Attivazione e deplezione selettiva

di linfociti antigene-specifici

DottorandaElisa Piscianz

TutoreDr. Marco Rabusin

Dottorato di Ricerca in

MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO

E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA

direttore: prof . A. Ventura

XXIV Ciclo

Trapianto di cellule staminali emopoietiche (HSCT)

trapianto

cellule del donatore

Ag virali altri Ag cellule staminali

attecchimento

ricevente

cellule infettate

GvI GvT

cellule tumorali

GvHD

celluledel ricevente

cellule target

Obiettivi dello studio

• attivazione delle cellule Ag-specifiche

• inibizione o killing delle cellule attivate

Identificare le condizioni migliori per:

Mettere a punto un metodo per

identificare e depletare

i linfociti T allo-reattivi

entro 48-72 ore

risparmiare le cellule resting

cellule allo-geniche da donatore

Mixed Leukocyte Reaction (MLR)

cellule stimolatrici linfociti responder

dal ricevente

LCL-EBV

cellule dendritiche

farmaci

Analisi:• vitalità: 7AAD• proliferazione: 3H-Thy, CFSE

allo-deplezione specifica

Farmaci

• Folate methabolism inhibitionMethotrexate (Genestier L, J Clinical

Investigation, 1998)

• JAK pathway inhibitionTasocitinib (Manshouri T, Cancer

Science, 2008)

• Membrane electron transport inhibitionPhenoxodiol (Herst PM, Haematologica,

2009)

• GSH depletion3-HAA (Lee SM, Immunology Letters, 2010)

• Proteasome inhibitionBortezomib (Blanco B, Blood, 2006)

Screening dei farmaci

3-HAA• metabolita Trp (IDO enzyme)• deplezione GSH• associazione con MnCl2 (Hiramatsu R, J Cellular Biochemistry,

2008)

tossicitàcellule resting

killing cellule attivate

Bortezomib• inibitore del proteosoma• compromette via IFk – NF-kB

3-HAA e MnCl2

Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011

stimolazione con LCL-EBV

deplezione con 3-HAA/MnCl2

vitalità: 7AAD

60 ore

proliferazione: 3H-Thy

3-HAA, MnCl2, Bortezomib

Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011

stimolazione con LCL-EBV

deplezione con 3-HAA/MnCl2/Bortezomib

vitalità: 7AAD

60 ore

proliferazione: 3H-Thy

Stimolazione con DCs e deplezione con farmaci

MLR

MLR + 3-HAA/MnCl2

PHA

non stimolato

PHA + 3-HAA/MnCl2

non stimolato + 3-HAA/MnCl2

Test di re-stimolazione

stimolazione con DCs

deplezione con 3-HAA/MnCl2

re-stimolazione (DCs 1st e DC 3rd)

60 ore

vitalità : 7AAD

60 ore

proliferazione: CFSE

Conclusioni e prossimo futuro…

• metodo attuabile• somministrazione/associazione dei farmaci modulabile

• risposta a patogeni• Treg

emivita dei farmaci dopo deplezione