U N I V E R S I D A D D E C O N C E P C I O NFACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

Departamento de Patología y Medicina Preventiva

Seminario de Título

DETECCION DE ANTICUERPOS SERICOS ANTI

Brucella spp EN CANINOS DE LA CIUDAD DE

CHILLAN

INGRID ALEJANDRA SANDOVAL MARDONES

CHILLAN - CHILE

2008

Animales De Compañía

beneficios

inconvenientes (Dabanch, 2003)

Medico Veterinario conocimiento, información y explicación de medidas(Miller, 1997)

Desconocimiento de enfermedades zoonóticas transmite el perro 25,8%(Alvarado, 2002)

Presentación subclínica; hallazgos fortuitos Salud Pública; < frecuentes(Dabanch, 2003)

Organización Panamericana de la Salud (OPS) América Latina: vigilancia y notificación obligatoria:

Rabia, Leptospirosis, Brucelosis, Tuberculosis, Encefalitis Equina

y Fiebre Aftosa (Fuentes et al, 2006)

Chile Enfermedad Zoonótica de Notificación Obligatoria

(Ministerio de Salud Chile, 2008)

INTRODUCCIÓN

Género Brucella (Meyer, 1990)

homología genética : 1 sp: Brucella mellitensis

biovariedades: Brucella mellitensis biovar mellitensis 1, 2 ó 3;

Brucella mellitensis biovar abortus 1… (Moreno et al., 2002)

Lisas

- B. suis

- B. abortus

- B. mellitensis

- B. canis

- B. ovis

Rugosas

Diferenciación (Sally et al., 1981; Meyer, 1990)

CEPAS AISLADAS

BRUCELOSIS

Brucella abortusocupacional (Acha y Szyfres, 2001)

grave; crónica (Meyer, 1990)

CHILE

10 casos

0-2 muertes /año(Ministerio de Salud Chile, 2003)

reservorio:bovino; perro(Ministerio de Salud Chile, 2000)

Brucella canis

inicio (Carmichael y Shin, 1996)

grado resistencia natural

(Ramírez et al., 2006; Barrouin-Melo et al., 2007)

multisistémica (Briseño et al., 2004)

BRUCELOSIS HUMANA

Monroe et al (1975)

predominio Ac de B. canis

niños recién nacidos: 5.7% (Ac maternales)

personas exposición media: 67.8%

Médicos Veterinarios: 72.6%

v/s donadores de sangres varones: 56.9%

↑ frecuencia a exposición

pacientes con fiebre de origen indeterminado >

títulos de Ac que otros pacientes

B. canis, B. abortus, B. mellitensis y B. suis (Hollett, 2006)

Brucella canis

intracelular, Gram (-) (Ramírez et al., 2006)

Fam. canidae huésped reserva (Hollett, 2006)

Ganado doméstico – chimpancés

limitado tras inoculaciones experimentales

favorablemente resistente a exposiciones naturales

(Carmichael y Shin, 1996)

perro vector mecánico y/o biológico (Brown et al., 1976)

importancia salud pública (zoonosis)

económica (Cavalcanti et al., 2006)

BRUCELOSIS CANINA

Distribución Geográfica

EE.UU. (1966) aborto (Beagle)

amplia: China, España, Japón, Alemania

> América Central y Sudamérica

- Brasil B. abortus; B. canis (Padilla et al., 2002)

- Argentina B. canis; B. abortus y B. suis (Samartino, 2002)

- Chile (1978) B. canis. RM y Valdivia (Borie et al, 2002)

Epidemiología

prevalencia; seroprevalencia (20-30%) México, Centro y

Sudamérica; sur EEUU y Japón: 7 - 8% perros callejeros

(Shin y Carmichael, 1999)

Chile: 9 criaderos (RM) 13.5 % perros seropositivos / 40%(2/9)

1993 - 1999 (RM): 20%. ↑ (falta programa de control adecuado) (Borie et al, 2002)

BRUCELOSIS CANINA

Signos clínicos

1° consideración fracaso reproductivo o esterilidad (Hollett, 2006)

Asintomáticos o enfermedad sistémica: discoespondilitis; uveítis

anterior crónica o endoftalmitis (Miller, 1997)

Hembras aborto: autólisis parcial (45 – 59 días)

reabsorción embrionaria, mortinatos y cachorros

débiles (Johnston, 1997)

B. abortus, B. suis y B. mellitensis: aborto (último1/3) (Wallace y Davidson, 1997)

Machos epididimitis y orquitis no purulenta, uni y/o bilateral,

profundas e irreversibles alteraciones (infertilidad)

crónicos: atrofia testicular uni o bilateral (Borie et al., 2002)

BRUCELOSIS CANINA

Secreciones vaginalesOrina

Semen

Mucosa genital

Fagocitosis

(linfonodulos)

Bacteremia

Tracto genital

Hembra Macho

Útero Epidídimo

Crías Próstata

Mucosa conjuntival

Mucosa oronasal

Disco

IntervertebralOjo

BRUCELOSIS CANINA

Diagnóstico

Valores hematológicos

Análisis seminal (Carmichael y Shin, 1996)

Aislamiento agente etiológico (+ certero)

cultivo sangre ( 8 sem) (Greene, 1997; Root, 2005)

Pruebas serológicas

Aglutinación en Placa y Tubos

AGID (Acha y Szyfres, 2001), Ag B. canis o B. ovis (Barrouin-Melo et al., 2007)

2 ME y 2 ME modificada de Aglutinación en Tubos (Acha y Szyfres, 2001;

Cavalcanti et al., 2006; Keid et al., 2007)

BRUCELOSIS CANINA

Diagnóstico

Reacción cruzada

Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus sp.

Bordetella bronchiseptica(Root, 2005; Barrouin-Melo et al., 2007; Keid et al., 2007)

AGID + específica – sensible (Acha y Szyfres, 2001)

identifica Ac de Ag citoplasmáticos de B.Canis

resultado (+): definitivo (Root, 2005; Greene, 1997)

Otras pruebas

Immunoelectroforesis

Immunofluorescencia Indirecta

Fijación del Complemento

ELISA (Barrouin-Melo et al., 2007)

BRUCELOSIS CANINA

Tratamiento

No alentador

bacteria intracelular; periodo extensos y bacteremia

episódica

sensibilidad a antibióticos; fracasos y recaídas

monoterapia antibiótico: infructuoso, no recomendado

biterapia: > éxito

(Hollett, 2006)

Prevención

Eutanasia (+)

Castración: (+)

(Miller, 1997)

BRUCELOSIS CANINA

De acuerdo con los antecedentes recopilados,

algunos perros de la ciudad de Chillán presentan

grados de positividad serológica a Brucella spp

con anticuerpos anti Brucella abortus o anti

Brucella canis

HIPOTESIS

GeneralDetectar serológicamente perros positivos a Brucella spp en la ciudad

de Chillán

Específicos• Identificar anticuerpos séricos anti Brucella abortus (cepa lisa) en

perros de la ciudad de Chillán, mediante la prueba de Aglutinación

Simple

• Identificar anticuerpos séricos anti Brucella canis (cepa rugosa) en

perros de la ciudad de Chillán, mediante un kit comercial

• Comparar la frecuencia de seropositividad en dos grupos de perros

de diferentes procedencias

OBJETIVOS

• Fecha

• Tamaño muestra

• Características de los animales

• Origen: Sociedad Protectora de Animales de la ciudad de Chillán (SPA) y

Clínica Veterinaria de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad

de Concepción (UdeC), Campus Chillán

SPA UdeC

MATERIALES Y METODO

TAMAÑO DE LA MUESTRA

Examen clínico ficha ( Identificación, sexo, edad aproximada, hallazgos

clínicos, fecha y lugar de procedencia)

5 mL; Vena Cefálica Antebrachii

Tubos sin anticoagulante

Guantes de examen clínico (zoonosis)

Traslado de tubos a Laboratorio de Microbiología Veterinaria del Departamento

de Patología y Medicina Preventiva

Centrifuga Dynac (Clay Adams®) a 2500 revoluciones 5’ para obtención de

suero

Prueba de Aglutinación Simple para Detección de

Anticuerpos anti Brucella (cepa lisa)

• micropipeta, puntillas

• placa de vidrio cuadriculada ( 50 muestras)

• 30 mL suero sanguíneo

• 30 mL Ag Rosa de Bengala (B. abortus- Bengatest®)

• mezcla manual, movimiento ondulante, 2’- 4’ a T° ambiente

• POSITIVA formación de grumos coloreados

• NEGATIVA no se observa cambio alguno

Kit Comercial Smartest diagnostics® para B. canis

• cassette “C” y “T”

• 1 gota del suero sanguíneo + 4 gotas buffer diluyente

• migración mezcla

• interpretación de resultado : 20’ a T°

• POSITIVA dos bandas púrpuras

• NEGATIVA una banda púrpura bajo letra “C”

• NO VALIDO no se observa bandas de colores o una banda bajo la letra “T”

RESULTADOS Y DISCUSION

SPA

30 caninos

6 ♂; 24 ♀

edad: 4 meses – 5 años

CC: 2,5 (1-5)

hallazgos clínicos

• zonas alopécicas

• preñez

• tumor vaginal

UdeC

54 caninos

30 ♂; 24 ♀

edad 1 – 6 años

CC: 3 (1 – 5)

hallazgos clínicos

• zonas alopécicas

• preñez

• heridas traumáticas

Tabla 1. Resultado serológico del total de sueros

examinados de perros de la cuidad de Chillán

mediante la prueba de Aglutinación Simple

ESPECIE

MUESTRAS POSITIVAS

N° TOTAL

N° %

Brucella abortus 1 1,2 84

• Keid et al (2007) : N° = 52; Test de Rosa de Bengala (detección Ac séricos

anti-Brucella cepa lisa)

0 %

Diferencia origen de perros en estudio : criaderos comerciales v/s

hábitos callejeros: ≠ hábito alimenticio (ingesta de materiales contaminados)

• Moura de Aguiar et al (2005) : N° = 304; 2-ME (ocurrencia de B. abortus)

zona rurales (0 %) y urbanas (0,3%) ; total (0,7%)

Diferencia hábito alimenticio

• Almeida et al (2004) : N° =, 635; 2-ME SAL (B. abortus)

18 (2,8%)

• Azevedo et al (2003) : N° = 118; 2-ME (B. abortus)

Perros vagos: 1 (0,85%)

• Baja seropositividad: B. abortus

• Importancia agente etiológico

• Perro posible vector de la enfermedad tanto para el

humano como para el ganado (Brown et al., 1976; Baek et al., 2003)

ESPECIE

MUESTRAS POSITIVAS

N° TOTAL

N° %

Brucella canis 3 15 20

Tabla 2. Resultado serológico del total de sueros

examinados de perros de la cuidad de Chillán

mediante Kit Comercial

Variados estudios B. canis

AGID resultados variables• Almeida et al (2004) : 14,2% (90/635)• Moura de Aguiar et al (2005) : 3,6% (11/304)• Cavalcanti et al (2006) : 5,88% (5/85)• Ramírez et al (2006) : 15,6% (71/456)

Otros estudios:

• Moraes et al (2002)Seroaglutinación Rápida en Placa (SAR): 1,77% (19/1072)SAR- 2-ME: 0,84% (9/1072)

• Briseño et al (2004)SAR: 42,8% (24/56)Aislamiento: 5,3% (3/56)

• Importancia del estudio de la Brucelosis canina en Chile

• Perros estudiados no hubo signos compatibles

• Aumenta riesgo de zoonosis

CANILES SEROPOSITIVIDAD

B. abortus

% N° TOTAL

UdeC 0 0 54

SPA 1 3,33 30

Tabla 3. Frecuencias de seropositividad a B. abortus

en perros provenientes de los caniles UdeC y SPA

CANILES SEROPOSITIVIDAD

B. CANIS

% N° TOTAL

UdeC 3 50% 18

SPA 1 16,66 2

Tabla 4. Frecuencias de seropositividad a B. canis

en perros provenientes de los caniles UdeC y SPA

Test de Probabilidad Exacta de Fisher

Brucella abortusOrigen A

SPA

Origen B

UdeC

Positivos 1 0

Negativos 29 54

P = 0,357 y P > 0,05 No es significativo (P<0,05 es significativo)

Brucella canisOrigen A

SPA

Origen B

UdeC

Positivos 1 3

Negativos 1 15

P = 0.368 y P > 0,05 No es significativo (P<0,05 es significativo)

1. Se detectaron anticuerpos tanto contra Brucella

abortus como contra Brucella canis

2. No hubo diferencias estadísticamente

significativas entre los perros muestreados de la

Sociedad Protectora de Animales de la ciudad de

Chillán con los de los caniles de la Clínica

Veterinaria de la Facultad de Ciencias

Veterinarias de la Universidad de Concepción,

Campus Chillán

CONCLUSIONES

U N I V E R S I D A D D E C O N C E P C I O NFACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

Departamento de Patología y Medicina Preventiva

Seminario de Título

DETECCION DE ANTICUERPOS SERICOS ANTI

Brucella spp EN CANINOS DE LA CIUDAD DE

CHILLAN

INGRID ALEJANDRA SANDOVAL MARDONES

CHILLAN - CHILE

2008