Incertezza di misura in microbiologiaAIA041208 · Secondo criteri di tipo fisico Categoria I •...

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A.Maiello, D.Spolaor - ISO 7218:2007 - ISO 19036:2006 e calcolo dell'incertezza di misura 1

Istituto per la Qualità e le Tecnologie Agroalimentari - Thiene (VI)

Incertezza di misura in microbiologia: il percorso di adeguamento alle

ISO 7218:2007 e ISO 19036:2006. Prime anticipazioni sul prossimo

Amendment alla ISO 19036

Dino Spolaor

Veneto Agricoltura - Istituto per la Qualità

e le Tecnologie Agroalimentari – Thiene VI

[email protected]

Montegrotto Terme, 4 dicembre 2008



ISO 7218:2007

MICROBIOLOGY OF FOOD AND ANIMAL FEEDING STUFFS – GENERAL REQUIREMENTS AND GUIDANCE FOR MICROBIOLOGICAL EXAMINATION

Scopo e Campo di applicazione- Guida per i laboratori di microbiologia - Applicabile ad alimenti e mangimi, all’ambiente di produzione e manipolazione degli alimenti.

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N° di piastre per diluizioneISO 7218:2007 par. 10.2.2

Una piastra per almeno due diluizioni

1. per laboratori che operano “under quality assurance” in accordo con i principi della ISO 17025

Due piastre

1. Laboratori “non ISO 17025”

2. Se richiesta una sola diluizione



Relazione ISO 7218 e metodi normati

• ISO 7218:2007 Par. 1 Scope

… The requirements of this International Standard supersede the corresponding ones of existing specific standards.

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CASI PARTICOLARIUNA PIASTRA PER DILUIZIONE (range 10-300)

Quando il range entro il quale devono essere accettate le piastre è compreso tra 10 e 300, bisogna,

prima di rigettare le piastre a causa di numeri al di fuori del range, verificare se comunque tali valori si trovano

all’interno dell’intervallo di Fiducia (I.F.) : 8 – 334.

10 300

8 334



CASI PARTICOLARIUNA PIASTRA PER DILUIZIONE (range 10-150)

Quando il range entro il quale devono essere accettate le piastre è compreso tra 10 e 150, bisogna,

prima di rigettare le piastre a causa di numeri al di fuori del range, verificare se comunque tali valori si trovano all’interno

dell’intervallo di Fiducia (I.F.): 7 – 167.

10 150

7 167

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Riepilogo modalità di espressione del risultato

0

3

12

45

8

67

910

m.o. inferiori a 1/d UFC/g

m.o. presenti ma inferiori a 4/d UFC/g

UFC stimate / g

UFC / g



ISO / TS 19036:2006

Microbiologia degli alimenti

Linea Guida per la stima dell’incertezza di misura per le determinazioni quantitative

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ISO / TS 19036:2006

Campo di Applicazione- Prodotti destinati al consumo umano ed animale- Campioni ambientali (aree di produzione e manipolazione

alimenti)

NON APPLICABILE- Prove in MPN

- Prove quantitative con bassa concentrazione di m.o. (UFC<10)

rif alla ISO 7218 elaborazione di Amd a ISO 19036

- Prove QUALITATIVE elaborazione di un nuovo documento



SCARTO TIPO DI RIPRODUCIBILITA’( sR)

Modalità di Calcoloin ordine di preferenza

1th - sR intraintralaboratorio (Riproducibilità intra laboratorio)

2th - sR di un metodo(dati di validazione interlaboratorio)

3th - sR da proficiency trial,interlaboratorio

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U = 2 uc(y) = 2 sR

U = incertezza estesa2 = fattore di copertura k ; p=95%uc(y) = incertezza composta




QUANDO CALCOLARLO?

• Per ciascun tipo di m.o. target(o gruppi)

• Per ciascuna matrice (o gruppi)

• Per ciascun metodo

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Problema: quali matrici?Secondo criteri di tipo fisico

Categoria I• Liquidi e polveri (es. latte, latte di cocco, acqua, latte

essiccato, caseinati, cipolle in polvere)

Categoria II• Solidi ben miscelati (es. carne macinata, carne

separata meccanicamente, salumi, crushed meat, panna montata, gelato al latte, crema di soia, ecc.)



Problema: quali matrici?Secondo criteri di tipo fisico

Categoria III• Solidi di piccola taglia (es. prezzemolo/funghi

essiccati, carote e sedano rapa grattugiati, tagliolini secchi, insalata IV gamma, gamberetti, cozze, cereali, mangimi, nocciole tritate)

Categoria IV• Altri solidi (carni non tritate, formaggi, prodotti di

pasticceria, pesce, piatti pronti, prosciutto,)

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Protocollo sperimentale

Food sample

2nd operator (Condition B)1st operator (Condition A)

Artificial contamination(if needed) Initial suspensionInitial suspension

AnalysisAnalysis



Stesso campione analizzato da due operatori diversi

contemporaneamente(se instabile)

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Come procedere?

Campione di alimento

Sottocampione reso omogeneo

campione di provaA campione di provaB

Sospensione A Sospensione B



Stesso campione (stabile)analizzato dallo stesso operatore in giorni diversi

GIORNO 1

GIORNO 2

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sR DI UN METODO valutazione INTRALABORATORIO

Protocollo

- Matrice (realmente contaminate /m.o. stressati)

- Sottocampione (utilizzato per prelevare la porzione per test)

- Almeno 10 campioni per ciascuna matrice

- Diversi giorni in un lungo periodo di tempo



sR DI UN METODO valutazione INTRALABORATORIO

Protocollo- Campioni con diversi livelli di contaminazione (quelli

usuali del lab)- Calcolo SR non per livello- Trasformazione log dei dati (stabilizzazione della varianza di

riproducibilità / livelli di contaminazione (<10 ufc escluse!)

- Contaminazione artificiale (se richiesta): attenzione al nuovo elemento di variabilità (simulare il più possibile la contaminazione naturale in termine di m.o. stressati / di competizione / “background microflora”)

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sR INTRALABORATORIO

n

bas

ni

iii

R 2

)log(log1

2∑=

=

−=

ai e bi = primo e secondo risultato della prova sullo stesso campione(logai-logbi) = differenza tra i 2 risultati, espressi in logaritmo decimalen = numero di prove eseguite in doppio (n ≥10)i = 1, 2, … n



sR INTRALABORATORIO

Radice della Sommatoria/n

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Conte < 10 UFC

Nel caso di conte che presentano meno di 10 UFC per piastra, in attesa dell’Amendment alla ISO 19036, se richiesto, esprimere l’incertezza di misura solo se entrambe le piastre contengono meno di 10 colonie per piastracome

Intervallo di Fiducia ricavato dalle tabelle

A1 e A2 – della ISO 7218:1996



ISO /TS 19036:2006 / ….Amd1(Amd 1 - Stadio di approvazione 50.0 - 11 agosto 2008)

...la ISO 19036 parte dall’assunto che la stima dell’incertezza di misura basata sul calcolo dello scarto tipo di riproducibilità, limitata alle conte superiori a 10 UFC/piastra, trascuri l’errore casuale dato dalla distribuzione di Poisson.

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ISO /TS 19036:2006 / ….Amd1(Stadio di approvazione 50.0 - 11 agosto 2008)

∑ C188610 ,

basse conte (<10 UFC),

nella formula un fattore di correzione che tiene conto della componente della varianza dovuta alla distribuzione di

Poisson.




Nell’Amendment 1 vengono date le condizioni, calcolabili matematicamente, per decidere di volta in volta se applicare tale fattore correttivo al calcolo dell’incertezza o considerarlo trascurabile

- in dipendenza dello scarto tipo di riproducibilità attribuito a ciascun metodo

- in dipendenza della somma delle colonie contate su tutte le piastre considerate

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∑+=

C188610

2U s2

R

,

RS2U =Alte conte:incertezza estesa calcolata con scarto tipo di riproducibilità

Basse conte: vengono combinate le due componenti




Confronto formule per basse e alte conte

0,00

0,20

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 30 40 50 60 70 80 90 100

110

120

130

140

150

Somma conte piastre

Ince

rtez

za e

stes

a

Formula semplificata

Con correzione componente di Poisson

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0,142

0,09

0,03

SR(log10 ) cfu/g

0,120,28I C

0,120,18IB

0,050,06ILatte in polvere

A

SR

19036U

(log10 ) cfu/gCategoria/

matrice

Laboratori

Matrice latte - Microorganismi a 30° C - ISO 4833:2003



INCERTEZZA DI MISURA (ISO/TS 19036:2006 )

COME va espressa?

- Risultato ed Intervallo in log10

5,0 log ± 0,2 log(UFC)/g oppure 5,0 log [ 4,8 , 5,2 ]

- Risultato ed Intervallo in Valore naturale100.000 UFC/g [ 63.000 , 160.000 ]105 UFC/g [ 6,3 x 104, 1,6 x 105 ]

- Intervallo in percentuale100.000 UFC/g [ 100.000 -37% , 100.000 +58% ]

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INCERTEZZA DI MISURA (ISO/TS 19036:2006 )

DOVE va espressa?Sul R. di P.: come incertezza estesa U associata al risultato nella sua stessa forma (log, n°) oppure espressa in percentuale (%)

Definiti : il Livello di probabilità p ed il Fattore di copertura k

Gradi di Libertà: N.A.Recupero: N.A.

RIPROLAB REV. 4 - VA.xls MICROINCERT 2008 rev. 4H - VA.xls



Calcolo Incertezza di Misura secondo ISO 19036

• In alcune slides che seguono saranno presentati alcuni estratti dei fogli di calcolo Microincert2008 e Riprolab, aggiornati secondo le ultime revisioni delle norme di riferimento. I fogli sono già predisposti per rispondere ai requisiti richiesti dall’Amendment19036 di prossima uscita.

• I fogli sono in uso nei Laboratori di Veneto Agricoltura – Istituto per la Qualità e le Tecnologie Agroalimentari – Thiene (Vicenza)

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RIPROLAB - Foglio per il calcolo dello scarto tipo di riproducibilità dei metodi di prova (estratto)

FOGLIO CALCOLO RIPRODUCIBILITA' INTRALABORATORIO (ISO/TS 1903 6:2006)Volume del diluente 9 ml Rapporto di� diluizione

Stafilococco coag.+Volume dell'inoculo 1 ml 10

METODO DI PROVA 90

Matrice II SR = 0,11 U = ± 0,22 log N. campioni 14

Prima diluizione utile

1a

diluizione Piastra 1

1a


2a


2a


Conferma colonie

P = piastra

C = campione

UFC/g-ml G2GIUDIZIO

Omogeneità TOTALE

G2Log (UFC) Diff. Log Lim.inf. Lim.sup.

2 38 44 2 4 - 4,0E+03 1,72 OK 3,60 2,4E+03 6,6E+03

2 30 31 4 6 - 3,2E+03 2,28 OK 3,51 0,09 2,0E+03 5,3E+03

1 20 1 1 - 1,8E+02 1,06 OK 2,26 1,1E+02 3,0E+02

1 34 7 5 - 3,8E+02 2,93 OK 2,58 0,32 2,3E+02 6,3E+02

3 48 45 3 6 - 4,6E+04 1,13 OK 4,67 2,8E+04 7,6E+043 32 45 8 - 4,0E+04 5,40 OK 4,61 0,06 2,5E+04 6,6E+043 27 43 7 5 - 3,7E+04 6,64 OK 4,57 2,3E+04 6,1E+043 39 40 5 4 - 4,0E+04 0,26 OK 4,60 0,03 2,4E+04 6,6E+043 17 4 - 1,9E+04 1,97 OK 4,28 1,2E+04 3,1E+043 44 - 4,4E+04 n.d. n.d. 4,64 0,36 2,7E+04 7,2E+043 23 30 1 2 - 2,5E+04 2,36 OK 4,41 1,5E+04 4,2E+043 50 40 4 3 - 4,4E+04 1,70 OK 4,64 0,24 2,7E+04 7,2E+043 43 35 6 6 - 4,1E+04 2,56 OK 4,61 2,5E+04 6,7E+043 45 51 6 9 - 5,0E+04 3,30 OK 4,70 0,09 3,1E+04 8,3E+043 47 51 6 2 - 4,8E+04 2,58 OK 4,68 2,9E+04 7,9E+043 57 57 5 5 - 5,6E+04 0,16 OK 4,75 0,07 3,4E+04 9,3E+043 48 45 7 7 - 4,9E+04 1,94 OK 4,69 3,0E+04 8,0E+043 55 61 4 4 - 5,6E+04 1,46 OK 4,75 0,06 3,4E+04 9,3E+043 47 52 4 8 - 5,0E+04 1,99 OK 4,70 3,1E+04 8,3E+043 48 48 6 6 - 4,9E+04 0,50 OK 4,69 0,01 3,0E+04 8,1E+043 44 50 8 4 - 4,8E+04 2,34 OK 4,68 2,9E+04 7,9E+043 52 38 5 6 - 4,6E+04 2,65 OK 4,66 0,02 2,8E+04 7,5E+043 30 35 8 5 - 3,5E+04 5,53 OK 4,55 2,2E+04 5,8E+043 38 38 2 8 - 3,9E+04 4,48 OK 4,59 0,04 2,4E+04 6,4E+04

Specie microbica sottoposta a conteggio



RIPROLAB - Foglio di validazione (estratto)FOGLIO CALCOLO RIPRODUCIBILITA' INTRALABORATORIO (I SO/TS 19036:2006)

Volume del diluente 9

Volume dell'inoculo 1

METODO DI PROVA

Matrice I U = ± 0,30 log N. campioni 10

Prima diluizione utile

1a


1a


2a


2a


Conferma colonie

P = piastra

C = campione

UFC/g-ml G2GIUDIZIO

Omogeneità TOTALE

G2Log (UFC) Diff. Log

3 67 - 6,7E+04 n.d. n.d. 4,83

3 87 - 8,7E+04 n.d. n.d. 4,94 0,115 71 - 7,1E+06 n.d. n.d. 6,85

5 62 - 6,2E+06 n.d. n.d. 6,79 0,064 35 - 3,5E+05 n.d. n.d. 5,544 44 - 4,4E+05 n.d. n.d. 5,64 0,105 100 - 1,0E+07 n.d. n.d. 7,005 43 - 4,3E+06 n.d. n.d. 6,63 0,375 190 - 1,9E+07 n.d. n.d. 7,285 170 - 1,7E+07 n.d. n.d. 7,23 0,054 23 - 2,3E+05 n.d. n.d. 5,363 150 - 1,5E+05 n.d. n.d. 5,18 0,197 53 - 5,3E+08 n.d. n.d. 8,727 41 - 4,1E+08 n.d. n.d. 8,61 0,112 100 - 1,0E+04 n.d. n.d. 4,002 120 - 1,2E+04 n.d. n.d. 4,08 0,083 30 - 3,0E+04 n.d. n.d. 4,482 130 - 1,3E+04 n.d. n.d. 4,11 0,366 110 - 1,1E+08 n.d. n.d. 8,047 22 - 2,2E+08 n.d. n.d. 8,34 0,30

- #DIV/0! nd nd

Specie microbica sottoposta a conteggio

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VENETO AGRICOLTURA - THIENE Volume del diluente 9 mlRapporto di diluizione

MODULO PER L'INSERIMENTO DEI DATI ANALITICI Volume dell'inoculo 1 ml 10

I II III IV

Cat

egor

iaM

atric

e

Codice prova

DATA AnalistaCodice

campione

Prima diluizione

utile

1a


1a


2a


2a


Conferma colonie

P = piastra

C = campione

UFC/g-ml

Limite inferiore UFC/g-ml

Limite superiore UFC/g-ml

Met

odo

calc

olo

Ince

rtez

za

# II 90 Tecnico 1 3914/2 3 19 - 1,9E+04 1,1E+04 3,1E+04 AMD 19036

15 Tecnico 2 3922/1 5 206 187 0 17 - 1,9E+07 1,7E+07 2,0E+07 MIKES

15 Tecnico 3 3922/2 5 79 84 9 10 - 8,3E+06 7,7E+06 8,8E+06 MIKES

# 118 Tecnico 1 2539 2 41 35 4 1 - 3,7E+03 2,8E+03 4,5E+03 MIKES

# II 118 Tecnico 1 2539 2 23 14 2 0 - 1,8E+03 6,8E+02 4,6E+03 AMD 19036

# II 94 Tecnico 3 2539 2 80 14 12 - 8,8E+03 4,6E+03 1,7E+04 ISO 19036

# II 94 Tecnico 3 2539 2 79 86 7 11 - 8,3E+03 4,4E+03 1,6E+04 ISO 19036

# II 118 Tecnico 2 2864 2 83 90 7 5 - 8,4E+03 3,4E+03 2,1E+04 ISO 19036

# # II 133 Tecnico 1 2840 1 90 19 13 - 1,0E+03 6,3E+02 1,6E+03 AMD 19036

# # II 133 Tecnico 2 2841 2 22 26 2 4 - 2,5E+03 1,5E+03 4,1E+03 AMD 19036

# # II 133 Tecnico 1 2842 2 100 94 9 13 - 9,8E+03 6,3E+03 1,5E+04 ISO 19036

# # I 120 Tecnico 2 2855/1 3 175 182 26 27 - 1,9E+05 1,2E+05 2,8E+05 ISO 19036

# # I 120 Tecnico 3 2855/2 3 130 140 17 13 - 1,4E+05 9,0E+04 2,1E+05 ISO 19036

# # I 120 Tecnico 1 2855/3 3 76 73 5 5 - 7,2E+04 4,6E+04 1,1E+05 AMD 19036

# # I 120 Tecnico 1 2855/4 3 124 130 16 13 - 1,3E+05 8,5E+04 1,9E+05 ISO 19036

# # I 120 Tecnico 3 2855/5 3 215 239 32 27 - 2,3E+05 1,5E+05 3,5E+05 ISO 19036

# # I 120 Tecnico 3 2855/6 3 48 47 5 3 - 4,7E+04 3,0E+04 7,4E+04 AMD 19036

# # I 120 Tecnico 2 2855/7 3 41 41 1 3 - 3,9E+04 2,5E+04 6,2E+04 AMD 19036

65 Tecnico 1 2875 5 91 12 11 - 9,5E+06 8,2E+06 1,1E+07 MIKES

# II 93 Tecnico 2 2875 7 31 31 0 4 - 3,0E+08 1,5E+08 6,1E+08 AMD 19036

# # II 133 Tecnico 1 2840 1 90 19 13 - 1,0E+03 6,3E+02 1,6E+03 AMD 19036

# # II 133 Tecnico 2 2841 2 22 26 2 4 - 2,5E+03 1,5E+03 4,1E+03 AMD 19036

MICROINCERT2008 –Foglio per il calcolo dell’incertezza di misura secondo ISO 19036 (estratto)



MICROINCERT 2008 rev. 4

Conteggio UFC/g-ml G2 Giudizio

omogeneità G2/(n-1)Giudizio

variabilitàOmogeneità 1 a

diluizioneGiudizio

1a dilOmogeneità 2 a

diluizioneGiudizio

2a dilProporzionalità Tra diluizioni

Giudizio Tra

diluizioni1,9E+04 n.d. n.d. n.d. NC n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d.1,9E+07 1,28 OK 0,64 OK 0,92 OK n.d. n.d. 0,36 OK8,3E+06 0,59 OK 0,20 OK 0,15 OK 0,05 OK 0,38 OK3,7E+03 3,33 OK 1,11 Critico 0,47 OK 1,93 OK 0,93 OK1,8E+03 2,22 OK 1,11 Critico 2,21 OK n.d. n.d. 0,01 OK8,8E+03 4,39 OK 2,20 Critico n.d. n.d. 0,15 OK 4,24 Critico8,3E+03 1,31 OK 0,44 OK 0,30 OK 0,90 OK 0,12 OK8,4E+03 2,29 OK 0,76 OK 0,28 OK 0,33 OK 1,67 OK1,0E+03 8,21 Critico 4,11 Critico n.d. n.d. 1,13 OK 7,08 NC2,5E+03 1,26 OK 0,42 OK 0,33 OK 0,68 OK 0,25 OK9,8E+03 1,22 OK 0,41 OK 0,19 OK 0,73 OK 0,30 OK1,9E+05 6,69 OK 2,23 Critico 0,14 OK 0,02 OK 6,53 Critico1,4E+05 1,20 OK 0,40 OK 0,37 OK 0,53 OK 0,29 OK7,2E+04 1,74 OK 0,58 OK 0,06 OK 0,00 OK 1,68 OK1,3E+05 0,89 OK 0,30 OK 0,14 OK 0,31 OK 0,44 OK2,3E+05 5,05 OK 1,68 Critico 1,27 OK 0,42 OK 3,35 OK4,7E+04 0,74 OK 0,25 OK 0,01 OK 0,51 OK 0,23 OK3,9E+04 3,51 OK 1,17 Critico 0,00 OK 1,05 OK 2,46 OK9,5E+06 1,00 OK 0,50 OK n.d. n.d. 0,04 OK 0,96 OK3,0E+08 0,23 OK 0,11 OK 0,00 OK n.d. n.d. 0,23 OK1,0E+03 8,21 Critico 4,11 Critico n.d. n.d. 1,13 OK 7,08 NC2,5E+03 1,26 OK 0,42 OK 0,33 OK 0,68 OK 0,25 OK9,8E+03 1,22 OK 0,41 OK 0,19 OK 0,73 OK 0,30 OK1,9E+05 6,69 OK 2,23 Critico 0,14 OK 0,02 OK 6,53 Critico1,4E+05 1,20 OK 0,40 OK 0,37 OK 0,53 OK 0,29 OK7,2E+04 1,74 OK 0,58 OK 0,06 OK 0,00 OK 1,68 OK1,3E+05 0,89 OK 0,30 OK 0,14 OK 0,31 OK 0,44 OK2,3E+05 5,05 OK 1,68 Critico 1,27 OK 0,42 OK 3,35 OK4,7E+04 0,74 OK 0,25 OK 0,01 OK 0,51 OK 0,23 OK3,9E+04 3,51 OK 1,17 Critico 0,00 OK 1,05 OK 2,46 OK9,5E+06 1,00 OK 0,50 OK n.d. n.d. 0,04 OK 0,96 OK3,0E+08 0,23 OK 0,11 OK 0,00 OK n.d. n.d. 0,23 OK5,9E+03 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d.

OMOGENEITA' CONTE

ACCETTABILITA' CONTEISO 14461-1:2005 Annex A

MICROINCERT2008 – Foglio (estratto) per la Valutazione della qualità del dato analitico

19



MICROINCERT2008 – Foglio di riepilogo dei dati della qualità analitica (estratto)

CONTROLLO QUALITA' ANALITICA (per singolo analista) CONTROLLO QUALITA' ANALITICA (per singolo METODO)STATISTICA DEI GIUDIZI ESPRESSI TRAMITE IL TEST DEL G2 STATISTICA DEI GIUDIZI ESPRESSI TRAMITE IL TEST DEL G2

TECNICI OK Critico NC TOT OK % Critico % NC % Cod. prova OK Critico NC TOT OK % Critico % NC %Tecnico 1 39 4 1 44 88,6% 9,1% 2,3% 1 0 0 0 0 - - -Tecnico 2 33 3 1 37 89,2% 8,1% 2,7% 2 0 0 0 0 - - -Tecnico 3 35 0 0 35 100,0% 0,0% 0,0% 3 0 0 0 0 - - -Tecnico 4 0 0 0 0 - - - 4 0 0 0 0 - - -Tecnico 5 0 0 0 0 - - - 5 0 0 0 0 - - -Tecnico 6 0 0 0 0 - - - 6 0 0 0 0 - - -Tecnico 7 0 0 0 0 - - - 7 0 0 0 0 - - -Tecnico 8 0 0 0 0 - - - 8 0 0 0 0 - - -Tecnico 9 0 0 0 0 - - - 9 0 0 0 0 - - -Tecnico 10 0 0 0 0 - - - 10 0 0 0 0 - - -Tecnico 11 0 0 0 0 - - - 11 0 0 0 0 - - -Tecnico 12 0 0 0 0 - - - 12 0 0 0 0 - - -Tecnico 13 0 0 0 0 - - - 13 0 0 0 0 - - -Tecnico 14 0 0 0 0 - - - 14 0 0 0 0 - - -Tecnico 15 0 0 0 0 - - - 15 4 0 0 4 100,0% 0,0% 0,0%

16 0 0 0 0 - - -CONTROLLO QUALITA' ANALITICA (del laboratorio) 17 0 0 0 0 - - -

18 0 0 0 0 - - -OK Critico NC TOT OK % Critico % NC % 19 0 0 0 0 - - -

LABORATORIO 107 7 2 116 92,2% 6,0% 1,7% 20 0 0 0 0 - - -21 0 0 0 0 - - -22 0 0 0 0 - - -23 0 0 0 0 - - -24 0 0 0 0 - - -

Giudizi %

Numerosità giudizi Giudizi %

NB: La validità statistica della valutazione della qualità del dato analitico si può avere a partire da almeno un centinaio di dati. Per approfondimenti consultare la norma ISO 13843.

Numerosità giudizi Giudizi % Numerosità giudizi



MICROINCERT2008 – Foglio di validazione (estratto)VENETO AGRICOLTURA - THIENE MICROINCERT 2008 rev. 4

DATI DI VALIDAZIONE DEL FOGLIO DI CALCOLO

Foglio "Controllo Qualità Analitica" Prima diluizione utile

1a diluizione Piastra 1



2a diluizione Piastra 2 G2 Giudizio

omogeneità

ISO 14461-1:2005 Annex A 4.1.1 Example 1 4 251 305 31 36 7,61 OKISO 14461-1:2005 Annex A 4.1.3 Example 3 0 22 18 0,40 OKISO 14461-1:2005 Annex A 4.1.3 Example 3 0 35 41 0,47 OKISO 14461-1:2005 Annex A 4.1.3 Example 3 0 80 99 2,02 OKISO 14461-1:2005 Annex A 4.1.3 Example 3 0 191 164 2,06 OKISO 14461-1:2005 Annex A 4.1.3 Example 3 0 340 297 2,90 OKUNI UNI ENV ISO 13843 Appendice B.7.2 0 256 302 3,80 OKUNI ENV ISO 13843 Appendice B.7.2 0 228 146 18,13 NCUNI ENV ISO 13843 Appendice B.7.2 0 89 108 1,84 OKUNI ENV ISO 13843 Appendice B.7.2 0 27 29 0,07 OKUNI ENV ISO 13843 Appendice B.7.2 0 143 129 0,72 OKMikes J4/2003 Annex C 4 268 314 31 15 11,85 Critico

Foglio "Ins. Conferma colonie"1a diluizione Piastra

1

1.1 N. c

olon

ie

sotto

post

e a

conf

erm

a

N. c

olon

ie

conf

erm

ate 1a diluizione

Piastra 2

1.2 N. c

olon

ie

sotto

post

e a

conf

erm

a

N. c

olon

ie

conf

erm

ate 2a diluizione

Piastra 1

2.1

Vengono riportati esempi di applicazione del foglio di calc olo a dati numerici presentati in Norme di riferimento del se ttore e dei relativi dati di calcolo ottenuti neidiversi fogli di cui si compone il programma. Nella prima col onna si trova il riferimento alla norma o altro documento aut orevole utilizzato. Gli esempi numericipossono derivare anche da norme superate, purché i calcoli m atematici non siano stati oggetto di revisione. Nelle colon ne successive si riportano degli estratti deisingoli fogli di calcolo (la cui denominazione è in prima col onna, sopra il riferimento normativo) in cui vengono svilup pati i calcoli. Sono riportati in celle con sfondogiallo i dati oggetto di calcolo e in carattere numerico, di c olore rosso, i risultati che corrispondono a valori riporta ti nei documenti di riferimento. In alcuni casi i valoripossono differire, ma in misura non significativa, da quelli ufficiali per il diverso grado di appross imazione usato.E' buona prassi valutare periodicamente il mantenimento de lle funzioni di calcolo del programma inserendo nei singoli fogli i dati riportati nelle celle gialle al fine diverificare la corrispondenza tra i dati ottenuti e quelli riportati nel foglio di validazione.

20



sR DI UN METODOda

studio INTERLABORATORIO



Vantaggi e limiti

• Tale approccio consente ad un laboratorio che ha partecipato allo studio interlaboratoriodi valutare il proprio bias come parte della componentebias dell’incertezza di misura (aspetto non trattato nella ISO 19036).

• I limiti riportati di seguito giustificano la scelta di considerare tale approccio come opzione n. 2

21



sR DI UN METODO da studio INTERLABORATORIO

LIMITISe da un lato è richiesto che precisione e bias del laboratorio

siano conformi a quelli dello studio interlaboratorio, dall’altro bisogna riconoscere che solo pochi metodi

normati riferiscono dati di R• ISO 7932 (B. cereus)• ISO 7937 (C. perfringens)• ISO 6888 parte1 e 2 (S. coagulasi positivo)• ISO 11290-2 (L. monocytogenes)

NON è POSSIBILE GENERALIZZARE I DATI DI PRECISIONE




LIMITII valori di precisione derivati da uno studio

INTERlaboratorio sono ottenuti in condizioni molto limitate quanto a

• combinazioni di matrici, • ceppi di microrganismi, • livello di contaminazione e • microflora contaminante (se presente)

22




LIMITIUno studio INTERlaboratorio richiede

campioni molto omogenei e stabili, obiettivo che porta ad una riduzionedella naturale variabilità che si troverebbe in pratica (sottostima dell’incertezza)



sR DI UN METODO da

INTERLABORATORY PROFICIENCY TRIAL

23



sR DI UN METODO da INTERLABORATORY PROFICIENCY TRIAL

Prerequisiti per utilizzare tale sR• Il laboratorio ha usato nel trial il metodo

applicato usualmente nelle analisi• I campioni usati nel trial siano comparabili

(matrice e livello di concentrazione microbica) con quelli analizzati di norma nel laboratorio

• I laboratori partecipanti al trial abbiano usato prevalentemente lo stesso metodo



Ma se la matrice è …

ACQUA?

24



CALCOLO DELL’INTERVALLO DI FIDUCIA

• UNI ENV ISO 13843:2003. Qualità dell’acqua – Guida per la validazione di metodi microbiologici

• UNI 10674:2002. Acque destinate al consumo umano –Guida generale per determinazioni microbiologiche

• ISO 8199:2005 – Water quality –General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture



UNI 10674:2002 -INTERVALLO DI FIDUCIA

Caso di conta su una sola piastra

ii C2c ±

C1 = 67

Calcolo risultato conteggio e intervallo di fiducia

166767267C ±=±=

25



UNI 10674:2002 -INTERVALLO DI FIDUCIA

Caso di conta su 2 piastre

nC

kI.F. mp±=

2C

2,0- mmC

2C

, m02Cm +

n = numero di piastre (prove)Cm = media delle n conteKp = fattore di copertura per p = 95%1,96 arrotondato a 2,0

Limite inferiore:

Limite superiore:mm C41c ,+

mm C41c ,−

Conte comprese tra 15 e 300 ufc per piastra



ISO 8199:2005 Water quality – General guidance on

the enumeration of micro-organisms by culture

dove • Csè la stima del numero espresso come UFC (conteggio) nel volume di riferimento Vs.• Z è la somma delle colonie contate sulle piastre o membrane derivate dalle diluizioni

considerate nel calcolo del risultato• Vtot è il volume totale del campione originale distribuito nelle piastre sottoposte a conta.

stottot

s VV

Z

V

ZIFC ×

±=± 2

%95

stottot

s VV

Z

V

ZIFC ×

+±+=± 122%95

per Z≥20

perZ<20

Calcolo intervallo di fiducia (IF)

26



DOCUMENTI di RIFERIMENTO

• UNI CEI EN ISO/IEC 17025:2000 – Requisiti generali per la competenza dei laboratori di prova e di taratura

• UNI CEI ENV 13005:2000 - Guida all’espressione dell’incertezza di misura• MIKES - Centre for metrology and accreditation, Publication J4/2003, Uncertainty of

quantitative determinations derived by cultivation of microorganisms, Seppo I. Niemela• ISO 7218:1996/Amd. 1:2001 - Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules

for microbiological examination• ISO 7218:2007 - Microbiology of food and animal feeding stuffs – General requirements and

guidance for microbiological examinations• ISO/TS 19036:2006 - Microbiology of food and animal feeding stuffs –Guidelines for the

estimation of measurement uncertainty for quantitative determinations• UNI ENV ISO 13843:2003. Qualità dell’acqua – Guida per la validazione di metodi

microbiologici • UNI 10674:2002. Acque destinate al consumo umano –Guida generale per determinazioni

microbiologiche• ISO 8199:2005 – Water quality –General guidance on the enumeration of micro-organisms by

culture

Incertezza di misura in microbiologiaAIA041208 · Secondo criteri di tipo fisico Categoria I •...

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