Tecniche di preparazione e Tecniche di preparazione e conservazione degli conservazione degli

emocomponentiemocomponenti

Bologna, 11/3/2006Bologna, 11/3/2006Bologna, 11/3/2006Bologna, 11/3/2006

Franco Verlicchi - Centro Trasfusionale Faenza/Lugo – AUSL RavennaFranco Verlicchi - Centro Trasfusionale Faenza/Lugo – AUSL Ravenna

DefinizioniDefinizioni prodotti del sangueprodotti del sangue

gli emocomponenti e gli emoderivatigli emocomponenti e gli emoderivati emocomponentiemocomponenti

i prodotti ricavati dal frazionamento del i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi fisici semplici o con aferesisangue con mezzi fisici semplici o con aferesi

emoderivati emoderivati i farmaci plasmaderivati ovvero le specialità i farmaci plasmaderivati ovvero le specialità medicinali estratte dall’emocomponente medicinali estratte dall’emocomponente

plasma mediante processo di lavorazione plasma mediante processo di lavorazione industriale industriale

Legge 21/10/2005, n° 219: Nuova disciplina delle attività trasfusionali e della produzione nazionale degli emoderivati

emocomponenti emocomponenti i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi fisici semplici o con aferesifisici semplici o con aferesi

Eritrociti LeucocitiLeucociti PiastrinePiastrine Plasma Plasma

Emocomponenti di 2° livello

Sangue intero

•Terapia trasfusionale mirataTerapia trasfusionale mirata•Conservazione idonea di ciascun Conservazione idonea di ciascun componentecomponente

Eritrociti

LeucocitiLeucociti

PiastrinePiastrine

Plasma Plasma

Centrifugazione + filtrazione

•Quantità raccolta•Emocomponenti non ottenibili da unità di sangue intero

Eritrociti LeucocitiLeucociti

PiastrinePiastrinePlasma Plasma

Eritrociti LeucocitiLeucociti

PiastrinePiastrinePlasma Plasma

Centrifugazione

2000 rpm 5-8 min

3500 rpm 15-20 min

Centrifugazione

Centrifugazione

Plasma Plasma

PiastrinePiastrine

LeucocitiLeucociti

PiastrinePiastrine

•Emazie concentrate•Emazie concentrate private del buffy coat•Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive•Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni additive•Emazie lavate•Emazie leucodeplete•Emazie irradiate•Emazie congelate•Concentrato di emazie da aferesi

Eritrociti

Emazie concentrate

Emazie concentrate private del buffy-coat

2-6 °C 35 gg

Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni

additive

Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni additive

2-6 °C 42 gg

Emazie lavate

2-6 °C

Conservare il minor tempo possibile (<24 h se apertura del

sistema)

•Lavaggi con soluzione isotonica a 4 °C•Proteine < 0.3 g/unità

PNH – deficit IgA

Emazie leucodeplete

2-6 °C

•Filtrazione - Leucociti < 1x106

Emazie irradiate•25-50 Gy

Stessa durata del prodotto corrispondente (<24 h se apertura del sistema)

Irradiazione entro 14 gg dal prelievoTrasfusione entro 28 gg dal prelievo

Trasfusione entro 48 ore dall’irradiazione in

neonati o iperpotassemia

Emazie leucodeplete

•Riduzione alloimmunizzazione•Riduzione infezioni post-operatorie•Riduzione reazioni trasfusionali non-emolitiche•Riduzione GVHD•Riduzione trasmissione patogeni (CMV, CJD)•Riduzione mortalità post-operatoria (cardio-chirurgia)•Riduzione ospedalizzazione

Emazie congelate

Glicerolo 40% Glicerolo 15-20%

Entro 7 gg dalla raccolta

-60 -80 °C Azoto liquido (-150 °C)

Fino a 10 anni

Scongelamento

Deglicerolizzazione

Utilizzare nel più breve tempo possibile

•Concentrato granulocitario da aferesiConcentrato granulocitario da aferesi•Cellule staminali emopoietiche perifericheCellule staminali emopoietiche periferiche

LeucocitiLeucociti

Concentrato granulocitario da aferesi

Authors’ conclusions: ‘Currently there is inconclusive evidence from RCTs to support or refute the generalized use of granulocyte transfusion therapy in the most common neutropenic patient population’

Concentrato granulocitario da aferesi

•Mobilizzazione leucocitaria nel donatore (Steroidi o G-CSF)

Conservazione a 20-24°C per 24 hUtilizzare nel più breve tempo possibile

Granulociti da sangue intero (buffy-coat):•Utilizzati, prevalentemente in OE pediatrica, negli anni ‘80 •Abbandonati per inefficacia

Cellule staminali emopoietiche periferiche

Da aferesi•Uso autologo o omologo•Preparazione del paziente/donatore (mobilizzazione CD34)

• Ciclofosfamide 4 g /m2 (autologo)• G-CSF s.c. per 4-5 gg

•1-2 procedure (2-3 ore) in giorni successivi

Conservazione a -80°C

Congelamento in azoto liquido con crioprotettori

Scongelamento a 37°C e impiego immediato

Cellule staminali emopoietiche periferiche

Da cordone ombelicale•Facilità di prelievo•Necessità meno stringente di HLA-matching•Ridotta GVHD•Minore rischio di rigetto (blando condizionamento)

Conservazione a -80°C

Congelamento in azoto liquido con crioprotettori

Scongelamento a 37°C e impiego immediato

•Ridotto numero di cellule CD34 (pazienti pediatrici)•Espansione in vitro

•Concentrato piastrinico da aferesi•Concentrato piastrinico da plasma-piastrinoaferesi•Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero•Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat•Concentrato piastrinico lavato•Concentrato piastrinico irradiato•Piastrine crioconservate (da aferesi)•Gel piastrinico

Piastrine

PiastrinePiastrinePlasma Plasma

LeucocitiLeucocitiLeucocitiLeucociti

PiastrinePiastrinePiastrinePiastrine

Centrifugazione

2000 rpm 5-8 min

3500 rpm 15-20 min

Centrifugazione

Centrifugazione

Plasma Plasma

Concentrato piastrinico da singola unità di sangue interoConcentrato piastrinico da singola unità di sangue intero

LeucocitiLeucocitiLeucocitiLeucociti

Concentrato piastrinico da pool di buffy-coatConcentrato piastrinico da pool di buffy-coat

Sangue intero(20-24 °C)

•Fino a 5 gg dal prelievo•20-24 °C•Agitazione continua

Eritrociti Leucociti PiastrinePiastrine Plasma

•Concentrato piastrinico lavato•Concentrato piastrinico irradiato

•Congelamento entro 24 ore dal prelievo•Crioprotettore (DMSO)•Conservazione 1 anno a -80°C, 10 anni a -150°C•Utilizzo immediato dopo scongelamento

•Piastrine crioconservate (da aferesi)

•Come concentrati piastrinici

•Gel piastrinico

PiastrinePiastrinePlasma Plasma

LeucocitiLeucocitiLeucocitiLeucociti

PiastrinePiastrinePiastrinePiastrine

Centrifugazione

2000 rpm 5-8 min

3500 rpm 15-20 min

Centrifugazione

Centrifugazione

Plasma Plasma

Concentrato piastrinico da singola unità di sangue interoConcentrato piastrinico da singola unità di sangue intero

LeucocitiLeucociti

Concentrato piastrinico da pool di buffy-coatConcentrato piastrinico da pool di buffy-coat

Sangue intero(20-24 °C)

Gel piastrinicoConcentrato piastrinico da singola unità di sangue intero•Autologo•Quantità di sangue intero variabile (30-50 cc)

Aggiunta di calcio e trombina

•Elevato contenuto di fattori di crescita degli α-granuli•Favorisce i processi di riparazione tessutale•Utilizzato in chirurgia maxillo-faciale, ortopedia, trattamento ulcere cutanee

Utilizzare nel più breve tempo possibile

•Plasma fresco congelato•Crioprecipitato•Plasma privo di crioprecipitato•Colla di fibrina

PLASMADERIVATI•Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche•Immunoglobuline•Uso ev•Specifiche anti-HBV•Specifiche anti-tetano•Fattori della coagulazione

Plasma

Plasma fresco congelato

•Separato entro 6 ore (non oltre 18) dal prelievo•Congelamento a -30° completato entro 1 ora

•Congelato entro 6 ore dal prelievo•Tipo A (aferesi)•Tipo B (scomposizione)

•Congelato tra 6 e 72 ore dal prelievo

•Tipo C (scomposizione)•Albumina•Immunoglobuline•ATIII•FVIII•FIX•Complesso protrombinico

Plasma fresco congelato

Utilizzo per uso clinico entro•24 mesi se conservato ad almeno -25°C•3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C

•Scongelato a 30-37°C con idonea strumentazione

•Utilizzato nel più breve tempo possibile•Entro 24 ore se conservato a 0-4°C

Plasma fresco congelato •Scongelamento a 1-6°C

CrioprecipitatoFVIII, FXIII, vWF, fibrinogeno, fibronectina

Plasma privo di crioprecipitato (cryosupernatant)vWF metalloproteasi (ADAMTS13)

Utilizzato nel più breve tempo possibileEntro 24 ore se conservato a 0-4°C

Ricongelamento entro 1 ora24 mesi se conservato ad almeno -25°C3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C

Colla di fibrina

•Crioprecipitato (autologo)•Calcio + trombina

Utilizzato nel più breve tempo possibile

Congelamento24 mesi se conservato ad almeno -25°C3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C

•Facilitazione della cicatrizzazione delle ferite chirurgiche•Azione favorevole sull’emostasi

Gel criopiastrinico•Crioprecipitato•Piastrine congelate •Calcio + trombina

Emoderivati (Plasmaderivati)

•Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche•Immunoglobuline

•Uso ev•Specifiche anti-HBV•Specifiche anti-tetano

•Fattori della coagulazione

•Metodiche di precipitazione/purificazione•Metodi fisici (crioprecipitazione)•Metodi fisico-chimici (etanolo - Cohn)

•Metodiche cromatografiche•Gel-filtrazione•Cromatografia a scambio ionico e interazione idrofobica•Cromatografia ad affinità

Emoderivati (Plasmaderivati) – Riduzione rischio infettivo

•Pathogen inactivation technology

•Quarantena

donazione esami

Fase finestra

Pathogen inactivation

•Trattamenti al calore•Pastorizzazione•Trattamento al vapore•Dry heat

•Trattamenti sovente-detergente•TriNButylPhosphate – Tryton X100•Trattamento al vapore•Dry heat

•Nanofiltrazione•Trattamento al blu di metilene•Amatosalene - UV

•Perdita di proteine•Costo•Tossicità sul ricevente•Danno alle cellule

Pathogen inactivation

•Alchilanti (S-303, PEN110)•Riboflavina

Eritrociti

Piastrine •Psoralene - UV•Riboflavina - UV