CONTROLLI MICROBIOLOGICI IN UN PROCESSO PRODUTTIVO GMP · 2020. 7. 16. · processo produttivo...

CONTROLLI MICROBIOLOGICI IN UN PROCESSO PRODUTTIVO E

NEL PRODOTTO FINITO

1

1. Molteplicità dei processi produttivi

2. Complessità formulativa

3. Varietà dei prodotti

4. Elevato “Turn-Over” dei prodotti

5. Elevato “Turn-Over” dei componenti

COMPLESSITA’ DEL SETTORE COSMETICO

PROCESSO PRODUTTIVO

MATERIE PRIME ACQUA PACKAGING

MAGAZZINO SERBATOI IMPIANTO

FABBRICAZIONE STOCCAGGIO

PRODOTTO SFUSO

CONFEZIONAMENTO STOCCAGGIO

PRODOTTO

FINITO

MESCOLATORI SERBATOI LINEE

RIEMPIMENTO

Giornata del 06/04/2019

FONTI DI CONTAMINAZIONE

MATERIE PRIME

ACQUA ACQUOSE

PRODOTTO

NON ACQUOSE

PROCESSI DI

LAVORAZIONE

AMBIENT

E

PERSONALE

IMPIANTI INADEGUATI

MATERIALE DI CONFEZIONAMENTO


Le officine di produzione devono

avere un sufficiente

approvvigionamento d’acqua da

utilizzare per il ciclo produttivo del

prodotto cosmetico e per la pulizia

dei locali, attrezzature ed utensili.

5

ACQUA DI PROCESSO


L’acqua prima dell’utilizzo deve essere

opportunamente controllata al fine di verificarne

l’adeguatezza chimico-fisica e microbiologica

agli scopi a cui è destinata. Nel caso di

trattamenti in impianti di deionizzazione,

demineralizzazione, addolcimento e

distillazione, questi devono essere dotati di

adeguati sistemi di abbattimento della carica

microbica a monte del trattamento

6

ACQUA DI PROCESSO


Quando coesistono reti di distribuzione

interna per acque potabili e non potabili

queste devono essere:

• mantenute separate e indipendenti

• rese riconoscibili, in modo da evitare

possibilità di miscelazione

ACQUA DI PROCESSO


7

8

1. Qualità microbiologica

2. Provenienza

3. Tipologia di trattamento chimico e

microbiologico

4. Caratteristiche impiantistiche (materiali di

costruzione e lay-out)

5. Gestione dell’impianto dal punto di vista

igienico

ACQUA DI PROCESSO


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ACQUA DI PROCESSO

MODALITA’ DI CONTROLLO

• Frequenza Giornaliera/settimanale/altro

• Modalità di campionamento (manualità

asettica)

• personale addestrato

• Numero di campioni da tutte le utenze

• Prelievi da tutti gli eventuali punti critici

dell’impianto


MODALITA’ DI CONTROLLO Metodologia di analisi

Analisi rapide dopo il prelievo

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• Metodi comprovati o interni (validazione)

Metodiche ISO o Farmacopea

• Valutazione dei risultati

• Adottare limiti di attenzione inferiori alla

specifica ed intervenire immediatamente

quando superati


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L’acqua di partenza deve essere conforme al

consumo umano (criteri di purezza microbiologica

dalla Farmacopea Europea)

Controlli da effettuare Limiti di accettabilità

Descrizione Limpido, chiaro, inodore

pH 5,0-7,0

Conducibilità max 10 •S cm -1

Solidi totali 0,001% max

Microbiologico FU non più di 100 UFC/ml per

filtrazione su membrana

EP Under normal condition an

appropriate action level

100 CFU/ml by filtration on

membrane

ACQUA DI PROCESSO

SPECIFICHE


QUALITA’ MICROBIOLOGICA

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• Nella valutazione del rischio per determinare

frequenza e tipologia di campionamento

bisogna tenere conto dei seguenti aspetti:

• Natura chimica e contenuto in acqua

• Processo produttivo originario

• Modalità di utilizzo in fabbrica

MATERIE PRIME


Classificazione in base a natura chimica

e contenuto in acqua

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MATERIE PRIME

Rischio (PXG) Tipologia materia prima

Inquinabilità alta Prodotti di origine naturale in soluzione acquosa, Tensioattivi in soluzione (30%), Umettanti in soluzione

Inquinabilità media Polveri organiche (animali, vegetali, sintesi), Polveri inorganiche minerali

Inquinabilità bassa Emollienti Sostanze grasse Cere, Olii essenziali

Inquinabilità assente Solventi Propellenti ,Tensioattivi concentrati (>70%), Umettanti concentrati


Correlazione tra classi di rischio, frequenza, controlli e azioni

Le classi di rischio sono correlate alla frequenza dei controlli e alla

specifica microbiologica

Classe 1 2 3 4

Rischio Alto Medio Basso Assente

Specifica

microbiologica

≤10ufc/g

Microorganismi

specifici assenti

≤100ufc/g

Microorganismi

specifici assenti

≤100ufc/g Non richiesta

Rapporto di analisi

del fornitore

Per ogni lotto Per ogni lotto Non necessario Non richiesto

Frequenza dei

controlli interni

Tutti i lott i di

ogni fornitura

Tutti i lott i di ogni

fornitura

1 fornitura ogni 5 Nessun controllo

Numerosità dei

campioni

Programma di

campionamento

normale

Programma di

campionamento

ridotto

1 campione per

lotto

/

Soglia di allarme

per valutazioni MBL

>10 e <30

ufc/g

>50 e <100

ufc/g

>50 e <100 ufc/g /

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MATERIE PRIME


La contaminazione microbica è dovuta

principalmente a due fattori:

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• contaminazione diretta da parte di acqua e MP fuori

controllo microbiologico

• contaminazione indiretta da parte di agenti microbici

aerodispersi. La sorgente di contaminazione è

rappresentata soprattutto dall’uomo e dai sistemi di

ventilazione.

MONITORAGGIO AMBIENTALE


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• Per garantire condizioni di sicurezza è quindi necessario

effettuare controlli sistematici su aria e superfici degli

ambienti più a rischio.

• Valutazione del rischio su impianti, attrezzature e ambienti

• Sulla base di tali considerazioni si è andato sviluppando

nel tempo il concetto di MMA (Monitoraggio

Microbiologico Ambientale), un sistema che ha lo scopo

di quantificare la carica microbica in un ambiente

confinato.



1. Il controllo dell’aria

2. Il controllo delle superfici

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Due diverse tipologie di campionamenti

• CAMPIONAMENTO PASSIVO

• CAMPIONAMENTO ATTIVO


CONTROLLO DELLE SUPERFICI


METODO: Si sfrega un tampone sterile

pre-umidificato su una superficie ben

definita da campionare (tipicamente

10x10 cm2)


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CONTROLLO DELL’ARIA


METODO:

• Esposizione piastre in base a mappatura

(rischio esposizione)

• SAS (campionatori d’aria)


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Limiti EU GMP:

20

Aria Sedimentazione:

100 CFU/piastra/4h esposizione

50 CFU/25 cm2 superfici


Aria Dinamico: 200 CFU/m3

LIMITI INDICATIVI DA «CALARE»

NELLA REALTA’ AZIENDALE


Il MMA NON è uno strumento per conoscere

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• esattamente la quantità e la tipologia dei microrganismi presenti nell’ambiente produttivo

• La sensibilità delle tecniche di monitoraggio è estremamente bassa.

• Non è possibile monitorare ovunque e in ogni momento: ciò che possiamo fare è “scattare fotografie” (più o meno aderenti alla realtà).



• (di)mostrare il sistema sotto controllo;

• I dati ambientali forniscono la possibilità di una valutazione continua della qualità delle aree produttive;

• I livelli di allerta/azione e l’analisi dei trend possono aiutare nel reagire in maniera (relativamente) tempestiva a deviazioni del sistema dallo stato di controllo;

• I dati ambientali supportano la convalida delle SOP di pulizia e disinfezione e la correttezza delle operazioni pianificate.

Il MMA è un eccellente strumento per mantenere e



QUALITA’ MICROBIOLOGICA

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1. Valutare il rischio microbiologico della

formulazione

2. Stabilire la Categorie di appartenenza

microbiologica secondo gli Standard

Internazionali

3. Definire le formulazioni a basso rischio

microbiologico

SEMILAVORATI E PRODOTTI FINITI



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• Frequenza: Ogni lotto

• Modalità di campionamento: personale

addestrato

• Numero di campioni: Dipende dalla grandezza

del lotto




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• Metodologia di analisi

• Metodi comprovati o interni (validazione) per

semilavorati

• Metodiche ISO o ISTISAN per Prodotti Finiti

• Valutazione dei risultati

• Adottare limiti di attenzione inferiori alla

specifica ed intervenire immediatamente

quando superati



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• Divide i prodotti finiti in due categorie:

• Categoria 1:

- prodotti per bambini sotto i 3 anni

- prodotti da usarsi sul contorno occhi

- prodotti da usarsi sulle mucose

• Categoria 2: tutti gli altri

The SCCS’S Notes of Guidance for the testing of cosmetic substances and their safety evaluation 8th revision 2012 -

SCCS/1501/12

E UNI EN ISO 17516:2015


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LIMITI QUALITATIVI E QUANTITATIVI The SCCS’S Notes of Guidance

• Carica microbica aerobia mesofila totale

Cat. 1

Cat. 2 CMT ≤ 102 Ufc/g o ml di prodotto

CMT ≤ 103 Ufc/g o ml di prodotto

• Microrganismi patogeni ricercati:

- Pseudomonas aeruginosa

- Staphylococcus aureus

- Candida albicans

- Cat. 1 assenti su 1g o ml di prodotto

- Cat. 2 assenti su 0,1g o ml di prodotto

E’ necessario analizzare ogni lotto di prodotto finito che entra nel mercato.


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LIMITI QUALITATIVI E QUANTITATIVI UNI EN ISO 17516:2015

• Carica microbica aerobia mesofila totale

Cat. 1

Cat. 2



• Microrganismi patogeni che devono essere assenti per tutti i prodotti su 1g o 1ml:

- Pseudomonas aeruginosa

- Staphylococcus aureus

- Candida albicans

- Escherichia coli

Microrganismi aspecifici possono essere presenti, entro certi limiti, ma non devono essere in grado di proliferare all’interno del prodotto.


• UNI EN ISO 18415 Cosmetics – Microbiology - Detection of specified and non-specified microorganisms

• UNI EN ISO 21149 Cosmetics – Microbiology - Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria

• UNI EN ISO 16212 Cosmetics – Microbiology - Enumeration of yeast and mould

• UNI EN ISO 22718 Cosmetics – Microbiology – Detection of Staphylococcus aureus

• UNI EN ISO 22717 Cosmetics – Microbiology – Detection of Pseudomonas aeruginosa

• UNI EN ISO 21150 Cosmetics – Microbiology – Detection of Escherichia coli

• UNI EN ISO 18416 Cosmetics – Microbiology – Detection of Candida albicans

• ……

DALLA BIBLIOGRAFIA


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Analisi microbiologiche dei prodotti cosmetici:

procedure e metodi di riferimento

Dalla PREMESSA:

• …… metodi di analisi che i laboratori pubblici operanti nel settore possono impiegare per i controlli delle caratteristiche di sicurezza microbiologica dei cosmetici.

• …. disporre di metodiche omogenee e confrontabili sul territorio nazionale e che, nello stesso tempo, diano le dovute garanzie di qualità del dato analitico, ……

• …. procedure analitiche specificatamente elaborate per i

prodotti cosmetici da enti di standardizzazione.

• …. sono riportati anche criteri di buone pratiche di laboratorio per l’assicurazione di qualità del dato.

Rapporto ISTISAN 13/15


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• Determinazione e conteggio dei batteri vitali mesofili aerobi

• Determinazione e conteggio di funghi e lieviti

• Determinazione di Pseudomonas aeruginosa

• Determinazione di Staphylococcus aureus

• Determinazione di Candida albicans

• Determinazione di Escherichia coli

ANALISI DA EFFETTUARE

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• Procedura in linea con la norma UNI EN ISO 21149:2009

• Tre metodologie possibili:

- Conteggio su agar (metodo quantitativo)

- Filtrazione su membrana (metodo quantitativo)

- Ricerca dei batteri tramite arricchimento (metodo qualitativo)

DETERMINAZIONE E CONTEGGIO DI BATTERI VITALI

MESOFILI AEROBI


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• Sospensione primaria:

1g o 1ml prodotto +

9ml diluente/neutralizzante

• Entro 45 minuti semina in terreno di coltura

- Inclusione in agar: semina di 1ml di sospensione primaria in 15-20ml di TSA

- Semina su agar: semina di 0,1ml di sospensione primaria su piastra di TSA

- Filtrazione su membrana: filtrare la sospensione primaria su filtro con pori di diametro da 0,45 µm e lavare la membrana con soluzione sterile

• Incubazionea 32,5°C ± 2,5°C per 72h ± 6h

METODO QUANTITATIVO


33

Espressione dei risultati:

N = numero di microrganismi presenti nel campione S calcolati in base all’equazione:

N = m / (V x d)

Dove:

m= media aritmetica delle conte ottenute dai duplicati V = volume

di inoculo di ogni piastra in ml

d = fattore di diluizione Se il prodotto non è miscibile in acqua, deve essere solubilizzato prima dell’analisi con un agente solubilizzante (p.es. polisorbato 80); annotare la diluizione eseguita.

Risultato:

Batteri vitali mesofili aerobi per g o ml del campione = N/S

Dove:

S = peso o volume esatto del campione con il quale era stata preparata la sospensione primaria

METODO QUANTITATIVO RISULTATI


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DETERMINAZIONE E CONTEGGIO DI FUNGHI E LIEVITI

Procedura in linea con la norma UNI EN ISO 16212

- Due metodologie possibili:

- Conteggio su agar (metodo quantitativo);

- Filtrazione su membrana (metodo quantitativo)


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• Sospensione primaria:

1 g o 1 ml prodotto +

9 ml diluente/neutralizzante

• Entro 45 minuti semina in terreno di coltura

- Inclusione in agar: semina di 1ml di sospensione primaria in 15-20ml di SDA + cloramfenicolo

- Semina su agar: semina di 0,1ml di sospensione primaria su piastra di SDA + cloramfenicolo

- Filtrazione su membrana: filtrare la sospensione primaria su filtro con pori di diametro da 0,45 µm e lavare la membrana con soluzione sterile

• Incubazionea 25°C ± 1°C per 3 – 5gg

FUNGHI E LIEVITI


36

• Espressione dei risultati:

N = numero di microrganismi presenti nel campione S calcolati in base all’equazione:

N = m / (V x d)

Dove:

m= media aritmetica delle conte ottenute dai duplicati V

= volume di inoculo di ogni piastra in ml

d = fattore di diluizione

Risultato:

Funghi per g o ml del campione = N/S

Dove:

S = peso o volume esatto del campione con il quale era stata preparata la sospensione primaria

FUNGHI E LIEVITI


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ENUMERAZIONE DI BATTERI PATOGENI

Pseudomonas aeurginosa: Procedura in linea con la norma UNI

EN ISO 22717;

Staphylocuccus aureus: Procedura in linea con la norma UNI EN

ISO 22718;

Candida albicans: Procedura in linea con la norma UNI EN ISO

18416;

Escherichia coli: Procedura in linea con la norma UNI EN ISO

21150.


38

CRITERI DI ACCETTABILITA’ MICROBIOLOGICA

NEL PRODOTTO COSMETICO

• Cat. 1 CMT ≤ 102 UFC/g o ml di prodotto

• Cat. 2 CMT ≤ 103 UFC/g o ml di prodotto

• Assenza patogeni


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GRAZIE PER L’ATTENZIONE

Giornata del 06/04/2019 40

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