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Estrazione del DNA dal lievito di birra

Materiale occorrente:• cucchiaiodalaboratorio;• beutada100ml;• spatola;• spruzzetta.

reattivi:• lievitodibirra;• detersivoliquido;• unkiwi;• alcoletilico(etanolo);• clorurodisodio.

Pericoli:• L’alcolèunasostanzainfiammabileepertantobisognatenerlolontanodallefiamme.

PrinciPioLacelluladellievitoèunacellulaeucariotaedhaunamembranaplasmatica,compostainlargapartedafosfolipidi.IlDNAdellievitoècontenutonelnucleocompostodafo-sfolipidi.PerestrarreilDNAoccorrerompereleduemembrane.Alloscoposiimpiegaildetergente.QuandoessovieneacontattodellamembranafosfolipidicaladestabilizzadistruggendolaepermettendoalDNAdi fuoriuscire. IlDNAfuoriuscitoèunitoalleproteineistoniche.PerliberareilDNAdalleproteineistonichesiimpiegaunenzimaproteolitico che le idrolizza. Infineper far raccogliere i cristalli delDNAsi impiegal’etanolocheriducelasolubilitàdelDNA.Nell’esperimentoverràestrattoilDNAdallecelluleeucariotedellievitodibirraSaccharomycescerevisiae.L’estrazioneavverràinduefasi:nellaprimasiavràlalisi(rottura)dellecellulepermezzodell’utilizzodiundetergenteperipiatti.InoltreildetersivoeliminaunapartedimaterialeproteicolegatoalDNA.Siutilizzapoiunenzimaproteolitico,checatalizzal’idrolisideipeptidi.Alloscoposiutilizzadelsuccodikiwi.SiestraeinfineilDNAutilizzandoetanolofreddo.

MetodicaSiprelevauncucchiaiodilievitoelosiriponenellabeuta.Successivamentesiaggiun-gonocirca50millilitridiacquadistillata.Siagitalentamente,perevitarelaformazio-nedischiuma,ottenendocosìunasospensione.AquestopuntosiaggiungeunapuntadispatoladiclorurodisodiocheneutralizzalecarichenegativedeigruppifosforicidelDNA.Ilsaleserveinoltreadassorbire,percoordinazione,l’acquachecircondaladoppiaelicadelDNA.Siaggiungepoiuncucchiaiodidetergenteliquidoperpiattiesiagitalentamenteperevitarelaformazionedischiuma.Successivamentesiaggiungo-no20millilitridisuccodikiwichecontienel’enzimaproteoliticoelosilasciareagireper30minuti.L’ultimafasedell’esperienzaprevedel’aggiuntadialcoletilicofreddoalla temperaturadi4°C(la temperaturadeicomuni frigoriferi).Quandosiaggiun-ge l’alcolbisognaavere l’accortezzadieseguire l’azionemolto lentamente inmododafarlostratificaresulliquidoacquoso.Perottenerequestorisultatoèconsigliabileoperareconuncontagocceeinclinarelabeutadurantel’operazione.DopoqualcheminutonellafasealcolicasiosserveràlapresenzadicristallifioccosibianchiformatidaagglomeratidiDNA.