Sostanze Psicoattive e Violenze Sessuali: Il Ruolo del ... · Tossicologia Forense Convegno...

Sostanze Psicoattivee Violenze Sessuali:

Il Ruolo del Laboratorio di Tossicologia Forense

Convegno “Violenza Domestica e di Genere – Aspetti Medici e Giuridici”Pad. Rama – Ospedale dell’Angelo, Mestre Venezia, 14-15 ottobre 2016

Dr. Giampietro Frison

Laboratorio di Igiene Ambientale e Tossicologia ForenseDipartimento di PrevenzioneAzienda ULSS 12 Veneziana

Drug-Facilitated Sexual Assault (DFSA)Costrizione ad atti sessuali non-consensuali favoriti da notevole riduzione o completa perdita di coscienza, causate dalla somministrazione o volontaria assunzione di xenobiotici ad effetto neurodepressivo

DFSA Opportunistica (assunz. volont.)

DFSA Proattiva (somm. incons. da terzi)

DFSA – Sostanze psicoattive incapacitanti

Somministrazione sost. psicoattive

- Bev. alcoliche (DFSA proattiva/opport.)

- “Drink spiking”: agg. xenobiotici a bevande

analcoliche o alcoliche (eff. sinergico!)

Caratteristiche sostanze psicoattive

- Droghe o principi attivi farmaceutici

- Incolori, inodori, rapid. solubili in acqua

- Rapida insorgenza effetti neurodepressori

- Basse dosi: rilassamento, euforia, disinibizione

- Dosi moderate: sedazione, amnesia retrograda

- Alte dosi: riduz./perdita funz. motorie e coscienza

DFSA – Sostanze psicoattive incapacitanti

MA LeBeau, Ther Drug Monit 30 (2), 2008

SOFT DFSA Committee

> 50 sostanze considerate

Classi sostanze-Alcol etilico

-Benzodiazepine

-Ipnotici non BDZ

-GHB

-Anticonvulsivanti

-Neurolettici

-Anestetici

-Oppioidi

-Barbiturici

-Cannabinoidi

-Anticolin./Antistamin.

-Volatili (clorof., idroc. arom.)

-(Amfet., Ketam., Cocaina)

Benzodiazepine- Effetti miorilassanti, sedativo-ipnotici; a rapida insorg. azione

- Amnesia retrograda già a basse dosi entro 15 min

- Flunitrazepam, Clonazepam, Bromazepam, Midazolam, Alprazolam, Lorazepam

Ipnotici non BDZ- Zolpidem, Zopiclone, Zaleplon: new DFSA drugs

- Legame a recettori omega SNC, no effetti periferici

- Rapida azione, > amn. retrogr., no screening IA

DFSA – Benzodiazepine - Ipnot. non BDZ

Zolpidem

Zopiclone

DFSA – “Z” drugs

201111 14zol pidem 1 -1_10 0k 1 5/11/20 11 3 .4 8.51

RT: 3,88 - 8,11

4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0

Time (min)

0

20

40

60

80

100

Rel

ativ

e A

bund

ance

0

20

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Rel

ativ

e A

bund

ance

0

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Rel

ativ

e A

bund

ance

0

20

40

60

80

100

Rel

ativ

e A

bund

ance

RT: 6,77AA: 4360383

RT: 6,93AA: 23305433

RT: 5,90AA: 3748886RT: 5,01

AA: 381967 6,135,38 6,75 7,26 7,53 7,804,53

RT: 5,03AA: 103848316

RT: 5,63AA: 1442084

RT: 5,30AA: 326188

6,456,105,21 6,935,064,51 5,39 7,43

NL: 2,13E6

m/z= 308,1742-308,1772 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100,00-800,00] MS ICIS 20111114zolpidem1-1_100k

NL: 1,17E7


NL: 5,71E7


NL: 1,90E5


Zolpidem

Hydroxy-Zolpidem

Carboxy-Zolpidem

DiHydroxy-Zolpidem

Diversi casi in Italia (… e al LIATF)

Metodo LC/HRMS per analisi sangue/urina/capelli in casi DFSA

ClandestineLabs

Internet

SmartShops

DFSA – Nuove sostanze psicoattive

Oltre 450 NSP attualmente in fase di monitoraggio.Il numero di NSP sul mercato supera attualmente il numero di sostanze psicoattive tradizionali.

European Monitoring Centre for Drugs and Drug Addiction (EMCDDA) United Nations Office on Drugs and Crime (UNODC)

DFSA – Nuove sostanze psicoattive

Synth. Cannab. – A never-ending story … XLR-11, PB-22, AB-

FUBINACA, MAB-CHMINACA, 5F-AMB, …

Molti casi di intossicazioni acute negli USA da MAB-CHMINACA

In aumento il numero di morti da Cannabinoidi sintetici negli USA

Gli ultimi prodotti (2014 – 2015) sono 700 volte più potenti del THC

Il 1 settembre 15 approvata in Texas una legge che rende illegali le “prophetic structures” (1000 potenziali Cannabinoidi Sintetici)

Associazione di p. a. Cannabinomimetici

Nelle stesse bustine 5 diversi

Cannabinoidi sintetici!!!

JWH-018, JWH-073, JWH-015,

JWH-200, JWH-250

LC-HR-MS

DFSA – Designer Benzodiazepines

DFSA – Designer BenzodiazepinesLa prima (2009-10): Phenazepam (5x

Diazepam)

Etizolam (miorilassante ++)

On-line nel 2013-14: Pyrazolam (12x Diazepam), Flubromazepam (h/l 106 h), Diclazepam

Più recenti: Clonazolam, Deschloroethyzolam, Flubromazolam, Nifoxipam, Meclonazepam

Nessuna approvata per fini terapeutici

Venduti on-line in pellets per aggirare normative farmaceutiche

5 - 10 US cent per dose

DFSA – Designer Benzodiazepines

Designer BDZ: una nuova sfida sia in ambito clinico che laboratoristico

Azioni farmacologiche ed effetti avversi misconosciuti

In genere molto potenti, dosi di 0.5 mg sedazione ed amnesia ++

Pellets, polveri da market on-line: difficile il dosaggio > overdosing!

Principi attivi e contenuto % altamente variabili in prodotti on-line

Utilizzate in DFSA o DFC

DFSA – Tetraidrozolina

Decongestionante oculare/nasale

Vasocostrittore locale

Uso locale: no effetti sistemici

Ingestione: supera BEE (lipofilo)!!

Neurodepressore a rapida azione!

Sonnolenza, depressione respir., ipotensione, flacc. muscolare, bradicardia, ipotermia, coma

Effetto sinergico con Alcol!

Incolore, inodore, insapore!

Il ruolo del laboratoriodi tossicologia forense

LIATF – Attività tossicologico - forensi

•Determinazioni quali-quantitative di principi attivi stupefacenti su campioni in giudiziale sequestro(polveri, liquidi, materiale vegetale, etc.)

•Indagini morfologiche e comparative(principi attivi, adulteranti, diluenti, involucri)

LIATF – Attività tossicologico - forensi

Umorvitreo

Tossicologia postmortale

Reati facil. da sost. psicoattive(DFSA e DFC)

Idoneità al lavoro(Workplace Drug Testing)

Idoneità alla guida(Candidati/Titolari Patenti di Guida)

Disabilità alla guida(Codice della Strada)

LIATF – Reati facilitati da sost. psicoattive Protocollo ULSS 12

Incarichi P.G. e A.G

Collaborazione con Associazioni

Richieste da singoli Cittadini

DFSA – Quali campioni biologici?

Sangue

Form. pilifere

Urina

Saliva

Capelli

Urina

Saliva

Sangue

1- 4 giorni

Fino a 24 ore

Da settimane ad anni

GIORNI 0.1 1 10 100 1000

Fino a 24 ore

Range temporali di rilevabilità sostanze

Analisi di capelli e altre formazioni pilifere

Accumulo di sostanze assunte nelle formazioni pilifere e mancata metabolizzazione ed eliminazione:Sequestro delle sostanze incorporate

Ampia finestra temporale analitica (da giorni a mesi/anni): possibilità di valutazioni tossicologiche retrospettive

Correlazione tra crescita capello (circa 1 cm/mese) e pres. sostanza

Prelievo non invasivo, non inestetismi, non problemi di conservazione, ripetizione di campionamento e analisi possibili

•Specificità e sensibilità molto elevate

•Identificazione analiti senza standard di riferimento

•Ricerca mirata di sost. psicoattive e metaboliti anche in ultratracce

HRMS - High Resol. Mass Spectrometry

DFSA e DFC - Casi rappresentativi

DFSA – Modus operandi

Il violentatore- Frequentazione casuale

- Freq. abituale (amico, collega, etc.)

L’ambiente- Pubblico, familiare, professionale (es.

sanitario: medici, dentisti, infermieri, badanti, etc.) > rapporto intimo con vittima + disponibilità farmaci!

La vittima- Sconosciuta, amica, fidanzata,parente

- Disabili psichici o fisici, sogg. con diff. psicologiche, anziani, etc.

Caso n. 1

Soggetto di sesso femminile di circa 60 anni, ospedalizzato per asportazione neoformazione lipomatosa polso dx

Sedazione con propofol in infusione, analgesia locale con mepivacaina/ropivacaina

Paziente cosciente, trasferita in reparto accompagnata da ausiliario di S.O. mediante passaggio in ascensore, manipolazione fleboclisi con iniezione xenobiotico, sottoposta a violenza sessuale, arrivo in reparto dopo circa 2 ore, incosciente

Consulenze ginecologica e psicologica, raccolta camp. biologico (sperma) per analisi mirate

Nessuna raccolta di sangue e/o urina per analisi tossicologiche

La vittima presenta Denuncia e Querela c/o la Procura della Repubblica del Tribunale di competenza

Circa 1 mese dopo la vittima contatta il lab. richiedendo CT (identificazione xenobiotico surrettiziamente somministrato)

Raccolta di capelli e peli pubici, conservati in attesa di indirizzare le indagini tossicologico-forensi

Nel frattempo analisi chimico-tossicologica di fluido residuale nel set di infusione: presenza di Tiopentale!!

Nessuna somministrazione terapeutica di Barbiturici nel periodo antecedente il ricovero e durante il ricovero stesso

Tiopentale e Pentobarbital: analiti target per analisi formazioni pilifere!

Caso n. 1

Capelli Capelli(fraz. prox.)

Peli pubici

Caso n. 1 - Formazioni pilifere

CAPELLI – Frazione distale

(m/z 157) (m/z 173)

IS(m/z 247)

13.0 13.5 14.0 14.5 15.0minutes

0%

25%

50%

75%

100%

Norm

Caso n. 1 - Risultati analitici (GC-MS/MS)

13.0 13.5 14.0 14.5 15.0minutes

0%

25%

50%

75%

100%

Norm

Pentobarbital(m/z 157)

Tiopentale(m/z 173)

IS(m/z 247)

CAPELLI – Frazione prossimale


13.0 13.5 14.0 14.5 15.0minutes

0%

25%

50%

75%

100%

Norm

Pentobarbital(m/z 157)

Thiopental(m/z 173)

IS(m/z 247)

PELI PUBICI


Presenza di Tiopentale nelle frazioni prossimali di capelli e nei peli pubici, assenza nelle frazioni distali: compatibilità con assunzione di Tiopentale in epoca corrispondente al ricovero

Presenza del metabolita Pentobarbital: prova indiretta di assunzione Tiopentale (assenza in commercio di farmaci contenenti Pentobarbital)

Non somm. terapeutiche di barbiturici nel periodo antecedente il ricovero e durante il ricovero stesso

Uso di farmaci contenenti Tiopentale consentito solo in ospedali e case di cura. Vietata la vendita al pubblico

Compatibilità con risultati analisi liquido fleboclisi

Caso n. 1 – Conclus. tossicologico-forensi

Tiopentale > effetto incapacitante > violenza sessuale

Violentatore identificato

Indagato e rinviato a giudizio

Testimonianza CT

Dichiarato colpevole del reato di violenza sessuale (art. 609 bis CP comma 1, 2), con aggravanti a) uso di sostanze alcoliche, narcotiche e stupefacenti, b) su persona sott. a limit. libertà personale (art 609 ter CP comma 2, 4)

Condannato a pena di 5 anni di reclusione, pag. spese processuali, interdizione perpetua da strutture sanitarie e pubblici uffici, risarcimento danni in sede civile

Caso n. 1 - Aspetti giudiziari

Caso n. 2Riassunto

• Ragazza di 28 anni, serata in discoteca con amici

• Consumo moderato di alcol, scambio di birre!

• Sintomi/segni (durata per 36-48 h)

1. Turbe cognitive/comportam. (confusione, agitazione)

2. Iperattività neuromuscolare (mioclono, iperriflessia, rigidità muscolare)

3. Turbe SN autonomo (tachicardia, nausea, vomito, midriasi, visione offuscata, arrossamento cute)

• Accesso a ospedale, screening urinario droghe NEG

Caso n. 2Analisi segmentale dei capelli c/o LIATF

•Analisi dei capelli circa 2 mesi dopo serata in discoteca

•Nessun uso di droghe o terapie farmacologiche

•Tre segmenti capelli: (0 – 1.5) (1.5 – 3) (4.5 – 6) cm

•Tutti i segmenti NEG per sostanze DFSA

•Segmento (0 – 1.5) cm: POS per paroxetina

•Segmenti (1.5 – 3) (4.5 – 6) cm: NEG per paroxetina

0 1 2 3 4 5 cm

1 segm. 2 segm. 3 segm.

Ricerca Paroxetina nei capelli (LC-HRMS) F:\Xcalibur\...\20140905_blkhair 9/5/2014 12:57:05 PM

RT: 4.95 - 10.03 SM: 13G

5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0Time (min)

0

20

40

60

80

100

0

20

40

60

80

100

0

20

40

60

80

100

Relative Abu

ndanc

e

0

20

40

60

80

100

RT: 7.54AA: 22748250

NL: 0m/z= 330.1274-330.1326 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS 20140905_blkhair

NL: 0m/z= 192.1174-192.1204 F: FTMS {1,2} + p ESI sid=25.00 Full ms [50.00-800.00] MS 20140905_blkhair

NL: 2.00E4m/z= 70.0647-70.0659 F: FTMS {1,2} + p ESI sid=25.00 Full ms [50.00-800.00] MS ICIS 20140905_blkhair

NL: 2.85E6m/z= 472.3304-472.3380 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS ICIS 20140905_blkhair

20140905_prv8635cap15952_fraz_distale 9/5/2014 1:15:07 PM

RT: 4.95 - 10.04 SM: 13G

5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0Time (min)

0

20

40

60

80

100

0

20

40

60

80

100

0

20

40

60

80

100

Relative Abundance

0

20

40

60

80

100

RT: 5.33AA: 15623

RT: 6.94AA: 31048

RT: 6.44AA: 14161

RT: 8.08AA: 6480

RT: 6.19AA: 6032

RT: 9.36AA: 7920

RT: 7.47MA: 20077308

7.777.16 9.47 9.70

NL: 0m/z= 330.1274-330.1326 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS 20140905_prv8635cap15952_fraz_distale

NL: 0m/z= 192.1174-192.1204 F: FTMS {1,2} + p ESI sid=25.00 Full ms [50.00-800.00] MS 20140905_prv8635cap15952_fraz_distale

NL: 1.37E4m/z= 70.0647-70.0659 F: FTMS {1,2} + p ESI sid=25.00 Full ms [50.00-800.00] MS ICIS 20140905_prv8635cap15952_fraz_distale

NL: 2.48E6m/z= 472.3304-472.3380 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS 20140905_prv8635cap15952_fraz_distale

Capelli NEG Segmento DISTALE

Full Scan

MS/MS

MS/MS

m/z 330.1500Full Scan

D4-Buprenorphine (IS)m/z 472.3342

MS/MS m/z 192.1189

MS/MS m/z 70.0653

m/z 330.1500


m/z 192.1189

m/z 70.0653

Ricerca Paroxetina nei capelli (LC-HRMS) 20140905_prv8635cap15952_fraz_prossim... 9/5/2014 3:39:41 PM

RT: 5.23 - 10.04 SM: 13G

5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0Time (min)

0

20

40

60

80

100

0

20

40

60

80

100

0

20

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100

Relativ

e Abu

nda

nce

0

20

40

60

80

100

RT: 7.81AA: 14909952

RT: 7.82MA: 434529

6.43 6.58RT: 7.82MA: 291613

5.425.965.66 6.446.22 6.91 7.26 7.60 8.32 8.70 9.349.12 9.57 9.90

RT: 7.47AA: 25737300

NL: 1.89E6m/z= 330.1474-330.1526 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS ICIS 20140905_prv8635cap15952_fraz_prossimale_HCD

NL: 5.67E4m/z= 192.1174-192.1204 F: FTMS {1,2} + p ESI Full ms2 [email protected] [50.00-800.00] MS 20140905_prv8635cap15952_fraz_prossimale_HCD

NL: 4.32E4m/z= 70.0647-70.0659 F: FTMS {1,2} + p ESI Full ms2 [email protected] [50.00-800.00] MS 20140905_prv8635cap15952_fraz_prossimale_HCD

NL: 2.99E6m/z= 472.3304-472.3380 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS ICIS 20140905_prv8635cap15952_fraz_prossimale_HCD

20140905_capspk5ng-mg_paroxetina_HCD 9/5/2014 3:57:46 PM

RT: 4.96 - 10.02 SM: 13G

5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0Time (min)

0

20

40

60

80

100

0

20

40

60

80

100

0

20

40

60

80

100

Relative Abundance

0

20

40

60

80

100

RT: 7.81AA: 32995142

RT: 7.80MA: 929185

6.91 7.45RT: 7.82MA: 687047

8.61

6.919.385.42 5.91 6.135.66 6.51 7.36 8.32 9.10 9.94

RT: 7.46AA: 19693790

NL: 4.17E6m/z= 330.1474-330.1526 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS ICIS 20140905_capspk5ng-mg_paroxetina_HCD

NL: 1.19E5m/z= 192.1174-192.1204 F: FTMS {1,2} + p ESI Full ms2 [email protected] [50.00-800.00] MS 20140905_capspk5ng-mg_paroxetina_HCD

NL: 8.85E4m/z= 70.0647-70.0659 F: FTMS {1,2} + p ESI Full ms2 [email protected] [50.00-800.00] MS 20140905_capspk5ng-mg_paroxetina_HCD

NL: 2.37E6m/z= 472.3304-472.3380 F: FTMS {1,1} + p ESI Full ms [100.00-800.00] MS ICIS 20140905_capspk5ng-mg_paroxetina_HCD

Segm. PROSSIMALE (0–1.5 cm) Capelli contr. POS (5 ng/mg)

Paroxetine MH+



MS/MS m/z 192.1189

MS/MS m/z 70.0653

Paroxetine MH+



MS/MS m/z 192.1189

MS/MS m/z 70.0653

Caso n. 2 - Conclusioni

1. Positività del segmento prossimale di capelli compatibile con le

condizioni cliniche della ragazza.

2. Sindrome serotoninergica causata dalla involontaria assunzione

di paroxetina durante la serata in discoteca (scambio di birre?!).

3. Sindrome serotoninergica : sindrome iatrogena, potenzialmente

letale, causata da un aumento della serotonina nel SNC, a seguito

dell’uso di farmaci (in combinazione o in overdose) che ne

aumentano abnormemente la concentrazione (antidepressivi

SSRIs come paroxetina, o MAOIs).

Caso n. 3Riassunto

•Soggetto di sesso maschile, circa 70 anni, incontra a casa propria giovane ragazza per un certo periodo

•Furto notturno nella sua gioielleria

•La Polizia accerta la sottrazione e l’uso delle chiavi del negozio da parte della ragazza

•L’uomo dichiara che la sera del furto gli venne offerta dalla ragazza della Coca Cola

•La polizia recupera in casa e nei dintorni 4 bottiglie vuote di Coca Cola, e ne richiede l’analisi al LIATF

Caso n. 3 – Analisi bottiglie Coca Cola

4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00

1000000

2000000

3000000

4000000

5000000

6000000

7000000

8000000

9000000

1e+07

1.1e+07

1.2e+07

1.3e+07

1.4e+07

1.5e+07

1.6e+07

1.7e+07

1.8e+07

1.9e+07

2e+07

2.1e+07

2.2e+07

2.3e+07

2.4e+07

2.5e+07

2.6e+07

Time-->

Abundance

TIC: 140116_pp8403_13TV_rep_3.D\ DATA.MS

3.868 4.002

4.027

4.119 4.179 4.255 4.344 4.682 4.905

5.017

5.059

5.481

5.900

6.275

6.442 6.954

8.493

9.006

9.76113.16113.557

13.784

15.075

15.17115.353

50 100 150 200 250 300 350 400 4500

500000

1000000

1500000

2000000

2500000

3000000

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Abundance

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GC-MS GC-MS LC-HRMS

IS

Clotiazepam Clotiazepam Clotiazepam MH+

MS/MS

MS/MS

MS/MS

MS/MS

Analisi segmentale dei capelli

• Campionamento effettuato circa 1.5 mesi dopo il furto

• L’uomo dichiara un uso personale occasionale di Rizen gocce!

• Necessità di dimostrare una assunzione maggiore di Clotiazepam in occasione del furto rispetto ai mesi precedenti

Caso n. 3 – Analisi segmentale capelliClotiazepam

• Benzodiazepina

• Ansiolitico, miorilassante, anticonvulsivante, sedativo

• Tienor, Rizen (compresse, gocce)

Clotiazepam aggiunto a Coca Cola bevuta la sera del furto!!!!

Capelli

Seg

mento S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8

Cm 0 -0.50.5 -1.0

1.0 -1.5

1.5 -2.0

2.0 -2.5

2.5 -3.0

3.0 -3.5

3.5 -4.0

Conc.

(pg/mg) 11 12 8 5 6 5 5 6

Caso n. 3 – Analisi segmentale capelli

Assunzione clotiazepamnel periodo del furto

Assunzione occasionale clotiazepam

nei mesi precedenti il furto

Grazie per l’attenzione!

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