutemero de mediciones
NMC National Mastitis Council
nm Nanoacutemetros
PK Farmacocineacuteticao
PD Farmacodinamia
PMN Polimorfonucleares neutroacutefilos
PO Oral
SCC Recuento de ceacutelulas somaacuteticas
Tmaacutex Tiempo al que se alcanza la Cmaacutex
Tfrac12λ Semivida de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
λ Constante de la tasa de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
MRT Tiempo medio de residencia
Vd Volumen de distribucioacuten aparente
Vss Volumen de distribucioacuten al estado estable
Media aritmeacutetica
Xi Valor adjudicado a cada observacioacuten
VII
Σ Sumatoria
micro Media poblacional
microg Microgramos
microL Microlitros
infin Infinito
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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151
X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
V
Abreviaturas y siacutembolos
AUC0-24h Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 hasta las 24 h
AUC0-infin Aacuterea bajo la curva de concentraciones en funcioacuten del tiempo desde el
momento 0 al infinito
AZI Azitromicina
BC Bicompartimental
degC Grados centiacutegrados
Cc Concentracioacuten calculada
CIM Concentracioacuten inhibitoria miacutenima
Cl Aclaramiento o clearance
cm Centiacutemetros
Ci Concentracioacuten inicial
Cmaacutex Concentracioacuten maacutexima
Cr Concentracioacuten real
CV Coeficiente de variacioacuten
DE Desviacuteo estaacutendar
EPA Efecto post-antibioacutetico
F Biodisponibilidad farmacoloacutegica
Flaacutectea Disponibilidad laacutectea
g Gramos
h Horas
IMM Intramamaria
IM Intramuscular
IV Intravenosa
kg Kilogramos
VI
L Litros
LOQ Liacutemite de cuantificacioacuten
LOD Liacutemite de deteccioacuten
M Molar
MC Monocompartimental
mg Miligramos
mL Mililitros
mm Miliacutemetros
mm Masa en masa
min Minutos
mv Masa en volumen
n Nuacutemero de mediciones
NMC National Mastitis Council
nm Nanoacutemetros
PK Farmacocineacuteticao
PD Farmacodinamia
PMN Polimorfonucleares neutroacutefilos
PO Oral
SCC Recuento de ceacutelulas somaacuteticas
Tmaacutex Tiempo al que se alcanza la Cmaacutex
Tfrac12λ Semivida de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
λ Constante de la tasa de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
MRT Tiempo medio de residencia
Vd Volumen de distribucioacuten aparente
Vss Volumen de distribucioacuten al estado estable
Media aritmeacutetica
Xi Valor adjudicado a cada observacioacuten
VII
Σ Sumatoria
micro Media poblacional
microg Microgramos
microL Microlitros
infin Infinito
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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151
X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
VI
L Litros
LOQ Liacutemite de cuantificacioacuten
LOD Liacutemite de deteccioacuten
M Molar
MC Monocompartimental
mg Miligramos
mL Mililitros
mm Miliacutemetros
mm Masa en masa
min Minutos
mv Masa en volumen
n Nuacutemero de mediciones
NMC National Mastitis Council
nm Nanoacutemetros
PK Farmacocineacuteticao
PD Farmacodinamia
PMN Polimorfonucleares neutroacutefilos
PO Oral
SCC Recuento de ceacutelulas somaacuteticas
Tmaacutex Tiempo al que se alcanza la Cmaacutex
Tfrac12λ Semivida de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
λ Constante de la tasa de eliminacioacuten (cineacutetica no compartimental)
MRT Tiempo medio de residencia
Vd Volumen de distribucioacuten aparente
Vss Volumen de distribucioacuten al estado estable
Media aritmeacutetica
Xi Valor adjudicado a cada observacioacuten
VII
Σ Sumatoria
micro Media poblacional
microg Microgramos
microL Microlitros
infin Infinito
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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151
X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
VII
Σ Sumatoria
micro Media poblacional
microg Microgramos
microL Microlitros
infin Infinito
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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151
X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
I RESUMEN
2
Tiacutetulo Farmacocineacutetica de Azitromicina en Vacas Lecheras Holando Argentino Palabras claves Azitromicina Mastitis bovina Farmacocineacutetica Resumen El prototipo de una clase de antibioacuteticos conocido como macroacutelidos fue introducido en 1952
con el nombre eritromicina La azitromicina (AZI) es un compuesto semisinteacutetico en el cual
se ha expandido el anillo lactoacutenico de la eritromicina para formar un compuesto con una
estructura anular de 15 miembros que posee en humanos una mayor tolerancia gaacutestrica
mejor perfil farmacocineacutetico acumulacioacuten en ceacutelulas inflamatorias y un espectro de actividad
mayor Estas caracteriacutesticas hacen pensar que la azitromicina pueda tener un futuro
promisorio en medicina veterinaria para ciertas infecciones del bovino como las producidas
en la glaacutendula mamaria El objetivo de este trabajo consistioacute en estudiar el comportamiento
farmacocineacutetico de AZI en sangre y leche luego de administracioacuten por diferentes viacuteas y en
vacas lecheras sanas y con mastitis Las concentraciones en sangre y leche fueron
determinadas por meacutetodo microbioloacutegico y analizadas por el modelo farmacocineacutetico
descriptivo no compartimental El comportamiento observado luego de administracioacuten por
cualquiera de las viacuteas analizadas fue tiacutepico de los macroacutelidos con bajas concentraciones en
plasma y concentraciones muy altas en leche y tejidos blandos un gran volumen de
distribucioacuten y una prolongada fase de eliminacioacuten tanto en leche como en sangre El hecho
de que AZI tiende a acumularse en ceacutelulas inflamatorias ha tenido incidencia cineacutetica en los
resultados obtenidos tras su administracioacuten especialmente en la administracioacuten
intramamaria Dado su comportamiento farmacocineacutetico estudiado y descripto en este
trabajo AZI demostroacute ser una interesante herramienta potencial para las infecciones de los
tejidos blandos el bovino aunque esto deberiacutea ser complementado con estudios de eficacia
3
Title Pharmacokinetic of Azithromycin in Holstein Lactating Cows Key Words Azithromycin Bovine mastitis Pharmacokinetic Summary The prototype of the macrolide class of antibiotics was introduced in 1952 under the name of
Erythromycin Azithromycin (AZI) is a semisynthetic compound in which the lactone ring has
been expanded to a 15-member structure and is considered the prototype of new macrolide
structures identified as azalides In human medicine azithromycin has an improved
pharmacokinetic profile shows an expandedenhanced antimicrobial spectrum over
erythromycin and the incidence of gastrointestinal-related effects are significantly lower
providing a useful alternative to erythromycin In veterinary medicine AZI could possess
advantages for the treatment of certain bovine infections such as those produced in the
mammary gland The objective of this paper was to study its pharmacokinetic behavior in
blood and milk following administration by different routes both in healthy cows and with
mastitis The blood and milk concentrations were determined by the microbiological method
and analyzed using a non-compartmental pharmacokinetic descriptive model The results
observed after its administration by any of the analyzed routes was typical of the macrolides
with low plasma concentrations and very high maximum concentrations (Cmax) in milk and
soft tissues a great volume of distribution and a prolonged terminal half-life both in blood and
milk The fact that AZI tends to accumulate in inflammatory cells has a kinetic incidence in
the results especially after intramammary administration Due to the described
pharmacokinetic behavior AZI proved to be an interesting tool with a potential for infections
in the soft tissues of the cow although this should be backed by efficacy trials
4
II INTRODUCCION
5
II1 FUNDAMENTOS DE LA ELECCIOacuteN DEL TEMA
II11 Mastitis bovina y consideraciones generales sobre terapia antimicrobiana La leche es el producto iacutentegro del ordentildeo completo e ininterrumpido de una hembra
lechera sana bien alimentada y no fatigada Ha de ser recogida higieacutenicamente y no debe
contener calostro Esta es la definicioacuten adoptada en el Primer Congreso Internacional para la
Represioacuten de los Fraudes en los Alimentos que tuvo lugar en Ginebra en 1908 (1) La
Federacioacuten Internacional de Lecheriacutea (FIL-IDF) en el antildeo 1983 define a la leche como El
producto de la secrecioacuten normal de la mama obtenido por uno o varios ordentildees sin ninguna
adicioacuten o substraccioacuten
Pero no necesitamos una definicioacuten de leche para darnos cuenta de su importancia y
utilizacioacuten en la naturaleza La leche es el uacutenico alimento de los mamiacuteferos recieacuten nacidos
absolutamente indispensable para asegurar su supervivencia y crecimiento La madre nutre
a su descendencia gracias a la secrecioacuten laacutectea producida por sus glaacutendulas mamarias La
lactacioacuten del joven cesa despueacutes de una duracioacuten variable seguacuten las especies con el
destete
En el caso de la mujer la lactacioacuten natural es probablemente el mejor sistema de
alimentacioacuten tanto en el plano afectivo como en el nutritivo pero por diversas razones en
lugar de la lactancia directa a veces es necesario apelar imperativamente a la utilizacioacuten de
productos laacutecteos industriales adaptados al crecimiento del nintildeo de pecho (2)
El hombre busca tambieacuten en la leche y sus derivados productos agradables a su
gusto que ademaacutes le proporcionen una buena parte de su suministro alimenticio a lo largo
de su vida Es por esto por lo que el hombre ha recurrido a la leche de la vaca y ha puesto
en marcha una industria de transformacioacuten laacutectea En esta industria la materia prima es la
leche por lo que esta debe ser de maacutexima calidad
La leche estaacute constituida por una fase acuosa (suero) y una fase soacutelida a su vez
formada por azuacutecares (lactosa) liacutepidos (trigliceacuteridos fosfoliacutepidos colesterol y aacutecidos grasos
libres) proteiacutenas (caseiacutena alfa-lactoalbuacutemina beta-lactoglobulina albuacutemina seacuterica e
inmunoglobulinas) vitaminas y minerales
El hombre a traveacutes de la seleccioacuten geneacutetica y los avances en la tecnologiacutea de
ordentildee ha llevado a que la ubre de la vaca lechera actual produzca cantidades de leche
muy superiores a aquellas para las que la glaacutendula ldquooriginalrdquo habiacutea sido disentildeada Este
hecho agregado a la remocioacuten mecaacutenica de la leche indudablemente impone situaciones
de ldquostressrdquo que pueden tener gran impacto sobre la salud de la glaacutendula la produccioacuten de la
leche y su composicioacuten (3)
6
En las vacas lecheras el periacuteodo de lactacioacuten se prolonga artificialmente La mayoriacutea
de estas vacas son vueltas a servir seis semanas maacutes tarde y por ende estaacuten prentildeadas
durante la mayor parte del periacuteodo de lactacioacuten El ordentildeo se interrumpe unos dos meses
antes del nacimiento del ternero siguiente y la vaca ldquose secardquo La involucioacuten parcial que
ocurre entonces no tarda en cesar y la ubre vuelve a agrandarse poco antes de que nazca el
ternero siguiente En consecuencia las vacas lecheras que conciben despueacutes de la primera
inseminacioacuten lactan durante unos diez meses y estaacuten secas unos dos meses cada antildeo Una
buena vaca lechera produce de 7000 a 9000 litros en el curso de una lactacioacuten cantidad
que es mucho mayor que la requerida para alimentar a un ternero
La afeccioacuten maacutes frecuente y peligrosa que puede sufrir una vaca lechera es la
mastitis El teacutermino mastitis se refiere a la inflamacioacuten de la glaacutendula mamaria sea cual
fuere su causa (4) Esta patologiacutea tiene lugar fundamentalmente en los comienzos de la
lactancia y cursa con alteraciones de diferente tipo e intensidad en la produccioacuten laacutectea En
algunos casos como manifestacioacuten local de diferentes enfermedades infecciosas generales
y en otros como estados infecciosos propios de la glaacutendula que pueden ser contagiosos o
no y producidos por diferentes geacutermenes patoacutegenos (5)
Como agentes causales figuran principalmente bacterias correspondiendo a los
micoplasmas y hongos una importancia secundaria Los geacutermenes penetran en la mama ya
sea siguiendo el canal del pezoacuten la cisterna y los conductos galactoacuteforos (infeccioacuten
galactoacutegena) o a traveacutes de heridas de la piel y pezones (infeccioacuten de heridas infeccioacuten
linfoacutegena) o bien arrastrados por el torrente sanguiacuteneo (infeccioacuten hematoacutegena) (4)
La mastitis puede ser clasificada por el tiempo de evolucioacuten en aguda o croacutenica por
la zona invadida puede ser focal o zonal (uno o dos cuartos) y difusa o general (toda la
ubre) por la forma de presentacioacuten puede ser exudativa serosa fibrinosa purulenta
hemorraacutegica gangrenosa etc y finalmente seguacuten la causa que la determina infecciosa o
traumaacutetica (5 6)
Hay una forma subcliacutenica de mastitis que econoacutemicamente es la maacutes importante (7)
Las enfermedades subcliacutenicas de la ubre se caracterizan por su naturaleza inaparente
donde por lo general no podemos distinguir exteriormente signos de enfermedad en la vaca
afectada La vaca parece normal en su comportamiento la ubre se ve normal y la leche que
se ordentildea tambieacuten parece normal Los principales geacutermenes causantes son Staphylococcus
aureus y Streptococcus agalactiae (5)
Aunque el plan de lucha contra la mastitis debe basarse en la prevencioacuten del
contagio de vacas sanas la curacioacuten de las vacas infectadas tiene importancia en el control
7
de la enfermedad y por intermedio del tratamiento antibioacutetico se pueden eliminar infecciones
causadas por diversos geacutermenes
Pero para aprovechar en su totalidad el potencial del tratamiento este debe ser
adecuado al tipo de infeccioacuten y debe recordarse que el tratamiento es solamente uno de los
eslabones en la larga cadena de control de la mastitis No debemos olvidar que un mal
manejo terapeacuteutico repercute negativamente en salud puacuteblica debido a la presencia de
residuos de medicamentos que pueden desencadenar problemas de diversa iacutendole como
por ejemplo procesos aleacutergicos aparicioacuten de cepas resistentes fracaso terapeacuteutico etc
Otra consecuencia del uso inadecuado de antibioacuteticos es la presencia de residuos en
la industrializacioacuten de los productos laacutecteos con la consecuente peacuterdida econoacutemica (5 8)
La terapia con antibioacuteticos ha sido y continuacutea siendo la maacutes adecuada en el
tratamiento de la mastitis Ante la instauracioacuten de una terapia con antibioacuteticos se deberiacutea
elegir la droga a la cual el microorganismo es susceptible fijar dosis y duracioacuten de
tratamiento en base a las caracteriacutesticas cineacuteticas del medicamento Y finalmente cumplir
rigurosamente con los periacuteodos de retirada (9)
Pese a las deacutecadas de investigacioacuten y planes integrales de control la mastitis bovina
continuacutea siendo un problema para la industria lechera de todo el mundo debido a las
peacuterdidas econoacutemicas ocurridas a nivel de la granja lechera como aquellas debidas a menor
produccioacuten de los cuartos infectados descarte de leche costos de tratamientos y refugo
prematuro de animales de alto meacuterito geneacutetico pero fundamentalmente por los efectos
adversos sobre la calidad de la leche cruda y los productos elaborados con ella (10)
Seleccionamos estos animales los mejoramos y los explotamos Pero no olvidemos
que para obtener un producto animal de buena calidad debemos brindarles a ellos un
estado de salud pleno Para lo cual ademaacutes de estrategias de prevencioacuten debemos aplicar
terapias adecuadas en aquellos animales que asiacute lo necesiten siendo de suma importancia
para ello un conocimiento exhaustivo de las caracteriacutesticas anatoacutemicas y fisioloacutegicas del
oacutergano blanco sus procesos patoloacutegicos y una comprensioacuten de la terapeacuteutica maacutes
apropiada incluyendo en este campo el conocimiento del comportamiento farmacocineacutetico
del agente antimicrobiano seleccionado
Cuando se decide tratar una mastitis el tratamiento debe ser integral y completo
Para lo cual es fundamental realizar un buen diagnoacutestico evaluando cuidadosamente la
susceptibilidad bacteriana y eligiendo el agente o la combinacioacuten de los mismos que se
utilizaraacute Considerar especialmente el terreno mamario y las posibilidades de penetracioacuten del
producto elegido no solamente en la glaacutendula mamaria sino en polimorfonucleares y auacuten
8
maacutes en fagolisosomas El plan de administracioacuten es muy importante eacuteste nos permite
obtener el ldquotiempo de contactordquo ideal para el medicamento y el microorganismo de que se
trate Se debe poner especial atencioacuten al respeto meticuloso de los periacuteodos de descarte de
la leche Esto nos permitiraacute enviar al mercado leche con presencia de faacutermacos por debajo
de los maacuteximos niveles residuales permitidos (9)
Los antibioacuteticos pueden ser administrados por dos viacuteas la viacutea intramamaria que es
aceptada como de eleccioacuten en el tratamiento de mastitis subcliacutenicas o croacutenicas y que en el
caso de mastitis agudas eventualmente fracasa debido a la pobre y despareja distribucioacuten
del medicamento a traveacutes del intenso crecimiento del pareacutenquima mamario o por el bloqueo
que producen los productos inflamatorios En estas circunstancias algunos autores
recomiendan la terapia parenteral (11 12) El eacutexito de la terapia parenteral depende del
pasaje de las drogas desde la sangre a la leche (5) por lo que las caracteriacutesticas
fisicoquiacutemicas del agente seleccionado son tan importantes como las microbioloacutegicas
II111 Tratamiento parenteral
Para un tratamiento eficaz se debe escoger un antibioacutetico que responda a cuatro
condiciones
1) Ser activo sobre los geacutermenes responsables de la mastitis
2) Difundir bien en el organismo sin ser atrapado por otro oacutergano que no sea la glaacutendula
mamaacuteria
3) Pasar la barrera fisioloacutegica de la ubre (barrera sangre-leche)
4) Mantenerse en la leche y en el tejido mamario en forma activa y seguacuten el antimicrobiano
lograr las relaciones PKPD adecuadas (CmaxCIM AUCCIM TgtCIM para eliminar los
microorganismos patoacutegenos sin permitir la emergencia de bacterias resistentes
La mayoriacutea de los antibioacuteticos atraviesan la barrera sangre-leche por difusioacuten pasiva
la barrera (epitelio mamario) hace las veces de liacutemite lipoideo-poroso que separa la sangre
con un pH 74 de la leche que tiene un pH con un valor algo inferior (65 a 68) en
condiciones normales (5 13) Los medicamentos penetran esta barrera por difusioacuten a traveacutes
de los liacutepidos de la membrana o pasando a traveacutes de los poros acuosos este pasaje estaacute
determinado por la intensidad de la unioacuten del antibioacutetico a la albuacutemina plasmaacutetica por el pKa
y por su grado de solubilidad en liacutepidos (12) La mayoriacutea de los antibioacuteticos usados en el
tratamiento de la mastitis son aacutecidos o bases orgaacutenicas deacutebiles La fraccioacuten no ionizada es
maacutes liposoluble que la ionizada y puede difundir maacutes faacutecilmente a traveacutes de las membranas
(14 15)
9
La proporcioacuten de droga en forma no ionizada depende del logariacutetmo de la constante
de disociacioacuten (pKa) de la droga y del pH del medio en el cual estaacute disuelta
La relacioacuten entre la concentracioacuten teoacuterica del antibioacutetico en sangre y leche puede ser
calculada seguacuten la ecuacioacuten de Jacobs Para el caso de las bases deacutebiles que no estaacuten
ionizadas en sangre la relacioacuten leche suero =
R leche sangre = 1 + 10 (pKa - pH leche)
1 + 10 (pKa - pH suero)
Donde esta relacioacuten es superior o igual a 1 (15-16-17)
En cambio para los aacutecidos deacutebiles la relacioacuten seraacute
R leche sangre = 1 + 10 ( pH leche - pKa)
1 + 10 (pH suero -pKa) Cuyo valor es inferior o igual a 1
Los antibioacuteticos anfoacuteteros como las tetraciclinas y los que no se ionizan como el
cloranfenicol altamente lipoacutefilicos producen relaciones lechesuero de 1 o valores
ligeramente menores tanto en leches normales como en mastiacuteticas porque el grado de
ionizacioacuten de estas drogas no sufre cambios por las pequentildeas diferencias de pH (5 16)
Se ha demostrado que solamente difunde a la leche la fraccioacuten no ionizada y
liposoluble de un electroacutelito orgaacutenico presente en la fase acuosa del plasma sanguiacuteneo (17
18)
La duracioacuten de la excrecioacuten de un antibioacutetico en la leche se puede definir como el
plazo que transcurre entre el tratamiento y el momento en el cual la concentracioacuten de
residuos en la leche no puede ser dosada aunque esto uacuteltimo depende de la sensibilidad
del meacutetodo de deteccioacuten Esta duracioacuten de excrecioacuten se expresa en horas (5 19)
Existen caacutelculos farmacocineacuteticos bastante precisos que permiten estimar los
paraacutemetros farmacocineacuteticos de antibioacuteticos en la leche en funcioacuten de la dosis y de las
caracteriacutesticas quiacutemicas del medicamento (5 12)
Hay tres paraacutemetros principales a tener en cuenta
10
1) La relacioacuten R de concentraciones maacuteximas medidas en el suero y en la leche
Cmaacutex suero
R = ----------
Cmaacutex leche
Que para el caso de los maacutecrolidos suele ser de 1 tanto en la leche normal como en la
infectada
2) El porcentaje de la dosis encontrada en la leche esta fraccioacuten es de 01 para el
cloranfenicol tambieacuten tanto en la leche sana como en la enferma
3) La biodisponibilidad laacutectea (FLac) es la relacioacuten entre las aacutereas bajo las curvas (AUC)
concentracioacuten vs tiempo medidas en suero y en leche Este paraacutemetro permite comparar la
cantidad total de antibioacutetico que aparece en la leche y en el suero durante el tratamiento
Esta cantidad se calcula midiendo las AUC y permite apreciar la importancia del pasaje de
antibioacuteticos a la leche y en el caso del cloranfenicol seriacutea 2 en la ubre sana y en la enferma
mientras que para la penicilina G es de 20 en la ubre normal y 5 en la infectada y para la
cloxacilina 15 y 55 respectivamente (5) En el caso de los macroacutelidos por su parte las
concentraciones suelen ser mas bajas en la leche del animal mastitico que en la del sano
Hay una serie de factores que influyen en la excrecioacuten de antibioacuteticos por la leche
tras su administracioacuten parenteral Algunos de ellos seriacutean dosis administrada (20) el
excipiente empleado (20) nuacutemero de tratamientos efectuados (21) y el estado patoloacutegico de
la glaacutendula En el caso de algunos antibioacuteticos (penicilinas aminoglucoacutesidos y macroacutelidos) la
presencia de una infeccioacuten mamaria parece perturbar considerablemente la eliminacioacuten de
los antibioacuteticos por la leche luego de la administracioacuten intramuscular (5)
Por ejemplo el pasaje de aminoglucoacutesidos a la leche aumenta en caso de mastitis
mientras que en el caso de los macroacutelidos disminuye La eliminacioacuten de cloranfenicol y de
tetraciclinas no parece ser afectada por la infeccioacuten mamaria
II112 Tratamiento intramamario
La utilizacioacuten de antibioacuteticos por viacutea intramamaria es particularmente importante en
medicina veterinaria por una parte en funcioacuten de tratarse del meacutetodo maacutes difundido para el
tratamiento de la mastitis y por otra parte por sus connotaciones higieacutenicas debido a la
11
permanencia de residuos de antibioacuteticos en la leche Hay dos puntos vitales a tener en
cuenta ante la eleccioacuten de drogas la eficacia del tratamiento y las consecuencias desde el
punto de vista de la salud puacuteblica (5 22)
La excrecioacuten de antibioacuteticos desde la leche estaacute gobernada por la cantidad de leche
producida las caracteriacutesticas del medicamento y el estado de salud de la ubre (5 23)
Algunos antibioacuteticos persisten en la leche maacutes allaacute de 96 horas despueacutes de la
administracioacuten Se soluciona este problema usando bases que permitan la raacutepida excrecioacuten
del antibioacutetico pero a altas dosis y a intervalos maacutes frecuentes de tratamiento para
compensar el corto periacuteodo de accioacuten (23)
La ubre bovina es un oacutergano poco favorable para realizar estudios cineacuteticos de
drogas (12) El procedimiento maacutes comuacuten es medir la velocidad de excrecioacuten de las drogas
en leche y el porcentaje de droga encontrado en la misma Por cierto que hay que
considerar una serie de factores uno de los mas importantes son los ordentildees que
representan el vaciado de la ubre 2 a 3 veces por diacutea
II113-Barrera sangre-leche
La transferencia de aacutecidos y bases deacutebiles a traveacutes de la barrera sangreleche
tiene lugar por un proceso de difusioacuten pasiva de las fracciones no ligadas y no ionizadas de
la droga esto esta influenciado por el pH del medio y el pKa de la droga
Las diferencias en las concentraciones de droga entre sangre y leche se
deben fundamentalmente a las diferencias de pH que hay entre estos dos fluidos (pH de la
leche 66 - 68 y pH del plasma 74 -77) el grado de ionizacioacuten de la droga y la
disponibilidad de droga para atravesar la barrera lipiacutedica en el orden que establece el
equilibrio a traveacutes de la membrana
En consecuencia las bases deacutebiles tienden a acumularse en leche en tanto
que las concentraciones de sustancias aacutecidas tienden a ser maacutes bajas que en plasma
debido a que estas se encuentran en mayor grado en forma no ionizada (24)
II114- Excrecioacuten biliar
Los faacutermacos y sus metabolitos tambieacuten pueden ser excretados pasiva o
activamente por los hepatocitos hacia los canaliacuteculos biliares y finalmente hacia el duodeno
por bilis Si las propiedades de estos compuestos son favorables para la absorcioacuten intestinal
se reabsorberaacuten pudieacutendose establecer un ciclo enterohepaacutetico
Durante tal ciclo continuacutean la secrecioacuten biliar y la reabsorcioacuten intestinal hasta
que la degradacioacuten metaboacutelica o excrecioacuten urinaria finalmente cause la eliminacioacuten del
12
agente del organismo Los ciclos enterohepaacuteticos a menudo son responsables de las vidas
medias prolongadas observadas en faacutermacos excretados principalmente en la bilis
El papel principal de la viacutea biliar de excrecioacuten consiste en eliminar ciertos
iones orgaacutenicos que no pueden reabsorberse desde el aparato intestinal ya que estaacuten
ionizados con el pH prevalente En los hepatocitos estaacuten situados sistemas de transporte
mediados por portadores no especiacuteficos para aacutecidos y para bases Los faacutermacos con masas
moleculares menores de unos 300 Daltons por lo general se difunden pasivamente hacia la
bilis (25)
IIII5- Excrecioacuten salival y mamaria
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de las glaacutendulas mamarias y salivales
ocurre por difusioacuten pasiva o ioacutenica El proceso es determinado por las relaciones pH pKa
solubilidad en liacutepidos y gradientes de concentracioacuten La saliva y sudor por lo general tienen
menos importancia La viacutea salival de excrecioacuten es importante soacutelo en los rumiantes ya que
secretan cantidades muy voluminosas de saliva alcalina La determinacioacuten de
concentraciones de droga en saliva es un excelente indicador de droga libre en plasma
utilizado en monitorizacioacuten de medicamentos
La excrecioacuten de faacutermacos a traveacutes de leche tiene una gran importancia en
medicina veterinaria ya que puede afectar a las criacuteas lactantes teniendo particular
importancia en salud puacuteblica por lo que debe ser contemplada esa posibilidad al administrar
un faacutermaco a vacas lecheras (26) En el caso particular de las avermectinas por ejemplo
sus concentraciones en leche pueden ejercer efecto antiparasitario contra paraacutesitos muy
susceptibles en el animal lactante
13
II1 2 Azitromicina
Hace exactamente cien antildeos -1910- Paul Erlich define a la quimioterapia como
una rama de la farmacologiacutea que se ocupa del estudio de las sustancias de composicioacuten
quiacutemica definida que introducidas en el organismo son capaces de lesionar o destruir
especiacuteficamente los agentes patoacutegenos vivos sin presentar efectos toacutexicos acentuados
sobre el hueacutesped
En el antildeo 1928 Alexander Fleming demostroacute la produccioacuten de sustancias
antibioacuteticas por un moho a partir de observaciones realizadas en cultivos de estafilococos
contaminados con Penicillum notatum
Fleming no fue capaz de aislar la penicilina en forma pura pero Raistrick
ampliando los experimentos de Fleming descubre en el antildeo 1930 que la penicilina es un
aacutecido orgaacutenico que puede extraerse de un cultivo acidificado mediante eacuteter (27)
En 1936 se inicioacute la era moderna de la quimioterapia con la utilizacioacuten cliacutenica
de la sulfonamida y la ldquoedad de orordquo del tratamiento antimicrobiano comienza en el antildeo
1941 cuando Florey y sus colaboradores aislaron la penicilina en forma de polvo impuro y
de color pardo A partir de aquiacute comienza la produccioacuten de penicilina en forma masiva y su
utilizacioacuten en ensayos cliacutenicos
Desde entonces la historia de los agentes antimicrobianos ha sido muy
dinaacutemica con un avance progresivo en investigacioacuten y en la industria farmaceacuteutica
proporcionando cada antildeo nuevas moleacuteculas que contribuyen a incrementar el arsenal
terapeacuteutico
Azitromicina (AZI) es un nuevo macroacutelido aacutecido estable semisinteacutetico obtenido a partir
de eritromicina Se diferencia de esta uacuteltima por ser mejor tolerado tras la administracioacuten
oral presentar un espectro antimicrobiano maacutes amplio y mejores caracteriacutesticas
farmacocineacuteticas como penetracioacuten tisular (28) Es el prototipo de una nueva sub-clase de
antibioacuteticos macroacutelidos con una estructura anular de 15 miembros conocidos como
AZALIDOS (29 30) Difiere de la eritromicina (Figura 1) por la insercioacuten de un aacutetomo de
nitroacutegeno asociado a un grupo metilo en la posicioacuten 9ordf del anillo lactoacutenico (31) dando lugar
a la siguiente formula molecular C38H72N2O12 cuyo peso molecular es de 74900 esta
diferencia se puede apreciar claramente en la Figura 1
14
Azitromicina Eritromicina
Fig 1 Estructura quiacutemica de Azitromicina y Eritromicina
Estudios in vitro muestran a la azitromicina como levemente menos activa que
eritromicina frente a organismos Gram-positivos aunque esto es de dudosa significancia
cliacutenica ya que alcanza concentraciones tisulares mayores Por el contrario se reconoce a
azitromicina maacutes activa contra muchos patoacutegenos Gram-negativos como Haemophilus
influenzae H parainfluenzae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Ureaplasma
urealyticum y Borrelia burgdorferi Al igual que la eritromicina y otros macroacutelidos la actividad
de la azitromicina no es afectada por las -lactamasas (31 32)
Luego de su administracioacuten oral se observan concentraciones seacutericas maacutes bajas que
para eritromicina esto es ocasionado por su raacutepida distribucioacuten desde la circulacioacuten
sisteacutemica hacia compartimentos extravasculares dando como resultado concentraciones
tisulares varias veces superiores a las comuacutenmente alcanzadas por eritromicina (33)
posteriormente sufre una lenta liberacioacuten desde el compartimiento extravasculares y en
gran medida intracelulares Lo cual se ve reflejado en una prolongada fase de eliminacioacuten
(32)
Estas caracteriacutesticas cineacuteticas ofrecen notables ventajas en los regiacutemenes de
dosificacioacuten suplantando el tradicional reacutegimen de dosificacioacuten utilizado para eritromicina
(32) Los esquemas posoloacutegicos habituales de Azitromicina oral son de 3 a 5 comprimidos
de 500 mg cada 24 horas y recientemente se han desarrollado formulaciones de liberacioacuten
15
lenta ndashmicroesferas- que permiten realizar tratamientos equivalentes con una sola dosis
(34)
La eficacia cliacutenica de la azitromicina ha sido confirmada en tratamientos de infecciones
del tracto respiratorio alto y bajo piel y tejidos blandos (35)
Pruebas cliacutenicas comparativas han demostrado que azitromicina es mejor tolerada que
eritromicina sobre todo en lo que respecta a trastornos gastrointestinales Estos estudios
tambieacuten han demostrado un perfil de tolerabilidad superior a cefaclor doxiciclina o
amoxicilina-probenecid (32)
II121Actividad antimicrobiana Azitromicina presenta un espectro de actividad in vitro similar al de eritromicina
aunque con algunas diferencias frente a determinados microorganismos
Azitromicina es activa contra aislamientos de Staphylococcus aureus incluso
productores de -lactamasas aunque menos que claritromicina y roxitromicina tambieacuten es
activa frente a Staphylococcus epidermidis y otros Staphylococcus coagulasa negativos Sin
embargo Staphylococcus resistentes a los macroacutelidos tambieacuten lo son a azitromicina (32)
Presenta buena actividad frente a Streptococcus grupo A B C F G otros
Streptococcus orales y Streptococcus bovis como asiacute tambieacuten frente a microorganismos
patoacutegenos comuacutenmente aislados del tracto urogenital como Chlamydia trachomatis
Ureaplasma urealiticum y patoacutegenos atiacutepicos del tracto respiratorio como Chlamydea
pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae (35)
Se comporta como bactericida frente a una variedad de microorganismos incluidos S
aureus S epidermidis S pneumoniae H influenzae Klebsiella pneumoniae especies de
Bordetella Legionella pneumophila M catarrhalis C trachomatis C pneumoniae complejo
de M avium y Borrelia burgdorferi (36)
Es inactiva contra Enterococos grupo D y activa contra Streptococcus pneumoniae
sensible a eritromicina Listeria monocitogenes es moderadamente sensible a azitromicina y
las especies de corinebacterias son generalmente resistentes Ha demostrado una actividad
moderada contra especies de clostridios (32)
Azitromicina ha demostrado su actividad antimicrobiana en modelos animales con
infecciones experimentales producidas por diferentes microorganismos Gram-positivos y
Gram-negativos (incluiacutedos Staphylococcus Streptococcus H Influenzae L pneumofila) y
otros microorganismos como T gondii Tpallidum B burgdorferi C trachomatis y complejo
de M Avium (32)
16
Azitromicina aparentemente tiene un efecto parasitostaacutetico contra Toxoplasma gondii
por lo que suele ser utilizada en pacientes con siacutendrome de inmunodeficiencia adquirida
(37) Tambieacuten se ha evaluado la actividad antimalaacuterica de azitromicina en infecciones
experimentales en ratones infectados con Plasmodium yoelii nigeriensis obtenieacutendose
resultados de curacioacuten satisfactoria (38) Aun continuacutean las investigaciones sobre el uso
potencial de azitromicina en el tratamiento de la malaria tracoma infecciones por
Pseudomonas aeruginosa erytema migrans fiebre tifoidea criptosporoidiosis enfermedad
peacutelvica inflamatoria acneacute fiebre purpuacuterea del mediterraacuteneo (mediterranean spotted fever) y
complejo micobacterium aviar (MAC) (39) Administraciones de Azitromicina con atovaquona
han resultados eficaces para el tratamiento de babesiosis en humanos (40) Tambieacuten la
combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del tracoma (41)
El efecto postantibioacutetico definido como la supresioacuten persistente del crecimiento
bacteriano luego de la exposicioacuten a un antimicrobiano in vitro por un periacuteodo corto de
tiempo (42) documentado para azitromicina es de aproximadamente 35 horas contra S
Pyogenes y S pneumoniae 3 horas para M catarrhalis 2 horas para K oxytoca y K
pneumoniae y 17 horas para H Influenzae a cuatro veces su concentracioacuten inhibitoria
miacutenima CIM (43)
El efecto antibacteriano de azitromicina al igual que otros macroacutelidos es atribuido a su
unioacuten reversible con la subunidad ribosomal 50 S de la ceacutelula bacteriana con la
subsecuente inhibicioacuten de la siacutentesis proteica el efecto bacteriostaacutetico o bactericida
depende de la sensibilidad del microorganismo y de las concentraciones de azitromicina
alcanzadas en el tejido infectado (44) La presencia del grupo metilo en la posicioacuten 9 del
anillo macroacutelido confiere una carga positiva extra a la moleacutecula de azitromicina esta carga
extra ampliacutea el espectro bacteriano de azitromicina en relacioacuten a la eritromicina contra la
mayoriacutea de los organismos gram-negativos (28)
II122 Farmacocineacutetica farmacodinamia Azitromicina es considerada maacutes estable que eritromicina en medios aacutecidos esto se
logroacute por la incorporacioacuten del aacutetomo de nitroacutegeno en la posicioacuten 9 del anillo lactoacutenico debido
a que provee de un segundo sitio de protonacioacuten Esta modificacioacuten quiacutemica ademaacutes de
mejorar su estabilidad en ambientes aacutecidos mejora su absorcioacuten a nivel del tubo digestivo y
disminuye de esta manera los trastornos gastrointestinales (45 46 31) Tras su
administracioacuten oral en el hombre presenta una biodisponibilidad de alrededor del 37
superior a la obtenida para eritromicina luego de su administracioacuten por la misma viacutea (25 )
(47)
17
Los antibioacuteticos macroacutelidos -casi todos de gran peso molecular- son sustratos para el
trasporte a traveacutes de transportadores como la P-glicoproteiacutena y de ahiacute su escasa absorcioacuten
oral sin embargo Azitromicina y otros macroacutelidos como Claritromicina exhiben una mayor
excelente biodisponibilidad por la viacutea oral debido a su afinidad quiacutemica por otros
transportadores como los OATPs (organic anion transporting polypeptides) (48)
El perfil farmacocineacutetico estaacute caracterizado por una raacutepida y extensiva captacioacuten
desde la circulacioacuten hacia compartimientos intracelulares seguida de una lenta fase de
eliminacioacuten (32)
Quizaacutes esto explique el bajo pico de concentracioacuten plasmaacutetica alcanzado (Cmax) de
alrededor de 04mgL a las 25 horas de una administracioacuten oral de 500 mg (49) en el
hombre
Esta moleacutecula aparentemente presenta una amplia distribucioacuten en el organismo
Generalmente se observan elevadas concentraciones en tejidos y oacuterganos como pulmoacuten
tonsilas proacutestata hiacutegado y linfonoacutedulos fluidos tisulares y una variedad de tipos celulares
incluidos fagocitos de la sangre Estudios farmacocineacuteticos en humanos mencionan
voluacutemenes de distribucioacuten de el orden de los 23 a 30 LKg (50) Mientras que las
concentraciones encontradas en grasa y muacutesculo son relativamente bajas (51 52 53)
Algunos autores mencionan que al igual que eritromicina y roxitromicina posee pobre
capacidad para atravesar la barrera placentaria por lo que su eficacia en el tratamiento de
infecciones fetales es limitada (54) Mientras que estudios maacutes recientes describen que
luego de la administracioacuten oral de 1 gramo de Azitromicina en mujeres embarazadas se
obtienen altas concentraciones en miometrio tejido adiposo y placenta en liacutequido amnioacutetico
si bien las concentraciones obtenidas tambieacuten son altas declinan a partir de las 6 horas
(55)
La fijacioacuten a las proteiacutenas plasmaacuteticas es del 50 a concentraciones de 0002 a 005
mgL y se reduce a un 7 a concentraciones de 1 mgL Esta afinidad proteica es inferior a
la que presenta la eritromicina (72 a 04 mgL) o roxitromicina (96 a 25 mg L) Lo que
sugiere que elevadas concentraciones de azitromicina se encuentran en la forma libre
disponibles para distribuirse en los sitios de infeccioacuten (32) Lo anteriormente mencionado fue
demostrado mediante un modelo animal de infeccioacuten experimental (Infeccioacuten con H
Influenzae en ratoacuten) encontraacutendose altas concentraciones en el pareacutenquima pulmonar de
los animales enfermos (12 mgkg) con respecto al grupo control que recibioacute la misma dosis
de 50 mgkg Estos resultados se deben a las altas concentraciones intracelulares
alcanzadas en leucocitos polimorfonucleares y a la lenta liberacioacuten desde el sitio de
infeccioacuten pulmonar (56)
18
La acumulacioacuten de droga intracelular esta influenciada por la concentracioacuten
extracelular del antibioacutetico viabilidad de las ceacutelulas el calcio extracelular temperatura y pH
(57) La difusioacuten pasiva es el mecanismo principal de transporte a traveacutes de membrana
fagociacutetica y el transporte activo en menor importancia (58) El ingreso de droga a la ceacutelula no
es afectada por inhibidores del metabolismo celular aunque puede verse levemente
afectada por la fagocitosis La excrecioacuten desde la ceacutelula se realiza en forma muy lenta y
puede incrementarse marcadamente por agentes que puedan neutralizar el pH lisosomal
que previene la protonacioacuten y prolonga la retencioacuten dentro de la ceacutelula (58)
Azitromicina es excretada de manera inalterada principalmente con las heces viacutea biliar
y secrecioacuten transintestinal y en menor grado por la orina (6 luego de 24 horas de la
administracioacuten oral y 12 a los tres diacuteas de la aplicacioacuten intravenosa) (47 59) La excrecioacuten
transintestinal quizaacutes sea el mecanismo primario de eliminacioacuten de los componentes
inalterados La eliminacioacuten de azitromicina desde el suero siguiendo un disentildeo polifaacutesico se
refleja inicialmente con una raacutepida distribucioacuten hacia los tejidos y la subsecuente liberacioacuten
lenta desde los mismos (32)
El perfil farmacocineacutetico no es alterado en forma significativa en pacientes ancianos
con un leve deterioro renal ni tampoco en pacientes con un moderado deterioro hepaacutetico
No hay datos farmacocineacuteticos en pediatriacutea pero pacientes con distintos grados de
insuficiencia renal no presentaron diferencias significativas en paraacutemetros farmacocineacuteticos
como aacuterea bajo la curva (AUC) o volumen de distribucioacuten (Vd) (60)
En cuanto a las interacciones medicamentosas eritromicina posee complejas maneras
de interaccioacuten cuando es administrada con glucocorticoides carbamazepina y teofilina
incrementando los efectos producidos por estos Esto se debe a que eritromicina inhibe a la
isoenzima P del citocromo P-450 Sin embargo azitromicina no produjo inhibicioacuten o
induccioacuten del citocromo P-450 en estudios realizados en ratas y sobre un estudio
retrospectivo realizado sobre 3995 pacientes no reveloacute interaccioacuten alguna en los casos que
recibiacutean concomitantemente teofilina warfarina cimetidina carbamazepina o metil
prednisolona (32) La combinacioacuten con Ivermectina y Albendazol para el tratamiento del
tracoma puede incrementar el AUC y la Cmax en un 31 y 27 respectivamente para
Ivermectina y disminuir los mismos paraacutemetros 16 y 14 para sulfoacutexido de albendazol
(41)
En virtud de estos resultados en los casos en los cuales es necesario tratar un
paciente con maacutes de un medicamento incluido un antibioacutetico macroacutelido azitromicina es la
droga de eleccioacuten por su baja interaccioacuten droga-droga (61)
19
Desde el punto de vista farmacodinaacutemico los macroacutelidos tienen la particularidad de
no pertenecer a una sola categoriacutea (62) Se considera que su actividad bacterioloacutegica es
tiempo-dependiente y que el eacutexito terapeacuteutico estaacute estrechamente ligado al paraacutemetro
TgtCIM (62 63) Sin embargo azitromicina tiene un perfil PK particular y a diferencia de los
macroacutelidos tradicionales posee un marcado EPA in vivo (62) Estudios experimentales han
demostrado que para alcanzar la eficacia cliacutenica de azitromicina y claritromicina se debe
tener en cuenta tanto el TgtCIM como el ABC0-24hCIM (62 64 65 66) Incluso algunos
autores han postulado que azitromicina y claritromicina tienen una actividad bacterioloacutegica
concentracioacuten-dependiente y que el paraacutemetro CmaacutexCIM es el que mejor predice su
comportamiento (66)
II123 Toxicidad Los efectos adversos observados luego de la administracioacuten de azitromicina fueron
similares a otros agentes comparables con esta droga como penicilinas cefalosporinas y
otros macroacutelidos Sin embargo son considerados escasos en comparacioacuten con los
reportados para otros agentes antibacterianos como eritromicina cefaclor y la combinacioacuten
amoxicilinaprobenecid (32) Los maacutes comunes pueden ser disturbios gastrointestinales (96
) seguidos de efectos en el sistema nervioso central y perifeacuterico (28) Pero normalmente
los efectos adversos van de leves a moderados y solamente son graves en un 6 de los
casos predominando los trastornos gastrointestinales veacutertigo cefaleas fatiga y efectos
cutaacuteneos Sobre un estudio con 3995 pacientes tratados con azitromicina solo en un 07
de los pacientes tuvo que ser suspendido el tratamiento en comparacioacuten con 13 a 152
para otras drogas en estudio (32)
En conclusioacuten azitromicina es un antibioacutetico de amplio espectro y probada eficacia en
un importante rango de infecciones comunes adquiridas Presenta un muy buen perfil
farmacocineacutetico y de tolerabilidad con un apropiado reacutegimen de dosificacioacuten dando una
alternativa uacutetil para eritromicina y otros macroacutelidos con similar actividad
20
II2 HIPOTESIS
1- Azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de los macroacutelidos- es una moleacutecula que posee
un gran volumen de distribucioacuten con una buena penetracioacuten en la glaacutendula mamaria
alcanzando altas concentraciones en leche
2- Normalmente azitromicina se elimina principalmente por viacutea biliar y en menor grado
por orina pero en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es una viacutea de eliminacioacuten
importante
3- Azitromicina se distribuye ampliamente hacia tejidos y fluidos bioloacutegicos
4- Las concentraciones de azitromicina en leche son mas elevadas en animales sanos
que en animales mastiticos en funcioacuten de los cambios en el pH de la leche
5- Luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina esta droga atraviesa la
barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en suero
21
II3 OBJETIVOS
II31 objetivos generales
1- Definir el comportamiento farmacocineacutetico de azitromicina en vacas lecheras
Holando Argentino sanas y con mastitis
2- Establecer una aproximacioacuten al reacutegimen terapeacuteutico oacuteptimo para azitromicina en
vacas lecheras
II32 Objetivos especiacuteficos
1- Poner a punto la teacutecnica de deteccioacuten y cuantificacioacuten de azitromicina por meacutetodo
bioloacutegico
2- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intravenosa
3- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramuscular
4- Estudiar la disposicioacuten seacuterica y laacutectea de azitromicina en vacas lecheras sanas y con
mastitis tras la administracioacuten intramamaria
5- Comparar la disposicioacuten laacutectea de azitromicina en vacas sanas y con mastitis
6- Estudiar la disposicioacuten de azitromicina en tejidos y fluidos tisulares tras su
administracioacuten intramuscular en terneros
22
III MATERIALES
23
III1 FORMULACION EXPERIMENTAL
Se prepararon cuatro formulaciones experimentales de azitromicina Intravenosa
Intramuscular IMM lactacioacuten e IMM secado Cada una de estas con las adaptaciones
necesarias para su aplicacioacuten y viacutea de administracioacuten
La formulacioacuten estuvo a cargo del aacuterea galeacutenica del departamento de Investigacioacuten y
desarrollo del laboratorio Biogeacutenesis Bagoacute por contar con la experiencia equipamiento e
instalaciones para la elaboracioacuten de lotes experimentales
Con cada lote preparado y en cualquiera de sus formas farmaceacuteuticas el laboratorio
controloacute el tiacutetulo de azitromicina por HPLC tanto en la formulacioacuten granel como en el envase
definitivo Ademaacutes de otros paraacutemetros como pH esterilidad y piroacutegenos III11 Formulacioacuten Endovenosa
Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina citrato al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten endovenosa fue formulada en una matriz 100 acuosa
III1 2 Formulacioacuten Intramuscular Frascos de 50 y 500 mL conteniendo una solucioacuten de azitromicina base al
10 PV equivalente a 10 mgmL
La solucioacuten intramuscular fue formulada en una matriz de Propilenglicol 80
alcohol benciacutelico 20
III13 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de vaca en lactacioacuten Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 125 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
III14 Formulacioacuten Intramamaria para tratamiento de la vaca al momento del secado
Jeringas intramamarias con un volumen total de 10 mL conteniendo 250 mg
de azitromicina base en partes iguales de Polietilenglicol 400 (PEG 400) y
Polietilenglicol 1000 (PEG 1000)
24
III2 ANIMALES EXPERIMENTALES
III21 Grupos experimentales Los animales de experimentacioacuten fueron obtenidos de diferentes establecimientos
lecheros de la provincia de Buenos Aires ldquoOjo de Aguardquo situado en el partido de Tandil ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen y ldquoEl Placerrdquo de Bavio partido de La Plata
Se formaron cuatro grupos de 12 vacas HA cada uno para realizar los estudios
farmacocineacuteticos los cuales estuvieron formados por animales sanos y animales con
mastitis subcliacutenica (seis sanos y seis con mastitis subcliacutenica)
-Grupo uno correspondiente al tratamiento endovenoso
-Grupo dos correspondiente al tratamiento intramuscular
-Grupo tres correspondiente al tratamiento intramarario de vacas en lactacioacuten
-Grupo cuatro correspondiente al tratamiento intramarario de vacas al momento de secado
Ademaacutes se formoacute un quinto grupo con terneros HA para realizar un estudio anexo de
penetracioacuten tisular de azitromicina
III211 Criterios para seleccioacuten animal Para la seleccioacuten de los animales se tomaron criterios generales aplicables tanto a los
grupos de vacas sanas como a los grupos de animales con mastitis subcliacutenica y criterios
especiacuteficos para los grupos con y sin mastitis
Criterios Generales
A Vacas Holando Argentino joacutevenes que estuvieran en lactacioacuten con un promedio de
produccioacuten Laacutectea no inferior a los 8 litros diarios
B Vacas con reacutegimen de ordentildee cada 12 horas
C Vacas y terneros que no tuviesen sintomatologiacutea cliacutenica de ninguna enfermedad
evaluadas con los siguientes paraacutemetros
a Temperatura corporal
b Frecuencia cardiacuteaca
c Frecuencia respiratoria
d Movimientos ruminales
e Palpacioacuten de ganglios inguinal superficial y retromamario
Criterios especiacuteficos para la seleccioacuten de animales con y sin mastitis subcliacutenica
25
f anaacutelisis cliacutenico de la ubre
g conteo de ceacutelulas somaacuteticas
h anaacutelisis bacterioloacutegico de leche
III212 Criterios de inclusioacuten Generales
Vacas que estuviesen entre la segunda y cuarta lactacioacuten
Sanos en la inspeccioacuten general (para los 5 grupos)
Con los cuatro cuartos mamarios funcionales (en ordentildee)
Sin lesiones en los pezones
Animales sin mastitis
Ubre sin signos de dolor y temperatura normal a la palpacioacuten
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas inferior a 200000 ceacutelulas mL
Sin aislamiento microbioloacutegico en ninguacuten cuarto mamario
Animales con mastitis
Conteo de ceacutelulas somaacuteticas superior a 600000 ceacutelulas mL
Con aislamiento microbioloacutegico en al menos dos de sus cuartos mamarios
III213 Criterios de no inclusioacuten Animales que se encontraran bajo tratamiento antibioacutetico o hubieran recibido
cualquier tratamiento antibioacutetico en los uacuteltimos 60 diacuteas (para los 5 grupos)
Cuartos descolgados (rotura de ligamento suspensor)
Vacas con marcadas dificultades de manejo
III214 Criterios de exclusioacuten (para los 5 grupos) Errores en la dosificacioacuten o administracioacuten de la formulacioacuten experimental
Reacciones adversas pos administracioacuten
Animales que hubiesen desarrollado otra patologiacutea a durante el periacuteodo de muestreo
Animales que hubiesen recibido otro antibioacutetico durante el periacuteodo de muestreo
26
III3 INSTRUMENTAL Y EQUIPAMIENTO III31 Instrumental y equipamiento de campo
Planillas para captura de datos
Caravanas numeradas y sin numeracioacuten
Pinza para caravanas
Marcador indeleble rojo verde azul y negro
Mocheta y maneas
Vacutainer B+D sin aditivos
Agujas para vacutainer 18 G y 21 G
Jeringas descartables de 5 10 20 y 60 mL
Agujas descartable 16G 18G 20G y 21G
Tubos de ensayo para centrifuga (esteacuteriles)
Pipetas Pasteur plaacutesticas descartables de 3 mL (esteacuteriles)
Gradillas
Calculadora de mano
Tubos de ensayo con fondo redondeado y tapa a rosca por 10 mL
Frascos plaacutesticos para recoleccioacuten de muestras bioloacutegicas de 50 mL
Cinta de enmascarar de 20 mm
Centrifuga (Presvac Argentina)
Alcohol
Algodoacuten
Balanza electroacutenica para grandes animales modelo EziWeigh 1 (Tru Test Nueva Zelanda)
27
III32 Instrumental y equipamiento de laboratorio
-Cepas de referencia (Micrococcus luteus ATCC 9431)
-Solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
-Anza de platino
-Mecheros Bunzen
-Autoclave
-Azitromicina -standard secundario-
-Buffer fosfato Nordm 1 pH 85
-Suero bovino libre de antibioacuteticos
-Leche bovina libre de antibioacuteticos
-Medio ATB Nordm 1
-Medio de cultivo Mueller-Hinton
-Erlenmeyers graduados de 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Probetas de vidrio de 50 100 250 500 y 1000 mL (IVA Argentina)
-Matraces aforados de vidrio de 10 100 y 250 mL (IVA Argentina)
-Agua destilada
-Termoacutemetro de laboratorio 0-100 degC (IVA Argentina)
-Placas de vidrio de 25 x 25 cm y 25 cm de alto (esteacuteriles)
-Tubos de ensayo (esteacuteriles)
-Cilindros de acero inoxidable de 10 mm de longitud 6 mm de diaacutemetro interno y 8 mm de
diaacutemetro externo (esteacuteriles)
-Pipetas de 01 cc 1 cc 5cc y 10 cc (esteacuteriles)
-Micropipeta de 200 microl
-Pinza anatoacutemica
-Planillas con la ubicacioacuten de las muestras en los cilindros
-Diagrama guiacutea de la distribucioacuten de los cilindros en la placa
-Balanza de precisioacuten Mettler H80
-Balanza de precisioacuten Sartorius
-Espectrofotoacutemetro Spectral 24 (Crudo-Caamantildeo)
-Bantildeo termostaacutetico Vicking modelo Masson
-Estufa de cultivo de 25 a 40 ordmC modelo SL70C (SanJor Argentina)
-Vernier
-Calculadora
-Gradillas
-Homogenizador de tejidos ultra Turrax T25
28
-Evaporador concentrador de muestras
-Vortex para un tubo
-vortex para varios tubos
-pHmetro de mesada
-Agitador magneacutetico
-Bantildeo ultrasoacutenico
-Destilador eleacutectrico
-Bomba de vaciacuteo
-Freezer -20 liacutenea hogar (Whirlpool Argentina)
-Computadora 586
-Microscopios
-Material de laboratorio de vidrio
-Software para anaacutelisis farmacocineacutetico WinNonlin Professional 52 (Scientific consulting
Inc Cary NC)
29
IV METODOS
30
IV1 MANEJO ANIMAL ALIMENTACIOacuteN IDENTIFICACIOacuteN Los animales fueron mantenidos en reacutegimen de ordentildee o secado seguacuten correspondiera y
con la alimentacioacuten adecuada a su eacutepoca de lactancia En este sentido todos tuvieron un
sistema de pastoreo con suplementacioacuten de concentrado en el tambo al momento del
ordentildee
Se mantuvo el sistema de identificacioacuten del establecimiento para el seguimiento individual
Estas siempre fueron dobles y en los casos donde se perdioacute alguna identificacioacuten se pidioacute
agregar una nueva de manera de tener siempre doble identificacioacuten
IV2 DESCRIPCIOacuteN DE DOSIS Y ADMINISTRACIOacuteN Luego de la seleccioacuten animal y la confeccioacuten de los grupos experimentales cada animal fue
pesado para establecer las dosis a administrar en los casos que asiacute lo requeriacutea ndash
intramuscular y endovenoso- La administracioacuten de cada formulacioacuten se realizoacute luego del
ordentildee de la mantildeana siguiendo las normas de higiene adecuadas para cada viacutea de
administracioacuten Al finalizar la aplicacioacuten se consideroacute como tiempo cero del muestreo
IV21 Administracioacuten endovenosa La dosis a administrar por la viacutea endovenosa fue de 10 mg por kilogramo de peso vivo
Esta se realizoacute -con el animal en el cepo y asegurado con bozal- en la vena yugular
derecha la administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndashde 5 a 10 segundos- sin
eventos adversos
IV23Administracioacuten intramuscular La dosis a administrar por la viacutea intramuscular fue de 10 mg por kilogramo de peso
vivo Esta se realizoacute -con el animal en el cepo- en la cara posterior del muslo izquierdo
-zona de los muacutesculos isquitibiales- La administracioacuten en todos los casos fue raacutepida ndash
de 10 a 20 segundos- y sin eventos adversos
IV23Administracioacuten intramamaria Inmediatamente despueacutes de terminado el ordentildee de rutina se desinfectoacute cada pezoacuten
con un antiseacuteptico yodado se secoacute con papel tisuacute y se volvioacute a desinfectar la punta del
pezoacuten con alcohol isopropiacutelico 70 seguacuten recomendacioacuten del NMC Finalizada esta
31
maniobra se aplicoacute en cada cuarto mamario el contenido completo de una jeringa
plaacutestica intramamaria de azitromicina 125 o 250 mg
La aplicacioacuten de las jeringas se efectuoacute con el siguiente orden 1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el
cuarto anterior izquierdo Se determinoacute como tiempo cero (0) al finalizar la aplicacioacuten
de la uacuteltima jeringa
IV3TOMA DE MUESTRAS Y CONSERVACION
IV31 Muestras de sangre Las extracciones de sangre se realizaron con los animales en la manga a partir de la
vena yugular izquierda ndashde preferencia- o derecha en algunos casos y para facilitar el
manejo se tomaron muestras de la vena cocciacutegea con los animales en el brete de ordentildeo o
la manga
Luego de la desinfeccioacuten de la zona de extraccioacuten con un algodoacuten embebido en
alcohol se tomaron las muestras de sangre con vacutainer de 10mL o jeringa con aguja la
cual era trasvasada inmediatamente a un tubo vacutainer para ser depositado en una
gradilla inclinada a 45ordm en un local del tambo o dentro de una heladera teacutermica para facilitar
la retraccioacuten del coaacutegulo Luego de la retraccioacuten del coaacutegulo las muestras fueron
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos y posteriormente se procedioacute a la extraccioacuten
del suero con pipetas Pasteur esteacuteriles (una para cada muestra)
El suero fue vertido en tubos de hemoacutelisis (limpios secos esteacuteriles y rotulados) y
mantenidos en freezer a -20ordmC hasta el momento de su anaacutelisis Esta metodologiacutea fue
empleada para la obtencioacuten de cada muestra sanguiacutenea
IV32 Muestras de leche Para la obtencioacuten de muestras de leche se procedioacute a despuntar por ordentildee manual
tres chorros de leche de cada cuarto finalizado el despunte se recolectaba (en un recolector
bioloacutegico de 50 mL de capacidad) un volumen aproximado de 10 mL por cada cuarto y
siguiendo la misma rutina empleada para la aplicacioacuten de jeringas intramamarias -1) cuarto
posterior derecho 2) cuarto posterior izquierdo 3) cuarto anterior derecho y 4) el cuarto
anterior izquierdo- Durante los muestreos se evitoacute el sellado pre y posordentildee en todo el
tambo
32
Las muestras de leche asiacute obtenidas fueron conservadas en los colectores bioloacutegicos
esteacuteriles a -20ordmC hasta su ensayo
Esta metodologiacutea fue empleada para todas las tomas de muestra de leche
IV33 Anaacutelisis de las muestras Los dos meacutetodos maacutes difundidos y utilizados para medir concentraciones de
azitromicina en fluidos corporales y tejidos son ensayo microbioloacutegico empleando la teacutecnica
de difusioacuten en agar-placa (46) y cromatografiacutea liacutequida de alta performance (HPLC) con
detector electroquiacutemico (67 68) o ultravioleta (69 70) Ambos meacutetodos presentan similar
precisioacuten y sensibilidad por lo que los dos meacutetodos son igualmente apropiados para
determinar concentraciones de azitromicina en suero y tejidos (71 32)
Tomando en cuenta estas referencias y considerando el volumen de muestras y los
mayores costos del uso de la cromatografiacutea liquida de alta performance (HPLC) se decidioacute
emplear el meacutetodo microbioloacutegico tanto para el anaacutelisis de muestras de suero y leche como
de tejidos
IV4 TECNICA ANALITICA
IV41 Fundamento El meacutetodo bioloacutegico consiste en enfrentar concentraciones conocidas del antibioacutetico a
testear (patrones) con un cultivo estandarizado de una cepa patroacuten de una bacteria sensible
al mismo A partir de los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano se traza una liacutenea
patroacuten en la que se interpolaraacuten los halos de inhibicioacuten de crecimiento bacteriano
producidos al enfrentar una muestra de concentracioacuten desconocida con el mismo cultivo
Posteriormente las concentraciones de antibioacutetico presentes en la muestra seraacuten obtenidas
por extrapolacioacuten desde la liacutenea patroacuten
IV42 Desarrollo analiacutetico y descripcioacuten del meacutetodo
La determinacioacuten cuantitativa de azitromicina en suero y leche se realizoacute mediante el
meacutetodo microbioloacutegico (teacutecnica cilindro-placa de Grove amp Randall) adaptado para este
antimicrobiano (71 94)
El meacutetodo microbioloacutegico consiste en la determinacioacuten de concentraciones
desconocidas de un antibacteriano en muestras bioloacutegicas por comparacioacuten con patrones de
concentracioacuten conocida de dicho antibacteriano Para ello se utiliza un medio de cultivo
33
estaacutendar (agar para antibioacuteticos) en el que se inocula una cantidad fija y determinada del
microorganismo sensible al antibacteriano Una vez homogeneizado el medio de cultivo se
vuelca dentro de placas de vidrio de 25 x 25 cm de lado y 25 cm de altura Posteriormente
sobre la superficie del agar gelificado se colocan cilindros dentro de los cuales se siembran
las muestras problema y los patrones La placa es incubada durante 24 horas periacuteodo luego
del cual se miden los halos de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano A partir de los halos
producidos por las concentraciones patrones se traza una liacutenea de regresioacuten De esta
manera por interpolacioacuten de los diaacutemetros de los halos producidos por las muestras
problema se extrapolan las concentraciones correspondientes
Las muestras problema (tanto seacutericas como laacutecteas) fueron sembradas por
duplicado Se utilizoacute una placa de cultivo por animal para las muestras de suero y otra placa
para las muestras de leche cada una con sus correspondientes estaacutendares de
concentraciones conocidas del antibacteriano en estudio (curvas patroacuten) Este
procedimiento se realizoacute en el mismo diacutea disminuyendo asiacute la variabilidad inter-placa e
inter-diacutea
Previamente al anaacutelisis de las muestras problema de cada protocolo se validoacute el
meacutetodo analiacutetico utilizado A tal fin se determinaron especificidad linealidad exactitud y
repetibilidad (precisioacuten) del meacutetodo y se calculoacute el liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ)
correspondiente
Diluciones estaacutendares y patrones
Azitromicina se encuentra en su forma anhidra con una pureza de 84 Por lo tanto
para obtener una solucioacuten stock madre de azitromicina de 1000 microgmL debieron pesarse
1190 mg de la sal que fueron disueltos en 10 mL de metanol calidad cromatograacutefica Dicha
solucioacuten almacenada a -20 degC mantiene su potencia durante 6 meses
A partir de la solucioacuten madre se prepararon las diluciones seriadas estaacutendares
utilizando como diluyente buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 esteacuteril (94) y los patrones en
plasma y en leche libres de residuos de antimicrobianos
Para preparar el buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 se mezclaron 53 mL de solucioacuten
esteacuteril de fosfato monobaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten A) con 947 mL de solucioacuten esteacuteril de
fosfato dibaacutesico de sodio 02 M (solucioacuten B) y se llevoacute la mezcla a 200 mL con agua
destilada esteacuteril Para preparar la solucioacuten A se diluyeron 278 g de fosfato monobaacutesico de
34
sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril y para la solucioacuten B se diluyeron 5365 g de
fosfato dibaacutesico de sodio en 1000 mL de agua destilada esteacuteril
Despueacutes de esterilizar el buffer en autoclave se realizoacute el control del pH El buffer se
mantuvo refrigerado y el pH fue perioacutedicamente controlado para asegurar la estabilidad del
mismo
El rango de concentraciones incluido en la recta de calibracioacuten estaacutendar y en la recta
patroacuten en suero fue 00625 microgmL 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL y 1 microgmL Para la
recta de calibracioacuten en leche el rango fue 0125 microgmL 025 microgmL 05 microgmL 1 microgmL y
2 microgmL
Inoacuteculo bacteriano
El microorganismo test utilizado fue Micrococcus luteus ATCC 9341 provisto por el
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS ldquoDr CG Malbraacutenrdquo (Buenos Aires
Argentina) A partir del mismo se sembraron en superficie picos de flauta con agar Muumlller-
Hinton los cuales fueron incubados a 35 ordmC durante 48 h
Transcurrido ese tiempo a partir de los picos de flauta se realizaron repiques (con el
mismo medio y tambieacuten en picos de flauta) de 24 h de incubacioacuten para la preparacioacuten del
inoacuteculo del diacutea de la siembra Estos cultivos se lavaron con 15 mL de solucioacuten fisioloacutegica
esteacuteril cada uno La solucioacuten obtenida fue diluida nuevamente con solucioacuten fisioloacutegica esteacuteril
hasta alcanzar un 75 de transmisioacuten medida por espectrofotometriacutea a 670 nm de longitud
de onda (94) que corresponde a una concentracioacuten de 2 ndash 26 x 107 UFCmL A partir de
esta suspensioacuten se tomoacute 1 mL para inocular el medio de cultivo para antibioacuteticos Nordm 1 cuyo
volumen fue de 120 mL por placa
Preparacioacuten de las placas
Para la preparacioacuten de las placas se utilizaron 120 mL de medio de cultivo para
antibioacuteticos Nordm 1 a una temperatura de 45-50 ordmC El mismo fue preparado el diacutea de la
siembra siguiendo las instrucciones del fabricante y fue esterilizado en autoclave a 120 ordmC y
a 1 atmoacutesfera de presioacuten durante 20 min Una vez retirado del autoclave fue colocado en
bantildeo de Mariacutea a 50 ordmC temperatura a la cual se le adicionoacute 1 mL del inoacuteculo bacteriano
correspondiente Se mezcloacute bien para tener una correcta distribucioacuten del inoacuteculo en la
totalidad del medio de cultivo con la precaucioacuten de evitar la formacioacuten de burbujas
35
La placa de vidrio (previamente numerada en la cara externa de la base para poder
saber la ubicacioacuten de los cilindros) y templada a 35ordmC se ubicoacute sobre una superficie
correctamente nivelada
El medio de cultivo inoculado fue vertido dentro de la placa de vidrio Una vez
solidificado el agar se colocaron los 49 cilindros de acero inoxidable de acuerdo al mapa
guiacutea y se ejercioacute sobre los mismos una ligera presioacuten para lograr una correcta coaptacioacuten
entre eacutestos y la superficie del medio
Siembra de las placas
Se sembraron por cuadruplicado 200 microL de cada solucioacuten estaacutendar (preparada con
buffer) o solucioacuten patroacuten (preparada en suero o leche bovina) en cada cilindro colocando su
ubicacioacuten en la planilla (Nordm de cilindro que recibioacute determinada muestra)
Las placas fueron incubadas en estufa a 35 ordmC durante 24 horas Transcurrido el
periacuteodo de incubacioacuten y utilizando un calibre Vernier se midieron los diaacutemetros de los halos
de inhibicioacuten del crecimiento bacteriano
A partir de los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten se trazaron las liacuteneas de regresioacuten
lineal entre estos y las concentraciones antimicrobianas presentes en los estaacutendares y en
los patrones A partir de estas liacuteneas de regresioacuten se determinaron los correspondientes
valores de interseccioacuten pendiente y los coeficientes de correlacioacuten (r)
IV43 Validacioacuten
Linealidad de la respuesta
La linealidad fue determinada a traveacutes de curvas de calibracioacuten de las
concentraciones calculadas del antimicrobiano (microgmL) y las concentraciones teoacutericas a
diferentes concentraciones del antimicrobiano ensayado (95) A partir de estas curvas fueron
calculados coeficiente de correlacioacuten lineal (r) pendiente e intercepcioacuten (96)
Las rectas de calibracioacuten fueron realizadas en 3 diacuteas distintos y cada una conteniacutea 5
concentraciones y 4 repeticiones por cada concentracioacuten
Especificidad de la teacutecnica
36
La especificidad se evaluoacute sembrando en cada placa y por cuadruplicado buffer
leche y suero libres de residuos de antimicrobianos (diluyentes y muestras control) El
objetivo fue corroborar la ausencia de sustancias con actividad inhibitoria intriacutenseca que
pudieran interferir con la actividad inhibitoria del antimicrobiano a ensayar (96)
Exactitud de la teacutecnica
La exactitud en la determinacioacuten de las concentraciones fue expresada como
porcentaje de recuperacioacuten y se obtuvo a partir de comparar la concentracioacuten calculada en
base a la recta de calibracioacuten (en leche o suero) con la concentracioacuten real y conocida del
patroacuten
Donde Cc es la concentracioacuten calculada y Cr es la concentracioacuten real
Se consideroacute adecuado un valor de recuperacioacuten comprendido entre 60 y 110
Precisioacuten de la teacutecnica
Para evaluar la precisioacuten de la teacutecnica se determinoacute el grado de repetibilidad el cual
estaacute relacionado con la dispersioacuten de una serie de mediciones de una misma muestra sobre
un valor promedio el cual corresponde a la varianza de la poblacioacuten y es estimada por el
desviacuteo estaacutendar (DE) Para comparar la dispersioacuten de 2 series de mediciones se utiliza el
desviacuteo estaacutendar relativo o coeficiente de variacioacuten (CV) que es expresado como porcentaje
Donde es el valor promedio de una serie de mediciones y el estimador de la media
poblacional (micro)
La evaluacioacuten de la precisioacuten se realizoacute mediante la estimacioacuten de los CV de los
halos de inhibicioacuten obtenidos a partir de los estaacutendares y patrones en suero y en leche
Cada concentracioacuten fue sembrada por cuadruplicado en una misma placa y durante 3 diacuteas
Cc 100 Recuperacioacuten ()= Cr
Ec 1
DE X
CV = Ec 2
37
a partir de lo cual se pudieron calcular los CV intra-diacutea e inter-diacutea Los valores de los CV
aceptables debieron ser inferiores al 20
Liacutemite de cuantificacioacuten
El liacutemite de cuantificacioacuten (LOQ) se define como la menor concentracioacuten para la cual
la reproducibilidad de los anaacutelisis no excede un CV del 20
Anaacutelisis de las muestras problema
Para evitar la variabilidad inter-placa se incluyoacute en cada placa sembrada con
muestras problema una bateriacutea de diluciones patrones del antimicrobiano en estudio en
suero o leche seguacuten correspondiera
A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria en los patrones se construyeron las
rectas de regresioacuten lineal
y = b + a x Ec 3
Donde y es la concentracioacuten del antimicrobiano b es el punto de interseccioacuten con el
eje de la abscisa a es la pendiente de la recta y x es el halo de inhibicioacuten
Los estimadores de a y b fueron calculados de la siguiente manera
Donde Yi es la concentracioacuten del antimicrobiano Xi es el diaacutemetro del halo de
inhibicioacuten y n es el nuacutemero de mediciones
El estimador del ajuste fue el coeficiente de correlacioacuten (r) que se calculoacute como
Los r considerados aceptables debieron ser superiores a 09 en todas las placas
Ec 5
Ec 4
r = n sum (Yi Xi) ndashsumYi sumXi)
radic [n sum Yi2 - (sum Yi)2][n sum Xi
2 - (sum Xi)2] Ec 6
sum Xi ndash b sum Yi a =
n
b = sum Yi2 ndash (sum Yi)2 n
sum Yi Xi ndash (sumYi sumXi) n
38
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de suero o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec7
Durante la determinacioacuten de azitromicina administrada por viacutea IMM hubo casos en
los que los halos de inhibicioacuten eran tan amplios que limitaban su lectura y por ello se
realizaron diluciones con leche bovina blanco Las concentraciones asiacute determinadas
debieron ser corregidas por el factor de dilucioacuten empleado De esta manera si la muestra
estaba diluida 110 la concentracioacuten final fue determinada de acuerdo a la Ecuacioacuten 8
ldquoConcentracioacuten finalrdquo = ldquoConcentracioacuten inicialrdquo 100
10 Ec 8
39
Resultados de la validacioacuten del meacutetodo microbioloacutegico
Azitromicina en suero
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en suero se presentan en la Tabla I y las rectas de calibracioacuten correspondientes
pueden observarse en la Figura I y la Figura II
En la Tabla II se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondiente a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten para el rango de concentraciones 00625 - 025 microgmL
fue 7097 plusmn 269 y porcentaje de recuperacioacuten para el rango 05 - 1 microgmL fue
10325 plusmn 488 El LOQ de azitromicina en suero bovino fue 00625 microgmL
Tabla I Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en suero
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -11401 plusmn 02021 -12833 plusmn 0071
PENDIENTE 09887 plusmn 01630 13768 plusmn 0068
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09200 plusmn 00200 09679 plusmn 00013
Tabla II Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (00625 - 1 microgmL) en suero bovino fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
0125 microgmL 1001 698 0980 1039 0978 844 0987 1170
025 microgmL 1163 599 1156 278 1144 682 1287 18414
05 microgmL 1313 262 1328 111 1342 128 1327 1151
1 microgmL 1608 271 1583 168 1657 375 1616 2307
40
Figura I Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de Azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura II Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en suero bovino frente al rango de concentraciones
00625 - 1 microgmL
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
00
05
10
15
20
25
0 02 04 06 08 1 12Concentracioacuten (μgmL)
Esperada Observada Lineal (Observada)
Diaacute
met
rode
hal
o (c
m)
41
Azitromicina en Leche
Los paraacutemetros resultantes de las rectas de calibracioacuten de los estaacutendares en buffer y
los patrones en leche se presentan en la Tabla III Las rectas de calibracioacuten
correspondientes pueden observarse en la Figura III y la Figura IV
En la Tabla IV se presenta la variabilidad intra-diacutea correspondientes a cada diacutea de
anaacutelisis y la variabilidad inter-diacutea correspondiente a los 3 diacuteas de anaacutelisis
El porcentaje de recuperacioacuten de la teacutecnica calculado para el rango de
concentraciones 0125 - 05 microgmL fue 9809 plusmn 845 y para el rango 1 - 2 microgmL fue
10311 plusmn 720 El LOQ de azitromicina en leche bovina que fue de 0125 microgmL
Tabla III Valores de interseccioacuten pendiente y coeficiente de correlacioacuten ( plusmn DS) de las rectas
de calibracioacuten de estaacutendares de azitromicina en buffer y patrones en leche
ESTAacuteNDARES PATRONES
INTERSECCIOacuteN -07968 plusmn 01039 -00776 plusmn 00191
PENDIENTE 07783 plusmn 00363 09438 plusmn 00069
COEFICIENTE DE CORRELACIOacuteN 09202 plusmn 00161 09522 plusmn 01521
Tabla IV Variabilidad (coeficientes de variacioacuten) intra-diacutea e inter-diacutea correspondiente a los halos
de inhibicioacuten de azitromicina (0125 - 2 microgmL) en leche bovina fortificado
CONCENTRACIOacuteN
HALOS DE INHIBICIOacuteN
Intra-diacutea 1 Intra-diacutea 2 Intra-diacutea 3 Inter-diacutea
CV CV CV CV
05 microgmL 0800 000 0800 000 0822 292 0807 143
1 microgmL 1113 686 1013 844 1165 711 1097 737
15 microgmL 1450 343 1477 164 1335 103 1423 518
2 microgmL 2315 265 2290 280 2298 297 2301 055
42
Figura III Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
estaacutendares de azitromicina en buffer fosfato de sodio 01 M pH 8 frente al rango de
concentraciones 00625 - 1 microgmL
Figura IV Recta de calibracioacuten mediante el ajuste lineal del halo de inhibicioacuten bacteriana de
patrones de azitromicina en leche bovina frente al rango de concentraciones
0125 - 2 microgmL
43
V EXPERIMENTOS REALIZADOS
44
V1 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de su administracioacuten endovenosa en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten endovenosa de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
5 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y
144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
25 5 75 10 15 20 30 y 45 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96
108 120 132 144 156 y 168 horas
V2 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramuscular en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica los cuales recibieron luego de su ordentildee una aplicacioacuten intramuscular de
azitromicina 10 dosis 10 mgkg de peso vivo y posteriormente se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- A partir del tiempo cero se tomaran las siguientes muestras de sangre 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 y 168 horas
V3 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten
Intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino en lactacioacuten sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se le aplico cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 125 mg
(una en cada cuarto) cada doce horas durante tres ordentildees consecutivos y luego se
procedioacute a la toma de muestras de sangre y leche
45
- Las muestras de leche fueron tomadas seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a 1 2 4 6 810 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a 1 2 4 6 8 10 y 12
horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de jeringas y toma de muestras a las 1 2 3 4 6 8 10 y
12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomo una muestra en cada ordentildee
Las muestras de sangre se tomaron seguacuten el siguiente esquema
Primer set de jeringas intramamarias y toma de muestras de leche a los 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del segundo set de jeringas y toma de muestras a los 30 minutos 1 2
3 4 6 8 10 y 12 horas
Ordentildee y aplicacioacuten del tercer set de pomos y toma de muestras a los 30 minutos 1 2 3 4
6 8 10 y 12 horas Luego y durante cuatro diacuteas se tomoacute una muestra en cada ordentildee
V4 ldquoAnaacutelisis farmacocineacutetico de azitromicina luego de sus administracioacuten intramamaria en vacas lecheras Holando Argentino al momento de secado sanas y con mastitis subcliacutenicardquo
Se seleccionaron 12 vacas en ordentildee seis animales sanos y seis con mastitis
subcliacutenica a los cuales se les aplicaron cuatro jeringas intramamarias de azitromicina 250
mg (una en cada cuarto) luego del uacuteltimo ordentildee de su lactacioacuten y se procedioacute a la toma de
muestras de sangre y leche
- Las muestras de leche fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
1 2 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
- Las muestras de sangre fueron tomadas a partir del tiempo cero en los siguientes horarios
30 minutos 1 2 3 4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 y 144 horas
V5 ldquoEstudio de penetracioacuten tisular de azitromicina en terneros Holando Argentinordquo
12 terneros sanos Holando Argentino con un peso entre 140 y 180 kilogramos de
peso recibieron una aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a una dosis de 10 mgkg
46
y posteriormente se procedioacute al sacrificio por exanguinacioacuten para la toma de muestras de
los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y testiacuteculo
Los animales se sacrificaron de a uno o dos en los siguientes tiempos
postratamiento 12 horas (un animal) 24 48 72 y 120 horas (dos animales por punto) 240 y
600 horas (un animal por punto)
- A partir del tiempo cero se tomaron las siguientes muestras de suero 30 minutos 1 2 3
4 6 8 10 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 192 204
216 228 240 252 264 276 y 600 horas
47
VI RESULTADOS
48
Los ensayos planificados se realizaron seguacuten el disentildeo planteado y sin desviacuteos
significativos que destacar
La seleccioacuten de los animales para cada ensayo resultoacute compleja y demandoacute bastante
tiempo ya que se trabajoacute en tambos que teniacutean entre 80 y 120 vacas en ordentildee y en esas
cantidades era bastante difiacutecil acotar todas las variables En este sentido se priorizaron las
variables seguacuten la importancia de estas para cumplir con los objetivos de esta tesis
Los criterios de inclusioacuten para las vacas sanas fueron
a- menos de 200000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos mamarios funcionales
d- ubres bien implantadas
Los criterios de inclusioacuten para las vacas con mastitis fueron
a- maacutes de 600000 ceacutelulas somaacuteticas
b- entre 8 y 25 litros de produccioacuten diaria de leche
c- los cuatro cuartos funcionales
d- ubres bien implantadas
Otras variables como cantidad de lactancias y periacuteodo de lactacioacuten se ajustaron de
acuerdo a la cantidad de animales disponibles luego de la primera clasificacioacuten realizada por
criterios de inclusioacuten En el caso del ensayo de secado el momento de lactacioacuten fue una
variable de inclusioacuten
Tanto las administraciones del producto como la toma de muestras de sangre y de
leche se realizaron sin dificultad y ni desviacuteos que destacar
Luego de la puesta a punto y validacioacuten del meacutetodo analiacutetico las muestras fueron
analizadas en un periacuteodo de 3 meses Los anaacutelisis se realizaron por animal esto quiere
decir que se descongelaba el total de muestras de un animal y se sembraban todas las
muestras juntas (aunque en maacutes de una placa) acotando con esto variables del
equipamiento y del anaacutelisis entre diacuteas para un animal
Todo el material de laboratorio a utilizar durante el anaacutelisis de las muestras (vidrio
patrones medios de cultivo inoacuteculos cilindros etc) fue preparado por el tesista y un
ayudante asiacute como la siembra de muestras y lectura de los resultados
Los datos recogidos de las placas por cada muestra ndashdiaacutemetro de cilindro- fueron
registrados en planillas disentildeadas a tal fin A traveacutes de la medicioacuten de la actividad inhibitoria
en los patrones se construyeron las rectas de regresioacuten lineal
49
La concentracioacuten del antimicrobiano en las muestras problema se expresoacute en microgmL
de plasma o leche y se calculoacute en funcioacuten del diaacutemetro del halo de inhibicioacuten medido
utilizando la ecuacioacuten de la recta de regresioacuten es decir
ldquoConcentracioacutenrdquo = b + a ldquodiaacutemetro del halordquo Ec9
Los datos asiacute obtenidos fueron analizados con el paquete informaacutetico WinNonlin
Professional 52 (Scientific Consulting Inc Cary NC) para obtener los paraacutemetros
farmacocineacuteticos en suero y leche y para cada unos de los ensayos realizados en esta
tesis
Finalmente a partir de los paraacutemetros cineacuteticos obtenidos se realizoacute un anaacutelisis
estadiacutestico para determinar la existencia o no de diferencias en el comportamiento
farmacocineacutetico de azitromicina entre vacas sanas y vacas con mastitis
El anaacutelisis estadiacutestico de los datos generados en este estudio farmacocineacutetico fue
realizado utilizando el Software JMP Statistical Discovery Software SAS Institute Inc Cary
NC USA Version 4 fijando en todos los casos un liacutemite de significancia de 5 (P= 005)
50
VI 1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAVENOSO
El ensayo endovenoso fue realizado en el establecimiento ldquoOjo de Aguardquo ubicado en
el partido de Tandil provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no se
observaron reacciones adversas locales o generales La aplicacioacuten se realizoacute en forma de
bolo en la vena yugular izquierda en un tiempo promedio de 10 segundos por animal
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y leche de acuerdo con el disentildeo de toma de muestras
del experimento Solo se perdieron dos muestras de sangre y una de leche las cuales
figuran como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacion del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 1 y 2 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 3 y 4 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 1 y 2 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 5 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 6 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 7 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
51
En la Tabla 8 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 9 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 10 se presentan los paraacutemetros farmacocineticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 11 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Clearance Vdss Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 12 se observa el valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
52
Tabla 1 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de
azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas en
lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3102 2620 2813 2159 2970 3157 2803 0372 0166 2709 2390 2757 1920 2600 2720 2516 0321 025 2480 2076 SM 1801 2427 2282 2213 0279 05 2379 1897 2048 1759 2138 2028 2042 0212 075 2310 1973 2028 1759 2103 1856 2005 0193
1 2193 1918 1904 1732 2048 1814 1935 0165 2 2207 1931 1801 1746 1959 1773 1903 0172 3 1807 1801 1787 1615 1911 1773 1782 0096 4 1918 1601 1567 1560 1821 1587 1676 0154 6 1511 1629 1684 1429 1794 1511 1593 0134 8 1298 1381 1443 1174 1704 1477 1413 0179 12 1078 1215 1195 1030 1167 1009 1116 0088 24 1098 1195 0961 1057 1016 0816 1024 0129 36 0699 1043 0479 0623 1030 0768 0774 0225 48 0851 0782 0472 0548 0720 0672 0674 0143 60 SM 0548 0417 0314 0713 0658 0530 0166 72 0562 0493 0369 0231 0568 0486 0451 0130 84 0438 0479 0238 0231 0568 0389 0391 0134 96 0417 0348 0417 0369 0327 0327 0368 0041 108 0396 0465 0417 0307 0300 0279 0361 0076 120 0142 0018 0038 0093 0224 0190 0118 0082
SM Sin muestra
53
Tabla 2 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0083 3391 2819 2950 2847 2813 2441 2877 0306 0166 2599 2570 2730 2650 2480 2427 2576 0111 025 2159 2282 2159 2214 2103 SM 2183 0068 05 2186 2241 1849 2035 2097 2007 2069 0140 075 2062 2186 1863 1952 2055 1973 2015 0111
1 2021 1931 1883 1849 2035 1904 1937 0075 2 1690 1897 1697 1780 1925 1794 1797 0098 3 1656 1842 1580 1615 1883 1656 1705 0126 4 1642 1794 1573 1580 1863 1663 1686 0118 6 1629 1642 1450 1525 1732 1477 1576 0109 8 1649 1491 1333 1511 1388 1466 1473 0109 12 1160 1388 1333 1339 1271 1319 1302 0079 24 0954 1243 1209 1236 1209 1243 1182 0113 36 0968 0968 0961 0919 0981 0809 0934 0065 48 0906 0947 0775 0706 0747 0679 0793 0109 60 0789 0757 0734 0665 0699 0644 0715 0055 72 0727 0699 0679 0623 0630 0610 0661 0047 84 0589 0644 0568 0617 0603 0527 0591 0041 96 0637 0527 0506 0493 0527 0410 0517 0073 108 SM 0486 0479 0479 0472 0396 0462 0037 120 0169 0197 0266 0266 0224 0348 0245 0063
SM Sin muestra
54
Tabla 3 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm A1 A2 A3 A4 A5 A6 Promedio DE Litros dia 160 180 210 165 220 185 18667 2401
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND ND 1690 ND 1690 NC 0332 ND 0346 ND ND 1853 ND 1100 1066 05 1066 1064 ND 0371 2047 ND 1137 0690 075 ND 1184 ND 0551 2783 ND 1506 1150
1 1750 1941 0208 1113 3048 0201 1377 1102 2 2063 2350 1823 1727 3650 0916 2088 0904 3 2232 2549 2016 2650 4242 1439 2521 0948 4 2756 3077 2439 2989 4171 1836 2878 0777 6 3390 3725 3939 3466 4692 2665 3646 0670 8 3331 3357 3727 3678 4110 2813 3503 0442 12 3399 3107 3862 3816 4191 3335 3618 0404 24 3095 2749 3669 3212 3916 3301 3323 0416 36 3044 2559 3169 3222 3354 3028 3063 0275 48 2723 2420 2823 3180 2783 2790 2786 0243 60 2511 2519 2621 2968 2078 2608 2551 0286 72 2503 2300 2641 2915 1976 2472 2468 0316 84 2148 2340 2141 2819 1608 2313 2228 0392 96 2215 2071 1891 2109 1751 2188 2038 0181
108 2308 SM 1862 2056 1588 2018 1966 0265 120 1826 2001 1381 1971 1078 1700 1660 0363
ND No detectado NC No calculado SM Sin muestra
55
Tabla 4 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intravenosa de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm A7 A8 A9 A10 A11 A12 Promedio DE Litros dia 150 180 170 200 200 190 18167 1941
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 0166 ND ND ND 0628 ND ND 0628 NC 0332 1165 ND ND 0777 ND ND 0971 0274 05 1823 ND 0936 1178 ND ND 1312 0458 075 2869 3209 1371 1304 ND ND 2188 0993
1 3036 3379 1571 1654 0051 0605 1716 1307 2 3768 3790 1777 1843 1266 1626 2345 1129 3 3944 3923 2114 2010 1571 2150 2619 1039 4 3851 3887 2269 2302 2117 2461 2814 0824 6 3944 3899 2703 2222 2857 2689 3052 0706 8 3888 3633 2486 2033 2948 2564 2925 0714 12 3731 3572 2320 2313 2961 2882 2963 0600 24 3759 3415 2017 2336 2987 2799 2886 0651 36 3379 3294 2000 1866 2727 2695 2660 0631 48 2897 3512 1868 1895 2500 2633 2551 0624 60 2573 2580 1834 1809 2383 2206 2231 0346 72 2601 2374 1742 1511 2065 2212 2084 0403 84 2471 2229 1359 1499 2026 1950 1922 0425 96 2045 2108 1319 1121 2130 1888 1768 0438
108 1999 2072 1388 1488 1844 1874 1777 0277 120 1600 1491 0976 1218 1642 1833 1460 0312
ND No detectado NC No calculado
56
Figura 1 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 2 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 5 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 355 287 286 243 339 367 313 048
λz (1h) 0016 0031 0020 0018 0015 0015 0019 0006
tfrac12λz (h) 427 227 351 381 454 478 386 911
Varea (mlkg) 63166 35813 68389 75618 61396 75158 63257 14679
Vss (mlkg) 56368 46311 58647 65640 57338 68584 58815 7830
CL (mlhkg) 1024 1095 1352 1376 937 1090 1146 179
AUC0-tlas (h microgml) 890 907 720 677 923 786 817 104
AUC0-infin (hmicrogml) 976 913 740 727 1067 917 890 134
MRT0-tlast (h) 427 415 398 384 418 419 410 161
MRT0-infin (h) 550 423 434 477 612 629 521 894
C0 concentracioacuten al tiempo cero λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Varea volumen de distribucioacuten Vss volumen de distribucioacuten al estado estable CLFmam aclaramiento corporal AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
58
Tabla 6 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
C0 (microgml) 442 309 319 307 318 245 323 064
λz (1h) 0014 0014 0013 0013 0013 0012 0013 0001
tfrac12λz (h) 499 486 550 556 523 570 531 336
Varea (mlkg) 64423 58856 66003 67230 65054 67613 64863 3187
Vss (mlkg) 55280 52046 60668 61242 57090 66786 58852 5180
CL (mlhkg) 995 1051 988 977 994 929 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 1117 1191 1202 1193 1160 1217 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 895 839 832 838 862 822 848 265
MRT0-tlast (h) 458 449 455 449 446 438 449 071
MRT0-infin (h) 618 620 729 731 662 813 695 761 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
Tabla 7 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00049 00042 00088 00058 00119 00059 00069 00029
tfrac12λz (h) 1402 1667 788 1186 584 1168 1133 395
Tmax (h) 120 60 60 120 60 120 90 329
Cmax (microgml) 340 373 394 382 469 334 382 049
AUC0-tlas (h microgml) 3118 2937 3158 3400 3082 3046 3123 155
AUC0-infin (hmicrogml) 6812 7750 4728 6773 3991 5910 5994 1413
FL 3505 3238 4386 5022 3339 3875 3893 695
MRT0-tlast (h) 553 557 522 550 469 558 535 348
MRT0-infin (h) 2001 2450 1125 1726 828 1686 1636 587
λz lambda pendiente fase de eliminacioacuten Tfrac12λz semivida de eliminacioacuten Tmax tiempo al que se produce la Cmax Cmax maacutexima concentracioacuten observada post administracioacuten AUC0-tlast aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 hasta la uacuteltima concentracioacuten AUC0-infin aacuterea bajo la curva de concentracioacuten en funcioacuten del tiempo desde el momento 0 al infinito FL biodisponibilidad en leche MRT0-tlast tiempo medio de residencia desde cero al ultimo tiempo detectado MRT0-infin tiempo medio de residencia desde cero al infinito
Tabla 8 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 00076 00076 00068 00062 00054 00048 00064 00012
tfrac12λz (h) 914 913 1017 1110 1284 1436 1112 211
Tmax (h) 30 30 60 240 240 120 120 986
Cmax (microgml) 394 392 270 234 299 288 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3366 3326 2087 2078 2781 2743 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5475 5289 3519 4030 5822 6540 5112 1133
F 3013 2793 1736 1742 2397 2254 23225 527
MRT0-tlast (h) 518 520 531 534 556 557 536 169
MRT0-infin (h) 1289 1261 1400 1632 1859 2133 1596 347
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 9 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
C0 (microgml) 3129 0482 3234 0644
λz (1h) 0019 0006 0013 0001
tfrac12λz (h) 386 911 5307 336
Varea (mlkg) 63256 14679 64863 3186
Vss (mlkg) 58815 7830 58852 5179
CL (mlhkg) 1146 179 989 392
AUC0-tlas (h microgml) 817 104 1180 360
AUC0-infin (hmicrogml) 890 134 848 265
MRT0-tlast (h) 410 161 449 071
MRT0-infin (h) 521 894 695 761
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 5
62
Tabla 10 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intravenosa a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0007 0003 0007 0001
tfrac12λz (h) 1133 395 1112 211
Tmax (h) 90 329 120 986
Cmax (microgml) 382 049 313 066
AUC0-tlas (h microgml) 3123 1548 2730 566
AUC0-infin (hmicrogml) 5994 1413 5112 1133
FL () 3894 694 2323 527
MRT0-tlast (h) 535 348 536 169
MRT0-infin (h) 1636 586 1596 347
63
Tabla 11 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Clearance Vdss
Vaacuterea y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 8171 plusmn 1044 1180 plusmn 360 00009
CL (mlhkg) 11457 plusmn 1786 989 plusmn 392 00468
Vss (mlkg) 5881 plusmn 783 5885 plusmn 517 04259
Varea (mlkg) 6325 plusmn 1467 6486 plusmn 318 02984
MRT0-tlast (h) 4102 plusmn 1606 4490 plusmn 070 00019 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 12 Valor obtenido de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC tfrac12λz Cmax Tmax
MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 312 plusmn 1548 2730 plusmn 566 00631
tfrac12λz (h) 1133 plusmn 395 1112 plusmn 211 04530
Cmax (microgml) 381 plusmn 048 313 plusmn 066 00563
Tmax (h) 900 plusmn 328 1200 plusmn 985 05000
MRT0-tlast (h) 5350 plusmn 348 5326 plusmn 169 04618
FL () 3894 plusmn 6935 23225 plusmn 5271 00108 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
64
VI 2 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMUSCULAR
El ensayo intramuscular fue realizado en el establecimiento ldquoEl Recreordquo ubicado en el
partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute por recuento de ceacutelulas somaacuteticas obtenidas
a partir del control lechero mensual y recontrolado a partir de muestras tomadas por el
tesista en el laboratorio de calidad de leche de la firma ldquoLa Sereniacutesimardquo partido de General
Rodriacuteguez Pcia de Buenos Aires
Luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg no
se observaron reacciones adversas generales pero algunos animales manifestaron dolor en
el sitio de inyeccioacuten durante las seis horas posteriores a la aplicacioacuten La aplicacioacuten se
realizoacute en la cara posterior del muslo ndashzona isquiotibial- y en un solo punto
Luego de la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para continuar
con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma de
muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 13 y 14 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 15 y 16 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 3 y 4 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 17 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 18 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 19 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
65
En la Tabla 20 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 21 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 22 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 23 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
En la Tabla 24 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax MRT y FL en leche de animales sanos y con mastitis Donde se
aplicoacute el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y
usando datos logotransformados
66
Tabla 13 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0660 0760 0392 0320 0616 0430 0530 0173 1 0780 0840 0532 0462 0730 0540 0647 0155 2 0970 0960 0655 0570 0840 0870 0811 0164 3 0820 1080 0655 0784 0720 0710 0795 0151 4 0640 0990 0840 0756 0690 0580 0749 0149 6 0510 0850 0980 0680 0560 0490 0678 0199 8 0460 0740 0890 0610 0450 0410 0593 0191 10 0430 0690 0780 0530 0340 0390 0527 0175 12 0410 0600 0700 0500 0320 0290 0470 0161 24 0380 0520 0532 0440 0270 0220 0394 0129 36 0320 0450 0500 0370 0230 0200 0345 0119 48 0270 0420 0430 0308 0210 0170 0301 0107 60 0250 0310 0360 0252 0160 0150 0247 0082 72 0220 0280 0310 0220 0120 0130 0213 0077 84 0180 0160 0224 0180 0100 0120 0161 0045 96 0150 0120 0140 0120 0090 0100 0120 0023 108 0090 0090 0084 0080 0080 0080 0084 0005 120 0060 0050 0056 0060 0060 0050 0056 0005
67
Tabla 14 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0350 0490 0430 0330 0320 0410 0388 0066 1 0550 0560 0540 0660 0480 0580 0562 0059 2 0650 0690 0630 0670 0620 0660 0653 0026 3 0710 0530 0590 0590 0550 0525 0583 0069 4 0660 0470 0530 0560 0480 0480 0530 0073 6 0570 0425 0480 0450 0410 0370 0451 0069 8 0530 0420 0410 0390 0370 0320 0407 0070 10 0480 0370 0380 0330 0310 0270 0357 0073 12 0450 0340 0320 0300 0280 0250 0323 0069 24 0330 0280 0280 0270 0230 0190 0263 0048 36 0285 0230 0250 0190 0190 0165 0218 0045 48 0200 0190 0210 0170 0170 0140 0180 0025 60 0150 0150 0180 0150 0150 0125 0151 0017 72 0120 0120 0140 0130 0130 0110 0125 0010 84 0100 0100 0110 0110 0110 0100 0105 0005 96 0090 0090 0090 0090 0100 0100 0093 0005 108 0070 0060 0070 0070 0090 0080 0073 0010 120 0060 0050 0050 0060 0060 0060 0057 0005
68
Tabla 15 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas sanas y en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 12 95 13 85 15 125 117 238
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND ND NC NC 2 1000 0740 ND ND ND ND 0290 0457 3 1290 1510 ND ND 1090 ND 0648 0723 4 1460 1830 0790 0520 1450 0420 1078 0579 6 1850 2300 1340 0720 2220 1360 1632 0605 8 2040 3710 1830 2980 5970 2140 3112 1567 10 2140 4940 1940 3280 7890 2610 3800 2277 12 2190 4880 2100 3380 6210 3000 3627 1618 24 2140 3780 2330 3260 5030 4400 3490 1141 36 2100 3300 2220 3170 4550 5370 3452 1291 48 2020 3180 2120 2900 4280 3820 3053 0902 60 1870 2850 2070 2810 3820 2810 2705 0691 72 1730 2630 1980 2580 2990 2380 2382 0460 84 1700 2340 1900 2440 2680 2240 2217 0360 96 1580 2130 1700 2280 2450 2120 2043 0337 108 1420 2020 1580 2070 2190 1980 1877 0304 120 1380 1890 1430 1850 2020 1790 1727 0261
ND No detectado NC No calculado
69
Tabla 16 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramuscular de 10 mgkg en vacas con mastitis y en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 16 105 10 13 115 14 1250 228
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND ND ND ND ND NC NC 1 ND ND ND ND ND 0810 0135 0331 2 0440 1000 0430 ND 0760 1830 0743 0631 3 0640 1730 0630 1530 1100 2000 1272 0574 4 0720 1900 0840 1680 1350 2320 1468 0621 6 0970 2290 1120 2580 1580 2820 1893 0779 8 2430 2360 1950 2810 1750 3620 2487 0669 10 2840 2880 2450 2910 2430 4140 2942 0625 12 3580 3190 2830 2840 3550 4150 3357 0508 24 3500 2980 3490 2790 3310 4150 3370 0476 36 3360 2840 2680 2650 2850 3860 3040 0476 48 3260 2690 2560 2590 2570 3640 2885 0456 60 3160 2540 2450 2510 2400 3370 2738 0416 72 3050 2430 2300 2220 2290 3120 2568 0407 84 2900 2210 2200 2010 2160 3040 2420 0434 96 2780 2050 1880 1950 1980 2940 2263 0468 108 2640 1870 1720 1800 1790 2760 2097 0471 120 2430 1720 1650 1720 1560 2680 1960 0471
ND No detectado NC No calculado
70
Figura 3 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Figura 4 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg a seis vacas sanas y con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 17 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0016 0022 0022 0019 0016 0014 0018 0004
tfrac12λz (h) 42214 31017 31283 35736 44581 49806 39106 7643
Tmax (h) 2000 3000 6000 3000 2000 2000 3000 1549
Cmax (microgml) 0970 1080 0980 0780 0840 0870 0920 0110
AUC0-tlas (h microgml) 32015 41795 44573 34135 23871 22020 33068 9137
AUC0-infin (hmicrogml) 35669 44032 47280 37228 27730 25613 36259 8594
F 3597 4610 6191 5042 2586 2801 41375 13978
MRT0-tlast (h) 42257 38319 39991 40450 38734 40704 40076 1428
MRT0-infin (h) 56461 44743 47159 51344 58994 61906 53434 6799
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
72
Tabla 18 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 0018 0018 0017 0015 0012 0011 0015 0003
tfrac12λz (h) 38291 39352 40713 47131 57463 60888 47306 9754
Tmax (h) 3000 2000 2000 2000 2000 2000 2167 0408
Cmax (microgml) 0710 0690 0630 0670 0620 0660 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 25748 22340 23675 21720 20950 18695 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 29062 25179 26612 25800 25924 23966 26090 1706
F 2305 1876 1970 1821 1806 1536 18856 2511
MRT0-tlast (h) 37054 39099 40336 40380 42924 42623 40403 2200
MRT0-infin (h) 52815 54621 55610 63722 73619 78959 63224 10920
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 19 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0005 0008 0005 0006 0010 0012 0008 0003
tfrac12λz (h) 151731 85175 142578 126436 66388 58803 105185 40183
Tmax (h) 12000 10000 24000 12000 10000 36000 17333 10558
Cmax (microgml) 2190 4940 2330 3380 7890 5370 4350 2173
AUC0-tlas (h microgml) 214870 339155 225485 307620 426895 346030 310009 80013
AUC0-infin (hmicrogml) 516953 571402 519632 645075 620367 497883 561885 60550
F 6711 8115 5059 9012 178834 15714 1041573 516760
R CmaxLCmaxS 225 457 238 433 939 617 4848 2667
MRT0-tlast (h) 56742 53292 58844 57671 51168 54270 55331 2913
MRT0-infin (h) 221622 130351 209901 185699 102504 100192 158378 54210
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
74
Tabla 20 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedios plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00034 00056 0007 0005 00071 00044 0005 0001
tfrac12λz (h) 20197 12381 9878 13726 9738 15650 135954 39495
Tmax (h) 12 12 24 10 12 12 13667 5125
Cmax (microgml) 358 319 349 291 355 415 3478 0418
AUC0-tlas (h microgml) 35008 28861 27443 27309 28181 39676 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 1058153 59583 50958 61371 50098 100186 71335 24999
F 135964 129189 115915 125732 134515 212228 1422572 350240
R CmaxLCmaxS 504 462 554 434 573 629 5260 0730
MRT0-tlast (h) 5987 5621 5658 5637 5563 5692 56935 1501
MRT0-infin (h) 29509 18120 15161 20160 14525 23138 20102 5606
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 21 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUC sueroIM AUC sueroIV) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0018 0004 0015 0003
tfrac12λz (h) 39106 7643 47306 9754
Tmax (h) 3000 1549 2167 0408
Cmax (microgml) 0920 0110 0663 0034
AUC0-tlas (h microgml) 33068 9137 22188 2402
AUC0-infin (hmicrogml) 36259 8594 26090 1706
F () 41375 13978 18860 2511
MRT0-tlast (h) 40076 1428 40403 2200
MRT0-infin (h) 53434 6799 63224 10920
76
Tabla 22 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedios obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas y seis con mastitis luego de su administracioacuten intramuscular a razoacuten de 10 mgkg
(AUClecheAUCsuero) 100 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0008 0003 0005 0001
tfrac12λz (h) 105185 40183 135954 39495
Tmax (h) 17333 10558 13667 5125
Cmax (microgml) 4350 2173 3478 0418
R Cmax -leche Cmax -suero 4848 2667 5260 0730
AUC0-tlas (h microgml) 310009 80013 310799 51011
AUC0-infin (hmicrogml) 561885 60550 713357 249994
FL () 1041573 516760 1422572 350240
MRT0-tlast (h) 55331 2913 56935 1501
MRT0-infin (h) 158378 54210 201027 56062
77
Tabla 23 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT y F en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias
de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 3307 plusmn 914 2219 plusmn 240 00054
tfrac12λz (h) 3911 plusmn 764 4731 plusmn 975 00114
Cmax (microgml) 092 plusmn -011 066 plusmn 003 00004
Tmax (h) 300 plusmn 155 217 plusmn 041 01431
MRT0-tlast (h) 4007 plusmn 142 4040 plusmn 22 04123
F () 4138 plusmn 1396 1886 plusmn 251 00012 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 24 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
MRT FL y R CmaxLCmaxS en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el
test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 310 plusmn 80 310 plusmn 51 04391
tfrac12λz (h) 105 plusmn 40 135 plusmn 39 00837
Cmax (microgml) 435 plusmn 217 347 plusmn 041 02825
Tmax (h) 1733 plusmn 1056 137 plusmn 513 02369
MRT0-tlast (h) 5533 plusmn 291 5693 plusmn 15 00993
FL () 104157 plusmn 51676 142257 plusmn 35024 00289
RCmaxLCmaxS 485 plusmn 267 526 plusmn 073 01982 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
78
VI 3 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO CON VACAS EN LACTANCIA
El ensayo intramamario en vacas en lactancia fue realizado en el establecimiento ldquoEl
Recreordquo ubicado en el partido de Brandsen provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea que se
efectuoacute en los ensayos intravenoso e intramuscular
La aplicacioacuten del antimicrobiano se realizoacute en cada cuarto mamario durante tres
ordentildees consecutivos y sin ninguna dificultad Luego de la administracioacuten intramamaria de
azitromicina a la dosis de 125 mg por cuarto mamario no se observaron reacciones
adversas locales o generales
Posteriormente a la dosificacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento Solo se perdieron dos muestras de leche las cuales figuran
como SM (sin muestra) en las tablas de concentraciones correspondientes
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestra fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 36 horas el trabajo fue realizado en cada ordentildee y hasta la
finalizacioacuten del experimento por el tesista y un colaborador
En las Tablas 25 y 26 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 27 y 28 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 5 y 6 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 29 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 30 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 31 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
79
En la Tabla 32 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 33 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 34 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 35 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 36 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
80
Tabla 25 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0240 0120 0180 0150 0140 ND 0138 0080 I 1hs 1 0170 0150 0200 0130 0160 ND 0135 0070 I 2hs 2 0130 0160 0140 0120 0130 0100 0130 0020 I 3hs 3 0100 0120 0160 0100 0130 0100 0118 0024 I 4hs 4 0100 ND 0140 0100 0110 0100 0092 0048 I 6hs 6 ND ND 0100 ND 0110 0100 0052 0057 I 8hs 8 ND ND 0100 ND 0100 ND 0033 0052
II 05hs 105 0210 0200 0250 0190 0230 0220 0217 0022 II 1hs 11 0180 0210 0220 0195 0220 0120 0191 0038 II 2hs 12 0140 0150 0240 0150 0180 0090 0158 0050 II 3hs 13 0110 0130 0220 0140 0140 0090 0138 0044 II 4hs 14 0105 0120 0180 0100 0120 0080 0118 0034 II 6hs 16 0100 0100 0140 0100 0130 0080 0108 0022 II 10hs 20 ND 0100 0100 0100 0110 0080 0082 0041 II 12hs 22 ND ND 0100 ND ND 0080 0030 0047 III 05hs 225 0160 0270 0220 2000 0200 0400 0542 0719 III 1hs 23 0170 0200 0240 0130 0210 0470 0237 0120 III 2hs 24 0150 0170 0200 0140 0200 0200 0177 0027 III 3hs 25 0130 0140 0170 0120 0150 0160 0145 0019 III 4hs 26 0120 0110 0180 0100 0170 0130 0135 0033 III 6hs 28 0120 0110 0170 0090 0170 0180 0140 0038 III 8hs 30 ND 0100 0150 0060 0150 0140 0120 0039 III 10hs 32 ND ND 0150 ND 0130 0120 0133 0015
24hs 46 ND ND 0110 ND ND ND 0110 NC 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
81
Tabla 26 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 05hs 05 0180 0140 0170 0140 0180 0190 0167 0022 I 1hs 1 0140 0150 0200 0160 0200 0160 0168 0026 I 2hs 2 0110 0110 0150 0120 0190 0140 0137 0031 I 3hs 3 0090 0080 0110 0100 0150 0140 0112 0028 I 4hs 4 0090 0080 0110 0080 0120 0090 0095 0016 I 6hs 6 0090 ND 0080 0080 0120 0080 0075 0040 I 8hs 8 0080 ND 0070 0070 0100 0080 0067 0034
II 05hs 105 0110 0090 0150 0160 0180 0140 0138 0033 II 1hs 11 0140 0100 0180 0180 0180 0140 0153 0033 II 2hs 12 0090 0090 0200 0110 0210 0110 0135 0055 II 3hs 13 0100 0080 0130 0100 0140 0120 0112 0022 II 4hs 14 0090 ND 0080 0080 0110 0080 0073 0038 II 6hs 16 0100 ND 0070 0070 0120 0100 0077 0042 II 10hs 20 0090 ND 0140 0070 0120 0090 0085 0048 II 12hs 22 0080 ND 0080 ND 0080 0080 0053 0041 III 05hs 225 0080 0120 0120 0140 0140 0070 0112 0030 III 1hs 23 0120 0100 0110 0140 0140 0160 0128 0022 III 2hs 24 0100 0100 0110 0120 0120 0150 0117 0019 III 3hs 25 0090 0090 0100 0090 0100 0120 0098 0012 III 4hs 26 0070 0090 0090 0100 0090 0100 0090 0011 III 6hs 28 0070 0090 0080 0090 0090 0080 0083 0008 III 8hs 30 0060 0080 0070 0090 0080 0080 0077 0010 III 10hs 32 0050 0070 ND 0070 ND 0050 0060 0012
24hs 46 0050 ND ND 0070 ND 0050 0057 0012 36hs 58 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
82
Tabla 27 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas sanas en lactacioacuten
Animal Nordm 1 2 3 4 5 6 Promedio DE Litros diacutea 105 8 82 104 11 13 1018 1868
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 10640 9770 10280 10640 11400 6370 9850 1786 I 2hs 2 5370 7430 7290 6930 9770 5370 7027 1628 I 4hs 4 3100 4600 4300 4300 6150 4520 4495 0977 I 6hs 6 3100 3780 4300 3380 4920 3740 3870 0655 I 8hs 8 2280 2660 3270 3100 4110 3150 3095 0619
I 10hs 10 2280 2160 3210 3000 3910 2840 2900 0642 II 1hs 11 14000 16600 27290 17180 14720 10640 16738 5662 II 2hs 12 8510 9770 13300 13770 7300 6930 9930 2969 II 4hs 14 4840 5460 6100 10840 5100 5140 6247 2292 II 6hs 16 4360 4520 5940 9290 4520 4840 5578 1907 II 10hs 20 3500 4680 4630 6150 3680 3770 4402 0992 II 12hs 22 3040 4360 4610 5550 3000 3560 4020 1002 III 1hs 23 20040 16330 16330 21880 13300 10640 16420 4149 III 2hs 24 13060 13060 11120 18400 10640 6930 12202 3776 III 4hs 26 10470 9770 11110 15520 7060 5370 9883 3521 III 6hs 28 8510 6590 5560 8970 5940 3500 6512 2017 III 8hs 30 7180 4210 5190 9770 4680 2520 5592 2542 III 10hs 32 6270 4000 3150 8810 3870 2480 4763 2360
24hs 46 2400 2400 2160 2890 3100 2090 2507 0404 36hs 58 2040 2770 2090 2090 2610 1890 2248 0354 48hs 70 1490 1730 SM 1590 2090 2400 1860 0378 60hs 82 1320 1620 2240 1390 1920 2090 1763 0378 72hs 94 1490 1320 1760 1540 1360 1950 1570 0243 84hs 106 1360 1150 1270 1210 1210 1210 1235 0072 96hs 118 1220 1040 1090 1110 0750 0970 1030 0160
108hs 130 0750 0690 1040 0850 0820 0890 0840 0121 120hs 142 1110 0630 0940 0670 0630 0910 0815 0201 144hs 166 0890 0630 0800 0630 0630 1000 0763 0159
SM Sin muestra
83
Tabla 28 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria de 125 mg por cuarto mamario durante tres ordentildees consecutivos en vacas con mastitis en lactacioacuten
Animal Nordm 7 8 9 10 11 12 Promedio DE Litros diacutea 82 84 12 14 145 125 1160 2718
Muestra Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml I 1hs 1 44360 19500 109650 48500 34500 90900 57902 34816 I 2hs 2 19450 10720 42660 22000 18120 48450 26900 15041 I 4hs 4 3560 7240 9120 12000 14320 23220 11577 6817 I 6hs 6 2200 4680 6610 4500 7560 18140 7282 5635 I 8hs 8 8450 3390 5370 5000 4450 9990 6108 2548
I 10hs 10 9930 3240 SM 5000 4040 7330 5908 2722 II 1hs 11 127050 22390 81280 94000 29900 94330 74825 40706 II 2hs 12 52480 12300 57540 55000 19500 67800 44103 22573 II 4hs 14 48970 7410 26920 48700 15150 37550 30783 17339 II 6hs 16 36560 5890 16980 42350 9090 19890 21793 14709 II 10hs 20 21880 3800 11750 33500 7560 15340 15638 10757 II 12hs 22 18860 3720 10960 28440 4340 13140 13243 9356 III 1hs 23 88510 14450 123030 124500 38600 101340 81738 45502 III 2hs 24 132430 34670 77620 98330 35050 88780 77813 37985 III 4hs 26 53830 12300 35480 70900 29890 64450 44475 22422 III 6hs 28 40090 7080 30900 68330 19000 38500 33983 20953 III 8hs 30 34510 4900 16220 40400 22890 22400 23553 12707 III 10hs 32 22650 7940 13180 26870 17500 13450 16932 6911
24hs 46 7830 3020 9330 14100 9760 10540 9097 3637 36hs 58 4900 2450 6760 8760 5800 7230 5983 2171 48hs 70 2550 3390 4900 3570 4930 5400 4123 1114 60hs 82 2770 3160 3720 2580 3340 4300 3312 0632 72hs 94 3690 2570 3240 2240 2780 3990 3085 0675 84hs 106 2500 2240 2820 2330 2560 3540 2665 0473 96hs 118 1950 1620 1740 2090 1600 2860 1977 0473
108hs 130 1610 1030 1700 1880 1120 1570 1485 0336 120hs 142 1540 1550 1620 1200 1140 1460 1418 0200 144hs 166 0980 1620 1410 0800 0890 0950 1108 0328
SM Sin muestra
84
Figura 5 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180Tiempo (hr)
Mastitis
Mastitis Error
sana
sana Error
Figura 6 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos a seis vacas sanas y seis con mastitis en periacuteodo de lactacioacuten
Tabla 29 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 0071 0121 0028 0132 0044 0074 0078 0041
tfrac12λz (h) 9770 5722 24461 5234 15942 9425 11759 7311
Tmax (h) 23000 22500 23000 22500 23000 22500 22750 0274
Cmax (microgml) 0170 0270 0240 0200 0210 0290 0230 0045
AUC0-tlas (h microgml) 0788 1080 3565 0848 1633 1660 1595 1036
AUC0-infin (hmicrogml) 2479 1906 7447 1301 4622 3292 3508 2250
MRT0-tlast (h) 2918 3479 10419 3478 4789 4526 4935 2778
MRT0-infin (h) 14638 9014 35894 7684 23036 13980 17374 10563
F () 0881 1190 4951 1252 1772 2111 2031 1502 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
86
Tabla 30 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 00337 00436 00706 00247 00774 00499 0050 0021
tfrac12λz (h) 205764 15893 98114 280833 89554 138839 16201 7199
Tmax (h) 23 225 225 225 225 23 22667 0258
Cmax (microgml) 012 012 012 014 014 016 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1455 087 07375 1945 081 1665 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 29393 2475 17283 47811 18436 26665 2739 1105
MRT0-tlast (h) 104467 47989 36508 108638 36296 96321 7170 3492
MRT0-infin (h) 322814 230408 142591 426895 133232 225517 24691 11197
F () 1301 0730 0616 1632 0701 1375 1062 0431
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
87
Tabla 31 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 1 2 3 4 5 6
λz (1h) 001 001 001 001 001 002 001 000
tfrac12λz (h) 6883 6001 4839 7860 5671 4550 5967 1248
AUC0-tlas (h microgml) 45147 43421 41173 36377 53245 41780 43524 5600
AUC0-infin (hmicrogml) 53091 51127 45572 47716 58400 45915 50303 4947
MRT0-tlast (h) 4866 4936 4643 5600 4185 4668 4816 465
MRT0-infin (h) 8108 7999 6471 10908 6003 6333 7637 1832
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
88
Tabla 32 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Anaacutelisis realizado a partir de la uacuteltima aplicacioacuten intramamaria
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 7 8 9 10 11 12
λz (1h) 001 002 002 002 002 001 002 000
tfrac12λz (h) 4735 3143 3543 3954 3928 8806 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 178140 109753 187326 174081 207169 64176 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 184835 113788 192182 182125 211702 84758 161565 50194
MRT0-tlast (h) 3313 4153 3394 3267 3288 5115 3755 747
MRT0-infin (h) 4042 4755 3857 4108 3694 10989 5241 2839
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 33 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 0078 0041 0050 0021
tfrac12λz (h) 11759 7311 16201 7199
Tmax (h) 22750 0274 22667 0258
Cmax (microgml) 0230 0045 0133 0016
AUC0-tlas (h microgml) 1595 1036 1247 0509
AUC0-infin (hmicrogml) 3508 2250 2739 1105
MRT0-tlast (h) 4935 2778 7170 3492
MRT0-infin (h) 17374 10563 24691 11197
F () 2031 1502 1062 0431
90
Tabla 34 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto durante tres ordentildees consecutivos Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 002 000
tfrac12λz (h) 5967 1248 4685 2087
AUC0-tlas (h microgml) 43524 5600 153441 54677
AUC0-infin (hmicrogml) 50303 4947 161565 50194
MRT0-tlast (h) 4816 465 3755 747
MRT0-infin (h) 7637 1832 5241 2839
91
Tabla 35 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de diferencias de
las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 159 plusmn 103 125 plusmn 051 03246
tfrac12λz (h) 1176 plusmn 731 162 plusmn 720 01874
Cmax (microgml) 023 plusmn 004 013 plusmn 002 00005
Tmax (h) 2275 plusmn 027 227 plusmn 026 03054
MRT0-tlast (h) 493 plusmn 278 717 plusmn 349 01840 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 36 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 43524 plusmn 5600 153441 plusmn 54677 00006
tfrac12λz (h) 5967 plusmn 1248 4685 plusmn 2087 01050
MRT0-tlast (h) 4816 plusmn 465 3755 plusmn 747 00153 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
92
VI 4 RESULTADOS DEL ENSAYO INTRAMAMARIO AL MOMENTO DE SECADO
El ensayo intramamario al momento de secado fue realizado en el establecimiento
ldquoEl Placerrdquo ubicado en Bavio partido de La Plata provincia de Buenos Aires
La seleccioacuten de los animales se realizoacute siguiendo la misma metodologiacutea explicada en
los ensayos anteriores La aplicacioacuten de azitromicina se realizoacute en cada cuarto luego del
uacuteltimo ordentildee de la lactacioacuten momento conocido como secado La dosificacioacuten se realizoacute
sin ninguna dificultad y luego de la administracioacuten intramamaria de azitromicina a la dosis de
250 mg por cuarto no se observaron reacciones adversas locales o generales
Posteriormente a la aplicacioacuten cada animal fue alojado en un brete del tambo para
continuar con la toma de muestras de sangre y de leche de acuerdo con el disentildeo de toma
de muestras del experimento No se perdioacute ninguna de las muestras de sangre o leche
planificadas en el disentildeo del ensayo
La aplicacioacuten fue realizada por el tesista y dos operarios para el manejo de manga y
sujecioacuten de animales La toma de muestras fue realizada por dos equipos de dos personas
cada uno y una quinta persona para indicar la secuencia de muestreo y realizar el registro
de datos A partir de las 8 horas pos-tratamiento el trabajo se continuoacute en la manga y los
animales fueron alojados en un piquete contiguo para las siguientes obtenciones de
muestras
En las Tablas 37 y 38 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en suero de animales sanos y con mastitis respectivamente
En las Tablas 39 y 40 se presentan las concentraciones individuales y promedio
alcanzadas en leche de animales sanos y con mastitis respectivamente
Las Figuras 7 y 8 muestran las curvas promedio de las concentraciones de
azitromicina en suero y leche de animales sanos y con mastitis
En la Tabla 41 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 42 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en suero de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 43 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales sanos luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 44 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio
obtenidos en leche de animales con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
93
En la Tabla 45 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
suero de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 46 se presentan los paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos en
leche de animales sanos y con mastitis luego del anaacutelisis no-compartimental
En la Tabla 47 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute
el test de diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando
datos logotransformados
En la Tabla 48 se ven los valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de
AUC Tfrac12λ y MRT en leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplicoacute el test de
diferencias de las medias -test de t- con un liacutemite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
94
Tabla 37 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 0200 0150 0195 0140 0080 0084 0142 0052 1 0190 0160 0210 0190 0140 0370 0210 0082 2 0170 0120 0240 0120 0180 0295 0188 0069 3 0160 0120 0220 0130 0160 0220 0168 0043 4 0150 0110 0225 0110 0140 0190 0154 0046 6 0130 0110 0230 0100 0120 0130 0137 0047 8 0100 0100 0190 0090 0110 0120 0118 0037 10 0100 0090 0130 0080 0090 0100 0098 0017 12 0090 0080 0120 0070 0080 0090 0088 0017 24 0080 0080 0110 0060 0060 0080 0078 0018 36 0070 0060 0100 0060 ND 0060 0070 0017 48 ND ND 0070 ND ND ND 0070 NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
95
Tabla 38 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 05 ND ND 0050 0110 0230 0590 0163 0226 1 0050 0120 0080 0100 0190 0310 0142 0095 2 0060 0130 0070 0090 0140 0180 0112 0046 3 0050 0120 0110 0080 0120 0180 0110 0044 4 0070 0120 0080 0070 0100 0150 0098 0032 6 0110 0100 0060 0060 0090 0140 0093 0031 8 0060 0100 0055 0060 0090 0110 0079 0024 10 0050 0090 0050 0050 0080 0090 0068 0020 12 0050 0050 0050 0050 0070 0080 0058 0013 24 ND ND ND ND 0050 0060 0055 0007 36 ND ND ND ND ND ND NC NC 48 ND ND ND ND ND ND NC NC 60 ND ND ND ND ND ND NC NC 72 ND ND ND ND ND ND NC NC 84 ND ND ND ND ND ND NC NC 96 ND ND ND ND ND ND NC NC 108 ND ND ND ND ND ND NC NC 120 ND ND ND ND ND ND NC NC 132 ND ND ND ND ND ND NC NC 144 ND ND ND ND ND ND NC NC
ND No detectado NC No calculado
96
Tabla 39 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas sanas de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 861 712 587 631 626 635 Promedio DE Litros diacutea 8 214 255 116 143 167 1625 6415
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 72940 38020 58200 27160 48970 33110 46400 17130 2 52000 34670 43700 13390 20410 13490 29610 16328 4 32580 26060 43700 10280 19050 14450 24353 12403 6 13210 14620 17000 6430 16210 9120 12765 4168 8 13330 13650 12900 5750 12580 7240 10908 3470 10 13330 9860 12700 6380 10000 7760 10005 2703 12 13000 9330 10500 5440 8510 6600 8897 2719 24 6440 5700 7100 3870 6450 5890 5908 1113 36 7530 5160 5400 2800 5750 5500 5357 1515 48 6380 3930 3400 2610 4460 4150 4155 1269 60 5610 3390 3000 2370 3310 3780 3577 1102 72 4970 3480 2800 2250 3300 3700 3417 0922 84 4800 3250 2500 2270 3140 3260 3203 0886 96 4480 3140 3400 2180 3280 3320 3300 0733 108 3700 2720 2100 1490 2300 2700 2502 0741 120 3330 2610 2600 1960 1900 2780 2530 0536 132 3220 2790 2600 1720 1900 2700 2488 0569 144 3130 2820 2500 1800 1700 2500 2408 0562
97
Tabla 40 Concentraciones individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina en leche luego de la administracioacuten intramamaria en vacas con mastitis de 250 mg por cuarto al momento de secado
Animal Nordm 241 334 676 655 777 276 Promedio DE Litros diacutea 123 174 22 195 157 182 1752 3317
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml 1 28180 9770 66060 12020 47860 115340 46538 39992 2 23980 9540 25700 11740 45710 69180 30975 22729 4 13800 6600 19490 10000 19270 37150 17718 10786 6 11480 6910 14790 6450 14790 19500 12320 5063 8 8510 5010 14450 6760 15670 17300 11283 5157 10 7580 4780 9770 5370 12680 14320 9083 3883 12 9770 4670 9120 5370 6170 15240 8390 3931 24 7240 4360 7580 5240 5610 11040 6845 2390 36 5010 3800 6020 3980 4600 5260 4778 0831 48 4360 3160 4300 4000 3720 4740 4047 0555 60 3710 3540 3600 3350 3470 3930 3600 0202 72 3650 3450 3700 3400 3400 3800 3567 0172 84 3400 3200 3400 3330 3160 3330 3303 0101 96 2900 3110 3150 3140 2860 3050 3035 0126 108 2700 3000 3000 2900 2740 2870 2868 0127 120 2300 2650 2690 2450 2620 2380 2515 0160 132 2150 2430 2450 2150 2580 2060 2303 0210 144 2000 2110 2150 2040 2540 2050 2148 0199
98
Figura 7 Concentraciones promedio de azitromicina en suero en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Figura 8 Concentraciones promedio de azitromicina en leche en funcioacuten del tiempo luego de su administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto a seis vacas sanas y seis con mastitis en el momento de secado
Tabla 41 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 004 002 002 002 002 002 001
tfrac12λz (h) 4875 1875 3258 3009 4562 3260 3473 1096
Tmax (h) 200 200 100 100 100 050 125 061
Cmax (microgml) 024 018 019 037 016 020 022 008
AUC0-tlas (h microgml) 591 225 273 375 307 346 353 128
AUC0-infin (hmicrogml) 1084 387 555 636 702 676 673 231
MRT0-tlast (h) 1977 1005 1540 1394 1601 1538 1509 315
MRT0-infin (h) 6454 2724 4973 4076 6426 4836 4915 1426
F () 664 248 379 554 333 440 436 152
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
100
Tabla 42 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 013 005 009 007 010 004 008 003
tfrac12λz (h) 544 1307 747 1032 664 1812 1018 477
Tmax (h) 600 050 200 050 300 050 208 218
Cmax (microgml) 011 059 013 011 011 023 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 074 269 115 079 076 197 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 113 382 168 154 124 328 212 114
MRT0-tlast (h) 625 863 579 533 555 967 687 182
MRT0-infin (h) 1098 1876 1122 1577 1174 2582 1571 583
F () 066 226 096 066 065 162 114 067
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 43 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas sanas luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 587 626 631 635 712 861
λz (1h) 001 001 001 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 13137 6613 11604 10920 13839 8446 10760 2772
AUC0-tlas (h microgml) 84181 75326 46143 68568 75552 106230 76000 19637
AUC0-infin (hmicrogml) 129666 91544 76278 107952 131855 144369 113611 26266
MRT0-tlast (h) 3813 4096 4758 5040 4545 4399 4442 444
MRT0-infin (h) 14175 7612 15181 14202 17279 10260 13118 3531
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
102
Tabla 44 Paraacutemetros farmacocineacuteticos individuales y promedio plusmn desviacuteo estaacutendar obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche obtenidas de seis vacas con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado
Paraacutemetros Animales (ID)
Promedio DE 241 276 334 655 676 777
λz (1h) 001 001 000 001 001 001 001 000
tfrac12λz (h) 8234 6109 14341 10359 8931 11477 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 69288 112282 51343 55005 86193 74185 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 93046 130350 94997 85494 113896 116242 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4727 3233 6072 5669 4093 4422 4703 1041
MRT0-infin (h) 10230 6003 19406 14112 9734 14023 12251 4632
Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Tabla 45 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en suero de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 002 001 008 003
tfrac12λz (h) 3473 1096 1018 477
Tmax (h) 125 061 208 218
Cmax (microgml) 022 008 021 019
AUC0-tlas (h microgml) 353 128 135 081
AUC0-infin (hmicrogml) 673 231 212 114
MRT0-tlast (h) 1509 315 687 182
MRT0-infin (h) 4915 1426 1571 583
F () 436 152 114 067
104
Tabla 46 Paraacutemetros farmacocineacuteticos promedio obtenidos por anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental sobre concentraciones de azitromicina en leche de vacas sanas y con mastitis luego de la administracioacuten intramamaria de 250 mg por cuarto al momento de secado Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Paraacutemetros Promedio Sanas DE Promedio
Mastitis DE
λz (1h) 001 000 001 000
tfrac12λz (h) 10760 2772 9909 2846
AUC0-tlas (h microgml) 76000 19637 74716 22394
AUC0-infin (hmicrogml) 113611 26266 105671 17140
MRT0-tlast (h) 4442 444 4703 1041
MRT0-infin (h) 13118 3531 12251 4632
105
Tabla 47 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ Cmax Tmax
y MRT en suero de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de
las medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos
logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 353 plusmn 128 135 plusmn 081 00120
tfrac12λz (h) 3473 plusmn 1096 1018 plusmn 477 00040
Cmax (microgml) 022 plusmn 008 021 plusmn 019 02583
Tmax (h) 125 plusmn 061 208 plusmn 218 03792
MRT0-tlast (h) 1509 plusmn 315 687 plusmn 182 00022 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
Diferencia significativa
Diferencia altamente significativa
Diferencia muy altamente significativa
Tabla 48 Valores obtenidos de P luego del anaacutelisis estadiacutestico de AUC Tfrac12λ y MRT en
leche de animales sanos y con mastitis Donde se aplico el test de diferencias de las medias
-test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
Paraacutemetro Sanas Mastitis Valor de ldquoprdquo AUC0-tlas (h microgml) 760 plusmn 196 747 plusmn 223 04259
tfrac12λz (h) 1076 plusmn 2772 9909 plusmn 2846 02689
MRT0-tlast (h) 4442 plusmn 444 4703 plusmn 1041 03122 Todos los siacutembolos fueron explicados al pie de la Tabla 7
106
VI5 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten tisular fue realizado como un estudio anexo a los objetivos
principales de esta tesis y es solo de caraacutecter descriptivo No se realizoacute ninguacuten anaacutelisis de
deplecioacuten o disposicioacuten tisular ya que para hacer ese tipo de estudios se hubiera requerido
un esquema de muestreo maacutes amplio y que incluyera una mayor cantidad de tiempos de
muestreo o un esquema de muestreo especifico para cada tejido Esto hubiese requerido el
sacrificio de una mayor cantidad de animales los cuales estaban fuera de nuestro alcance y
de los objetivos centrales de esta tesis
La cantidad de animales disponible para este ensayo fue 12 de los cuales uno fue
utilizado como blanco para la preparacioacuten de patrones con los 11 animales restantes se
diagramoacute un muestreo en base a resultados preliminares en suero obtenidos del ensayo
intramuscular en vacas y de datos bibliograacuteficos reportados por otros autores en humanos
(32-85-87-91-93) Los tiempos de muestreo fueron 12 24 48 72 120 240 y 600 horas
sacrificando un animal en los tiempos mas proacuteximos y distantes del ensayo (12 240 y 600
horas) y de a 2 animales en los tiempos centrales del ensayo (24 48 72 y 120 horas)
Todos los animales fueron inyectados en el mismo momento y en la regioacuten de los
muacutesculos isquiotibiales derechos luego de realizada la inyeccioacuten se tomaron muestras de
sangre para la determinacioacuten de azitromicina en suero con el mismo esquema utilizado para
el estudio intramuscular en vacas hasta las 276 horas (tabla 52) y luego una muestra final
del animal sacrificado a las 600 horas
Los animales fueron sacrificados por noqueo y exanguinacioacuten yugular de cada tejido
se tomoacute una muestra de 50 gramos de la siguiente manera
Muacutesculo longisimus dorsi y serrato cervical
Hiacutegado abarcando al menos dos loacutebulos y retirando la capsula de Glisson
Rintildeoacuten corte longitudinal de ambos rintildeones
Grasa perirenal y omental
Pulmoacuten loacutebulos dorsales y ventrales de uno de los pulmones
Cerebro corte longitudinal de uno de los hemisferios
Testiacuteculo ambos testiacuteculos completos
Con estas muestras se realizoacute una trituracioacuten y de este triturado se trabajoacute con
aliacutecuotas de 5 gramos para la extraccioacuten
La preparacioacuten de la muestra para la extraccioacuten y determinacioacuten de azitromicina en
cada tejido fue realizada de la siguiente manera
107
Se colocaban 5 gramos de tejido en un vaso de precipitado al cual se le agregaban
10 mL de metanol e inmediatamente se homogeneizaba con ultraturax durante 3 minutos
Luego el homogenato era volcado a un tubo para ser centrifugado durante 30 minutos a
1500 g Del sobrenandante se trasvasaban 2 mL a otro tubo para evaporar a bantildeo de Maria
a 45degC bajo flujo de nitroacutegeno una vez que el tubo estaba completamente seco se
conservaba tapado hasta el momento de la siembra
Para la siembra de la muestra se agregaban 500 microlitros de buffer fosfato pH 8
se agitaba con vortex y luego se sembraban 200 microlitros por duplicado
Para la preparacioacuten de patrones se tomaban 5 gramos de tejido libre de
antimicrobiano se lo trituraba y se lo fortificaba con azitromicina para obtener 05 1 15 y 2
microgramos por gramo Se dejaba en incubacioacuten a 35˚C durante 30 minutos para permitir
que la moleacutecula se distribuyera en el tejido para posteriormente proceder de la misma
manera que para la muestras problema
Las concentraciones individuales de azitromicina en cada tejido se expresan en la
tabla 49 y en la tabla 50 se expresan las concentraciones promedio en cada tejido
En la tabla 51 se observan las concentraciones maacuteximas alcanzadas en cada tejido
la concentracioacuten promedio en suero para el mismo tiempo y la relacioacuten entre las
concentraciones encontradas en cada tejido y en suero
En la figura 9 se expresan en forma comparativa por medio de barras las
concentraciones halladas en cada tejido
108
Tabla 49 Concentraciones individuales en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Animal (ID)
Tiempo (h)
Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
Nevado 12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 141
24 1981 3568 41656 0503 27232 0628 6999
Amarillo 3851 2925 18151 0584 30845 0593 6386 135
48 1429 3973 14789 0416 22810 0140 6889
139 5051 3516 27527 3997 20271 0224 9418 131
72 2018 2280 7314 3066 38309 0379 9745
138 1010 3356 10187 1741 25175 0138 6640 145
120 1766 2628 7622 0153 18191 0155 8106
150 0699 2750 8632 0711 15915 0148 8999 1 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 2 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 50 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Muacutesculo Hiacutegado Rintildeoacuten Grasa Pulmoacuten Cerebro Testiacuteculo Tiempo (h) microgg microgg microgg microgg microgg microgg microgg
12 2014 2434 6197 0200 13966 0138 4257 24 2915 3250 29900 0500 29085 0611 6695 48 3240 3740 21160 2210 21540 0183 8155 72 1515 2820 8750 2400 31730 0260 8192
120 1228 2690 8130 0433 17550 0152 8552 240 1026 4083 5646 0340 18620 0192 32000 600 1400 0091 0487 0290 1460 0410 21990
Tabla 51 Relacioacuten plasmandashtejido al momento de la maacutexima concentracioacuten en tejido luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tejido Cmax microgg Tmax hs Concentracioacuten en
plasma al momento de Cmax microgmL
Relacioacuten tejido-plasma
Muacutesculo 324 48 0155 2090
Hiacutegado 408 240 0056 7286
Rintildeoacuten 2990 24 0253 11818
Grasa 24 72 0121 1983
Pulmoacuten 3173 72 0121 26223
Cerebro 061 24 0253 241
Testiacuteculo 32 240 0056 57143
109
Figura 9 Concentraciones promedio en diferentes tejidos luego de la administracioacuten intramuscular de azitromicina a la dosis de 10 mgkg en terneros
Tabla 52 Concentraciones seacutericas individuales y promedios plusmn desviacuteos estaacutendar de azitromicina luego de la administracioacuten Intramuscular de 10 mgkg en terneros utilizados para la evaluacioacuten de penetracioacuten tisular
Animal (ID) Nevado Amarillo 141 139 135 138 131 145 150 1 2 Promedio DE Peso 54 70 725 105 358 101 99 113 135 160 145 96189 4467
Tiempo (h) microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml microgml Ugml Ugml Ugml Ugml Ugml 05 0073 0095 0282 0141 0051 0061 0214 0094 0302 0665 0216 0199 0178 1 0140 0267 0267 0171 0052 0117 0214 0120 0381 0587 0189 0228 0149 2 0413 0290 0250 0198 0086 0159 0249 0153 0453 0553 0191 0272 0144 3 0268 0424 0306 0253 0105 0208 0346 0183 0359 0388 0342 0289 0096 4 0224 0513 0215 0308 0141 0216 0321 0201 0416 0553 0270 0307 0134 6 0371 0360 0310 0335 0127 0345 0307 0288 0453 0799 0444 0376 0165 8 0278 0315 0341 0394 0141 0232 0280 0325 0344 0426 0364 0313 0079 10 0216 0282 0246 0428 0136 0236 0316 0259 0302 0371 0330 0284 0079 12 0193 0282 0168 0442 0192 0208 0264 0195 0285 0339 0306 0261 0082 24 0267 0155 0205 0181 0216 0168 0165 0201 0650 0321 0253 0149 36 0195 0171 0156 0136 0220 0220 0231 0291 0203 0049 48 0180 0127 0105 0136 0170 0180 0139 0206 0155 0034 60 0081 0086 0113 0146 0135 0157 0120 0032 72 0074 0068 0106 0201 0127 0149 0121 0050 84 0106 0130 0109 0135 0120 0015 96 0092 0095 0105 0135 0107 0020 108 0074 0073 0111 0159 0104 0041 120 0066 0075 0093 0159 0098 0042 132 0100 0151 0126 0036 144 0081 0151 0116 0049 156 0069 0099 0084 0021 168 0087 0107 0097 0014 180 0077 0110 0094 0023 192 0058 0080 0069 0016 204 0062 0074 0068 0008 216 0055 0078 0067 0016 228 0053 0059 0056 0004 240 0053 0059 0056 0004 252 0063 0063 NC 264 0063 0063 NC 276 ND ND NC 600 ND ND NC
111
VII DISCUSION
112
VII1 FUNDAMENTO DE LA ELECCIOacuteN DEL MODELO DE ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO Supuestos baacutesicos del anaacutelisis compartimental
Una vez ingresadas a la circulacioacuten sisteacutemica las moleacuteculas de medicamento
presentan cierto grado de difusioacuten desde el compartimiento central hacia determinados
tejidos y oacuterganos
Los antibioacuteticos aminoglucoacutesidos representan un ejemplo interesante de
comportamiento farmacocineacutetico y casi totalmente opuesto a los macroacutelidos porque debido
a sus caracteriacutesticas fiacutesico-quiacutemicas (bases fuertes) estos se encontrariacutean en plasma
solamente en su forma ionizada lo que en teoriacutea determinariacutea su pobre difusioacuten a traveacutes de
las membranas bioloacutegicas Estas drogas deberiacutean comportarse siguiendo un modelo
monocompartimental dada su escasa distribucioacuten No obstante tras su administracioacuten
intravascular estas presentan una disposicioacuten plasmaacutetica que puede ser descripta por un
modelo de ajuste biexponencial el que es asociado con la existencia de un proceso de
distribucioacuten y un proceso de eliminacioacuten
iquestQue ocurre para que drogas tan hidrosolubles tengan un proceso de distribucioacuten
marcado
Esto es explicado entre otras cosas porque los aminoglucoacutesidos exhiben una afinidad
selectiva por el tejido renal En concordancia con lo mencionado anteriormente la mayoriacutea
de los faacutermacos que son administrados por la viacutea intravascular presentan la existencia de al
menos dos compartimentos central y perifeacuterico
En el caso de la moleacutecula que nos ocupa la azitromicina en forma casi opuesta es
una sustancia muy liposoluble Esta droga gracias a su liposolubilidad se absorbe en forma
completa y sigue un proceso de distribucioacuten importante con lenta eliminacioacuten
Problemas asociados al disentildeo experimental El nuacutemero de teacuterminos exponenciales que se asocia con el nuacutemero de
compartimientos necesarios para describir la disposicioacuten plasmaacutetica de una moleacutecula tras su
administracioacuten intravascular es algo que no puede ser definido con exactitud dado que
exhibe una elevada dependencia de la frecuencia y tiempos de muestreo plasmaacutetico maacutes
allaacute de todos los rasgos atribuibles a la moleacutecula en estudio
Frecuentemente perfiles de concentracioacuten plasmaacutetica derivados de ensayos en
donde se han tomado muchas muestras de plasma durante un tiempo prolongado pueden
ser ajustados con maacutes teacuterminos exponenciales (compartimientos) que los necesarios
113
cuando la frecuencia y el tiempo de muestreo es menor por lo que la seleccioacuten del modelo
compartimental estaacute condicionado en gran parte por el disentildeo experimental y en
consecuencia la estimacioacuten de la semivida terminal depende del modelo seleccionado ya
que a medida que el nuacutemero de compartimientos aumenta eacutesta tiende a ser maacutes
prolongada (92) Tanto el muestreo muy temprano como el muestreo tardiacuteo (siendo el
aumento de sensibilidad de las teacutecnicas analiacuteticas directamente responsable de esto uacuteltimo)
pueden repercutir en la discriminacioacuten de maacutes compartimientos farmacocineacuteticos Esto
puede sin embargo ser corregido a traveacutes de meacutetodos de discriminacioacuten de modelos del
tipo del Test Maice (106)
Problemas asociados a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
Otro inconveniente estaacute asociado a la variabilidad de los procesos farmacocineacuteticos
de absorcioacuten distribucioacuten metabolismo y excrecioacuten que determinan diferencias entre los
perfiles plasmaacuteticos de diferentes individuos De esta manera puede resultar que luego de
administrar una misma dosis de un faacutermaco a varios individuos los perfiles plasmaacuteticos de
algunos puedan ser ajustados con un modelo de dos compartimientos y los del resto de los
individuos deban ser ajustados con un modelo de tres compartimientos
El problema que se plantea entonces es si los datos de todos los sujetos deben ser
obligados a ldquoun modelo uacutenicordquo o si se debe respetar para cada uno el modelo basado en el
ajuste de su nivel individual de plasma de datos concentracioacuten-tiempo (siendo un gran
inconveniente el de utilizar modelos diferentes para diferentes individuos que las pendientes
de las uacuteltimas fases de eliminacioacuten sean demasiado distintas y por lo tanto tambieacuten los sean
las semividas de eliminacioacuten) Estas y otras preguntas plantean verdaderos problemas en el
uso del anaacutelisis compartimental problemas que pueden en razonable medida evitarse con
un anaacutelisis no compartimental
Problemas de interpretacioacuten asociados al anaacutelisis compartimental Cuando un faacutermaco es administrado por la viacutea extravascular a menudo no es posible
distinguir la fase de distribucioacuten mediante inspeccioacuten visual del perfil de concentracioacuten
plasmaacutetica Como consecuencia de lo anterior el perfil plasmaacutetico extravascular puede ser
descrito con un modelo biexponencial para describir la fase de absorcioacuten y eliminacioacuten
aparentes
Este fenoacutemeno que se denomina desvanecimiento del teacutermino exponencial asociado
a la fase de distribucioacuten (73 74) se debe a que la velocidad del proceso de distribucioacuten es
mayor que la velocidad de absorcioacuten del medicamento
114
El modelo biexponencial entonces puede ser erroacuteneamente interpretado como que el
organismo tras una administracioacuten extravascular se comporta como un uacutenico
compartimiento en donde el faacutermaco se encuentra distribuido en forma uniforme y
homogeacutenea cuando en realidad el proceso de distribucioacuten estaacute siendo operativo pero se
encuentra solapado por el de absorcioacuten
Debe tenerse en cuenta que la discriminacioacuten del miacutenimo nuacutemero de
compartimientos necesario para explicar el comportamiento farmacocineacutetico de una
moleacutecula solo deberiacutea realizarse a partir del anaacutelisis de un perfil plasmaacutetico obtenido tras
una administracioacuten IV si el objetivo es una descripcioacuten farmacocineacutetica minuciosa
En vista de lo expuesto el anaacutelisis farmacocineacutetico basado en el ajuste de los datos
experimentales con modelos compartimentales a menudo genera dificultades y problemas
difiacuteciles de resolver por lo que muchos investigadores adoptan como procedimiento el
anaacutelisis de los datos experimentales del modo no compartimental (75)
Ventajas del anaacutelisis no compartimental El teacutermino ldquoanaacutelisis no compartimentalrdquo puede dar lugar a confusiones ya que en
realidad cuando se determinan concentraciones plasmaacuteticas se asume que la dosis del
faacutermaco administrado se halla ldquodisueltardquo en un volumen aparente lo que da origen a las
concentraciones plasmaacuteticas asumiendo entonces que al menos un compartimiento estaacute
siendo operativo Convendriacutea entonces ser maacutes objetivo en la definicioacuten y hablar de anaacutelisis
modelo-independiente
Si bien para el anaacutelisis farmacocineacutetico modelo independiente se necesita asumir
que la farmacocineacutetica de la droga es lineal dentro del margen de concentraciones
plasmaacuteticas observadas este tipo de anaacutelisis presenta ciertas ventajas como son
- Se trabaja con los datos experimentales observados y no con los valores estimados
- El anaacutelisis no compartimental es menos propenso a la manipulacioacuten de datos
- El caacutelculo de los paraacutemetros farmacocineacuteticos se realiza con un miacutenimo de
intervencioacuten por el investigador
- Paraacutemetros como Cmax y Tmax se obtienen por observacioacuten directa de los datos
experimentales
Dos pasos son fundamentales en el anaacutelisis modelo independiente
- El caacutelculo de las AUC desde tiempo 0 hasta el uacuteltimo punto con la concentracioacuten
cuantificable
- El caacutelculo de la constante aparente de eliminacioacuten terminal
115
Un ejemplo de la confiabilidad de los resultados obtenidos con el anaacutelisis modelo
independiente es que el mismo es aconsejado como primera eleccioacuten para la realizacioacuten de
los estudios de bioequivalencia por las agencias de medicamentos reconocidas como EMEA
y FDA (76 77 78 92)
116
VII2 RESUMEN DE LOS RESULTADOS
La administracioacuten de AZI en bovinos por cualquiera de las viacuteas evaluadas en esta
tesis ndashintra y extravascular- demostraron que la droga se distribuye raacutepidamente desde
sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus concentraciones en suero muy bajas respecto
de las concentraciones alcanzadas en leche Este comportamiento se observoacute tanto en
animales sanos como en animales con mastitis Si bien las concentraciones en sangre
tienden a ser muy bajas respecto de las encontradas en leche estas se mantienen durante
largos periacuteodos
El hecho de que las concentraciones de AZI en leche sean mucho maacutes altas que las
encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad lo que repercute en un gran volumen
de distribucioacuten
Los paraacutemetros farmacocineacuteticos muestran una alta permanencia en el
compartimiento perifeacuterico siendo el Tfrac12λ en leche de 3 a 4 veces mayor respecto del
plasmaacutetico
Estos datos coinciden con los reportados por otros investigadores sobre trabajos
realizados en el hombre y otras especies animales como caballo cabra y perros asiacute como
tambieacuten datos reportados en trabajos realizados con otros macroacutelidos como eritromicina
117
VII3 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN ENDOVENOSA EN VACAS LECHERAS HOLANDO ARGENTINO EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Azitromicina es un macroacutelido extensamente utilizado en medicina humana desde
hace varios antildeos Su comportamiento farmacocineacutetico ha sido bien estudiado en el hombre
(80 87) y diferentes especies animales como por ejemplo en ratas (97) gatos (81) potrillos
(98 79) perros (31) conejos (52) ovejas (86) y cabras (78) Sin embargo son escasos los
estudios realizados para azitromicina en bovinos (84) aunque siacute se ha evaluado el
comportamiento cineacutetico de diferentes macroacutelidos como tilosina (99) eritromicina (100)
tilmicosina (101) o tulatromicina (102) eacutesta uacuteltima con caracteriacutesticas muy similares a la
azitromicina
En cuanto a la azitromicina en general todos los estudios cineacuteticos realizados han
sido tras su administracioacuten oral o intravenosa En el hombre la principal viacutea de
biotransformacioacuten involucra una N-demetilacioacuten de la desosamina ubicada en la posicioacuten 9ordf
del anillo macroacutelido y una O-demetilacioacuten e hidroacutelisis yo hidroxilacioacuten de la clanidosa y de la
desosamina del anillo Se han identificado maacutes de 10 metabolitos de azitromicina todos
ellos microbioloacutegicamente inactivos (82 83) Por esta razoacuten se ha reportado una
equivalencia analiacutetica entre la cromatografiacutea y el meacutetodo microbioloacutegico (71)
Luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg de peso
vivo las concentraciones seacutericas promedio fueron 2803 plusmn 0372 y 2877 plusmn 0306 microgmL a las
0083 h post-administracioacuten en animales sanos y con mastitis respectivamente A partir de
ese momento las concentraciones de azitromicina descendieron abruptamente durante las
primeras 12 horas para luego evidenciar un descenso muy lento hasta alcanzar niveles en
el orden de los 0118 plusmn 0082 y 0245 plusmn 0063 microgmL a las 120 h post-administracioacuten en
ambos grupos experimentales respectivamente Los niveles obtenidos coinciden en liacutenea
general con aquellos informados por otros autores en diferentes especies tras la misma viacutea
de administracioacuten (86 78)
Azitromicina es un antimicrobiano que se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares las que se mantienen durante periacuteodos de tiempo muy
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico por meacutetodo no compartimental se determinoacute una
semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) muy prolongada 386 plusmn 911 y 531 plusmn 336 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente Este comportamiento concuerda con las
118
caracteriacutesticas farmacoloacutegicas de la moleacutecula y coincide con las prolongadas semividas
reportadas por Caacuterceles y colaboradores para otras especies (cabra oveja y conejo) tras la
administracioacuten de azitromicina por la misma viacutea siendo los valores hallados 325 477 y
218 horas para cabra oveja y conejo respectivamente (78 86 52) La dosis administrada
en cabras y ovejas fue 20 mgkg mientras que en conejos utilizaron una dosis similar a la
nuestra (10 mgkg) En las tres especies mencionadas el anaacutelisis farmacocineacutetico de los
datos se realizoacute siguiendo un modelo compartimental de tres exponentes y un esquema de
pesada 1concentracioacuten
El volumen aparente de distribucioacuten al estado estacionario (Vdss) fue
aproximadamente de 6 Lkg (Tablas 5 y 6) tanto en animales sanos como en animales con
mastitis Este volumen es considerado elevado y se correlaciona con la alta liposolubilidad
de la moleacutecula en estudio lo que sugiere una excelente penetracioacuten y distribucioacuten de la
misma en los fluidos orgaacutenicos incluyendo sitios subcelulares Sin embargo fue inferior a los
voluacutemenes de distribucioacuten reportados por otros autores en diferentes especies (78 79 81
87 53) Caacuterceles y col (2005) informan en ovinos un Vdss de 3014 Lkg tras la
administracioacuten de una formulacioacuten comercial a base de azitromicina (Pfizer Inc New York
USA) a razoacuten de 20 mgkg recordemos que nosotros utilizamos una solucioacuten formulada en
una matriz 100 acuosa y una dosis de 10 mgkg de peso vivo Tambieacuten debemos
considerar que el animal Holstein que se utilizoacute en el presente estudio es magro por
naturaleza y eso podriacutea explicar un Vd maacutes bajo
El AUC concentracioacuten seacuterica de azitromicina en funcioacuten del tiempo fue de 81710 plusmn
104 microghrmL en animales sanos y 118 0 plusmn 360 microghrmL en vacas con mastitis Estos
valores de AUC son muy superiores a los reportados por Foulds y cols (1990) en humanos
de 96 plusmn 48 (87) Y maacutes del doble de lo reportado por Caacuterceles y cols (2005) para ovejas
donde el AUC luego de la administracioacuten intravenosa de azitromicina a la dosis de 20 mgKg
fue de 388 (86) Esta mayor disponibilidad plasmaacutetica de azitromicina en bovinos tambieacuten
contribuiriacutea a explicar el menor valor de volumen de distribucioacuten calculado en nuestro
estudio
El Clearence corporal fue 114577 plusmn 179 mLhrkg en vacas sanas y 9890 plusmn 392
mLhrkg en vacas con mastitis Estos valores son bajos en comparacioacuten con los reportados
en humanos (610 mLhrkg) aunque esta comparacioacuten es poco relevante en teacuterminos
numeacutericos ya que el reacutegimen de dosificacioacuten en humanos es por infusioacuten y en varios diacuteas (4
a 5 diacuteas) dando una dosis acumulada de 2500 a 4000 mg por individuo equivalentes a 40
mgkg aproximadamente Por otro lado Caacuterceles y cols reportan valores de Clearance en el
orden de 850 y 520 mLhrkg con semividas de eliminacioacuten de 325 y 477 para cabras y
ovejas respectivamente lo cual indicariacutea que los pequentildeos rumiantes depuran AZI maacutes
119
raacutepidamente que los bovinos lo cual podriacutea explicar la ligeramente menor semivida de
eliminacioacuten reportada por Caacuterceles y col para ovinos y caprinos Al comparar
estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas sanas con aquellos
obtenidos en vacas con mastitis se encontraron diferencias significativas fundamentalmente
en aacuterea bajo la curva clearance y tiempo medio de residencia (Tabla 11) Encontramos
diferencias estadiacutesticas altamente significativas en la disponibilidad plasmaacutetica entre
animales sanos y portadores de mastitis (8171 plusmn 1044 vs 1180 plusmn 360 P 00009) Este
hallazgo lo podemos explicar aplicando la hipoacutetesis del coeficiente de reparto en animales
normales el pH de la leche es ligeramente maacutes aacutecido que el de la sangre (66 vs 74) de
manera que AZI que es una droga alcalina sufriraacute un mayor secuestro ioacutenico en la glaacutendula
mamaria y por lo tanto su disponibilidad plasmaacutetica disminuiraacute Por otra parte en la leche
de los animales con mastitis el pH aumenta acercaacutendose al valor sanguiacuteneo la moleacutecula
estaacute menos ionizada y mantiene su facilidad de pasaje a traveacutes de la barrera sangre-leche
determinando un aumento de su disponibilidad plasmaacutetica Lo explicado se corresponde con
el mayor tiempo medio de residencia y menor clearance obtenido en animales enfermos
El paso de AZI a glaacutendula mamaria fue raacutepido ya que las concentraciones en leche
comenzaron a detectarse a partir de los 10 minutos post- administracioacuten endovenosa y
superaron largamente a las obtenidas en sangre La eliminacioacuten por esta viacutea se realizoacute en
forma muy lenta manteniendo concentraciones en el orden de 15 microgmL a las 120 horas
pos-administracioacuten 9 veces maacutes altas que aquellas encontradas en sangre para ese mismo
tiempo Es importante destacar que estas concentraciones superan la CIM de 05 microgmL
para Staphylococcus aureus (principal agente causal de la mastitis bovina subcliacutenica) (84)
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de eliminacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 1133 plusmn 395 y 1112 plusmn 211 horas para animales sanos y con mastitis
respectivamente siendo en ambas situaciones maacutes altas que aquellas obtenidas en plasma
Se alcanzoacute una Cmax de 382 plusmn 049 microgml a las 9 horas (Tmax) en vacas sanas mientras
que en los animales con mastitis el pico fue ligeramente inferior (313 plusmn 066 microgml) pero
se presentoacute un poco maacutes tarde (Tmax 12 horas) Azitromicina pasa raacutepidamente hacia la
glaacutendula mamaria y es secretada extensamente por leche Si bien no existen datos acerca
del perfil de eliminacioacuten por leche en otras especies animales siacute se cuenta con algunos
datos de distribucioacuten tisular en el hombre donde se comprueba la buena llegada a diversos
oacuterganos como pulmoacuten glaacutendula salival uacutetero ovario o a diferentes fluidos como secrecioacuten
bronquial saliva humor acuoso etc (32 88 89 90 91 92)
120
El AUC concentracioacuten en leche en funcioacuten del tiempo fue 3123 plusmn 155 microghrmL para
animales sanos y 2730 plusmn 566 microghrmL para las vacas con mastitis dando lugar a una
biodisponibilidad laacutectea (FL) de 3894 plusmn 6935 en animales sanos y 23225 plusmn 52 71 en
animales con mastitis Es decir que en leche encontramos entre 200 y 300 veces maacutes AZI
que en suero
Ademaacutes de concentrarse ampliamente en la glaacutendula su semivida de eliminacioacuten
desde la misma -como mencionamos- es muy lenta lo cual se corrobora con el prolongado
TMR obtenido 53 5 plusmn 348 y 536 plusmn 169 en ambos grupos experimentales (sanos y
enfermos respectivamente)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas al comparar los
paraacutemetros cineacuteticos obtenidos del anaacutelisis de los datos en leche entre ambos grupos No
ocurrioacute lo mismo con la biodisponibilidad en leche en donde siacute hallamos diferencias
significativas entre animales sanos y con mastitis tal lo explicamos al describir la estadiacutestica
en suero (Tabla 12)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio el comportamiento tiacutepico de los
macroacutelidos estudiados en medicina humana y veterinaria con concentraciones bajas en
sangre volumen de distribucioacuten elevado y semivida de eliminacioacuten prolongada Y muchas
similitudes respecto de los resultados obtenidos con azitromicina en humanos donde las
concentraciones en sangre bajan raacutepidamente y el pasaje de droga hacia los tejidos -como
la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente La moleacutecula permanece por largos periacuteodos en
tejidos blandos como glaacutendula mamaria y desde aquiacute se elimina lentamente (clearance bajo
semivida larga y un gran AUC)
Estas caracteriacutesticas farmacocineacuteticas representan a priori una gran ventaja desde
el punto de vista terapeacuteutico para el tratamiento de las mastitis infecciosas del bovino por el
gran intervalo de dosis que supone una droga con estas caracteriacutesticas y su excelente
llegada a la glaacutendula mamaria De hecho en un trabajo previo publicado por Lucas y col
(2009) se alcanzoacute la cura bacterioloacutegica en 7 de 8 cuartos mamarios infectados y el conteo
de ceacutelulas somaacuteticas disminuyoacute de 2200300 a 223000 luego del tratamiento con
azitromicina
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico se trata de una excelente
herramienta para el tratamiento de la mastitis y otras infecciones del bovino aunque tambieacuten
hay que considerar que para vacas en lactacioacuten el periacuteodo de espera podriacutea ser muy
prolongado lo cual limitariacutea su utilizacioacuten por razones econoacutemicas
Los antimicrobianos administrados parenteralmente deben llegar a la glaacutendula
mamaria a traveacutes de la circulacioacuten sanguiacutenea Las concentraciones alcanzadas van a
depender de la habilidad de la moleacutecula de penetrar el endotelio capilar y de difundir a
121
traveacutes de las membranas bioloacutegicas de naturaleza lipoproteica (13) El grado de ionizacioacuten
del antimicrobiano en leche y en plasma su liposolubilidad y el porcentaje de unioacuten a las
proteiacutenas de la leche y del plasma determinaraacuten sus concentraciones en leche y en la
circulacioacuten sisteacutemica (5) En general solo las moleacuteculas liposolubles no ionizadas y libres
alcanzan la glaacutendula mamaria y se eliminan por leche Azitromicina es una base orgaacutenica
altamente liposoluble (pKa 874) con un 7 (2microgmL) a 51 (02 microgmL) de unioacuten a
proteiacutenas (dependiendo de la concentracioacuten) y un bajo grado de ionizacioacuten (103) Es decir
es una moleacutecula que se distribuye faacutecilmente a traveacutes del tejido mamario y la leche Debe
tenerse siempre presente que las diferentes formulaciones de un mismo principio activo
influiraacuten en la liberacioacuten y eliminacioacuten del mismo por lo tanto cualquier modificacioacuten
realizada en la foacutermula incidiraacute en el tiempo de permanencia en la glaacutendula (5)
En general los estudios farmacocineacuteticos en bovinos de leche son realizados en
animales normales el uso de animales con mastitis subcliacutenica o cliacutenica homogeacuteneamente
seleccionados puede contribuir a un mejor entendimiento de posibles tratamientos y de sus
implicancias farmacocineacuteticas y farmacodinaacutemicas Probablemente en los paiacuteses realmente
desarrollados desde el punto de vista lechero los planes de administracioacuten disentildeados por
las empresas no puedan ser objetados debido a la homogeneidad del rendimiento de los
rodeos En nuestro paiacutes pese al elevado nivel alcanzado por muchas explotaciones siguen
existiendo explotaciones de escaso rendimiento y pobre perfil sanitario Hemos detectado
importantes diferencias farmacocineacuteticas y en periacuteodos de retirada entre animales normales
y mastiacuteticos Este es un problema que si no se estudia debidamente puede resultar en
cuantiosas peacuterdidas econoacutemicas (5 8 9 99)
122
VII4 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SU ADMINISTRACIOacuteN INTRAMUSCULAR EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Como mencionamos en el apartado anterior casi todos los estudios realizados con
azitromicina en diferentes especies han sido efectuados luego de su administracioacuten
intravenosa u oral con la excepcioacuten de nuestro trabajo y otros estudios realizados por
Caacuterceles y col en ovinos caprinos y conejos (86 78 52) La administracioacuten oral de AZI
frecuentemente estaacute asociada a varios efectos adversos a nivel del tracto gastrointestinal
(voacutemitos dolor abdominal diarreas) (28) La incidencia o severidad de estos podriacutea verse
incrementada en especies herbiacutevoras donde muchos de los efectos toacutexicos de los
antimicrobianos son ocasionados al interferir con los efectos protectores de la microflora
normal o por alterar la funcioacuten metaboacutelica de la flora microbiana del tracto digestivo (72) Los
agentes antimicrobianos macroacutelidos en general no son utilizados en el hombre por la viacutea
intramuscular pero en medicina veterinaria existen diferentes formulaciones para su
administracioacuten intramuscular profunda (104 105 84)
Luego de la administracioacuten intramuscular en dosis uacutenica a razoacuten de 10 mgkg las
concentraciones de azitromicina en sangre fueron detectadas desde la primera muestra
obtenida a los 30 minutos post inyeccioacuten y se mantuvieron en niveles mensurables durante
las 120 horas que duroacute el ensayo (Fig 3) Las concentraciones se incrementaron hasta las 2
horas momento en el cual se produjo la Cmax para luego disminuir muy lentamente En
leche AZI se comenzoacute a cuantificar entre la primer y segunda hora tras su administracioacuten
alcanzando la Cmax alrededor de las 10 horas para luego decrecer en forma muy lenta ndashal
igual que en suero- pero con concentraciones mucho maacutes elevadas (Fig 4) La relacioacuten
Cmax -leche Cmax -suero fue de 473 para animales sanos y 524 para animales con mastitis
(Tabla 22)
Tanto en plasma como en leche AZI demostroacute una prolongada persistencia con una
lenta pendiente de eliminacioacuten En la curva de disponibilidad seacuterica se identifican claramente
las fases de absorcioacuten distribucioacuten y eliminacioacuten (Fig 3) mientras que en leche no se
evidencia la distribucioacuten pero si una extensa fase de eliminacioacuten
Si bien como mencionamos no existen muchos estudios realizados por la viacutea
intramuscular estos hallazgos coinciden en liacuteneas generales con lo descrito por otros
autores luego de la administracioacuten oral donde azitromicina se caracteriza por alcanzar altas
concentraciones tisulares y en fluidos las cuales se mantienen durante periacuteodos de tiempo
prolongados auacuten cuando las concentraciones plasmaacuteticas hubiesen alcanzado niveles muy
bajos (88)
123
La Cmax seacuterica fue 092 plusmn 011 microgml en vacas sanas y 066 plusmn 003 microgml en vacas
con mastitis Estos valores son superiores a los descriptos por Lucas et al 018 plusmn 003 y
011 microgml luego de aplicar dos dosis intramusculares de 10 mgkg con un intervalo de 48
horas (84) Sin embargo son coincidentes con Caacuterceles y cols quienes reportan valores de
064 y 126 para cabra y oveja luego de la administracioacuten intramuscular de 20 mgkg en una
sola dosis (78 86)
El pico de concentracioacuten se produjo a las 3 plusmn 155 horas (Tmax) en vacas sanas y a
las 217 plusmn 041 horas en las vacas con mastitis Lucas y cols reportan 208 plusmn 156 horas
luego de la primera dosis tambieacuten en animales con mastitis Es posible que en el trabajo de
Lucas al no realizar el mismo protocolo de muestreo no se haya visualizado el momento
exacto en donde ocurrioacute el pico de concentracioacuten Caacuterceles y cols reportaron un Tmax maacutes
temprano que nosotros (124 y 125 horas post-administracioacuten en ovejas y cabras
respectivamente)
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3911 plusmn 764 y 4731 plusmn 975 horas en animales
sanos y con mastitis respectivamente Estos valores coinciden con la Tfrac12λ hallada por Lucas
y cols (3266 plusmn 2163) (85) y con las prolongadas semividas reportadas por Caacuterceles y col
en cabras y ovejas tras la administracioacuten intramuscular de AZI a razoacuten de 20 mgkg (452 y
612 h respectivamente) (78 86) Sin embargo nuestra semivida de eliminacioacuten fue cerca
del doble a la obtenida en conejos tras administrar igual dosis que nosotros (231 horas)
(53)
El AUC concentracioacuten seacuterica en funcioacuten del tiempo fue 3307 plusmn 914 microghrmL en
animales sanos mientras que en vacas con mastitis obtuvimos un AUC de 2218 plusmn 240
microghrmL Nuevamente como informamos en el ensayo intravenoso nuestros valores de
AUC fueron muy superiores a los reportados por otros autores Foulds y cols reportan un
AUC de 96 plusmn 48 en humanos (87) y en el estudio realizado previamente en vacas lecheras
por Lucas y cols se estimoacute un AUC auacuten menor (339 plusmn 123) (84) Sin embargo coincidimos
con Caacuterceles y cols quienes estimaron un AUC en ovejas luego de la administracioacuten
intramuscular de azitromicina a la dosis de 20 mgKg de 36 microghrmL (86)
En bovinos hallamos que AZI seguacuten nuestra formulacioacuten experimental tras su
administracioacuten intramuscular presenta una menor biodisponibilidad seacuterica (4138 plusmn 1398
en animales sanos y 2241 plusmn 211 en animales con mastitis) cuando la comparamos con
los datos reportados por Caacuterceles y col tras sus estudios en ovinos y caprinos (78 86)
El tiempo medio de residencia desde el tiempo cero hasta la uacuteltima muestra (MRT0-
tlast) fue 4007 plusmn 143 y 4040 plusmn 22 horas en vacas sanas y con mastitis respectivamente
Esta prolongada permanencia se condice con las prolongadas semividas de eliminacioacuten
obtenidas reflejando la persistencia de la moleacutecula en el organismo Sin embargo nosotros
124
obtuvimos un MRT menor que el reportado por Caacuterceles y col en ovejas (5834 plusmn 805 h) y
en cabras (6031 plusmn 928 h) (78 86) Esta diferencia podriacutea deberse a la mayor dosificacioacuten
utilizada por Caacuterceles y a diferencias anaacutetomo-fisioloacutegicas propias de cada especie
Nuestros animales experimentales fueron bovinos Holstein animales magros por naturaleza
mientras que los ovinos y caprinos y fundamentalmente las razas espantildeolas se
caracterizan por ser animales con un alto contenido de tejido adiposo
Al comparar estadiacutesticamente los paraacutemetros farmacocineacuteticos obtenidos en vacas
sanas y vacas con mastitis se encontraron diferencias altamente significativas en Cmax
aacuterea bajo la curva y por consiguiente en la biodisponibilidad intramuscular (Tabla 23)
Tras eacutesta viacutea de administracioacuten el paso de AZI a leche fue maacutes lento que tras su
administracioacuten endovenosa A los 30 minutos post-administracioacuten no se detectoacute AZI en
ninguacuten animal a la hora se cuantificoacute AZI en un solo animal perteneciente al grupo con
mastitis a las dos horas se detectoacute en 7 de los 12 animales a las 3 horas en 9 animales y
recieacuten a las cuatro horas postadministracioacuten todos los animales de ambos grupos
presentaban concentraciones mensurables de AZI en leche (Tablas 15 y 16) La Cmax en
leche fue muy superior a aquella obtenida en suero arrojando una R CmaxLCmaxS de 485
plusmn 2 67 y 526 plusmn 073 para vacas sanas y con mastitis respectivamente Nuevamente la
eliminacioacuten de AZI por leche se realizoacute en forma muy lenta manteniendo concentraciones
entre 15 y 2 microgmL a las 120 horas pos-administracioacuten y superando asiacute ampliamente -32
veces maacutes altas- a las obtenidas en sangre para ese mismo tiempo Se mantuvieron
concentraciones cuatro veces por arriba de la CIM para Staphylococcus aureus (84)
Como mencionamos la penetracioacuten en leche fue maacutes lenta dando lugar a un Tmax
maacutes tardiacuteo que para la administracioacuten endovenosa 1733 plusmn 1056 horas en vacas sanas y
137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis coincidiendo con el Tmax obtenido por Lucas y
cols (84) La semivida de eliminacioacuten en leche (Tfrac12λ) fue 105 plusmn 40 y 135 plusmn 39 horas ambos
mucho maacutes prolongados que los obtenidos en plasma
En el trabajo realizado por Lucas y cols luego de la administracioacuten de 2 dosis de
azitromicina a razoacuten de 10 mgkg y con un intervalo de 48 h la Cmaacutex1 alcanzada en leche fue
776 microgmL y en plasma fue 018 microgmL y la C maacutex2 en leche fue 782 microgmL mientras que a
nivel plasmaacutetico fue 011 microgmL De acuerdo a estos valores los niveles laacutecteos de
azitromicina fueron 40 a 70 veces superiores a los niveles alcanzados en plasma (84) Estas
diferencias en la Cmax reportada por Lucas respecto de este trabajo pueden deberse a
diferencias en los niveles de produccioacuten de los animales utilizados y al tipo de formulacioacuten
utilizada maacutes auacuten si consideramos que el Tmax en leche reportado por Lucas fue 1533 plusmn
1033 luego de la primer aplicacioacuten valor muy similar a los 1733 plusmn 1056 horas en vacas
125
sanas y 137 plusmn 513 horas en vacas con mastitis encontradas en este estudio Otro aspecto
fundamental es que todos los animales utilizados en el estudio de Lucas eran enfermos
con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas y con aislamiento positivo a Staphylococcus aureus en
alguno de los 4 cuartos mamarios
Cuando Lucas y cols compararon la Cmax en leche de cuartos mamarios sanos
versus cuartos mamarios con mastitis no encontraron diferencias significativas ni en Cmaacutex1 ni
en Cmaacutex2 siendo los valores alcanzados de Cmaacutex1 para los cuartos mamarios mastiacuteticos 78
microgmL y en la leche de los cuartos mamarios sanos 774 microgmL mientras que la Cmaacutex2 fue
809 microgmL y 768 microgmL respectivamente
Los valores de Tfrac12λ ponen en evidencia que ademaacutes de alcanzar altas
concentraciones en leche las mismas tienden a disminuir maacutes lentamente en leche respecto
de lo que sucede en plasma El Tfrac12λ determinado a partir de las concentraciones laacutecteas fue
4 veces maacutes prolongado que el plasmaacutetico El mismo comportamiento PK fue hallado por
Lucas y col (84)
El AUC fue 310 plusmn 80 microghrmL en animales sanos y 310 plusmn 51 microghrmL en las vacas
con mastitis A priori podriacuteamos suponer que la moleacutecula se comporta de manera similar
tanto en una ubre sana como en una ubre con mastitis Sin embargo al calcular la FL
(biodisponibilidad laacutectea) encontramos que luego de la administracioacuten intramuscular por
alguna razoacuten la moleacutecula se concentroacute maacutes en el oacutergano blanco enfermo (10427 plusmn 5185
para las vacas sanas y 14224 plusmn 350 para las vacas con mastitis) arrojando una P de
00289 En este ensayo encontramos que el AUC seacuterica fue inferior en los animales
enfermos (recordemos que luego de la administracioacuten endovenosa obtuvimos lo contrario)
es decir la moleacutecula abandonoacute en mayor magnitud el lecho vascular lo que determinoacute una
mayor FL a favor de los animales enfermos Una explicacioacuten para este interesante hallazgo
es el hecho de tratarse de animales diferentes en ambos ensayos por un lado el grupo
experimental utilizado para el estudio intravenoso estaba constituido por animales de mayor
produccioacuten (entre 15 y 22Ld) que los animales utilizados para el estudio intramuscular (85-
16 Ld) de manera que AZI se encontraba por un lado maacutes diluida en esas ubres y por otro
lado en cada ordentildee se eliminaba mayor cantidad de antimicrobiano que en animales de
menor produccioacuten Recordemos que los animales fueron ubicados dentro del grupo enfermo
o sano seguacuten tuvieran un CCS mayor o menor a 600000 y tuvieran aislamiento
microbioloacutegico positivo o negativo asiacute el grupo sano utilizado en el ensayo endovenoso
presentoacute un CCS promedio de 49254050 plusmn 5172181 (rango 410908 a 543780) y el grupo
enfermo presentoacute un promedio de 77217967 plusmn 9063972 (rango 689763 a 926543)
Mientras que los animales que formaban parte de este ensayo intramuscular presentaban un
126
CCS de 135500 plusmn 7307462 (rango 29000 a 219000) y 1582667 plusmn 52544483 (rango
932000 a 2173000) para el grupo sano y con mastitis respectivamente De estos datos se
desprende que los animales enfermos correspondientes a este estudio presentaban 25
veces maacutes ceacutelulas que el grupo enfermo del estudio intravenoso Azitromicina es justamente
un antimicrobiano que tiende a concentrarse varias veces en el ambiente intracelular aacutecido
fundamentalmente en las ceacutelulas fagociacuteticas (107) donde penetran por difusioacuten simple (108)
Los leucocitos principalmente neutroacutefilos macroacutefagos y monocitos acumulan AZI en sus
lisosomas y la transportan al sitio de la infeccioacuten (109 110)
El valor de MRT fue 5533 plusmn 291 mLhrkg en vacas sanas y 5693 plusmn 15 mLhrkg en
vacas con mastitis corroborando la prolongada permanencia de la moleacutecula en la glaacutendula
mamaria
No se observaron diferencias significativas entre los paraacutemetros farmacocineacuteticos
obtenidos mediante anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental para animales sanos y con
mastitis (AUC Tfrac12λ Cmax Tmax y MRT) (Tabla 24) excepto como hemos explicado
anteriormente para la biodisponibilidad laacutectea (FL) que fue superior en los animales
enfermos
Azitromicina luego de su administracioacuten intramuscular corrobora los hallazgos
farmacocineacuteticos obtenidos tras su administracioacuten intravenosa con algunas diferencias
sustanciales y dependientes de caracteriacutesticas fisiopatoloacutegicas de los animales como
produccioacuten de leche y cantidad de ceacutelulas somaacuteticas Estas uacuteltimas dos importantes
variables que deben ser consideradas a la hora de disentildear regiacutemenes posoloacutegicos
racionales con el objetivo de maximizar eficacia y disminuir la presencia de residuos
antibioacuteticos por arriba de los liacutemites maacuteximos de residuos permitidos
127
VII5 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS HA EN LACTACIOacuteN SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Desde el punto de vista farmacocineacutetico la glaacutendula mamaria es un compartimiento
perifeacuterico con una dinaacutemica particular a causa de su fisiologiacutea donde el antibioacutetico se
administra despueacutes del ordentildee -con glaacutendula vaciacutea- y hasta el ordentildee siguiente acontecen
diversas situaciones por un lado se vuelve a producir leche -lo que genera dilucioacuten del ATB-
y por otro lado hay absorcioacuten desde la glaacutendula mamaria hacia sangre al cabo de 12 horas
aproximadamente (en un establecimiento con 2 ordentildees por diacutea) sucede otro ordentildee donde
nuevamente la glaacutendula se vaciacutea casi por completo para volver a iniciar el ciclo de
produccioacuten La administracioacuten de antimicrobianos por viacutea intramamaria es una praacutectica muy
difundida en medicina veterinaria para el tratamiento de mastitis subcliacutenicas Es considerada
una viacutea de administracioacuten directa en la glaacutendula en donde obviamos el proceso de
absorcioacuten que sufre la moleacutecula cuando es administrada por una viacutea parenteral como la
intramuscular De manera tal que la biodisponibilidad laacutectea se considera 100 Las
ventajas de la administracioacuten por la viacutea IMM son las altas concentraciones alcanzadas en la
leche y la menor peacuterdida farmacoloacutegica debida a los procesos de absorcioacuten y transferencia a
traveacutes de las membranas bioloacutegicas (111) Mientras que las desventajas de esta viacutea pueden
ser la despareja distribucioacuten de varios compuestos en el interior de la ubre el riesgo de
contaminacioacuten por inoculacioacuten de bacterias a traveacutes del canal del pezoacuten y la posible
irritacioacuten del tejido mamario por el faacutermaco o la formulacioacuten utilizada (111) Luego de la
administracioacuten de una infusioacuten IMM el contacto entre el agente antimicrobiano y el patoacutegeno
dentro de la glaacutendula estaacute supeditado a una serie de eventos sucesivos (12) 1- Fase
farmaceacuteutica (desintegracioacuten del formulado disolucioacuten del faacutermaco excrecioacuten del faacutermaco
en la leche) 2- Fase farmacocineacutetica (absorcioacuten ndashlecheplasma- distribucioacuten ndashlocal y
sisteacutemica- metabolismo excrecioacuten ndashlocal y sisteacutemica-) y 3- Fase farmacodinaacutemica
El tipo de excipiente que contiene el formulado es el que determina la tasa de
liberacioacuten del faacutermaco y la fase farmaceacuteutica es la que gobierna la forma inicial de la curva
de concentraciones versus tiempo del antimicrobiano en la leche (12)
Las formulaciones IMM utilizadas para el tratamiento de la mastitis durante el periacuteodo
de lactancia contienen excipientes de liberacioacuten raacutepida pues el objetivo es erradicar la
infeccioacuten del tejido glandular y minimizar el periacuteodo de descarte de la leche (12)
128
El inicio de la fase PK presupone la existencia del faacutermaco disponible en la secrecioacuten
laacutectea y depende de la desintegracioacuten del formulado y la disolucioacuten del faacutermaco Estos
procesos determinan la disponibilidad farmacoloacutegica
La cantidad de faacutermaco recuperado en la leche estaacute influenciada por varios factores
entre los cuales se pueden nombrar el tipo de excipiente utilizado en la formulacioacuten la tasa
de pasaje lecheplasma el tamantildeo de la ubre y la cantidad de leche que en ella estaacute
contenida (12)
El pasaje del antimicrobiano presente en leche implica el movimiento del faacutermaco a
traveacutes de una membrana bioloacutegica ya sea por difusioacuten pasiva o transporte especializado
Los factores que afectan el pasaje de los antimicrobianos desde la leche hacia el plasma
son los mismos que afectan la transferencia de los mismos desde la sangre hacia la leche
Estos factores son el pKa de la moleacutecula la liposolubilidad de la fraccioacuten no ionizada y el
porcentaje de unioacuten al tejido mamario (12) Los faacutermacos liposolubles como la AZI
atraviesan la membrana a traveacutes de la regioacuten lipoproteica y el pasaje de los mismos es
directamente proporcional al gradiente de concentracioacuten y a la liposolubilidad de la moleacutecula
La fraccioacuten no ionizada generalmente es maacutes liposoluble que la ionizada y atraviesa la
membrana lipiacutedica con mayor facilidad
La capacidad de atravesar la barrera lecheplasma es expresada como coeficiente de
liposolubilidad por porcentaje de fraccioacuten no ionizada (112) y la tasa de pasaje real puede
ser cuantificada mediante la relacioacuten Cmaacutex (plasma) Cmaacutex (leche) o mediante la relacioacuten ABC(plasma)
ABC(leche) (12)
El fenoacutemeno de absorcioacuten lecheplasma trae como consecuencia la presencia del
agente antimicrobiano en plasma sanguiacuteneo En la circulacioacuten sisteacutemica el faacutermaco seguiraacute
los fenoacutemenos farmacocineacuteticos que se suceden luego de la absorcioacuten (distribucioacuten
metabolismo y excrecioacuten) (113)
El fenoacutemeno de distribucioacuten del antimicrobiano en el interior de la glaacutendula se
produce por difusioacuten pasiva de las moleacuteculas a traveacutes de los componentes lipofiacutelicos e
hidrofiacutelicos de la secrecioacuten glandular Este fenoacutemeno se ve afectado por la unioacuten del
faacutermaco al tejido mamario yo a los componentes de la leche (12)
El proceso de excrecioacuten del antimicrobiano desde la glaacutendula mamaria estaacute gobernado por
el tipo de base utilizada la cantidad de leche producida las caracteriacutesticas propias de la
moleacutecula la salud de la glaacutendula mamaria y el nuacutemero de ordentildeos realizados (12)
129
En este contexto la semivida de eliminacioacuten en leche estaraacute bajo la influencia de las
variables antes mencionadas para la glaacutendula en ordentildee (dilucioacuten pasaje a sangre y
eliminacioacuten con el ordentildee) por lo que seriacutea maacutes adecuado renombrarla como semivida de
declinacioacuten
Luego de la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 125 mg por cuarto mamario
durante tres ordentildees las concentraciones de AZI en sangre fueron detectadas desde la
primera muestra obtenida a los 30 minutos de la aplicacioacuten intramamaria y se mantuvieron
en niveles cuantificables entre todos los intervalos de aplicacioacuten para caer por debajo del
liacutemite de cuantificacioacuten en todos los animales entre las 24 y 36 horas post-tercera
aplicacioacuten intramamaria
La Cmax en suero (luego de la aplicacioacuten de la tercera jeringa intramamaria) fue 023
plusmn 004 microgmL en vacas sanas y 013 plusmn 001 microgmL en vacas con mastitis niveles maacutes bajos
que los logrados tras la administracioacuten intramuscular El perfil de concentraciones seacutericas
obtenido fue polifaacutesico y muy erraacutetico Sin embargo fueron concentraciones similares a las
halladas por Lucas y cols (018 plusmn 003 y 011 plusmn 003 microgmL) luego de dos dosis
intramusculares de 10 mgkg con intervalo de 48 horas (85) El Tmax se produjo a las 2275
plusmn 027 horas en vacas sanas y a las 227 plusmn 025 horas en las vacas con mastitis estos
valores corresponden a 1 hora luego de la tercera aplicacioacuten intramamaria Se obtuvo una
biodisponibilidad seacuterica extremadamente baja tras la administracioacuten de AZI por esta viacutea
(203 plusmn 150 y 106 plusmn 043 en animales sanos y con mastitis respectivamente) Queda
claro que la moleacutecula queda retenida en la glaacutendula mamaria El AUC seacuterica fue 159 plusmn 103
microghrmL para animales sanos y 124 plusmn 05 microghrmL para las vacas con mastitis Estos
resultados ponen de manifiesto que para este tipo de moleacuteculas con gran penetracioacuten
celular gran distribucioacuten tisular e importante secuestro ioacutenico en compartimentos maacutes
aacutecidos no siempre el anaacutelisis de las concentraciones seacutericas nos permitiraacute hallar una
excelente correlacioacuten con lo acontecido en el compartimento del efecto es decir con lo que
ocurre en el sitio de la infeccioacuten Nuestros datos coinciden en liacuteneas generales con lo
hallado tras la administracioacuten intracisternal de eritromicina en vacas lecheras (100) es decir
bajas concentraciones plasmaacuteticas y baja biodisponibilidad
La semivida de eliminacioacuten seacuterica (Tfrac12λ) fue mucho maacutes corta que la que obtuvimos
luego de las administraciones endovenosa e intramuscular (1176 plusmn 731 y 1620 plusmn 720
horas para animales sanos y con mastitis respectivamente)
El tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 493 plusmn 277 y 717 plusmn 35 h en vacas
sanas y con mastitis respectivamente mucho maacutes breve que la semivida de eliminacioacuten
130
No hallamos diferencias estadiacutesticas al comparar los paraacutemetros farmacocineacuteticos
seacutericos entre animales sanos y enfermos (Tabla 35)
Sin embargo en leche (obviamente por ser la viacutea de administracioacuten IMM de
penetracioacuten directa en la glaacutendula) las concentraciones halladas se encontraron en otro
orden de magnitud En la leche de los animales sanos determinamos concentraciones
cercanas a los 10 microgmL tras la primera aplicacioacuten intramamaria De alguna manera la
moleacutecula se fue acumulando a pesar de absorberse hacia sangre y de excretarse mediante
los ordentildees ya que luego de la segunda y tercera dosificacioacuten determinamos
concentraciones en el orden de los 1674 plusmn 566 y 1642 plusmn 415 microgmL respectivamente A
partir de aquiacute las concentraciones comenzaron a caer raacutepidamente en las primeras 24 horas
y luego en forma maacutes suave durante las siguientes 100 horas para finalizar a las 144 horas
post-uacuteltima administracioacuten con niveles en el orden de los 08 microgmL (Tabla 27) En la leche
de los animales con mastitis nos encontramos con un comportamiento similar pero con
concentraciones varias veces superiores Tras la primer jeringa intramamaria la
concentracioacuten fue 5790 plusmn 3482 microgmL luego de la segunda aplicacioacuten 7483 plusmn 4071 microgmL
y tras la uacuteltima administracioacuten obtuvimos una concentracioacuten de 8174 plusmn 4550 microgmL para
declinar a las 144 h a niveles en el orden del microgmL (Tabla 28) Es decir en los animales
enfermos la moleacutecula se comporta de manera diametralmente opuesta a los macroacutelidos
convencionales Si bien la leche de los animales con mastitis es ligeramente maacutes alcalina la
moleacutecula queda retenida en las ceacutelulas fagociacuteticas Y justamente como los animales
enfermos se caracterizan por presentar un alto CCS (gt600000) al administrar la moleacutecula
por la viacutea intracisternal se facilita el acceso directo al compartimento celular en donde la AZI
ademaacutes sufre un secuestro ioacutenico a nivel subcelular dado el pH aacutecido (65-55) Por esta
razoacuten como se puede comprobar observando la Figura 6 las concentraciones de AZI en
leche mastiacutetica superan en maacutes de diez veces a las encontradas en leche normal con un
bajo CCS
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche (Tfrac12λ) fue 5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 horas en vacas sanas y con mastitis
respectivamente Esto indica que ha pesar de sufrir una gran peacuterdida a traveacutes de los
sucesivos ordentildees AZI se elimina muy lentamente desde el compartimento blanco Esto
uacuteltimo queda corroborado con los prolongados tiempos medios de residencia obtenidos
El AUC fue 435 plusmn 56 microghrmL en animales sanos y 1534 plusmn 546 microghrmL en vacas
con mastitis arrojando diferencias muy altamente significativas y reafirmando el concepto de
atrapamiento en la glaacutendula mamaria enferma (Tabla 36)
Azitromicina demuestra a traveacutes de este estudio diversas caracteriacutesticas que la
diferencian de los macroacutelidos convencionales bajas concentraciones en sangre y muy altas
131
en otros compartimentos fundamentalmente en aquellos sitios donde se encuentra ubicado
el proceso infeccioso Las concentraciones en sangre decrecen raacutepidamente y el pasaje de
la moleacutecula hacia los tejidos perifeacutericos -como la glaacutendula mamaria- se hace raacutepidamente
donde permanece por largos periacuteodos y de donde se elimina lentamente
No cabe duda que por lo expuesto se trata de una excelente herramienta para el
tratamiento de la mastitis cliacutenica o subcliacutenica del bovino Sin embargo debe considerarse
tambieacuten que este tipo de moleacuteculas requiere de un prolongado periacuteodo de descarte de la
leche tornaacutendose en un inconveniente econoacutemico
Por uacuteltimo hay que destacar que debido a su extensa eliminacioacuten y por tratarse de
un antimicrobiano tiempo dependiente y con efecto postantibioacutetico quizaacutes no seriacutean
necesarias tres aplicaciones sucesivas como se realizoacute en este ensayo y sea efectivo un
esquema de una sola aplicacioacuten como ya se ha demostrado en algunos tratamientos de
infecciones en humanos (90 91)
132
VII6 ANAacuteLISIS FARMACOCINEacuteTICO DE AZITROMICINA LUEGO DE SUS ADMINISTRACIOacuteN INTRAMAMARIA EN VACAS LECHERAS AL MOMENTO DE SECADO SANAS Y CON MASTITIS SUBCLIacuteNICA
Algunas de las consideraciones hechas respecto de la viacutea de administracioacuten para el
estudio intramamario en lactacioacuten son tambieacuten validas para este ensayo La gran diferencia
entre ambos es que aquiacute por ser un estudio al momento del secado no hay maacutes ordentildees y
por lo tanto no hay eliminacioacuten por leche Por otro lado la inflamacioacuten que genera la
suspensioacuten brusca del ordentildee con el secado incrementa la cantidad de ceacutelulas somaacuteticas
haciendo que las diferencias que pudiesen existir por esta variable sean menores
En los tratamientos IMM administrados al momento del secado el proceso de
liberacioacuten del principio activo se prolonga temporalmente y tiene mayor influencia sobre la
forma inicial de la curva de concentracioacuten versus tiempo (12) El excipiente utilizado puede
estar compuesto por aceite vegetal o mineral La ventaja de los excipientes que contienen
aceite mineral como por ejemplo los aceites de parafina o de glicerina es que demoran la
liberacioacuten del principio activo y prolongan la permanencia del antimicrobiano en el interior de
la glaacutendula (12 112) En algunos casos los excipientes contienen otros agentes que
incrementan la permanencia como es el monoesterato de aluminio en una base oleosa (12)
Luego de la administracioacuten de jeringas IMM parte del formulado se perderaacute junto con
la leche que se extrae en los primeros ordentildeos post-tratamiento Esta perdida es
despreciable en el caso de los tratamientos hechos al secado pues las vacas son apartadas
de la rutina de ordentildeo Sin embargo con la interrupcioacuten de la rutina de ordentildeo se
desencadenan cambios fisioloacutegicos en la glaacutendula mamaria que pueden afectar a las fases
farmaceacuteutica y farmacocineacutetica
Luego del tratamiento IMM de secado la velocidad de eliminacioacuten se ve afectada por
la dosis la naturaleza del vehiacuteculo las caracteriacutesticas propias del faacutermaco el nivel de unioacuten
del antibacteriano al contenido de la glaacutendula y al tejido glandular (12 112)
En nuestro caso tras la administracioacuten intramamaria a razoacuten de 250 mg por cuarto
mamario al momento del secado las concentraciones de azitromicina en sangre fueron
detectadas desde la primera muestra obtenida a los 30 minutos post-aplicacioacuten
intracisternal A partir de la primera hora las concentraciones descendieron raacutepidamente y
entre las 24 - 36 horas dejaron en todos los animales de ser cuantificables
La Cmax en suero fue 022 plusmn 008 en vacas sanas y 021 plusmn 019 en vacas con
mastitis valores muy similares a los obtenidos luego de la administracioacuten IMM de
azitromicina en animales en lactacioacuten El pico de concentracioacuten se produjo raacutepidamente
133
(Tmax) 125 plusmn 061 y 208 plusmn 218 horas post-administracioacuten en vacas sanas y con mastitis
respectivamente y de manera similar a lo ocurrido en el ensayo en lactacioacuten
Si comparamos los valores de Cmax y Tmax en suero obtenidos por la viacutea
intramamaria respecto de los valores obtenidos tras la administracioacuten por la viacutea
intramuscular veremos que tras la administracioacuten intramamaria se alcanza una menor Cmax
pero de manera maacutes temprana La Cmax maacutes baja seguramente estaacute vinculada a una
dosiskg muy inferior en el estudio intramamario mientras que el Tmax maacutes adelantado
estariacutea vinculado a una absorcioacuten mas raacutepida desde la glaacutendula mamaria respecto de la viacutea
intramuscular
La semivida de eliminacioacuten (Tfrac12λ) fue 3473 plusmn 1096 y 1018 plusmn 477 horas para
animales sanos y con mastitis respectivamente de manera similar a lo explicado en el
estudio IMM en lactancia la semivida de eliminacioacuten por esta viacutea de administracioacuten es maacutes
corta que la obtenida tras la administracioacuten intramuscular Es importante destacar (como se
puede observar en las Tablas 37 y 38) la caracteriacutestica polifaacutesica del perfil seacuterico este
comportamiento dificultoacute bastante la estimacioacuten de la pendiente de la fase de eliminacioacuten El
tiempo medio de residencia (MRT0-tlast) fue 1509 plusmn 315 en vacas sanas y 687 plusmn 182 en
vacas con mastitis bastante menor que tras las administraciones parenterales (IM y EV)
El AUC fue 353 plusmn 128 para animales sanos y 135 plusmn 081 para las vacas con
mastitis arrojando una P de 00120 Al igual que en el ensayo durante la lactancia se
obtuvo una baja biodisponibilidad (F) 436 plusmn 152 y 114 plusmn 067 en vacas sanas y con
mastitis respectivamente Queda expuesto que en los animales enfermos el pasaje de la
moleacutecula desde la glaacutendula a sangre es muy escaso esto vuelve a corroborar el secuestro
que sufre la AZI en el oacutergano blanco
Encontramos diferencias muy significativas y altamente significativas en AUC Tfrac12λ y
MRT (Tabla 47) entre animales sanos y con mastitis al aplicar el test de diferencias de las
medias -test de t- con un limite de significancia del 5 y usando datos logotransformados
En cuanto al comportamiento de AZI en la glaacutendula mamaria tras la aplicacioacuten en el
momento del secado se midieron concentraciones en leche de 4600 plusmn 1713 y 4654 plusmn
3999 microgmL en ambos grupos experimentales Como puede observarse en las Tablas 39 y
40 se obtuvieron desviacuteos bastante grandes una explicacioacuten a esta variacioacuten es que al
momento del secado no todas las ubres presentan el mismo grado de produccioacuten el mismo
tamantildeo glandular el mismo rango de ceacutelulas somaacuteticas De manera que el antimicrobiano
se diluiraacute en diferentes voluacutemenes de secrecioacuten laacutectea y se distribuiraacute en diferentes tamantildeos
de cavidades A partir de aquiacute las concentraciones caen raacutepidamente en las primeras 12
134
horas y luego lo hacen en forma muy lenta durante las siguientes 132 horas para finalizar a
las 144 horas desde el inicio del ensayo con concentraciones promedio de 240 y 214
microgmL para vacas sanas y con mastitis respectivamente
Luego del anaacutelisis farmacocineacutetico no compartimental la semivida de declinacioacuten en
leche fue similar tanto para vacas sanas como mastiacuteticas (Tfrac12λ 1076 plusmn 2772 y 9909 plusmn
2846 horas respectivamente) pero maacutes prolongadas que durante el periacuteodo de lactacioacuten
(5967 plusmn 1248 y 4685 plusmn 2087 respectivamente) Esta es una caracteriacutestica buscada para
las formulaciones destinadas al tratamiento durante el periacuteodo de secado
El AUC fue 760 plusmn 196 microghrmL en animales sanos y 747 plusmn 223 microghrmL en las
vacas con mastitis El valor de MRT fue de 4442 plusmn 444 mLhrkg en vacas sanas y 4703 plusmn
1041 mLhrkg en vacas con mastitis
Es decir no existen diferencias entre animales sanos y con mastitis lo cual fue
corroborado con el anaacutelisis estadiacutestico que no arrojoacute diferencias significativas entre ambos
grupos experimentales (Tabla 48)
Azitromicina nuevamente mantiene su comportamiento descripto en los apartados
anteriores concentraciones seacutericas bajas y polifaacutesicas y concentraciones en leche maacutes
elevadas y sostenidas durante periacuteodos prolongados superando 4 a 6 veces el MRT y la
semivida de eliminacioacuten seacuterica De manera que insistimos en la posibilidad de considerar a
la AZI una excelente herramienta para el tratamiento y la prevencioacuten de la mastitis cliacutenica
yo subcliacutenica del bovino
Por uacuteltimo podriacuteamos mencionar que de los datos obtenidos la dosis administrada
para el secado podriacutea ser adecuada sobre todo si consideramos que AZI es un
antimicrobiano con efecto postantibiotico prolongado Por supuesto que todo esto deberiacutea
ser corroborado con estudios de eficacia a campo y de modelizacioacuten
farmacocineacuteticafarmacodinaacutemica frente a cada microorganismo susceptible
135
VII7 ESTUDIO DE PENETRACIOacuteN DE AZITROMICINA EN TEJIDOS
El estudio de penetracioacuten en tejidos fue realizado sobre 12 terneros sanos Holando
Argentino con un rango de peso entre 140 y 180 kilogramos los cuales recibieron una
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina 10 a razoacuten de 10 mgkg Posteriormente se
procedioacute al sacrificio de los animales a diferentes tiempos postratamiento para la obtencioacuten
de muestras de los siguientes tejidos hiacutegado rintildeoacuten muacutesculo grasa pulmoacuten cerebro y
testiacuteculo
El objetivo de esta prueba fue evaluar la distribucioacuten y penetracioacuten de azitromicina en
los tejidos mencionados pero por limitaciones en la disponibilidad de animales para realizar
este ensayo solo se realiza una descripcioacuten de las concentraciones encontradas ya que
para hacer un estudio de deplecioacuten se necesita una N mayor por punto y un esquema de
muestreo maacutes amplio o particular para cada tejido
Desde el primer punto de muestreo a las 12 horas postratamiento hasta las 600
horas momento en el cual se sacrificoacute el uacuteltimo animal azitromicina fue detectada y medida
en todos los tejidos analizados Esto nos indica que azitromicina se distribuye raacutepidamente
hacia los tejidos para luego experimentar un lento proceso de eliminacioacuten
Al mismo tiempo las concentraciones y el perfil de la curva en plasma siguioacute un
comportamiento similar al observado en los ensayos previos
Las concentraciones maacuteximas en los tejidos analizados fueron encontradas entre las
24 y 72 horas salvo en hiacutegado y testiacuteculo donde las maacuteximas concentraciones se
encontraron a las 240 horas Fueron muy altas en pulmoacuten rintildeoacuten y testiacuteculo y maacutes bajas en
hiacutegado muacutesculo grasa y cerebro (tablas 49 y 50)
Las mayores concentraciones encontradas fueron de 32 31 73 y 299 microggr en
testiacuteculo pulmoacuten y rintildeoacuten respectivamente y tambieacuten mantuvieron la mayor relacioacuten tejido-
plasma (57141 26223 y 11818 respectivamente) (tabla 51)
Si bien existen varios estudios que presentan concentraciones de AZI en diferentes
tejidos humanos (32 87 94) todos ellos corresponden a administraciones orales de 500 mg
y en dos tomas de 250 mg con intervalo de 12 horas y uno endovenoso (93) Ademaacutes estos
trabajos por razones obvias corresponden a biopsias realizadas al momento de una cirugiacutea
donde se toma de a un tejido por individuo o dos como maacuteximo Por otro lado el trabajo mas
completo realizado por Fould (1990) y colaboradores agrupa los resultados en
concentraciones de 02 a 1 microggr y de 1 a 9 microggr Sin embargo y al igual que lo hallado por
nosotros en terneros los tejidos con mayor concentracioacuten -1 a 9 microggr- fueron pulmoacuten y
136
testiacuteculo ademaacutes de proacutestata ovarios trompas de Falopio uacutetero y tonsilas y las
concentraciones mas bajas -02 a 1 microggr- fueron halladas en muacutesculo grasa y hueso (ver
anexos 87)
Caacuterceles y colaboradores en un estudio de disposicioacuten tisular en conejos tras la
administracioacuten intramuscular de 10 mgkg encontraron concentraciones altas en rintildeoacuten
pulmoacuten bazo y corazoacuten mientras que en bilis fueron muy altas y en muacutesculo encontraron
concentraciones bastante bajas (52)
Si bien hay diferencias en los disentildeos y esquemas de tratamiento tanto en el hombre
como en conejos asiacute como en nuestro ensayo en estos trabajos los resultados encontrados
son coincidentes en cuanto a cuales son los tejidos donde azitromicina penetra con mayor o
menor magnitud
Por uacuteltimo y en virtud de estos resultados podriacuteamos hipotetizar que una sola
aplicacioacuten intramuscular de azitromicina a razoacuten de 10 mgkg podriacutea ser adecuada para el
tratamiento de las infecciones producidas en tejidos blandos por geacutermenes sensibles a la
azitromicina Estos hallazgos dieron lugar al disentildeo de nuevos estudios in vitro in vivo y ex
vivo a los efectos de lograr profundizar el conocimiento a cerca de la efectividad de la
azitromicina en diferentes modelos de infeccioacuten y diferentes especies animales
137
VIII CONCLUSIONES
138
VIII1 COMENTARIOS ACERCA DE LAS HIPOacuteTESIS PLANTEADAS A manera de epiacutelogo creemos conveniente presentar algunos comentarios acerca de
las hipoacutetesis que se plantearon al comienzo del trabajo de tesis
En primer lugar se planteoacute la hipoacutetesis que azitromicina ndashal igual que la mayoriacutea de
los macroacutelidos- es una droga que posee un gran volumen de distribucioacuten con una buena
penetracioacuten en la glaacutendula mamaria alcanzando altas concentraciones en leche
Esta hipoacutetesis se confirma a traveacutes de los resultados obtenidos de los estudios
intravenoso e intramuscular donde la llegada de AZI a leche fue muy raacutepida y en
concentraciones que superaron 9 veces a las halladas en sangre para el caso de la
administracioacuten intravenosa (comparando los niveles en la cola de la curva) y 5 veces superoacute
la Cmax en leche a la seacuterica en el ensayo intramuscular
La segunda Hipoacutetesis planteaba que en animales en lactacioacuten la secrecioacuten laacutectea es
una viacutea de eliminacioacuten importante para la azitromicina a pesar de que normalmente se
elimina por viacutea biliar principalmente y en menor grado por orina
Esta hipoacutetesis tambieacuten fue confirmada por los ensayos intravenoso e intramuscular a
traveacutes de las persistentes concentraciones encontradas en leche a lo largo del muestreo
cineacutetico realizado
Nuestra tercera hipoacutetesis planteaba que azitromicina se distribuye ampliamente hacia
tejidos y fluidos bioloacutegicos
Al igual que las hipoacutetesis anteriores esta tambieacuten fue confirmada tanto para leche y
glaacutendula mamaria luego de los ensayos intravenoso e intramuscular como para otros
oacuterganos de la economiacutea animal dadas las altas concentraciones de AZI encontradas en
diferentes tejidos y fluidos luego del estudio realizado en terneros
La cuarta hipoacutetesis planteaba que las concentraciones de azitromicina en leche son
maacutes elevadas en animales sanos que en animales mastiacuteticos en funcioacuten de los cambios en
el pH de la leche
Esta hipoacutetesis fue refutada dado que azitromicina es un macroacutelido de uacuteltima
generacioacuten que se caracteriza por presentar una gran facilidad para penetrar al interior
celular en donde queda secuestrada justamente al encontrarse frente a un pH aacutecido De
manera que en los animales mastiacuteticos con alto conteo de ceacutelulas somaacuteticas las
139
concentraciones de AZI en leche superaron varias veces a las alcanzadas en animales
sanos
La quinta y uacuteltima hipoacutetesis planteaba que luego de la administracioacuten intramamaria
de azitromicina esta droga atraviesa la barrera sangre leche encontraacutendose tambieacuten en
suero
Esta hipoacutetesis fue confirmada con los dos ensayos intramamarios donde las
concentraciones en sangre -si bien fueron de corta duracioacuten respecto de otras viacuteas- fueron
claramente medibles en todos los animales y con un comportamiento farmacocineacutetico claro y
similar entre ellos VIII2 CONCLUSIONES FINALES
Azitromicina demostroacute a traveacutes de los diferentes estudios realizados en este trabajo
el comportamiento diferencial con respecto al resto de los macroacutelidos utilizados en medicina
veterinaria La droga siempre dio lugar a concentraciones bajas en sangre y altas en otros
compartimentos Presentoacute muchas similitudes respecto de su comportamiento en el hombre
y diferentes especies animales evaluadas por otros autores con concentraciones en sangre
que bajan raacutepidamente y con un pasaje raacutepido de la moleacutecula hacia otros tejidos -como la
glaacutendula mamaria- en donde permanece por largos periacuteodos de tiempo y sufre una lenta
eliminacioacuten
La administracioacuten de AZI en bovinos por las viacuteas IV e IM demuestra y confirma que
AZI se distribuye raacutepidamente desde sangre hacia glaacutendula mamaria siendo sus
concentraciones en suero muy bajas respecto de las concentraciones alcanzadas en leche
comportamiento que se dioacute tanto en animales sanos como en animales con mastitis Al
mismo tiempo los trabajos realizados por la viacutea intramamaria demuestran que AZI tambieacuten
se absorbe por esta viacutea aunque en forma escasa considerando la concentraciones
alcanzadas y el tiempo de residencia El hecho de que las concentraciones de AZI en leche
sean mucho maacutes altas que las encontradas en plasma se debe a su gran lipofilicidad y
volumen de distribucioacuten
No cabe duda que por su comportamiento farmacocineacutetico por cualquiera de las viacuteas
estudiadas y su gran penetracioacuten tisular AZI seriacutea una excelente herramienta para el
tratamiento no solo de la mastitis sino tambieacuten de otras infecciones que afectan a tejidos
blandos del bovino
140
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151
X ANEXOS
152
PARAacuteMETROS FARMACOCINEacuteTICOS REPORTADOS POR OTROS AUTORES
Parametros Peters Foulds Pfizer Lucas Suarez Carceles Carceles Carceles Referencia 32 87 93 84 85 78 86 52
Especie Human Human Human Bov potrillo cabra oveja conejo
Via oral Oral IV Im Oral IV IM IV IM IV IM
Dosis 500mg 500mg 1000-4000 10mgkg 10mgkg 20 mgkg 20 mgkg 10mgkg
Cl 610 3295+-1255 850 520
λz (1h)
tfrac12λz (h) 10-40 8-40 14+-11 257+-15 325 452 477 612 218 231
Tmax (h) 25 2 124
Cmax (microgml) 04 04 363+-16 018 064 126
AUC0-tlas (h microgml) 339 339 96+-
48 339+-123 388 36
F () 37 37 922 941
Vd 23-30 333 345 345
MRT0-tlast (h) 2674+-16 401 603 401 603
153
CONCENTRACIONES EN TEJIDOS REPORTADAS POR OTROS AUTORES
Valores expresados en microgmL o en microggr
Paraacutemetros Pfizer Lurev Suarez Foulds Peters Carceles Turic Referencia 93 91 85 87 32 52
Especie Human Human Potrillo Human Human conejo Terneros Viacutea de administracioacuten oral oral Oral oral oral IM IM
Dosis 500mg 500mg 10mgkg 500mg 500mg 10mgkg 10mgkg
Tiempo Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax Cmax
Piel 04
Fluido pulmonar 100 1 a 9 156 ndash 218 Epitelio bronquioalveolar 4992 +-
2694 1 a 9 474
Hiacutegado 3667 408
Muacutesculo 02 a 1 298 324
Corazoacuten 1983
Rintildeoacuten 843 2990
Grasa 02 a 1 240
Pulmoacuten 40 1 a 9 39 1001 3173
Bazo 2248
Tonsilas 45 1 a 9
Cerebro 061
Uacutetero 28 1 a 9
Ovarios 1 a 9 Trompas de Fallopio 1 a 9
Proacutestata 1 a 9
Testiacuteculo 1 a 9 3200
Corion 46
Hueso 02 a 1
Bilis 3975
Esputo 29
