LE LINFOADENOPATIE I LINFOMI - Unità Funzionale di … · LINFOMI NON HODGKIN LINFOMA DI HODGKIN...
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Organi linfatici primari Organi linfatici periferici
mIg
BM.O.
Sangue RICIRCOLAZIONE
Progenitoref
LinfonodiMilzaTess. linfatico
associato
Cell
linfocitario associatoalle mucose/cute
TTIMO SangueLi fCell.
staminaleLinfon.
TCR
RICIRCOLAZIONE
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DISTRIBUTION of B CELLS in the LYMPH NODE CORTEX
GC = germinal center; Mn = mantle, P = paracortex (mainly T cells); SC subcortexProfAM Vannucchi-AA2009-10
COSA ESPRIME L’AUMENTO DI VOLUME DEI LINFONODILINFONODI
• RISPOSTA IMMUNE AD AGENTI INFETTIVI (BATTERICI EA )VIRALI)
• INFILTRAZIONE DI CELLULE INFIAMMATORIE IN INFEZIONILOCALIZZATE (linfoadeniti)
• INFILTRAZIONE DI CELLULE NEOPLASTICHE (metastasi)( )
• PROLIFERAZIONE NEOPLASTICA LOCALE (linfomi e leucemie)
• INFILTRAZIONE DI MACROFAGI INFARCITI DI LIPIDI(tesaurismosi)
LinfoadenopatiaLinfoadenopatia < 30 anni = 80% infiammatoria> 50 anni = 60% neoplastica 50 anni 60% neoplastica
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ClassificazioneClassificazione WHOWHO èè basatabasata sullesulle caratteristichecaratteristiche delladella cellulacellulaneoplastica,neoplastica, aa livellolivello::••MorfologicoMorfologico••ImmunofenotipicoImmunofenotipico
M l lM l l LINFOMI••MolecolareMolecolare
LINFOMI NON HODGKIN LINFOMA DI HODGKINLINFOMI NON HODGKIN LINFOMA DI HODGKIN
aggressivi indolentiaggressivi indolenti
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EPIDEMIOLOGIA dei LINFOMI
tant
i00
abi
tr
100.
00nz
a pe
rIn
cide
nI
N l ’60 000 l’ d d l f è ù h ddNegli anni ’60-2000, l’incidenza dei linfomi è più che raddoppiataProfAM Vannucchi-AA2009-10
Linfonodi laterocervicali e sottomentonieri in LNHLinfonodi laterocervicali e sottomentonieri in LNH
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Pacchetto di linfonodi sottomentonieri con ulcerazionePacchetto di linfonodi sottomentonieri con ulcerazione cutanea in linfoma non HDG
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Immagine TAC di numerosi linfonodi ingranditi in sedeImmagine TAC di numerosi linfonodi ingranditi in sede addominale in corso di linfoma non HDG
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Immagine TAC di imponente adenomegaliaImmagine TAC di imponente adenomegalia mediastinica in corso di linfoma linfoblastico T
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Slargamento mediastinico in linfoma non Hdg TSlargamento mediastinico in linfoma non Hdg T
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ACCERTAMENTI DI LABORATORIO
non specificinon specifici“specifici”“specifici”
• esame emocromocitometricocompleto, con formula
• VEScomp to, con formu a
• tests sierologici (HIV, EBV,CMV toxoplasmosi)
• LDH
ß2 microglobulinemiaCMV, toxoplasmosi)
• Biopsia osteomidollare
• ß2-microglobulinemia
• Elettroforesi proteine -> IFp
• Biopsia linfonodale NOAGOASPIRATO!!
pse picco monoclonale
• Dosaggio IgAGOASPIRATO!!
• Esami
• Dosaggio Ig
immunofenotipici/citogenetici/molecolari ProfAM Vannucchi-AA2009-10
STADIAZIONE dei LINFOMI (i)
Febbre
Calo ponderale Sudorazioni p> 10 %
Sudorazioni notturne
Esame obiettivo Ricerca dei sintomi B
R TC B Rx toracestandard
TC total body
Biopsia osteomidollareProfAM Vannucchi-AA2009-10
STADIAZIONE dei LINFOMI (ii)STADIAZIONE dei LINFOMI (ii)
A: assenza di sintomi sistemiciB: presenza di sintomi sistemicip
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Analisiimmunoistochimica
Esame clinicoimmunoistochimica
Diagnosii t t
Biologia
integratadei linfomiEsame microscopico
morfologico Biologiamolecolare
morfologico
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MORFOLOGIA dei LINFOMI (iii)
Espressione di bcl-2 in unlinfonodo normale un linfoma follicolare
p
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MECCANISMI di LINFOMAGENESI
EZIOLOGIA PATOGENESI FENOTIPO
?Attivazione di
proto-oncogeniproliferazione
?(90 %)
proto oncogeni
apoptosivirus
(5-10 %)
Inattivazione dii
p p
immunodeficit(1 5 %) geni
onco-soppressoridifferenziazione(1-5 %)
pesticidipesticidi(0.5-1 %)
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PRINCIPALI MARCATORI MOLECOLARI NEI LNHPRINCIPALI MARCATORI MOLECOLARI NEI LNH
CARIOTIPO ONCOGENE FUNZIONECARIOTIPO ONCOGENE FUNZIONE
FOLLICOLARE t(14;18) bcl-2 Prevenzione apoptosi
MANTELLARE t(11;14) bcl-1 D1 ciclina
A GRANDI CELLULE B
t(3;14)t(3;2)
bcl-6 Fattore di trascrizione nucleare
t(3;22)BURKITT t(8;14)
t(8;22)c-Myc Fattore di
trascrizione nucleare( ; )t(2;8)
L. ANAPLASTICO
t(2;5) ALK-NPM Fattore di trascri ione n cleareANAPLASTICO trascrizione nucleare
Riarrangiamento geni IgHProfAM Vannucchi-AA2009-10
PROTO-ONCOGENE TRANSLOCATIONS
CRCR
partner genes (Ig or other)proto-oncogene partner genes (Ig or other)proto oncogene
Chromosomal translocation
CRR C
Transcriptional deregulationf hFusion protein of the proto-oncogeneFusion protein
(da, Gaidano G.)ProfAM Vannucchi-AA2009-10
RIARRANGIAMENTO bclRIARRANGIAMENTO bcl--2/IgH2/IgH
18q2118q21 MBR MCR
I≈80% ≈20%
II
14q3214q32 VH DH JH CH
t(14;18)(q32;q21) BCLt(14;18)(q32;q21) BCL--2/IgH2/IgH
MBR JH CHMBR H H
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“t(14;18), a journey to eternity”“t(14;18), a journey to eternity”
• BCL-2 è una proteina localizzata a livello delle membrane
t( ; 8), a jou ey to ete tyt( ; 8), a jou ey to ete ty
mitocondriale, reticolo endoplasmico, perinucleare;normalmente espressa nelle cellule emopoietiche
• Interviene nel fisiologico controllo della apoptosi linfocitaria• Interviene nel fisiologico controllo della apoptosi linfocitarianella zona del centro germinativo, sotto forma di uncomplesso eterodimerico con BAX
BAXBCL-2 APOPTOSI BAX
BCL-2BAX
BAX-BAX
BAX-BCL-2
BAX-BAX
BAX-BCL-2
Meijerink JP, Leukemia 1997; 11:2175ProfAM Vannucchi-AA2009-10
RIARRANGIAMENTO bclRIARRANGIAMENTO bcl--2/IgH 2/IgH gg
Analisi cariotipica (>80% casi t(14;18)+)
FISH (≈80-90% casi t(14;18)+)
Southern blotting (>90% casi bcl-2/IgH+)
PCR “convenzionale & nested” (40-80% bcl-2/IgH+)
Con nested PCR, ≅50% di 36 soggetti normali è risultato bcl-2/IgH+ utilizzando 10 μg DNA da g μgsangue periferico
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DIAGNOSTICA MOLECOLARE DEL L. FOLLICOLARE
LNH: Istotipo SensibilitàRiarrangiamento Tutte le forme 1 / 100.000IgH
Tutte le forme linfoproliferative B
1 / 100.000
Bcl2/IgH L follicolare 1/ 1 000 000Bcl2/IgH L. follicolare 1/ 1.000.000
18q21 14q32
JHBcl-2
q q
“nested PCR”ProfAM Vannucchi-AA2009-10
RISPOSTA ALLA TERAPIARISPOSTA ALLA TERAPIA
MONITORAGGIO della CONTAMINAZIONE bclMONITORAGGIO della CONTAMINAZIONE bcl--2/IgH2/IgHnelle PREPARAZIONI di CELLULE STAMINALInelle PREPARAZIONI di CELLULE STAMINALI
•Il purging con 3-4 anti-B MoAbp g gseguito dalla separazione immuno-magnetica è più efficace della lisida complemento.
•Frazioni altamente purificate diCD34+ (e CD34+/CD19+) sono
2- BM diagnosi
CD34+ (e CD34+/CD19+) sonouniformemente bcl-2/IgH-
g3,6- BM pre-espianto4,7- CD34-
+5,8- CD34+Negrin RS, JCO 1994;1021-Voso MT, Blood 1997;3763-
Freedman AS, Blood 1999;3325 ProfAM Vannucchi-AA2009-10
BCL-6 E LNH B A GRANDI CELLULE DIFFUSO
• Alterazioni coinvolgenti il gene BCL-6 (3q27) si riscontrano nel 100% dei LNH a grandi cellule diffusi (≈35% per traslocazioni condei LNH a grandi cellule diffusi (≈35% per traslocazioni con cromosomi 14,2,22, più traslocazioni varianti)
• Bcl-6 è una proteina che funge da repressore della trascrizione genica. E’ l tti t l t i ti t è t iE’ espresso selettivamente nel centro germinativo, mentre è assente nei linfociti B “vergini” (pre-GC) e nelle cellule B memoria e plasmacellule (post-GC).
PROMOTER PARTNER(35% casi)
5’ 3’1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
MUTAZIONI(65% i)(65% casi)
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BCL-1 E LNH MANTELLARE
• 65% casi di LNH-mantellare è positivo con l’esame citogenetico[ (11 14)] 100% è i i l’ l l [BCL 1][t(11;14)], 100% è positivo con l’esame molecolare [BCL-1]
• Giustapposizione della regione joining del gene IgH sulcromosoma 14 con una regione 11q13 corrispondente al genecromosoma 14 con una regione 11q13 corrispondente al geneBCL-1
• ≈ 60% casi riarrangiamento sono localizzati in una corta regione• ≈ 60% casi riarrangiamento sono localizzati in una corta regione(Major Translocation Cluster, MTC) , 10-20% più distali
• Ciclina D1 non è normalmente espressa nei linfociti o nelle celluleCiclina D1 non è normalmente espressa nei linfociti o nelle cellulemieloidi, mentre risulta costantemente espressa nei LNHmantellari, in rari casi di mieloma multiplo (<5%), e in rari casi diLLC con decorso aggressivo
• La ciclina D1 interviene nella regolazione del ciclo cellulare, nelpassaggio dalla fase G1 alla fase S
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“The t(14;18) defines a unique subset of diffuse large B“The t(14;18) defines a unique subset of diffuse large B--cell cell lymphoma with a germinal center Blymphoma with a germinal center B cell gene expression profile”cell gene expression profile”lymphoma with a germinal center Blymphoma with a germinal center B--cell gene expression profilecell gene expression profile
Germinal center B-cell like
L.GCBD
PB activated B cell likeB-cell like
Huang JZ, Blood 2002; 99:2285 – Alizadeh AA, Nature 2000; 403: 503ProfAM Vannucchi-AA2009-10
Immunotherapy of Non Hodgkin’s lymphomas
•Monoclonal antibodies as single agents
•Monoclonal antibodies combined with chemotherapy
•Radioimmunotherapy
A ti i th•Active immunotherapy
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Rit i b h i d ti CD20 hi i M AbRituximab: a humanized anti CD20 chimeric MoAb
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Therapeutic vaccination for lymphoid malignanciesp y p gusing an idiotype-KLH strategies
Levy et al., ASH 2001 ProfAM Vannucchi-AA2009-10