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Citogenetica I

La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l’analisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith

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1-3 gruppo A 4-5 gruppo B

X-6-12 gruppo C

13-15 gruppo D 16-18 gruppo E

19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G

Cariotipi a confronto

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G-bande

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Selezione delle metafasi

Ottimama…..

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Selezione delle metafasi

Puo’essere anche cosi’...Cromosomi non ben riconoscibili, difficili anche dacontare.Scartare! (potendo)

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.. O cosi’

Selezione delle metafasi

Troppo contrattipero’ si puo’ usareper contarli.Scartare! (potendo)

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Selezione delle metafasi

Sufficiente Si possono contarePuo’ essere utile peranalizzare i cromosominon sovrapposti

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Discreta Si possono contare, e anchese ci sono alcunesovrapposizioni,si possono analizzare

Selezione delle metafasi

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Selezione delle metafasi Buona

Si possono contare, e anchese ci sono alcunesovrapposizioni,la morfologia deicromosomi e’buona

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1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO CROMOSOMICO

2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA’

3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE

Come si fa il cariotipo?

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10

1611

9

46

Fare il cariotipo

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CARIOTIPO IN QM (indicare il bandeggio)

Cariotipo ordinato

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Diagramma

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Diagramma

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46,XX - cariotipo normale Femminile

46,XY - cariotipo normale Maschile

Questo modo di scrivere ci da’ due informazioni:- numero totale dei cromosomi (46)- sesso dell’organismo

47,XY,+21Maschio con 47 cromosomi (invece di 46) ed un cromosoma 21 in piu’ (sindrome di Down)

46,XX,del(14)(q23) del=delezione

46,XY,dup(14)(q22q25) dup= duplicazione

46,XX,r(7)(p22q36) r=ring (cromosoma ad anello)

Terminologia

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FISH

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doppia elicadi DNA

A T C G G T A T C C T AT A G G C A T A G G A T

osservazionedel vetrino

A T C G G T A T C C T A

T A G G C A T A G G A T

denaturazione

cromosomasul vetrino

sintesi di una sonda complementare marcata con un fluorocromo

ibridazione della sonda suicromosomi denaturati sul vetrino

AT C G G

TAT C C T A

A T C G G T A T C C T AT A G G C A T A G G A TTT A GG C A T A G G A

FISH

A T C G G T A T C C T AT A GG C A T A G G A T

A T C G G T A T C C T A

T A GG C A T A G G A T

denaturazione

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Principio della fluorescenza

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filtro di emissione

specchio dicroico

filtro

di e

ccitazio

ne

obiettivo/condensatore

fotografiaCCD camera

Lampada a vaporidi mercurio

Elaborazione alcomputer

FISH : microscopio a fluorescenza

Osservazioneal microscopio

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Cromosomi 1. denaturati2. colorati con DAPI

FISH: metafase in DAPI

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Sonde puntiformifluorescenti

FISH: segnali

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Sovrapposizione dell’immagine della sonda sull’immagine del DAPI

FISH: merge

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SONDE PER FISH

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DAPIDAPI

SONDASONDA

MERGEMERGE

WCP

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DAPIDAPI

SONDASONDA

MERGEMERGE

PCP

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2 SONDE PUNTIFORMI 2 SONDE PUNTIFORMI 3 SONDE PUNTIFORMI 3 SONDE PUNTIFORMI

COIBRIDAZIONI

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Duplicazione braccio corto del cromosoma Y

crom Ynormale

Yp duplicato

Alfoide crom Y

SRY

46X -Y + mar(dupYp)

Individuo di sesso maschile azospermico

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Inversione pericentrica:4(inv)

liquido amniotico

4 inv(4)

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Traslocazione 1/15 in diagnosi prenatale

Prelievo di villi corialiSangue periferico madre

1 1/15 15/1 1546,XY,der(1)t(1;15)(1pter,15q23)matishder(1)t(1p;15q)(p36.33;q24.2)mat(pcp1p36;pcp15q)

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Traslocazione(3/22)

3 3/22 22/3 22

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Traslocazione 5/11

Liquido amnioticoSangue periferico padre

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Traslocazione 5/11

5 5/11 11/5 11

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insinv6/7

6 6del 7/6 y

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isocromosoma 21

21 isodic21