TEST FARMACI ANSIOLITICI E TEST FARMACI ANSIOLITICI E BENZODIAZEPINEBENZODIAZEPINE

I livelli di ansia sono alterati o aumentati da:

•Specifici stimoli

•Attesa di eventi inevitabili

•Ambiente nuovo

•Incertezza

•Incapacità di esprimere impulsi o desideri

•Creazione di un conflitto che blocca il comportamento

Paura

Conflitto

FARMACI ANSIOLITICIFARMACI ANSIOLITICI

Interazione benzodiazepine-GABA-canale dello ione cloruro

TEST PER LE BENZODIAZEPINE

1) Binding

2) Antagonismo aggressività

TEST PER GLI ANSIOLITICI

1) Gabbia a due comparti (evitamento)

2) Labirinto a quattro bracci

3) Test del conflitto

4) Interazione sociale

5) Test della discriminazione (pentilenetetrazolo)

BINDING

KD - GABA

KD + GABA

GABA ratio

Advantages and disavantages of ethologicaland conditioned models I

Advantages

-Often quick and easy to use- Equipement is inexpensive-Training of animals is notrequired- Natural stimuli are used

Disavantages-Anxiolytic and anxiogenic effects are confounded by changes in motor activity- Baseline measures are subject tomarked day-to-day variation-Animal cannot be reused-Effects of chronic drug administrationcannot be investigated becouseexploratory behaviour habituates-Effects often cannot be reproducedwithin and between laboratories

Ethological

Advantages and disavantages of conditionedand ethological models II

Advantages

-Baseline measures are consistent and reproducible withinand between laboratories-Animals can be reused- Good predictor of a drug’s anxiolitic potential in humans

Disavantages

-Animals have undergo long training periods-Food and water deprivation is required–Only benzodiazepines have consistenteffects- Sedation and muscle relaxation can affect the animal’s ability to performthe behaviour

Conditioned model

INIBIZIONE DELL’EVITAMENTO

PROCEDIMENTO

Durante i primi due giorni del test gli animali vengono lasciatiall’interno dello shuttle-box per 20 minuti, per consentire loro l’ambientamento.

I tre giorni successivi l’animale viene testato sottoponendolo ad un training di 80, 40, 20 trial per un tempo totale di 40, 20, 10 minuti rispettivamente. La durata de singolo trial è di 6.5 sec. così suddivisa:

•Stimolo acustico/luminoso 6,5 sec

•Stimolo elettrico ultimi 3 sec dell’intensità di 1 mA.

Ogni trial è distanziato dal precedente di 30 sec e per ottenere una migliore risposta si usano due stimoli (sonoro e visivo) contemporaneamente.

Schema riassuntivo

1°giorno: 20 min di adattamento 2°giorno:20 min di adattamento 3°giorno:80 trial per 20 min di test

4°giorno:40 trial per 20 min di test 5°giorno 20 trial per 10 min di test

Comportamenti registrati:

Stop = numero di shock subiti e nessun passaggio del

ratto durante stimolo

Fuga = numero di passaggi in presenza di shock

Evitamento = numero di passaggi in presenza di solo

stimolo acustico/visivo

Attraversamenti = attraversamenti spontanei durante

test

Latenza = tempo latenza (sec) tra stimolo

acustico/visivo e passaggio

Con BZ diminuisce evitamento e aumenta stop

LABIRINTO A QUATTRO BRACCI

TEST DEL CONFLITTO (TEST DI VOGEL)

TEST DEL CONFLITTO (TEST DI GELLER)

30

20

10

0

30

20

10

0N°DELLE S

CO

SSE R

ICEVUTE

TEST ANTICONFLITTUALE (1 mA) TEST PROCONFLITTUALE (0.3 mA)

CONTROLLO

DIAZEPAM

FG-7142

Dose-response effect of chloriazepoxide on rewarded, time-out and punished responding. The highest doses of benzodiazepine depressconditioned respondig. 10 mg/Kg of the drug increases responding in allthree sectors of the schedule but punished responding increases most.

Rew = reward To = time-out c = conflict

EFFECTIVENESS OF SOME PSYCHOTROPIC DRUGS IN THE CONFLICT TEST

ACTIVE INACTIVE

BENZODIAZEPINES

MEPROBAMATE

BARBITURES

ETHANOL (?)

MORPHINE

AMPHETAMINE

CHLORPROMAZINE

HALOPERIDOL

IMIPRAMINE

IPRONIAZID

TEST DELL’ INTERAZIONESOCIALE

1. Esplorazione del partner 2. Ispezione ano-genitale3. Monta 4. Autopulizia

5. Morsicature 6. Inseguimento 7. Scalciamento8. Collutazione

400

300

200

0

100

Low light Low light High lightFamiliar Unfamiliar Unfamiliar

Mean time spent in active social interaction

The mean time spent in active social interaction for rats tested in 3 conditions, after 5 days of diazepam administration (0.5 mg/Kg) and after 5 days of water injection.

Water

Diazepam 0.5 mg/Kg

100

200

300

400

500

600

0

low light low light high lightfamiliar unfamiliar unfamiliar

ACUTEACUTEPHENOBARBITONEPHENOBARBITONE

CHRONIC CHRONIC PHENOBARBITONEPHENOBARBITONE

low light low light high light low light low light high light

MEPROBAMATEMEPROBAMATE

familiar familiar familiar familiarunfamiliar unfamiliar

SEC

The left-hand histogram shows the mean time spent in active social interaction by rats given an acute dose of sodiumphenobarbitone, and by a group of saline injected control rats. Each point is the mean score of six pairs of rats, and indipendent groups of rats were tested in 3 different conditions.The central panel shows the results for rats treated with s. phenobarbitone for 5 days and for rats given 5 days of saline injections. The right hand histogram shows the results for ratsgiven an acute dose of meprobamate and control rats givenpropylene glycol injections.

Sodium phenobarbitone25 mg /Kg

Sodium phenobarbitone35 mg /Kg

Saline

Sodium phenobarbitone25 mg /Kg

Saline

SalineMeprobamate

0

500

400

300

200

100

SEC

SALINE INJECTIONS

CAFFEINE 20mg/Kg

AMPHETAMINE 2 mg/Kg

MEAN TIME SPENT IN ACTIVE SOCIAL INTERACTION, IN 3 TEST CONDITIONS, FOR RATS INJECTED WITH CAFFEINE CITRATE (20 mg/Kg), AMPHETAMINE (2 mg/Kg) AND FOR SALINE INJECTION CONTROLS

MEAN TIME SPENT IN ACTIVE SOCIAL INTERACTION

Low light Low light High light

familiar unfamiliar unfamiliar

TEST DELLA DISCRIMINAZIONE

Test della discriminazioneTest della discriminazione

AddestramentoAddestramento

Veicolo - leva A H2O / cibo

Farmaco A - leva B H2O / cibo

Farmaco B - leva B H2O / cibo

Farmaco C - leva A H2O / cibo

Farmaco B = farmaco A Farmaco C diverso da farmaco B

EsperimentoEsperimento