Fitelab TS 1 dicembre 2011 · informato alla crioconservazione con ... Fivet/IVF (inseminazione in...

Fitelab TS 1 dicembre 2011

Esperienza ventennale nel Laboratorio di

Tossicologia e Farmacologia di Patologia

Clinica.

Dalla nascita del Sevizio in Procreazione

Medicalmente Assistita

Daniele Cicutto - S.S. Fisiopatologia della Riproduzione Umana e Banca del Seme - Az. Osp. S. Maria degli Angeli - Pordenone

Da tecnico di laboratorio di Patologia

Clinica a tecnico di lab. IVF

Seguire un percorso di formazione in Centri Universitari specializzati per acquisire competenze professionali al fine di gestire tutti gli aspetti del Laboratorio che vanno dalla tecnica, alla gestione, alla qualità

Imparare a lavorare in sterilità


Equipe Multidisciplinare

ginecologo

andrologo

biologo

tecnico di laboratorio

infermiera professionale

oss


Fecondazione Assistita: incontro di

gameti: ovocita-spermatozoo

coppia fertile


Fecondazione Assistita: incontro

gameti: ovocita-spermatozoo

Coppia infertile


Tecnico di laboratorio P.M.A.

Lavoro differenziato:

Attività fuori cicli P.M.A.

Settimana operativa I.V.F.


GESTIONE LABORATORIO

BIOLOGICO

Settimane non operative (2)

Studio campioni seminali

Processazione agoaspirati e biopsie testicolari (Tesa, Tese)

Attività crioconservazione materiale seminale e bioptico: Banca del Seme


GESTIONE LABORATORIO BIOLOGICO

Settimane non operative (1)

Controllo materiale di consumo e

gestione magazzino

Controllo materiale d’uso e

sterilizzazione

Ordine terreni e reagenti vari in

funzione attività programmata


Attività antecedente settimana

P.M.A.

Preparazione incubatori : decontaminazione ed umidificazione

Controllo dell’appropriatezza livelli CO2 e temperatura settati

Verifica piani termostatati

Avvio del laboratorio: preparazione piastre, pre-incubazione terreni ed olio per cultura cellulare


Lavorazione Gameti:

Spermatozoi

Ovociti


Caratteristiche seme: spermatozoi e

plasma seminale

Va incontro a coagulazione immediatamente dopo l’ emissione

Si liquefa in un tempo varabile fra 20-45 minuti dall’ emissione

Ha un pH compreso fra 6.2 e7.8 ed il valore può essere di importanza diagnostica fondamentale nella diagnostica delle AZOOSPERMIE per stabilire la diagnosi di ostruzione.


Classificazione del materiale

seminale

Normospermia ( > 20 mil/ml)

Oligospermia ( < 20 mil /ml )

Criptozoospermia (< 1 mil/ml )

Azoospermia


Capacitazione

Definizione:

1) rimozione dal campione seminale delle

sostanze che inibiscono la motilità degli

spermatozoi,

2) selezione degli spermatozoi più mobili

3) attivazione ulteriore della loro motilità

onde consentire la penetrazione della zona

pellucida da parte di uno di essi


Le tecniche

Swim up da strato

Swim up da pellet

Centrifugazione in gradienti discontinui

TESA, TESE su pazienti azospermici


Recupero spz nel paziente

azospermico

TESA: Agoaspirazione testicolare (TEsticular Sperm Aspiration)

TESE: Biopsia testicolare (TEsticular Sperm Estraction)

Trattamento materiale bioptico per individuazione spermatozoi ed eventuale successiva CRIOCONSERVAZIONE

Daniele Cicutto - S.S. Fisiopatologia della Riproduzione Umana e Banca del Seme - Az. Osp. S. Maria degli Angeli - Pordenone Daniele Cicutto - S.S. Fisiopatologia della Riproduzione Umana e Banca del Seme - Az. Osp. S. Maria degli Angeli - Pordenone

Banca del Seme

Ricevimento pazienti per Consenso

informato alla crioconservazione con

spiegazioni ad eventuali domande

Crioconservazione prolungata per Pazienti

oncologici o con malattie che potrebbero

portare a sterilità

Crioconservazione pazienti per procedura

IVF


Banca del Seme

Trattamento preliminare del seme e/o

del materiale bioptico

Miscelazione del seme o del materiale bioptico con terreno protettivo (contenente anche glicerolo)

Caricamento paillettes ad alta sicurezza

Identificazione paziente con stecca, visotubi, jonc ed etichette crioresistenti

Inserimento stecca in azoto liquido


Banca del Seme

Scongelamento crioconservato

Identificazione collocazione campione

Estrazione stecca dal canister in azoto

liquido, prelevamento paillettes necessarie

Riscaldamento paillettes visotubo a

temperatura ambiente

Riscaldamento paillettes a 37°C

Apertura paillettes e doppio lavaggio del

materiale crioconservato


Preparazione della donna

Ciclo spontaneo

Stimolazione ovarica


Settimana Operativa: le tecniche

PMA

1° Livello: Inseminazione intrauterina

2° Livello:

Fivet/IVF (inseminazione in vitro)

ICSI (microiniezione di spermatozoo nell’ovocita)

3° Livello: - ICSI da TESA / TESE

Embrio transfer in utero


Settimana operativa (1)

Trattamento seminale differenziato

secondo le caratteristiche del seme



Controllo liquido follicolare, individuazione

dei C.O.C. (complessi oocita cumulo)

Isolamento e lavaggio dei C.O.C. in

terreno tamponato con Hepes

Trasferimento dei C.O.C. in altra piastra

cambiando terreno di cultura e porre in

incubatore CO2

Daniele Cicutto - S.S. Fisiopatologia della Riproduzione Umana e Banca del Seme - Az. Osp. Pordenone


Decoronizzazione per procedure I.C.S.I

cioè per la microiniezione dello

spermatozoo nell’ovocita

Inseminazione per procedure FIVET

dopo alcune ore dal Pick-up ovocitario


Inseminazione Fivet



Dopo 18 ore:

Verifica fertilizzazione:

degli oociti iniettati in ICSI

degli oociti inseminati in Fivet previa decoronizzazione dall’inseminazione


Predisposizione all’embrio-transfer

solitamente dopo 48 ore dal Pick-up

Predisposizione terreno per lavaggio canale

cervicale

Termostatazione delle pipette denuding e

del catetere per trasferimento embrioni

Assistenza al caricamento del catetere

Controllo del lavaggio del catetere per

eventuali embrioni ritenuti


Lavoriamo in equipe

Grazie per l’attenzione

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