Controllo Esterno di Qualità in Citogenetica Emato...

Controllo Esterno di Qualità in

Citogenetica Emato-Oncologica

2013

Marco Mancini, Barbara Crescenzi, Sabine Anne Stioui

Controllo Esterno di Qualità in Citogenetica Emato-Oncologica 2013

• 26 laboratori partecipanti

• 52 casi valutati

Casi da sottoporre al CEQ

Il primo casoaccettato nel mese

di marzo 2012

Il secondo caso, con cariotipo anomalo,

accettato nel mese diottobre 2012

Tre immagini di metafasi e due cariotipi, ricostruiti da tali immagini

il relativo referto in formato pdf+


Criteri di valutazione

• ricostruzione dei cariotipi/analisi del cariotipo

• completezza/appropriatezza dell’analisi

• definizione del risultato (formula ISCN e descrizione)

• interpretazione

• completezza/adeguatezza della refertazione


• tempi di refertazione

� Nel CEQ 2013 obbligatoria l’indicazione della tecnica di coltura utilizzata

� Valutazione appropriatezza più rigorosa


Performance sufficiente

Performance

insufficiente

� Qualità del bandeggio inadeguata � Analisi errata/non completa/non appropriata

� Formula ISCN errata/assente

� Descrizione risultatoerrata/assente

� Interpretazione errata o assente

� Referto con informazioniincongruenti e/o privo di informazioni essenziali

Score Score < 6 < 6 susu 12,512,5

Score ≥ 6 su 12,5


Performance dei laboratori partecipartecipanti al

CEQ in citogenetica oncologica 2013

0

2

4

6

8

10

12

performance

insufficiente

8,5-9,5 9,8-10,8 11-11,8 12-12,3

punteggio medio

nu

me

ro d

i la

bo

rato

ri

Criteri di valutazioneQualità delle immagini


CEQ 2012CEQ 2013


Criteri di valutazioneRicostruzione del cariotipo

� 3 cariotipi: scambio di un cromosoma

� 1 cariotipo: alcuni cromosomi non riconoscibili per scarsa qualità del bandeggio


Qualità delle immagini e ricostruzione del cariotipo

� Una buona qualità della morfologia dei cromosomi

è un fattore critico per il successo dell’analisi citogenetica

�Colture adatte alle differenti patologie e modalità di

preparazioni adeguate dei campioni da analizzarefacilitano il successo dell’indagine citogenetica


Criteri di valutazioneFormula ISCN


CEQ 201244%

4%52%

errori minorierrori graviformula corretta


� La stringa del cariotipo secondo l’ISCN fornisce

l’immagine scritta delle anomalie cromosomiche identificate, internazionalmente interpretabile

Formula ISCN

� La nomenclatura ISCN è spesso un linguaggiocomprensibile solo ai citogenetisti.



Descrizione del risultato (52 referti)Criteri di valutazione

� descrizione incompleta 40

� descrizione non corretta e incompleta 4

� descrizione non corretta e fuorviante 2

� descrizione non corretta 1

� descrizione completa e corretta 5


CEQ 2013

Descrizione del risultato (52 referti)

Nel 2013 criteri più stringenti

15

30

5

CEQ 2012

2



�Descrizione non corretta: presenza di cellule normali descritta come “clone”

�Descrizione incompleta: assenza di numero di

cromosomi e/o tipo di riarrangiamento/i ritrovato/i e/o bracci, bande e punti di rottura coinvolti

Descrizione del risultato

Referti



CEQ 2013 CEQ 2012


Interpretazione (52 referti)


Tempi di refertazioneCriteri di valutazione


CEQ 2013 CEQ 2012

3 laboratori: analisi non appropriata e risultato non attendibile

Performance insufficiente

assegnata a 5 laboratori


2 laboratori: descrizione del risultato errata e fuorviante per il clinico nel referto


Esempio di referto poor


� Secondo l’ISCN la perdita di un cromosoma

è “ clonale ” se evidenziata in 3 o piùmetafasi

� Interpretazione della perdita del cromosoma Y

Unbalanced

+8*

-7 or del(7q)

-5 or del(5q)del(20q)*

-Y*

i(17(q) or i(17p)

-13 or del 13(q)

del(11q)del(12p) or t(12p)

del(9q)

idic(X)(q13)

Recurring chromosomal abnormalities and their frequency in the myelodysplastic syndromes at diagnosis

(WHO Classification of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues 2008)

Abnormality MDS t-MDS Abnormality

10%

10%

10%

5-8%5%

3-5%

3%

3%

3%1-2%

1-2%

50%40%

Balanced

t(11;16)(q23;p13)

t(3;21)(q26;q22)

t(1;3)(p36;q21)

t(2,11)(p21;q32)inv(3)(q21q26)

t(6;9)(p23;q34)

MDS t-MDS

3%

2%

1%

1%1%

1%

* In assenza di criteri morfologici,

anomalie isolate non diagnosticheper SMD

Loss of the Y Chromosome

Wong et al., 2008

AMLwith -Y

ETA’

45,X,-Y46,XY

Random mutation

Loss of the Y Chromosome

Mieloma multiplo

Incidenza di cariotipianormali nel MM

30-40%

Fase non proliferativa

Fase attiva con poche cellule proliferanti

Fase fulminante con un aumento delle plasmacellule blastiche

Cellule stroma

indipendenti

Mieloma multiplo

Early

myelomaCellule stroma

dipendenti

Mieloma

avanzato

Proliferano in coltura

Metafasi anormali markerdi malattia più avanzata

In cultura apoptosi

No metafasi informative

metafasi anormali



CITOGENETICAANALISI CROMOSOMICA BANDEGGIO - QFQMateriale: MIDOLLO OSSEOColture: ONC,24hMetafasi: 20Risultato: 46,XY[20]CARIOTIPO MASCHILE NORMALEIBRIDAZIONE IN SITU (FISH)Sonda: 12, ATM (11q22.3),13q14, BCL1/IGH , IGH/BCL2, 17p13Risultato: Assenza trisomia 12, normali le altre sequenze indagate ( ATM, 13q14, BCL1, IGH,BCL2, 17p13) nei 200 nuclei analizzati

Leucemia linfoide cronica

Cellule linfoidi arrestate in fase

G0-G1

Se coltivate in assenza di mitogeni e citochine muoionorapidamente

Una stimolazione combinata con IL-2 e CpG-oligonucleotidi può

superare il difetto proliferativo


Ringraziamenti

G.FloridiaF.Censi,

F.Tosto

D.Taruscio

Centro Nazionale Malattie RareIstituto Superiore di Sanità

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