DOTTORATO IN SCIENZE MEDICHE VETERINARIE XXIX Ciclo … · derivanti da annessi fetali nella specie...
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PROVE IN CORSO Elaborazione dati scratch e migration test. Indagine morfologica mediante ME (in collaborazione con Università di Perugia, Dott.ssa Pascucci). Comparazione molecolare mediante PCR quantitativa e morfologica mediante ME a fluorescenza di cellule equine ed umane (in collaborazione con DiBiNem dell’ Università di Bologna, Prof.ssa Falconi e Dott.ssa Teti). Pubblicazioni Mariella J., Freccero F., Lanci A., Dondi F., Taddei L., and Castagnetti C. HDL, LDL and total cholesterol in healthy and septic neonatal foals, 7 th European College of Equine Internal Medicine (ECEIM) Congress, Prague, 6-8 november 2014 (abstract). Iacono E., Rossi B., Lanci A., Castagnetti C., and Merlo B. Expression of proinflammatory Cytokines by Equine Mesenchymal Stem Cells from foetal adnexa: preliminary data, 27 th Annual Conference of Italian Association of Cell Cultures (ONLUS-AICC) and 5 th International Satellite Symposium AICC-GISM (Gruppo Italiano Staminali Mesenchimali), Verona, 12-14 november 2014 (abstract). Lanci A., Iacono E., Palermo C., Grandis A., Pirrone A., Merlo B., and Castagnetti C. Study of umbilical cord in the equine species. XXI Congresso Internazionale Società Italiana Veterinari per Equini (SIVE), Pisa, 6-8 febbraio 2015 (comunicazione libera). Freccero F., Mariella J., Lanci A., Cotignoli C., Castagnetti C. Clinical use of a commercial hyperimmune plasma in hospitalized foals with FPT. Congresso Internazionale Società Italiana Veterinari per Equini (SIVE), Pisa, 6-8 febbraio 2015 (abstract). Caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali (MSCs) derivanti da annessi fetali nella specie equina INTRODUZIONE Secondo quanto riportato in bibliografia, le cellule staminali mesenchimali prendono parte ai processi riparativi attraverso la modulazione della risposta immunitaria dell’organismo, ma nella specie equina non ne è ancora stato definito l’immunofenotipo. Sempre maggiore è l’interesse verso MSCs derivanti da tessuti ed invogli fetali, la cui raccolta risulta essere non invasiva per l’animale. Diversi autori hanno evidenziato come queste cellule possano essere considerate uno stadio intermedio, in termini di pluripotenza, tra cellule embrionali e adulte. SCOPI a. Determinazione del tempo di duplicazione cellulare (DT) e del tempo di migrazione cellulare (scratch e migration test) di cellule derivanti da annessi fetali equini. b. Determinazione dell’espressione di markers di pluripotenza e mesenchimalità e di mediatori della risposta infiammatoria ed immunitaria nelle stesse linee cellulari mediante RT-PCR e immunocitochimica. c. Studio morfologico delle linee cellulari isolate mediante microscopia elettronica (ME). MATERIALI E METODI Stagione di monta 2014: raccolta di 14 campioni di liquido amniotico (LA), membrana amniotica (MA) e gelatina di Wharton (WJ) da fattrici ricoverate presso l’Unità di Perinatologia Equina S. Belluzzi del DIMEVET. DOTTORATO IN SCIENZE MEDICHE VETERINARIE XXIX Ciclo Dott.ssa Aliai Lanci Tutor: Prof.ssa Carolina Castagnetti Altri studi in corso: studio istologico e immunoistochimico di cordoni ombelicali equini studio proteomico di LA equino RISULTATI Differenziazione osteogenica (a), condrogenica (b) e adipogenica (c) a P3; RT-PCR (d,e); ICC per α-sma (f). MSCs DT (gg) MCH-I MCH-II CD34 CD45 CD90 CD44 IL-8 IL-β1 TNF-α α-SMA CK N-cad E-cad MA 2.4±1.0 - - - - + + - - - + - + - LA 1.8±0.2 - - - - + + - - - + - + - WJ 1.9±0.1 - - + - + + ++ - - + - + - Coltura cellulare Differenziazione cellulare Condrogenica Osteogenica Adipogenica RT-PCR Immunocitochimica (ICC) P3 LA MA WJ WJ MA Nella tabella sottostante sono illustrati i risultati ottenuti per i markers testati con RT-PCR e ICC. LA a b c f e d M GAPDH CD90 CD45 CD34 CD73 WJ, MA, LA, Fibro M M GAPDH GAPDH IL-β1 IL-β1 IL-8 IL-8 TNF-α TNF-α WJ, MA, LA, Fibro
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PROVE IN CORSO Elaborazione dati scratch e migration test. Indagine morfologica mediante ME (in collaborazione con Università di Perugia, Dott.ssa Pascucci). Comparazione molecolare mediante PCR quantitativa e morfologica mediante ME a fluorescenza di cellule equine ed umane (in collaborazione con DiBiNem dell’ Università di Bologna, Prof.ssa Falconi e Dott.ssa Teti).
Pubblicazioni Mariella J., Freccero F., Lanci A., Dondi F., Taddei L., and Castagnetti C. HDL, LDL and total cholesterol in healthy and
septic neonatal foals, 7th European College of Equine Internal Medicine (ECEIM) Congress, Prague, 6-8 november 2014 (abstract).
Iacono E., Rossi B., Lanci A., Castagnetti C., and Merlo B. Expression of proinflammatory Cytokines by Equine Mesenchymal Stem Cells from foetal adnexa: preliminary data, 27thAnnual Conference of Italian Association of Cell Cultures (ONLUS-AICC) and 5th International Satellite Symposium AICC-GISM (Gruppo Italiano Staminali Mesenchimali), Verona, 12-14 november 2014 (abstract).
Lanci A., Iacono E., Palermo C., Grandis A., Pirrone A., Merlo B., and Castagnetti C. Study of umbilical cord in the equine species. XXI Congresso Internazionale Società Italiana Veterinari per Equini (SIVE), Pisa, 6-8 febbraio 2015 (comunicazione libera).
Freccero F., Mariella J., Lanci A., Cotignoli C., Castagnetti C. Clinical use of a commercial hyperimmune plasma in hospitalized foals with FPT. Congresso Internazionale Società Italiana Veterinari per Equini (SIVE), Pisa, 6-8 febbraio 2015 (abstract).
Caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali (MSCs) derivanti da annessi fetali nella specie equina
INTRODUZIONE Secondo quanto riportato in bibliografia, le cellule staminali mesenchimali prendono parte ai processi riparativi attraverso la modulazione della risposta immunitaria dell’organismo, ma nella specie equina non ne è ancora stato definito l’immunofenotipo. Sempre maggiore è l’interesse verso MSCs derivanti da tessuti ed invogli fetali, la cui raccolta risulta essere non invasiva per l’animale. Diversi autori hanno evidenziato come queste cellule possano essere considerate uno stadio intermedio, in termini di pluripotenza, tra cellule embrionali e adulte.
SCOPI a. Determinazione del tempo di duplicazione cellulare (DT) e del tempo di migrazione cellulare (scratch e
migration test) di cellule derivanti da annessi fetali equini. b. Determinazione dell’espressione di markers di pluripotenza e mesenchimalità e di mediatori della risposta
infiammatoria ed immunitaria nelle stesse linee cellulari mediante RT-PCR e immunocitochimica. c. Studio morfologico delle linee cellulari isolate mediante microscopia elettronica (ME).
MATERIALI E METODI Stagione di monta 2014: raccolta di 14 campioni di liquido amniotico (LA), membrana amniotica (MA) e gelatina di Wharton (WJ) da fattrici ricoverate presso l’Unità di Perinatologia Equina S. Belluzzi del DIMEVET.
DOTTORATO IN SCIENZE MEDICHE VETERINARIE XXIX Ciclo
Dott.ssa Aliai Lanci Tutor: Prof.ssa Carolina Castagnetti
Altri studi in corso: studio istologico e
immunoistochimico di cordoni ombelicali equini
studio proteomico di LA equino
RISULTATI
Differenziazione osteogenica (a), condrogenica (b) e adipogenica (c) a P3; RT-PCR (d,e); ICC per α-sma (f).
MSCs DT (gg)
MC
H-I
MC
H-I
I
CD
34
CD
45
CD
90
CD
44
IL-8
IL-β
1
TN
F-α
α-S
MA
CK
N-c
ad
E-c
ad
MA 2.4±1.0 - - - - + + - - - + - + -
LA 1.8±0.2 - - - - + + - - - + - + -
WJ 1.9±0.1 - - + - + + ++ - - + - + -
Coltura cellulare
Differenziazione cellulare
Condrogenica Osteogenica Adipogenica
RT-PCR
Immunocitochimica (ICC)
P3 LA
MA
WJ WJ
MA
Nella tabella sottostante sono illustrati i risultati ottenuti per i markers testati con RT-PCR e ICC.
LA
a b c
f e d
M
GAPDH CD90 CD45 CD34 CD73
WJ, MA, LA, Fibro
M
M
GAPDH
GAPDH
IL-β1
IL-β1
IL-8
IL-8
TNF-α
TNF-α
WJ, MA, LA, Fibro
