Paola Andrea Ayala Ramírez, Bac, MSc

Buitrago T, Poveda A, Rodríguez J Esp. Pathology, Olaya M PhD, García-Robles R PhD

• Instituto de Genética Humana, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Javeriana

• Instituto de Investigación en Nutrición, Genética y Metabolismo, Facultad de Medicina, Universidad El Bosque

• Departamento de Patología, Hospital Universitario San Ignacio, Pontificia Universidad Javeriana

• La preeclampsia (PE) es un desorden hipertensivo multisistémico de etiología desconocida

• Después de la semana 20• En Colombia:– Trastornos hipertensivos del embarazo: principal

causa agrupada de morbilidad materna extrema en las pacientes, presentándose en 60,5% del total de las pacientes y en el 59,3% de las adolescentes

• Presión sistólica >140mmHg y/o diastólica >90mmHg y proteinuria >0.3 g en orina de 24 horas, 0,3 mg/dl relación proteina/creatinina o lectura de tira de orina mayor a 1 +

Cunningham FG, Obstetricia de Williams, 2006

Cunningham FG, Obstetricia de Williams, 2006

Hemostasis en el embarazo

Factores anti-fibrinolíticos

Factores antitrombóticos

Factores trombogénicos

Lanir N, et al. Procoagulant and anticoagulant mechanisms in human placenta, 2003

• Evaluar los niveles de mRNA y proteína del factor tisular y la trombomodulina en placentas de pacientes con preeclampsia en un estudio de casos y controles

• Evaluar los cambios histopatológicos para obtener nueva información que permita comprender mejor la fisiopatología de esta enfermedad.

• Estudio observacional analítico de tipo casos ycontroles, siendo la preeclampsia el evento deinterés.

• Muestras de 16 placentas de mujeres condiagnóstico de preeclampsia y 19 muestras deplacenta de pacientes con fetos sanos yembarazo sin complicaciones como poblacióncontrol del Hospital Universitario San Ignacio.

Tabla No. 1. Aspectos buscados en la revisión macroscópica de las placentas.

TROMOBISIS FIBRINA HEMATOMA ATEROPATIA DECIDUALINFARTOS VELLOSITARIOSNORMOCITOS PRESENTESHIPERPLASIA DEL SINCITIOEDEMA QUISTE X

Departamento de patología. Hospital San Ignacio.

Departamento de patología. Hospital San Ignacio.

• Corte de aproximadamente 2 cm con escalpelo estéril

• La muestra de tejido se introdujo en un tubo de 2 ml con 500 μl de RNAlater (Qiagen) y se almacenó a -40°C hasta su procesamiento

http://altitudchulec.blogspot.com/2010/05/la-placenta-en-lagran-altura.html.

Extracción de RNA de placenta con Trizol

modificado de invitrogen,inc.

75 mg de tejido1 ml de Trizol + 500 µl de sln

de lisis y 16 µl de proteinasa K200 µl de

cloroformo

Fase acuosa con isopropanol

Lavado con etanol 75%

Resuspendió en 50 µl H2O de DEPC

CuantificaciónNanoDrop

Tratamiento con 5U de DNAsa

Cuantificación NanoDrop

48 horas

10 minutos

Retrotranscripción 1 µg de RNA

• La cuantificación de mRNA de FT y TM se llevó a cabo el método de cuantificación absoluta con curva estándar normalizando con el gen housekeeping GAPDH

La cuantificación de proteínas de

factor tisular y trombomodulina. Se

realizó mediante la prueba Elisa

sándwich de laboratorio Sekisui

diagnostics.

Laboratorio Sekisui diagnostics

CASOS % CONTROLES % VALOR P

TROMBOSIS 53.8 37.84 0.25

FIBRINA 92.3 73.68 0.205

HEMATOMA 0.0 10.5 0.99

ARTERIOPATIA DECIDUAL 23.08 0.0 0.027

INFARTOS VELLOSITARIOS 61.5 0.0 0.001

NORMOCITOS PRESENTES 69.2 43.37 0.163

ESTASIS LEUCOCITARIA 7.69 10.53 0.99

HIPERPLASIA DEL SINCITIOTROFOBLASTO 61.54 21.05 0.0017

EDEMA 0.0 21.05 0.31

QUISTE DE CELULAS X 0.0 26.32 0.072

• Se encuentra una diferencia de laproporción de arteriopatía decidual,infartos vellocitarios e hiperplasia delsincitiotrofoblasto entre casos y controleslas cuales son estadísticamentesignificativos.

• En los hallazgos macroscópicos seencontraron diferencias estadisticamentesignificaticas en el peso, estando acordecon lo documentado en la literatura.

• El estudio de FT y TM en placentas de mujeres gestantes con diagnóstico de PE permite generar conocimiento sobre el compromiso de los mecanismos hemostáticos en la placenta en estas enfermedades. – Implicaciones en prevención, diagnóstico,

pronóstico y tratamiento.

• Evidencias de compromiso expresión FT y TM en placentas de embarazos con preeclampsia

• Cabe resaltar que este es el primer estudio a nivel mundial que mide los niveles de mRNAde TM en PE y adicionalmente es el primer estudio que encontró diferencias de la expresión de TM en PE

– Los hallazgos encontrados tanto en el estudiomolecular como histopatológico apoyan lodescrito en otros estudios y la literatura.