AntibiogrammaAntibiogrammaAntibiogrammaDott. Semih ESIN

Antibiogramma:Antibiogramma:Indagine di laboratorio per saggiareIndagine di laboratorio per saggiarela suscettibilit di un microrganismola suscettibilit di un microrganismo

ai farmaci antibattericiai farmaci antibatterici

A causa della ormai vasta diffusione delfenomeno della farmaco-resistenza, il test disensibilit agli antibiotici essenziale per lamaggior parte dei microrganismi isolati daipazienti per la scelta dellantibiotico migliore peril trattamento.

Il microbiologo clinico, impiegando leinformazioni relative alla sensibilit ai farmaci,costruisce gli antibiogrammi, che indicano lasensibilit dei microrganismi isolati in clinica neiconfronti degli antibiotici attualmente in uso.

Luso inappropiato ed esagerato di farmaci antimicrobici staportando a un rapido sviluppo, nei microrganismi patogeni,di resistenze specifiche a tali sostanze. La scoperta elimpiego in clinica di molti antibiotici andata di pari passocon la comparsa di batteri resistenti alla loro azione.

Resistenza ai farmaciResistenza ai farmaci

Campione clinico prelevato prima delliniziodella terapia antimicrobica

Isolamento ed identificazionedellagente patogeno

Antibiogramma

Scelta dellantibiotico orivalutazione della terapia

Antibiogramma: diagramma diAntibiogramma: diagramma diflussoflusso

MICMIC (MMinimum IInhibiting CConcentration; minimaconcentrazione inibente) La concentrazione pi bassadel composto in esame necessaria per inibire lacrescita di un dato organismo.

MBCMBC (MMinimum BBactericidal CConcentration; minimaconcentrazione battericida) La concentrazione pibassa del composto in esame necessaria per provocarela morte di pi del 99.9% di un dato organismo.

Metodi per determinare la suscettibilitMetodi per determinare la suscettibilitdei microrganismi ai farmacidei microrganismi ai farmaci

Metodi basati sulla diffusionein agar (terreno solido)

Kirby-Bauer

Metodi basati sulla diluizionedellantibiotico (terreno liquido)

Determinazione della minimaconcentrazione inibente (MIC)

Procedura di Kirby-Bauer per determinare laProcedura di Kirby-Bauer per determinare lasensibilit di un microrganismo agli antibioticisensibilit di un microrganismo agli antibiotici

2. La colonia viene inoculataallinterno di un tubo contenenteterreno di coltura liquido e lasciatacrescere sino al raggiungimento diuna densit specifica.

3. Un tampone viene introdottonella coltura liquida e poistrisciato su tutta la superficie diuna piastra di agar sterile in mododa ottenere una crescita battericaconsistente ed uniforme.

1. Una colonia isolata vieneprelevata da una piastra di agar.

Procedura di Kirby-Bauer per determinare laProcedura di Kirby-Bauer per determinare lasensibilit di un microrganismo agli antibioticisensibilit di un microrganismo agli antibiotici

5. Incubazione di 18 ore in 35C perconsentire la crescita batterica.

6. Viene valutata la presenza e vengono misurate le dimensioni(diametro in mm) degli eventuali aloni di inibizione della crescitaattorno ai dischetti dei differenti agenti ed i valori ottenuti vengonoparagonati a quelli standard, in modo da stabilire se lisolato sensibile o meno ad un dato antibiotico.

4. Filtri di carta a forma didisco (carta bibulaassorbente) contenenticoncentrazioni note di diversiagenti antimicrobici vengonoposti sulla piastra.

Quantit note dellagente antimicrobico sono assorbite sudischetti di carta da filtro che vengono poi depositati sullasuperficie del terreno agarizzato.

Lagente antimicrobico diffonde dal dischetto nellagarcreando un gradiente di concentrazionegradiente di concentrazione: quanto pi ci siallontana dal dischetto, tanto minore sar la suaconcentrazione, fino al punto in qui si raggiunger laconcentrazione criticaconcentrazione critica (MIC aprossimata). Al di l diquesto punto si avr crescita confluente, mentre nella zonapi vicina al dischetto la crescita sar assente. La zona incui non si avuta crescita viene chiamata alone dialone diinibizione.inibizione.

Il metodo di Kirby-Bauer:Il metodo di Kirby-Bauer:interpretazione dei risultatiinterpretazione dei risultati

Il diametro degli aloni diinibizione osservati sulla piastraviene misurato (in mm) ed i valoriottenuti paragonati a quellistandard per il ceppo batterico, inmodo da stabilire se lisolato sensibile o meno ad un datoantibiotico (SSensibileensibile, IIntermediontermedio,RResistenteesistente).

Il metodo di Kirby-Bauer:Il metodo di Kirby-Bauer:interpretazione dei risultatiinterpretazione dei risultati

Il metodo di Kirby-Bauer:Il metodo di Kirby-Bauer:interpretazione dei risultatiinterpretazione dei risultati

c

c

ba

ab

9 mm 14 mm

30 mm

CF GM

CB

CFCFGMGM

CBCB

RR II

SS

Tecnica delle diluizioni scalariTecnica delle diluizioni scalari1. Ad una serie di provette contenenti il terreno di coltura(brodo di Mueller-Hinton) vengono aggiunte diluizioni scalari(in ragione di 2) dellantibiotico da saggiare.

2. Ogni provetta viene inoculata con una quantit standard(105 -108 CFU/ml) del microrganismo in esame.

3. Dopo 18 ore di incubazione, le provette vengono controllateper la presenza di una crescita batterica visibile (torbidit):lassenza di torbidit visibile del terreno di coltura denotauninibizione completa della crescita microbica.

La sensibilit del microrganismo nei confrontidellantibiotico espressa come la pi alta diluizione(cio la pi bassa concentrazione) di antibiotico capacedi inibire completamente la crescita del microrganismostesso (minima concentrazione inibente=MIC)(minima concentrazione inibente=MIC).

MICMIC

incubazione (18 ore)

Tecnica delle diluizioni scalariTecnica delle diluizioni scalari((macrodiluizionemacrodiluizione))

MICMIC (MMinimum IInhibitingCConcentration; minimaconcentrazione inibente) Laconcentrazione pi bassa delcomposto in esame necessariaper inibire la crescita di undato organismo.

Con 0.2 0.4 0.81.6 3.2 6.4 12.8 25.6 51.2

MICMIC

Saggio di MIC e MBCSaggio di MIC e MBC

MBCMBC

MICMIC

MBCMBC (MMinimum BBactericidal CConcentration;minima concentrazione battericida) Laconcentrazione pi bassa del composto in esamenecessaria per provocare la morte di pi del99.9% di un dato organismo.

Concentrazione minima battericida (MBC)

2 3

4 5

32 4 5

n3=17 c.f.u.; n4=66 c.f.u.; n5=2000 c.f.u.

(inoculo=0.5x105 c.f.u.)

Sensibilit agli antibiotici determinataSensibilit agli antibiotici determinataattraverso il metodo delle microdiluizioniattraverso il metodo delle microdiluizioni

Ciascuna fila (orizzontale) di pozzetticontiene un diverso antibiotico. Lusodi una piastra per microtitolazioneconsente di automatizzare questo tipodi test.

La MIC corrisponde al pozzettocontenente la pi bassaconcentrazione di antibiotico allaquale non c evidenza di crescitabatterica.

La pi alta concentrazione diantibiotico presente nel pozzetto asinistra; le diluizioni serialiprocedono nei pozzetti a destra.

Per esempio, nelle file 1 e 2, il titolo nel terzo pozzetto. Nella fila 3lantibiotico inefficace alleconcentrazioni testate, per cui ccrescita batterica in tutti i pozzetti.

Nella fila 4, la MIC nel primopozzetto.

Sistemi Commerciali: E-Test (AB Biodisk)Sistemi Commerciali: E-Test (AB Biodisk)

LE-test impiega strisce impregnate di antibiotico postesulla superficie dellagar. Il principio del test analogo aquello del metodo per diffusione. La striscia contieneconcentrazioni crescenti di antibiotico che sono indicatesulla striscia stessa. Dopo incubazione il valore di MICcorrisponde alla concentrazione di antibiotico a cui lalonedi inibizione interseca la striscia.

MICMIC

E-TestE-Test (Applicazione & Interpretazione)(Applicazione & Interpretazione)

CI: ciprofloxacina; IP: imipenem

Pseudomonas aeruginosa

SS

RR

E-TestE-Test (Interpretazione)(Interpretazione)

Sistemi commerciali automatizzatiSistemi commerciali automatizzatiSistemi semi-automatici:Sistemi semi-automatici: Basati sulla determinazione dellaMIC in terreno liquido, utilizzano un sistema di analisicomputerizzata della crescita batterica in gallerie diplastica, contenenti lantibiotico in forma liofilizzata, percalcolare la MIC. Vitek (BioMrieux) Phoenix (BD Diagnostics)

RefertoReferto

Sono possibili tre categorie di suscettibilit ad unantibiotico:sensibile (S); intermedia (I); resistente (R)

comporta che il microrganismo risponde alle dosistandard di antibiotico somministrato secondo una viaopportuna, incluso la via orale.

comporta che il microrganismo possa essere inibitoda concentrazioni di antibiotico che sono raggiunte inseguito a inoculazione parenterale della massima dose diantibiotico possibile; lantibiotico pu essere selezionato ascopo terapeutico, ma opportuno considerare altriantibiotici che potrebbero risultare pi efficaci.

Indica che il microrganismo non inibito daconcentrazioni raggiungibili del farmaco e, pertanto, nondeve essere selezionato per la terapia.

R

S

I

RefertoReferto